单脱氢抗坏血酸还原酶(monodehydroascorbate reductase,MDHAR)活性测定试剂盒说明书
发酵时底物脱氢后产生的还原力
发酵时底物脱氢后产生的还原力一、背景介绍发酵是一种利用微生物代谢活动来变换物质的过程。
在发酵过程中，微生物会利用底物（例如葡萄糖、乳糖等）进行代谢活动，产生大量的代谢产物。
其中，底物脱氢是发酵过程中的一个重要步骤。
底物脱氢后，产生的还原力具有重要的生物化学意义。
二、底物脱氢的过程底物脱氢是指有机化合物失去氢原子的过程。
在发酵过程中，底物（例如葡萄糖）被微生物代谢酶催化，发生脱氢反应，将底物中的氢转移至辅酶分子NAD+（还原成NADH）或FAD（还原成FADH2）等载体分子上。
这些载体分子带走了底物所失去的氢原子，同时底物失去的氢也得到了转移，也就是所谓的还原力。
三、还原力的生物化学意义1. ATP的产生：还原力在细胞内可以转化为ATP，提供细胞代谢所需的能量。
2. 氧化磷酸化过程：上线粒体内，NADH和FADH2通过氧化磷酸化反应转化为ATP，是重要的细胞能量来源。
3. 细胞代谢调控：还原力在细胞代谢过程中具有重要的调控作用，特别是在糖、脂肪及蛋白质的代谢途径中起到了关键的作用。
四、影响还原力产生的因素1. 底物种类：不同的底物在发酵过程中会产生不同量的还原力。
2. 微生物种类：不同种类的微生物对底物的代谢方式不同，也会产生不同量的还原力。
3. 温度和pH值：发酵过程中的温度和pH值对微生物代谢活动有直接影响，从而影响还原力的产生。
4. 氧气含量：氧气的存在与否也会影响微生物的代谢方式，从而影响还原力的产生量。
五、应用领域1. 生物工程：在生物工程领域，利用微生物产生的还原力可以用于合成有机化合物、酶促反应等。
2. 医药领域：还原力的产生和运用也与药物合成、微生物药物代谢活动等有关，具有重要的研究意义和应用价值。
3. 环境保护：利用微生物产生的还原力还可以用于环境污染物的降解和处理等。
六、结语底物脱氢后产生的还原力在发酵过程中具有重要的生物化学意义，对生命活动有着重要的影响。
其产生受到多种因素的影响，具有广泛的应用领域。
7-脱氢胆固醇还原酶
7-脱氢胆固醇还原酶脱氢胆固醇还原酶（DHCR7）是一种酶，它在胆固醇合成途径中发挥着重要的作用。
在这篇文章中，我们将讨论脱氢胆固醇还原酶的功能、结构和调节机制，并介绍相关的研究内容。
脱氢胆固醇还原酶是一种加氢酶，它将脱氢胆固醇（DHC）还原为胆固醇。
这个反应是胆固醇生物合成过程中的一个关键步骤。
在这个反应中，通过将DHC上的二氢骨架上的双键还原成单键，脱氢胆固醇还原酶能够帮助细胞合成胆固醇。
胆固醇是细胞膜的重要组成部分，同时也是多种激素合成和胆汁酸产生的前体分子。
脱氢胆固醇还原酶是由DHCR7基因编码的，该基因位于人类染色体11q13.4上。
DHCR7基因是一个高度保守的基因，在不同物种中都具有相似的序列。
研究发现，DHCR7基因突变会导致胆固醇合成途径的异常，从而引起严重的遗传性疾病，如Smith-Lemli-Opitz综合征（SLOS）。
SLOS是一种常染色体隐性遗传病，其特征为胆固醇合成途径的缺陷和胆固醇浓度的降低。
为了更好地理解脱氢胆固醇还原酶的结构和功能，许多研究人员对其进行了详细的研究。
其中一项研究报道了人类脱氢胆固醇还原酶的晶体结构解析结果，揭示了其三维结构。
这项研究发现，脱氢胆固醇还原酶是一种具有十字形结构的酶，其催化位点位于酶的中心。
此外，还有许多研究关注脱氢胆固醇还原酶的调节机制。
一项研究发现，SLOS患者中DHCR7基因突变导致了酶活性的丧失。
这表明，脱氢胆固醇还原酶的正常功能对维持正常的胆固醇合成途径非常重要。
另一项研究表明，转录因子SREBP （sterol regulatory element binding protein）可以调节DHCR7基因的表达。
研究人员通过RNA干扰和基因过表达实验，发现SREBP可以显著改变DHCR7基因的表达水平。
这表明，SREBP通过直接调控DHCR7基因的表达，参与了胆固醇合成途径的调节。
此外，脱氢胆固醇还原酶在疾病中的作用也引起了研究人员的广泛关注。
单脱氢抗坏血酸还原酶
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）检测
单脱氢抗坏血酸还原酶（Monodehydroascorbate reductase, MDHAR）是抗坏血酸-谷胱甘肽循环（AsA-GSH）中的一种重要酶，催化单脱氢抗坏血酸（MDHA）还原生成抗坏血酸，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。
测定原理：MDHAR催化NADH还原MDHA生成抗坏血酸和NAD+，NADH在340nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。
通过测定340nm 光吸收下降速率，来计算出单脱氢抗坏血酸还原酶活性。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒，可高效、精准的检测单脱氢抗坏血酸还原酶的活性变化。
此外，我们还提供其他ASA-GSH循环类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定单脱氢抗坏血酸还原酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 单脱氢抗坏血酸还原酶活性信息。
脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)试剂盒说明书
货号：MS1306 规格：100管/96样脱氢抗坏血酸还原酶（dehydroascorbate reductase，DHAR）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：DHAR存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA和GSSG，调控细胞AsA/DHA比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。
提高植物体内的DHAR活性，可提高植物食品中AsA含量，进而提高植物食品的营养品质。
测定原理：DHAR催化GSH还原DHA生成AsA，通过测定DHA减少速率，计算DHAR活性。
实验中所需仪器及设备：研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。
临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：1. 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
DHAR 测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热30min。
3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、20μL试剂三、20μL试剂四和140μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A2-A1。
苹果短链脱氢酶基因MdSDR响应腐烂病菌侵染的功能研究
㊀核农学报㊀２０２２，３６（１１）：２１５８ ２１６５ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ收稿日期：２０２１⁃１２⁃０８㊀接受日期：２０２２⁃０３⁃０１基金项目：国家自然科学基金－新疆联合基金（Ｕ１９０３２０６），国家自然科学基金（３１４７１７３２），陕西省重大专项（２０２０ｚｄｚｘ０３０３－０１）作者简介：王帅乐，男，主要从事植物病理学研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：６３１３４２７６０＠ｑｑ．ｃｏｍ∗通讯作者：黄丽丽，女，教授，主要从事小麦㊁果树病害的病原学和综合防治研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｌｉｌｉ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ文章编号：１０００⁃８５５１（２０２２）１１⁃２１５８⁃０８苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究王帅乐㊀肖珂雨㊀王维东㊀黄丽丽∗（西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室／植物保护学院，陕西杨凌㊀７１２１００）摘㊀要：短链脱氢／还原酶（ＳＤＲ）是一类ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依赖的氧化还原酶，负责催化生物体内各种代谢活动的氧化还原步骤㊂为了探究苹果（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ＳＤＲ（ＭｄＳＤＲ）蛋白的功能，利用农杆菌介导的苹果组培苗瞬时转化技术在苹果叶片中瞬时表达ＭｄＳＤＲ，然后通过刺伤接种法研究过表达ＭｄＳＤＲ对叶片抗病性的影响；利用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术检测瞬时表达ＭｄＳＤＲ后苹果中脂肪酸生物合成相关基因的表达水平；利用气相色谱分析技术检测瞬时表达ＭｄＳＤＲ苹果叶片中的脂肪酸含量；利用尼罗红染色检测苹果叶片中的脂滴（ＬＤｓ）积累情况㊂结果表明，瞬时表达ＭｄＳＤＲ显著增强了苹果叶片对腐烂病菌（Ｖａｌｓａｍａｌｉ）的抗病性，试验组叶片病斑直径相比对照组减小约１４ ４６％（Ｐ＜０ ００１）；瞬时表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中脂肪酸生物合成相关基因的表达显著上调（Ｐ＜０ ００１），其中ＭｄＡＣＣａｓｅ上调４８ ４１倍，ＭｄＫＡＲ上调１２９ ７９倍，ＭｄＥＮＲ上调１６８ ２０倍，ＭｄＨＡＤ上调８ ６７倍，ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ和ＭｄＫＡＳⅡ均上调约５倍；然而过表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中脂肪酸的积累水平无显著变化（Ｐ＞０ ０５）；进一步研究发现，过表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中调控脂滴合成的基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ显著上调表达（Ｐ＜０ ０５），脂滴数量大量增加㊂本研究初步证明ＭｄＳＤＲ能够通过促进脂肪酸的合成，间接提高脂滴的数量，从而提高苹果的抗病性，为苹果抗性品种的研究提供了一定的理论基础㊂关键词：短链脱氢／还原酶（ＳＤＲ）；脂肪酸；脂滴；抗病性ＤＯＩ：１０ １１８６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１ ２０２２ １１ ２１５８㊀㊀短链脱氢／还原酶（ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＳＤＲ）是一类ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依赖的氧化还原酶，负责催化生物体内的氧化还原反应［１－３］㊂ＳＤＲ在高等植物中分布广泛［４］，主要参与生物碱㊁萜类㊁酚类物质和激素等多种次级代谢途径，增强了植物对细菌㊁真菌㊁病毒㊁动物和昆虫等生物胁迫以及非生物胁迫的适应能力，并且在植物传粉㊁种子传播和种间竞争中发挥重要作用［１，５－８］㊂同时，ＳＤＲ也参与多种初级代谢，维持植物正常的生长发育㊂例如，在叶绿素的合成途径中，ＳＤＲ家族的原叶绿体氧化还原酶（ｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＰＯＲ）能将原叶绿素转化为叶绿素［９－１０］；在脂肪酸合成途径中，ＳＤＲ家族的β－酮脂酰－ＡＣＰ还原酶（β－ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＫＡＲ）和烯脂酰－ＡＣＰ还原酶（ｅｎｏｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＥＮＲ）能催化还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＮＡＤＰＨ）和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＡＤＨ）依赖的两个还原步骤，是植物脂肪酸生物合成的两种关键酶［１１－１２］㊂脂肪酸是细胞膜㊁栓质和角质蜡的关键成分，为植物抵御环境胁迫提供了物理屏障［１３－１４］㊂植物能通过改变不饱和脂肪酸的含量来调节膜的流动性，从而维持适合关键整合蛋白（ｉｎｔｅｇｒａｌｐｒｏｔｅｉｎ）发挥功能的环境［１５－１６］㊂例如，在高温胁迫环境下，野生型烟草叶绿体中的光合蛋白出现热变性和光合效率下降㊂而三元脂肪酸（ｔｒｉｅｎｏｉｃｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＴＡｓ）表达被抑制的转基因植株中，未检测到光合蛋白热变性，其光合效率降幅较小［１７］㊂另外，脂肪酸也参与病原胁迫响应㊂研究发８５１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究现，游离亚麻酸既是一种胁迫信号分子，也是植物氧化脂质（如茉莉酸）生物合成的前体［１８－１９］㊂许多研究也证明，叶绿体油酸（ｏｌｅｉｃａｃｉｄ，ＯＡ）和壬二酸（ａｚｅｌａｉｃａｃｉｄ，ＡＺＡ）水平对拟南芥的生物胁迫响应至关重要，可以引发细胞程序性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）和激发系统获得性抗性（ｓｙｓｔｅｍｉｃａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＳＡＲ）［２０－２１］㊂另外，植物叶片中脂肪酸的积累能刺激植物脂滴（ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓ，ＬＤｓ）的产生㊂而脂滴在植物胁迫应答㊁激素信号途径和植物生长发育中起重要作用［２２－２３］㊂例如，脂滴表面的油体钙蛋白ｃａｌｅｏｓｉｎ和油体固醇蛋白ｓｔｅｒｏｌｅｏｓｉｎ等蛋白具有酶活性，其中ｃａｌｅｏｓｉｎ具有过氧化酶活性，可以将α－亚麻酸衍生物转化为各种氧化脂类植保素；ｓｔｅｒｏｌｅｏｓｉｎ是一种甾醇脱氢酶，可以将甾醇底物转化为油菜素类固醇（ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄｓ，ＢＲｓ），从而调控生长发育和胁迫响应［２４－２５］㊂上述研究结果均表明，脂肪酸在植物抵抗生物胁迫中发挥着重要的作用㊂在苹果（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）中，目前关于ＳＤＲ基因功能的研究仍鲜有报道㊂西北农林科技大学果树病害病原生物学及综合防治团队前期以富士苹果ｃＤＮＡ为模板克隆获得ＭｄＳＤＲ基因编码区（ｃｏｄｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＣＤＳ）全长序列，并通过预测发现其可能与脂肪酸的合成有关［２６］㊂为了验证ＭｄＳＤＲ蛋白是否参与脂肪酸的合成和调控植物免疫，本研究通过农杆菌介导的瞬时表达技术及实时荧光定量ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅＰＣＲ，ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术探究苹果ＭｄＳＤＲ对脂肪酸合成中关键基因表达的影响，揭示ＭｄＳＤＲ在脂肪酸合成中的重要作用，并利用苹果瞬时表达技术探究ＭｄＳＤＲ对苹果树腐烂病菌侵染的影响，初步研究其抗逆功能和作用机理，旨在为苹果抗性品种的研究提供一定的理论基础㊂１㊀材料与方法１ １㊀植物材料嘎啦苹果组培苗（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｃｖ．Ｒｏｙａｌｇａｌａ）由西北农林科技大学园艺学院李明军教授实验室惠赠㊂组织培养植株生长于ＭＳ培养基中，培养基配方为：４ ４３ｇ㊃Ｌ－１ＭＳ＋３０ｇ㊃Ｌ－１蔗糖＋８ｇ㊃Ｌ－１琼脂＋０ ３ｍｇ㊃Ｌ－１６－苄氨基嘌呤＋０ ２ｍｇ㊃Ｌ－１吲哚－３－乙酸，ｐＨ值为５ ８；组培苗置于人工智能气候箱（ＲＸＺ－５００－Ｄ⁃ＰＥＤ，宁波江南仪器厂）内培养，培养条件为：温度２５ħ，光照１６ｈ／黑暗８ｈ，光照度６４００Ｌｘ，相对湿度６０％㊂每１５ｄ更换一次培养基㊂１ ２㊀菌株和质粒载体大肠杆菌ＤＨ５α㊁农杆菌ＧＶ３１０１及载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２均购自北京擎科新业生物技术有限公司；苹果腐烂病菌０３－８（Ｖａｌｓａｍａｌｉ）保存于西北农林科技大学㊂１ ３㊀植物表达载体的构建以富士苹果ｍＲＮＡ反转录合成的ｃＤＮＡ为模板，利用特异性引物ＭｄＳＤＲ－Ｆ㊁ＭｄＳＤＲ－Ｒ对ＭｄＳＤＲ基因进行ＰＣＲ扩增，采用快捷型琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒ＩＩ（ＤＰ１７２２，Ｂｉｏｔｅｋｅ，北京）对目的基因条带进行回收㊂将回收产物与线性化载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２连接构建重组质粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２－ＭｄＳＤＲ㊂热激法转化大肠杆菌ＤＨ５α，进行卡那霉素抗性筛选及菌落ＰＣＲ验证后提取质粒送至上海生工生物工程股份有限公司测序㊂将测序重组质粒及空载体（对照）分别电击转化至农杆菌ＧＶ３１０１，卡那霉素抗性筛选及菌落ＰＣＲ验证后于－８０ħ冰箱保存备用㊂１ ４㊀农杆菌介导的苹果组培苗瞬时转化用含５０μｇ㊃ｍＬ－１卡那霉素及５０μｇ㊃ｍＬ－１利福平的ＹＥＰ培养基，以２８ħ㊁２００ｒ㊃ｍｉｎ－１的条件培养含有ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２－ＭｄＳＤＲ和ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２表达载体的农杆菌１６ｈ，６０００ｒ㊃ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ收集菌体，用０ ０１ｍｏｌ㊃Ｌ－１的ＭｇＣｌ２溶液清洗２次，最终用含１００μｍｏｌ㊃Ｌ－１乙酰丁香酮及１０μｍｏｌ㊃Ｌ－１２－吗啉乙磺酸（４－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ，ＭＥＳ）的ＭｇＣｌ２溶液重悬菌体，使其ＯＤ６００值为１㊂挑选健康㊁长势相近的４周龄组培苗若干，使用真空渗透的方法［２６］对其进行瞬时转化，转化后的组培苗培养条件与１ １中的组培条件相同㊂１ ５㊀苹果总ＲＮＡ提取及ｃＤＮＡ的合成组培苗瞬时表达４８ｈ后随机选取叶片样品进行苹果总ＲＮＡ的提取，提取方法参照快速通用植物ＲＮＡ提取试剂盒说明书（０４１６－５０ｇｋ，北京华越洋生物有限公司），提取完成后对其浓度进行测定，于－８０ħ冰箱保存备用㊂ｃＤＮＡ的合成参照ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡ反转录试剂盒说明书（４３６８８１３，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，美国）进行，反转录产物于－８０ħ冰箱保存备用㊂１ ６㊀实时荧光定量ＰＣＲ分析在ＮＣＢＩ数据库中找到ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ㊁ＭｄＨＡＤ㊁ＭｄＥＮＲ等与苹果脂肪酸合成相关的基因序列以及与植物脂滴调控相关基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ［２７－２８］，并以ＭｄＥＦ－１α为内参基因［２９］㊂使用Ｐｒｉｍｉｅｒ５软件对上述基因进行引物设计（表１）㊂９５１２核㊀农㊀学㊀报３６卷表１㊀引物序列Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓ引物名称Ｐｒｉｍｅｒｎａｍｅ引物序列（５ᶄң３ᶄ）Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ（５ᶄң３ᶄ）产物大小Ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｚｅ／ｂｐＭｄβＣＴ－ＦＡＴＡＴＣＡＴＴＡＴＴＧＣＣＧＡＡＣＣＣＡＡ９１ＭｄβＣＴ－ＲＴＴＴＴＣＧＴＡＡＡＡＴＣＴＣＧＣＣＴＡＣＴＭｄＡＣＣａｓｅ－ＦＧＡＣＣＡＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＡＡＧＴＴＡＡ１５１ＭｄＡＣＣａｓｅ－ＲＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＴＧＡＡＡＧＡＡＧＭｄＫＡＲ－ＦＴＧＧＴＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＴＴＧＴＴ８０ＭｄＫＡＲ－ＲＣＡＣＣＧＡＡＴＧＣＣＴＣＡＡＴＣＴＣＭｄＫＡＳⅠ－ＦＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＴＴＣＧＴＴＡＴＧＧＧ９１ＭｄＫＡＳⅠ－ＲＧＣＡＡＴＴＡＴＣＧＧＴＧＣＴＣＣＴＣＴＴＴＭｄＫＡＳⅡ－ＦＣＴＴＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＡ１３６ＭｄＫＡＳⅡ－ＲＡＧＣＣＡＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＴＡＴＣＣＣＭｄＥＮＲ－ＦＣＡＡＡＴＧＧＡＣＣＧＧＡＧＧＴＴＧ１１３ＭｄＥＮＲ－ＲＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＧＣＴＴＧＡＧＴＡＭｄＨＡＤ－ＦＡＡＡＴＧＣＴＣＣＣＴＣＣＣＧＡＡＴＣ９１ＭｄＨＡＤ－ＲＧＧＴＴＧＡＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＡＧＴＴＭｄＳＥＩＰＩＮ－ＦＣＴＣＧＧＡＧＴＣＴＴＴＣＡＧＧＴＣＡＧＧ１１２ＭｄＳＥＩＰＩＮ－ＲＡＴＡＧＡＡＧＧＣＧＧＡＴＡＧＧＣＴＣＡＣＭｄＥＦ－１α－ＦＡＴＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＣＴＧＧＧＴＧＣ１８９ＭｄＥＦ－１α－ＲＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＴＧＡＴＧＴＴＣＣ㊀㊀利用ＰＣＲ技术检测上述引物的特异性，ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０μＬ２ˑＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘ㊁上下游引物各０ ５μＬ㊁１μＬｃＤＮＡ㊁８μＬｄｄＨ２Ｏ㊂反应程序：９５ħ预变性５ｍｉｎ；９５ħ变性３０ｓ，５５ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，３０个循环㊂基因相对表达水平测定：按照２ˑＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａ３１１－１０，北京康润诚业生物科技有限公司）说明书配制ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系，每个样品设３个重复㊂ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０μＬ２ˑＲｅａｌＳｔａｒＧｒｅｅｎＰｏｗｅｒＭｉｘｔｕｒｅ㊁１０μｍｏｌ㊃Ｌ－１正反向引物各０ ５μＬ㊁１ ５μＬｃＤＮＡ㊁７ ５μＬｄｄＨ２Ｏ㊂使用罗氏ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６实时荧光定量ＰＣＲ仪，反应程序：９５ħ预变性５ｍｉｎ；９５ħ变性１０ｓ，５８ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，４５个循环；熔解反应程序为：９５ħ１０ｓ，６５ħ６０ｓ，９７ħ１ｓ㊂１ ７㊀真菌活化与侵染试验将苹果腐烂病菌（Ｖ．ｍａｌｉ）在马铃薯葡萄糖琼脂（ｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ，ＰＤＡ）培养基上活化，于２５ħ条件下培养３ｄ㊂组培苗瞬时转化４８ｈ后取叶片刺伤接种Ｖ．ｍａｌｉ㊂将叶柄插入水琼脂中保湿，２５ħ共培养３６ｈ左右，拍照并用ＩｍａｇｅＪ软件计算病斑直径，重复３次㊂使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９作图并用ＳＰＳＳ２６ ０进行ｔ测验分析㊂为了减少试验误差，每次重复使用至少３０个叶片，取自长势相似的组培苗㊂１ ８㊀苹果叶片脂肪酸含量的测定组培苗瞬时表达４８ｈ后取叶片样品，液氮速冻后用干冰保存运输，送至西安迈维代谢生物科技有限公司进行脂肪酸含量及种类的测定㊂处理组与对照组各做３次重复，使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９作图并用ＳＰＳＳ２６ ０进行ｔ测验分析㊂１ ９㊀苹果叶片中脂滴的染色观察尼罗红（ＨＹ⁃Ｄ０７１８，ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ，美国）在缓冲液中稀释至２００ｍｍｏｌ㊃Ｌ－１，ｐＨ值为７㊂将组培苗瞬时表达４８ｈ后取叶片样品，在尼罗红染液中３７ħ避光孵育５ １０ｍｉｎ，洗去染色液后制片㊂用ＦＶ３０００激光共聚焦扫描显微镜（奥林巴斯，日本）观察，由４８８ｎｍ激发，在５００ ５４０ｎｍ光谱下收集信号㊂２㊀结果与分析２ １㊀苹果叶片抗病性检测为了探究ＭｄＳＤＲ蛋白在植物抗生物胁迫中的作用，在苹果组培苗叶片中瞬时表达ＭｄＳＤＲ基因后接种Ｖ．ｍａｌｉ，检测病斑变化情况㊂结果显示，过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片的病斑明显小于对照（图１－Ａ）㊂平均病斑直径统计结果显示，过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片的病斑直径显著小于（Ｐ＜０ ００１）对照（约１４ ４６％）（图１－Ｂ），表明过表达ＭｄＳＤＲ提高了苹果叶片对Ｖ．ｍａｌｉ的抗病性㊂注：Ａ：Ｖ．ｍａｉｌ．侵染苹果叶片３６ｈ后的叶片表型；Ｂ：Ｖ．ｍａｉｌ．侵染苹果叶片３６ｈ后的平均病斑直径㊂∗∗∗表示在Ｐ＜０ ００１水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：Ａ：ＲｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆｔｈｅａｐｐｌｅｌｅａｖｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲａｔ３６ｈｏｕｒｓｐｏｓｔ⁃ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ（ｈｐｉ）ｏｆＶ．ｍａｌｉ．Ｂ：ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｌｅｓｉｏｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｉｎｗｈｉｃｈＭｄＳＤＲｉｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄａｔ３６ｈｐｉｏｆＶ．ｍａｌｉ．∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ００１ｌｅｖｅｌ．图１㊀瞬时表达ＭｄＳＤＲ抑制Ｖ．ｍａｌｉ的侵染Ｆｉｇ．１㊀ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＶ．ｍａｌｉ２ ２㊀脂肪酸合成相关关键基因的表达水平检测为了探究ＭｄＳＤＲ对植物脂肪酸合成的影响，对脂０６１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究肪酸合成通路关键酶编码基因的表达水平进行了检测㊂与对照相比，瞬时过表达ＭｄＳＤＲ苹果叶片中脂肪酸从头合成通路中的相关基因全部显著上调表达，其中ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ和ＭｄＥＮＲ上调幅度较大，ＭｄＡＣＣａｓｅ上调４８ ４１倍，ＭｄＫＡＲ上调１２９ ７９倍，ＭｄＥＮＲ上调１６８ ２０倍㊂ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ和ＭｄＨＡＤ均呈现出上调表达的趋势，其中ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ和ＭｄＫＡＳⅡ均上调约５倍，ＭｄＨＡＤ上调８ ６７倍（图２）㊂上述结果表明，ＭｄＳＤＲ蛋白参与调控脂肪酸的生物合成㊂注：∗∗∗表示在Ｐ＜０ ００１水平差异显著；∗∗∗∗表示在Ｐ＜０ ０００１水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ００１ｌｅｖｅｌ．