病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断病毒感染的实验诊断（一）● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染 [讲义编号NODE70103300270100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
[讲义编号NODE70103300270100000102：针对本讲义提问]一、病毒的基本性状（一）形态结构 1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
[讲义编号NODE70103300270100000103：针对本讲义提问]2.结构[讲义编号NODE70103300270100000104：针对本讲义提问]（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
[讲义编号NODE70103300270100000105：针对本讲义提问]异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
[讲义编号NODE70103300270100000106：针对本讲义提问]干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
[讲义编号NODE70103300270100000107：针对本讲义提问]（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
病毒感染的实验诊断
采集各种器官时要分开使用器械和
容器。
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（二）标本的运送和保存
标本采集后注意无菌、冷冻、保湿、 立即送检。
分离培养病毒的标本要尽快送到实 验室处理和接种。如不能及时送检，可 在4℃冷藏数小时，如需较长时间保存则 应 置 -70℃ 。 放 置 在 -20℃ ， 病 毒 容 易 灭 活，冻存液中需加入甘油或二甲亚砜等 作保护，避免反复冻融使病毒灭活。
应部位采取标本，处理标本时要考虑病
毒的生物学特性。常见分离病毒标本的
选择见教材P64表4-2。
（1） 心脏疾病
（2） 中枢神经系统感染
（3） 先天或新生儿感染
（4） 胃肠道疾病
（5） 呼吸道感染
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3．常见标本的采集方法
（1） 血液：以无菌手续抽取抗凝血10ml， 抗凝剂可选用100u/ml肝素钠。为了血清 学检查的需要，应抽取另一管5ml血液， 不抗凝送检。
程度上取决于标本的恰当采样和处理，为了保 证标本质量，应注意以下问题：
1．采样时间 尽可能在发病的初期，急性期 或患者入院的当天进行，越早越好，最好在治 疗之前。疾病后期体内产生免疫力，病毒量减 少或消失。
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2．标本种类的选择
根据临床感染的症状及流行病学资
料，判断可能感染病毒的种类，选择相
清学实验；后者主要是核酸杂交与PCR 及现代免疫学技术。
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病毒分离培养
病原学诊断 形态学检测
病 毒
分子生物学技术——病毒核酸
学
补体结合试验
检
中和试验
验
血清学诊断 血凝抑制试验
2016资格考试微生物检验分章节复习(二十七)
2016资格考试微生物检验分章节复习（二十七）第二十七章病毒感染的实验诊断一、A11、下列哪一点为病毒与其他微生物（细菌、立克次体和衣原体等）的明显不同（）。
A、病毒不含氨基糖酸B、病毒不含氨基酸C、病毒不含核酸D、病毒含氨基糖酸E、病毒只含核酸2、下列哪种细胞适合于乙脑病毒的分离和培养（）。
A、C6/36细胞B、鸡胚细胞C、鸭胚细胞D、Hela细胞E、CER细胞3、检测到下列哪种抗体可确诊病毒引起的新生儿先天性感染（）。
A、IgGB、IgMC、IgAD、IgDE、IgE4、HBsAg（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗HBe（-）、抗HBc（-），表明（）。
A、急生肝炎初期B、慢性活动性肝炎C、乙肝恢复并产生免疫力D、既往乙肝病毒感染E、慢性迁延性肝炎5、埃博拉病毒致病性的差异主要取决于（）。
A、血清型的不同B、病毒科的不同C、被感染者不同D、性别不同E、人种不同6、不能用于检查病毒的方法是（）。
A、动物接种B、鸡胚尿囊接种C、鸡胚卵黄囊接种D、细胞培养E、人工培养基培养7、出血热病毒属于下列哪一种基因类型的病毒（）。
A、负链RNAB、正链RNAC、分节段D、不分节段E、双链RNA8、噬菌体的核酸，最常见的是（）。
A、双链环状DNAB、双链线状DNAC、单链环状DNAD、单链线状NAE、单链RNA9、呼吸道合胞病毒因在组织培养繁殖时能引起下列哪一种现象而定为现在的名称（）。
A、细胞聚合B、细胞融合C、细胞核消失D、细胞界限不清E、细胞破裂10、下列哪种病毒不属于肝炎病毒（）。
A、HCVB、HBVC、HEVD、HAVE、CMV11、对甲型肝炎早期有诊断价值的免疫球蛋白是（）。
A、IgAB、IgGC、IgMD、IgEE、IgD12、登革休克综合征主要诊断依据不包括（）。
A、出血B、休克C、肾脏损伤D、口唇发绀E、肌肉关节酸痛13、脊髓灰质炎病毒主要经过下列（）途径传播。
A、人畜途径B、血液途径C、破损皮肤D、粪-口途径E、性传播14、HIV造成免疫系统的多种功能发生缺陷的主要原因是下列哪一点（）。
病毒病的常规实验室诊断
胞现象也可被特异性抗血清所抑制，故在病毒鉴定，特别是对
某些不产生细胞病变的病毒，常用红细胞吸附和吸附抑制试验 进行快速鉴定。
2.4 补体结合试验（CFT）
原理：CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补体的特 性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测抗原、抗体间有无特 异性结合的一类实验。 参与本实验的五种成分分为两个系统 ①待检系统：已知抗原（或抗体）和待检 抗体（或抗原细胞代谢的测定
病毒间的干扰现象
抗原的测定
电子显微镜观察
1.5 病毒感染力的测定—半数细胞培养物感染量 （TCID50)
Reed-Muench
内插法
Karber法
细胞病变孔：50%以上细胞发生病变才可算为细胞病变孔。
病毒种类 狂犬病病毒 接种途径 卵黄囊 ++ 绒毛尿囊膜 ++ 尿囊腔 养膜腔 脑内 +++ 病变 特征 鸡胚死亡 备注
流感病毒
新城疫病毒 痘病毒 蓝舍病病毒 传支 法氏囊 鹅细小
++++
++++ +++ +++ +++ ++ +++++ ++ ++++ ++++
2.9 单扩溶血试验
是在琼脂单扩散基础上发展起来的，又称为被动溶血技术，主要用于流感 病毒血凝素和神经氨酸酶抗体的测定。 吸附在红细胞表面上的抗原与同种抗体结合，再加上补体的