∗∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ０００１ｌｅｖｅｌ．图２㊀ＭｄＳＤＲ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＥＮＲ㊁ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ和ＭｄＨＡＤ相对表达量Ｆｉｇ．２㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＥＮＲ㊁ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡａｎｄＭｄＨＡＤ２ ３㊀苹果叶片脂肪酸含量测定为了探究过表达ＭｄＳＤＲ对植物叶片中脂肪酸积累水平的影响，对苹果叶片中的脂肪酸含量进行了测定㊂通过对试验组与对照组数据进行差异显著性分析，发现过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片中各种脂肪酸含量未发生显著变化（Ｐ＞０ ０５）（图３）㊂２ ４㊀脂滴合成关键基因的表达水平检测为了验证上述推测，过表达ＭｄＳＤＲ后检测了调控脂滴形成的关键基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ的表达水平变化㊂结果显示，瞬时表达ＭｄＳＤＲ后，苹果叶片中ＭｄＳＥＩＰＩＮ基因的表达水平显著提高（图４－Ａ）（Ｐ＜０ ０５），表明瞬时表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的生物合成㊂ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示，在瞬时表达ＭｄＳＤＲ基因的苹果组培苗叶片中检测到ＭｄＳＤＲ蛋白（图４－Ｂ），表明通过农杆菌介导瞬时表达技术，ＭｄＳＤＲ蛋白在苹果组培苗叶片中成功表达㊂２ ５㊀苹果叶片中脂滴的染色观察本研究采用尼罗红染色［３０］观察瞬时表达ＭｄＳＤＲ图３㊀脂肪酸相对含量Ｆｉｇ．３㊀Ｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄ的苹果叶片样品，结果显示，瞬时表达ＭｄＳＤＲ后的苹果叶片出现大量的点状绿色荧光（图５－Ａ），而在对照中并未发现有大量的点状绿色荧光（图５－Ｂ）㊂本试验过表达的ＭｄＳＤＲ蛋白上融合有ＧＦＰ标签，因此为了排除ＧＦＰ荧光给试验带来的干扰，单独表达了ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ１６１２核㊀农㊀学㊀报３６卷注：Ａ：ＭｄＳＥＩＰＩＮ相对表达水平；Ｂ：ＭｄＳＤＲ蛋白表达检测㊂∗表示在Ｐ＜０ ０５水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：Ａ：ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＥＩＰＩＮ．Ｂ：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｏｆＭｄＳＤＲ．∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ０５ｌｅｖｅｌ．图４㊀ＭｄＳＥＩＰＩＮ相对表达量与ＭｄＳＤＲ蛋白表达检测Ｆｉｇ．４㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＥＩＰＩＮａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ注：脂滴被尼罗红染色后激发出的荧光呈点分布㊂Ａ：瞬时表达ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ后用尼罗红染色的苹果叶片；Ｂ：瞬时表达ＧＦＰ后用尼罗红染色的苹果叶片；Ｃ：瞬时表达ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ后未染色的苹㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀果叶片；Ｄ：瞬时表达ＧＦＰ后未染色的苹果叶片㊂Ｎｏｔｅ：ＴｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｅｘｃｉｔｅｄｂｙｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅｒｅｄｓｈｏｗｓａｄｏｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ａ：ＡｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅＲｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ－ＧＦＰ．Ｂ：ＡｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅＲｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＦＰ．Ｃ：ＵｎｓｔａｉｎｅｄａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ－ＧＦＰ．Ｄ：Ｕｎｓｔａｉｎｅｄａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＦＰ．图５㊀ＭｄＳＤＲ瞬时表达增加苹果叶片中脂滴数量Ｆｉｇ．５㊀ＭｄＳＤＲｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｓｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＬＤｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓ和ＧＦＰ，观察并未发现点状绿色荧光（图５－Ｃ㊁Ｄ）㊂综上所述，瞬时表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的形成㊂３㊀讨论短链脱氢／还原酶不仅可以参与调控植物初级代谢，如脂肪酸生物合成㊁叶绿素生物合成或降解，还可以参与调控植物的次级代谢，如萜类㊁类固醇㊁酚类和生物碱的生物合成［３１］㊂在脂肪酸生物合成的过程中，乙酰ＣｏＡ的羧化反应是脂肪酸合成通路的限速步骤，故乙酰ＣｏＡ羧化酶（ａｃｅｔｙｌＣｏＡｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＡＣＣａｓｅ）活性控制着脂肪酸的合成速度；在脂肪酸链延伸阶段中，β－酮脂酰⁃ＡＣＰ合酶（β－ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｓｙｎｔｈａｓｅⅡ，ＫＡＳ）能催化第一步的缩合反应；同时，β－酮脂酰⁃ＡＣＰ还原酶（β⁃ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＫＡＲ）和烯脂酰⁃ＡＣＰ还原酶（ｅｎｏｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＥＮＲ）负责催化其中两步还原反应，即在还原型辅酶ＩＩＮＡＤＰＨ的协助下，ＫＡＲ催化β－酮丁酰基的β－位羰基还原为羟基，ＥＮＲ催化ә２－烯丁酰基的α－双键还原为单键；而β－羟脂酰－ＡＣＰ脱水酶（β⁃ｈｙｄｒｄｏｘｙａｃｙｌ⁃ＡＣＰｄｅｈｙｄｒａｓｅ，ＨＡＤ）则负责催化β－羟丁酰基α㊁β－碳原子间的脱水反应［３２］㊂本研究发现瞬时过表达ＭｄＳＤＲ后，苹果中乙酰ＣｏＡ羧化酶（ＭｄＡＣＣａｓｅ）基因㊁β－酮脂酰－ＡＣＰ合酶（ＭｄＫＡＳ）基因㊁β－酮脂酰－ＡＣＰ还原酶（ＭｄＫＡＲ）基因㊁烯脂酰－ＡＣＰ还原酶（ＭｄＥＮＲ）基因的表达水平显著上调（图２）㊂上述结果表明，ＭｄＳＤＲ能参与调控植物脂肪酸的生物合成过程，这与本实验室前期预测的结果［２６］一致㊂已有研究表明脂肪酸能参与调控植物的免疫反应［１，２１］㊂例如茄子中棕榈油酸的积累提高了植物对白粉病菌的抗病性［３３］；番茄中棕榈油酸的积累增加了植物对黄萎病菌的抗病性［３４］；亚油酸和亚麻酸的积累会显著提升鳄梨对炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）和番茄对丁香假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ）的抗病性［３５－３６］；根际微生物诱导植物对灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）的抗病性同样与植物中亚油酸和亚麻酸积累水平密切相关［３７］㊂本研究发现，过表达ＭｄＳＤＲ能够提高苹果对腐烂病菌的抗性（图１），然而苹果叶片中脂肪酸含量无显著变化（图３）（Ｐ＞０ ０５）㊂因此推测ＭｄＳＤＲ参与调控脂肪酸的生物合成，但并未通过增加脂肪酸含量来提高苹果抗性㊂脂肪酸作为初级代谢产物，是生物体内多种中性脂质生物合成的前体㊂然而过高水平的脂肪酸会对细胞造成损伤［３８］㊂因此生物体会通过多种途径将脂肪酸转化成中性脂质，例如脂肪酸能够通过多步反应，最终在ＳＥＩＰＩＮ蛋白调控下形成了成熟的脂滴［２８，３０］，保２６１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究持了细胞内的脂肪酸水平的稳态［２２，３９］㊂脂滴是由富含膜蛋白的单层磷脂分子层包裹中性脂类物质组成的细胞器［４０］㊂脂滴一般存在于种子等植物的营养储存器官中，为植物提供能量和参与植物生长发育调控㊂叶片等光合组织中脂滴的数量通常远小于种子和花，但叶片脂滴能参与调控植物的非生物和生物胁迫响应［２３，３９］㊂例如，脂滴相关蛋白（ＬＤ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＡＰ）能调控植物脂滴的产生㊂对拟南芥ｌｄａｐ１／ｌｄａｐ３双敲除突变体的研究发现，突变体植物比野生型更容易受到干旱胁迫的影响［４１］㊂而过表达ｌｄａｐ基因的拟南芥显著提高了对干旱胁迫的抗性，这说明脂滴参与调控植物的干旱胁迫响应；另外两种脂滴表面的双加氧酶（ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ）和ｃａｌｅｏｓｉｎ能将α－亚麻酸转化为氧化脂类（ｏｘｙｌｉｐｉｎ）植保素，从而作为一种信号分子触发植物的超敏反应（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨＲ）［２１，２５］㊂这些研究均表明脂滴参与植物的非生物和生物胁迫响应㊂本研究发现过表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的产生（图４㊁５），同时也提高了苹果对病原菌的抗性（图１）㊂因此推测ＭｄＳＤＲ蛋白通过调控脂肪酸的生物合成间接提高了脂滴的积累水平，从而提高了苹果对腐烂病菌的抗性，但脂滴提高苹果抗病性的具体调控机制还有待进一步研究㊂４ 结论本研究利用农杆菌介导的瞬时转化体系在苹果组培苗中过表达ＭｄＳＤＲ，检测到苹果叶片中脂滴数量增加，并且对Ｖ．ｍａｌｉ的抗性显著提高㊂初步证明ＭｄＳＤＲ可以通过促进脂肪酸的生物合成，间接提高叶片脂滴的水平，从而增加植物的抗病性㊂该研究为理解植物抵抗病原胁迫的途径提供了新思路㊂参考文献：［１］㊀ＹｕＳＨ，ＳｕｎＱＧ，ＷｕＪＸ，ＺｈａｏＰＣ，ＳｕｎＹＭ，ＧｕｏＺＦ．Ｇｅｎｏｍｅ⁃ｗｉｄｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ）ｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０２１，２２（１７）：９４９８［２］㊀ＫａｌｌｂｅｒｇＹ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＵ，ＪöｒｎｖａｌｌＨ，ＰｅｒｓｓｏｎＢ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ（ＳＤＲｓ）［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２６９（１８）：４４０９－４４１７［３］㊀ＭｏＸＨ，ＺｈａｎｇＨ，ＤｕＦＹ，ＹａｎｇＳ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＮｃｍＤｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｈｅＣ－１０ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｎｏｃａｍｙｃｉｎＦｉｎｎｏｃａｍｙｃｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０２０，１１：６１０８２７［４］㊀ＫａｖａｎａｇｈＫＬ，ＪｏｒｎｖａｌｌＨ，ＰｅｒｓｓｏｎＢ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＵ．ＴｈｅＳＤＲｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｗｉｔｈｉｎａｆａｍｉｌｙｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｃａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｎｚｙｍｅｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００８，６５（２４）：３８９５－３９０６［５］㊀ＳｔｏｃｋｉｎｇｅｒＰ，ＲｏｔｈＳ，ＭüｌｌｅｒＭ，ＰｌｅｉｓｓＪ．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｍｉｎｅ⁃ｒｅｄｕｃｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓ：Ｃｏｍｍｏｎｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｉｎｉｍｉｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ，β－ｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ，ａｎｄｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ［Ｊ］．ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ，２０２０，２１（１８）：２６８９－２６９５［６］㊀ＦｅｒｒｅｒＪＬ，ＡｕｓｔｉｎＭＢ，ＳｔｅｗａｒｔＣＪｒ，ＮｏｅｌＪＰ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，４６（３）：３５６－３７０［７］㊀ＹｕＪ，ＳｕｎＨ，ＺｈａｎｇＪＪ，ＨｏｕＹＹ，ＺｈａｎｇＴＪ，ＫａｎｇＪＭ，ＷａｎｇＺ，ＹａｎｇＱＣ，ＬｏｎｇＲＣ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｌｄｏ⁃ｋｅｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅｆａｍｉｌｙａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏｓａｌｔ，ｄｒｏｕｇｈｔ，ａｎｄａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０２０，２１（３）：７５４［８］㊀ＣｈｏｉＨＷ，ＬｅｅＢＧ，ＫｉｍＮＨ，ＰａｒｋＹ，ＬｉｍＣＷ，ＳｏｎｇＨＫ，ＨｗａｎｇＢＫ．Ａｒｏｌｅｆｏｒａｍｅｎｔｈｏｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｍｉｃｒｏｂｉａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１４８（１）：３８３－４０１［９］㊀ＧａｂｒｕｋＭ，Ｍｙｓｌｉｗａ⁃ＫｕｒｄｚｉｅｌＢ．Ｔｈｅｏｒｉｇｉｎ，ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｉｓｏｆｏｒｍｓｏｆｌｉｇｈｔ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＬＰＯＲ）：Ｆｏｃｕｓｏｎａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，２０２０，４７７（１２）：２２２１－２２３６［１０］㊀ＶｅｄａｌａｎｋａｒＰ，ＴｒｉｐａｔｈｙＢＣ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇｈｔ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｍａ，２０１９，２５６（２）：２９３－３１２［１１］㊀Ｏ ＨａｒａＰ，ＳｌａｂａｓＡＲ，ＦａｗｃｅｔｔＴ．Ｆａｔｔｙａｃｉｄａｎｄｌｉｐｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅｓａｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｔｃｏｎｓｔａｎｔｍｏｌａｒｒａｔｉｏｓｂｕｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｂｓｏｌｕｔｅｌｅｖｅｌｓｄｕｒｉｎｇｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００２，１２９（１）：３１０－３２０［１２］㊀ＯｈｌｒｏｇｇｅＪＢ，ＪａｗｏｒｓｋｉＪＧ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９７，４８：１０９－１３６［１３］㊀ＢｅｉｓｓｏｎＦ，ＬｉＹ，ＢｏｎａｖｅｎｔｕｒｅＧ，ＰｏｌｌａｒｄＭ，ＯｈｌｒｏｇｇｅＪＢ．ＴｈｅａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＧＰＡＴ５ｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｕｂｅｒｉｎｉｎｓｅｅｄｃｏａｔａｎｄｒｏｏｔｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００７，１９（１）：３５１－３６８［１４］㊀ＬｅｅＳＢ，ＳｕｈＭＣ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ⁃ａｎｃｈｏｒｅｄｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ１５ａｆｆｅｃｔｓｓｅｅｄｃｏａｔｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０１８，９６（６）：１２０６－１２１７［１５］㊀ＩｖａｎｏｖａＴＶ，ＶｏｒｏｎｋｏｖＡＳ，ＫｕｚｎｅｔｓｏｖａＥＩ，ＫｕｍａｃｈｏｖａＴＫ，ＺｈｉｒｏｖＶＫ，ＴｓｙｄｅｎｄａｍｂａｅｖＶＤ．ＬｉｐｉｄｆａｔｔｙａｃｉｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅｒｉｃａｒｐＣｙｄｏｎｉａｏｂｌｏｎｇａＭｉｌｌ．ａｎｄＭｅｓｐｉｌｕｓｇｅｒｍａｎｉｃａＬ．ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｏａｌｔｉｔｕｄｉｎａｌｚｏｎａｌｉｔｙ［Ｊ］．ＤｏｋｌａｄｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，２０１９，４８６（１）：２２９－２３３［１６］㊀ＲａｂｅｒｔＣ，ＩｎｏｓｔｒｏｚａＫ，ＢｒａｖｏＳ，ＳｅｐúｌｖｅｄａＮ，ＢｒａｖｏＬＡ．Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙｓｔｕｄｙｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｐｒｏｆｉｌｅｉｎｔｗｏｆｉｌｍｙｆｅｒｎｓｗｉｔｈｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎｔｏｌｅｒａｎｃｅｒｅｖｅａｌｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｏｍｅｇａ－３ｆａｔｔｙａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｓ（Ｂａｓｅｌ），２０２０，９（１１）：１４３１［１７］㊀ＩｂａＫ．Ａｃｃｌｉｍａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓｉｎｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ：Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓｏｆｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｆｏｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．３６１２核㊀农㊀学㊀报３６卷ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３：２２５－２４５［１８］㊀Ｂｌ ｅＥ．Ｉｍｐａｃｔｏｆｐｈｙｔｏ⁃ｏｘｙｌｉｐｉｎｓｉｎｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００２，７（７）：３１５－３２２［１９］㊀ＣｈｒｉｓｔｉｅＷＷ，ＨａｒｗｏｏｄＪＬ．Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓｔｏｐｒｏｄｕｃｅｌｉｐｉｄｍｅｄｉａｔｏｒｓ［Ｊ］．ＥｓｓａｙｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２０，６４（３）：４０１－４２１［２０］㊀ＫａｃｈｒｏｏＰ，ＳｈａｎｋｌｉｎＪ，ＳｈａｈＪ，ＷｈｉｔｔｌｅＥＪ，ＫｌｅｓｓｉｇＤＦ．Ａｆａｔｔｙａｃｉｄｄｅｓａｔｕｒａｓｅｍｏｄｕｌａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｄｅｆｅｎｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，２００１，９８（１６）：９４４８－９４５３［２１］㊀ＣｅｃｃｈｉｎｉＮＭ，ＳｐｅｅｄＤＪ，ＲｏｙｃｈｏｕｄｈｒｙＳ，ＧｒｅｅｎｂｅｒｇＪＴ．ＫｉｎａｓｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｍｏｔｉｆｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒＡＺＩ１ｐｌａｓｔｉｄｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇｄｕｒｉｎｇｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０２１，１０５（６）：１６１５－１６２９［２２］㊀ＨｕａｎｇＡＨＣ．Ｐｌａｎｔｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓａｎｄｔｈｅｉｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒｒａｐｉｄａｄｖａｎｃｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１８，１７６（３）：１８９４－１９１８［２３］㊀ＰｙｃＭ，ＣａｉＹＱ，ＧｒｅｅｒＭＳ，ＹｕｒｃｈｅｎｋｏＯ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ，ＤｙｅｒＪＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ．Ｔｕｒｎｉｎｇｏｖｅｒａｎｅｗｌｅａｆｉｎｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１７，２２（７）：５９６－６０９［２４］㊀ＬｉａｎｇＴ，ＳｈｉＣ，ＰｅｎｇＹ，ＴａｎＨＪ，ＸｉｎＰＹ，ＹａｎｇＹ，ＷａｎｇＦ，ＬｉＸ，ＣｈｕＪＦ，ＨｕａｎｇＪＲ，ＹｉｎＹＲ，ＬｉｕＨＴ．Ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄ⁃ａｃｔｉｖａｔｅｄＢＲＩ１－ＥＭＳ⁃ＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ１ｉｎｈｉｂｉｔｓｆｌａｖｏｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓｇｒｏｗｔｈａｎｄＵＶ⁃Ｂｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０２０，３２（１０）：３２２４－３２３９［２５］㊀ＳｈｉｍａｄａＴＬ，Ｈａｒａ⁃ＮｉｓｈｉｍｕｒａＩ．Ｌｅａｆｏｉｌｂｏｄｉｅｓａｒｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｆａｃｔｏｒｉｅｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｎｔｉｆｕｎｇａｌｏｘｙｌｉｐｉｎｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１５，２５：１４５－１５０［２６］㊀龚婉，吕路琼，王维东，黄丽丽．富士苹果ＳＤＲｓ家族基因ＭｄＳＤＲ的克隆及序列分析［Ｊ］．分子植物育种，２０２０，１８（１４）：４５９７－４６０４［２７］㊀ＷａｎｇＷＤ，ＮｉｅＪＪ，ＬｖＬＱ，ＧｏｎｇＷ，ＷａｎｇＳＬ，ＹａｎｇＭＭ，ＸｕＬＳ，ＬｉＭＪ，ＤｕＨＸ，ＨｕａｎｇＬＬ．ＡＶａｌｓａｍａｌｉｅｆｆｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１ｔａｒｇｅｔｓａｐｐｌｅ（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ⁃ｒｅｌａｔｅｄ１０ｐｒｏｔｅｉｎｔｏｐｒｏｍｏｔｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０２１，１２：７４１３４２［２８］㊀ＧｒｅｅｒＭＳ，ＣａｉＹ，ＧｉｄｄａＳＫ，ＥｓｎａｙＮ，ＫｒｅｔｚｓｃｈｍａｒＦＫ，ＳｅａｙＤ，ＭｃＣｌｉｎｃｈｉｅＥ，ＩｓｃｈｅｂｅｃｋＴ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．ＳＥＩＰＩＮｉｓｏｆｏｒｍｓｉｎｔｅｒａｃｔｗｉｔｈｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅ⁃ｔｅｔｈｅｒｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＶＡＰ２７－１ｆｏｒｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０２０，３２（９）：２９３２－２９５０［２９］㊀ＹｉｎＺＹ，ＫｅＸＷ，ＫａｎｇＺＳ，ＨｕａｎｇＬＬ．ＡｐｐｌｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｇａｉｎｓｔＶａｌｓａｍａｌｉｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｅｓ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１６，９３：８５－９２［３０］㊀ＣａｉＹ，ＧｏｏｄｍａｎＪＭ，ＰｙｃＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＳＥＩＰＩＮｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｕｌａｔｅｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０１５，２７（９）：２６１６－２６３６［３１］㊀ＴｏｎｆａｃｋＬＢ，ＭｏｕｍｍｏｕＨ，Ｌａｔｃｈ Ａ，ＹｏｕｍｂｉＥ，ＢｅｎｉｃｈｏｕＭ，ＰｅｃｈＪＣ，ＶａｎＤｅｒＲｅｓｔＢ．ＴｈｅｐｌａｎｔＳＤＲｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｉｎｐｒｉｍａｒｙａｎｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１２：４１－５３［３２］㊀郭蔼光．基础生物化学第２版［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００９［３３］㊀ＷａｎｇＣ，ＣｈｉｎＣＫ，ＣｈｅｎＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｙｅａｓｔｄｅｌｔａ－９ｄｅｓａｔｕｒａｓｅｇｅｎｅｉｎｔｏｍａｔｏｅｎｈａｎｃｅｓｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９８，５２（６）：３７１－３８３［３４］㊀ＸｉｎｇＪＳ，ＣｈｉｎＣＫ．ＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｅｇｇｐｌａｎｔａｆｆｅｃｔｓｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０００，５６（５）：２１７－２２５［３５］㊀ＭａｄｉＬ，ＷａｎｇＸＪ，ＫｏｂｉｌｅｒＡ，ＬｉｃｈｔｅｒＡ，ＰｒｕｓｋｙＤ．Ｓｔｒｅｓｓｏｎａｖｏｃａｄｏｆｒｕｉｔｓｒｅｇｕｌａｔｅｓә９－ｓｔｅａｒｏｙｌＡＣＰｄｅｓａｔｕｒａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｆａｔｔｙａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｔｉｆｕｎｇａｌｄｉｅｎｅｌｅｖｅｌａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＣｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓａｔｔａｃｋ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２００３，６２（５）：２７７－２８３［３６］㊀ＹａｅｎｏＴ，ＭａｔｓｕｄａＯ，ＩｂａＫ．Ｒｏｌｅｏｆｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｔｒｉｅｎｏｉｃｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｐｌａｎｔｄｉｓｅａｓｅｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２００４，４０（６）：９３１－９４１［３７］㊀ＯｎｇｅｎａＭ，ＤｕｂｙＦ，ＲｏｓｓｉｇｎｏｌＦ，ＦａｕｃｏｎｎｉｅｒＭＬ，ＤｏｍｍｅｓＪ，ＴｈｏｎａｒｔＰ．ＳｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅｐａｔｈｗａｙｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄｉｎｂｅａｎｂｙａｎｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｒａｉｎ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ⁃ＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００４，１７（９）：１００９－１０１８［３８］㊀ＫｕｎｚＨＨ，ＳｃｈａｒｎｅｗｓｋｉＭ，ＦｅｕｓｓｎｅｒＫ，ＦｅｕｓｓｎｅｒＩ，ＦｌｕｇｇｅＵＩ，ＦｕｌｄａＭ，ＧｉｅｒｔｈＭ．ＴｈｅＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒＰＸＡ１ａｎｄｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌｂｅｔａ⁃ｏｘｉｄａｔｉｏｎａｒｅｖｉｔａｌｆｏｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｍａｔｕｒｅｌｅａｖｅｓｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｄｕｒｉｎｇｅｘｔｅｎｄｅｄｄａｒｋｎｅｓｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００９，２１（９）：２７３３－２７４９［３９］㊀ＩｓｃｈｅｂｅｃｋＴ，ＫｒａｗｃｚｙｋＨＥ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄａｌｇａｅ：Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｔｕｒｎｏｖｅｒａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｅｍｉｎａｒｓｉｎＣｅｌｌａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，２０２０，１０８：８２－９３［４０］㊀ＯｎａｌＧ，ＫｕｔｌｕＯ，ＧｏｚｕａｃｉｋＤ，ＤｏｋｍｅｃｉＥｍｒｅＳ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＬｉｐｉｄｓｉｎＨｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅ，２０１７，１６（１）：１２８［４１］㊀ＧｉｄｄａＳＫ，ＰａｒｋＳ，ＰｙｃＭ，ＹｕｒｃｈｅｎｋｏＯ，ＣａｉＹ，ＷｕＰ，ＡｎｄｒｅｗｓＤＷ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ，ＤｙｅｒＪＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＬＤＡＰｓ）ａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｔｒａｌｌｉｐｉｄｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１６，１７０（４）：２０５２－２０７１４６１２ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ５６１２２０２２，３６（１１）：２１５８ ２１６５ＦｕｎｃｔｉｏｎＥｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆＡｐｐｌｅＳｈｏｒｔ⁃ＣｈａｉｎＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ＲｅｄｕｃｔａｓｅｉｎＲｅｓｐｏｎｓｅｔｏＶａｌｓａｍａｌｉＷＡＮＧＳｈｕａｉｌｅ㊀ＸＩＡＯＫｅｙｕ㊀ＷＡＮＧＷｅｉｄｏｎｇ㊀ＨＵＡＮＧＬｉｌｉ∗（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＳｔｒｅｓｓＢｉｏｌｏｇｙｆｏｒＡｒｉｄＡｒｅａｓ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ㊀７１２１００）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ）ｉｓａｋｉｎｄｏｆＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ｗｈｉｃｈｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｃａｔａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｒｅｄｏｘｓｔｅｐｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｍｅｔａｂｏｌｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｏｒｇａｎｉｓｍｓ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ，ｔｈｅＭｄＳＤＲｇｅｎｅｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａｃｖ．Ｆｕｊｉｂｙａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｐｒｉｃｋｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｂｙＧａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＴｈｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｂｙｎｉｌｅｒｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＶａｌｓａｍａｌｉ．Ｔｈｅｌｅｓｉｏｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙａｂｏｕｔ１４ ４６％ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０ ００１）．ＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０ ００１）．ＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆＭｄＡＣＣａｓｅｗａｓｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ４９ ４１ｔｉｍｅｓ，ＭｄＫＡＲｗａｓ１３０ ７９ｔｉｍｅｓ，ＭｄＥＮＲｗａｓ１６９ ２０ｔｉｍｅｓ，ＭｄＨＡＤｗａｓ９ ６７ｔｉｍｅｓ，ａｎｄＭｄβＣＴ，ＭｄＫＡＳⅠａｎｄＭｄＫＡＳⅡｗｅｒｅａｂｏｕｔ６ｔｉｍｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｄｉｄｎｏｔｉｎｃｒｅａｓｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０ ０５）．ＴｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲ．Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｐｒｏｖｅｄｔｈａｔＭｄＳＤＲｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆａｐｐｌｅ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｐｒｏｖｉｄｅｓａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆａｐｐｌｅｂｒｅｅｄｉｎｇｆｏｒｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ），ｆａｔｔｙａｃｉｄ，ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓ，ｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ。
脱氢抗坏血酸结构式
脱氢抗坏血酸结构式
摘要：
1.脱氢抗坏血酸的概述
2.脱氢抗坏血酸的结构式
3.脱氢抗坏血酸的性质与稳定性
4.脱氢抗坏血酸的用途
5.脱氢抗坏血酸的生态学数据
正文：
脱氢抗坏血酸（英文名：dehydroascorbic acid，别名：维生素C，维他命C，丙种维生素，L-抗坏血酸）是一种白色结晶，无气味，具有柠檬酸样酸味。
其分子式为C6H8O6，分子量为176.13。
在干燥空气中，脱氢抗坏血酸是稳定的，但若与空气和光线接触，则会被氧化成脱氢抗坏血酸。
此外，碱、铁和铜等物质会加速其氧化反应。
脱氢抗坏血酸是一种相对强的还原剂，长时间贮存会导致颜色变深，呈现不同程度的浅黄色。
在1 克的产品中，约可以溶解于3 毫升的水、30 毫升的乙醇和50 毫升的乙醚。
脱氢抗坏血酸广泛应用于医药、食品、化妆品等行业。
在医药领域，它可以用于预防和治疗坏血病、增强免疫力等。
在食品和化妆品行业，它具有抗氧化作用，可以保持产品的新鲜度和活性。
然而，脱氢抗坏血酸对环境可能具有一定的危害性。
在接触空气和光线时，容易发生氧化反应，产生有害物质。
因此，在储存和使用过程中，应尽量避免与氧化物接触。
几种非环单萜衍生物的制备及表征
几种非环单萜衍生物的制备及表征
非环单萜衍生物是一类化合物，具有广泛的生物活性和药理作用。
它们具有很强的吸引力，因为它们可以通过人工合成来大规模生产，
而不必依赖于天然来源。
下面介绍几种非环单萜衍生物的制备及表征。
第一种是咖啡因。
咖啡因是一种常见的中枢神经系统刺激剂，可
以通过从咖啡豆、茶叶和可可豆中提取而得到。
它还可以通过对异丙
肾上腺素和尿素进行加热反应而制得。
咖啡因的结构具有三个甲基组
分和两个氮原子，因此可以通过核磁共振和红外光谱等技术来表征。
第二种是莫洛托夫酸。
它是一种广泛应用于生物医学和化学研究
领域的化合物，可以通过将乙酰丙酮和醋酸转化为酯的形式，然后进
行过酸性水解得到。
莫洛托夫酸结构中含有苯环、羧酸官能团和
α,β-不饱和双键，可以通过质谱和红外光谱等技术来表征。
第三种是脱氢抗坏血酸。
脱氢抗坏血酸是一种维生素C的衍生物，可以通过将抗坏血酸与盐酸反应生成对应的盐酸盐，然后通过强氧化
剂氧化得到。
脱氢抗坏血酸结构中含有双环和烷基官能团，可以通过
红外光谱和核磁共振等技术来表征。
这几种非环单萜衍生物的制备和表征提供了一种有效的方法，可
以应用于新药开发和生物医学研究。
柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定
柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定MasayoshiSawamura;陈金栋
【期刊名称】《福建热作科技》
【年(卷),期】1992(000)003
【摘要】本文综述了柑桔类果汁中L－脱氢抗坏血酸用12克／升的氢硫化钠溶液进行处理，在35℃下经20分钟后使其转化成L－抗坏血酸（维生素C）已获得了成功，接着用一种简便的液相色谱技术来分析测定柑桔汗中的抗坏血酸含量。
【总页数】3页(P75-77)
【作者】MasayoshiSawamura;陈金栋
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】TS255.44
【相关文献】
1.猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶cDNA片段的克隆与序列分析 [J], 牛歆雨;雷玉山;梁东;马锋旺;王西锐
2.电位滴定法测定桔汁饮品中抗坏血酸含量研究初报 [J], 陈忠明
3.《橙、柑、桔汁及其饮料中果汁含量的测定》国家标准概况 [J], 徐清渠
4.高效液相色谱法同时测定水果蔬菜中L-抗坏血酸、D-异抗坏血酸、脱氢抗坏血酸及总维生素C的含量 [J], 杨媛;冯晓元;石磊;杨军军;张莹莹;张开春
5.柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定 [J], Sawam.,M;陈金栋
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号: QS1008 规格：50管/48样单脱氢抗坏血酸还原酶（monodehydroascorbate reductase,MDHAR）
活性测定试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。
测定原理：
MDHAR 催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。
通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。
自备实验用品及仪器：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水
试剂组成和配置：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体50mL×1瓶，室温保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：液体25μL×1瓶，4℃保存。
临用前加5mL试剂二充分溶解。
粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议
500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g ，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
MDHAR测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 依次在比色皿中加入100μL试剂三、100μL试剂四、100μL试剂五和600μL试剂二，最后加入100μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。
MDHAR活性计算公式：
(1). 按蛋白浓度计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷（Cpr×V样）÷T
= 804×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
第1页，共2页
MDHAR活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1nmol NADH 为1U。
MDHAR (nmol/min /g鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷（W×V样÷V样总）÷T
= 804×△A ÷W
（3）按细胞数量计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反总×109÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T
= 804×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每毫升液体每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε÷d×V反总×109÷V样）÷T
= 804×△A
ε：NADH摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL=0.001 L，V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，2min。
注意事项：
临用前配制的试剂未使用完的4℃保存，3天内使用完。
第2页，共2页。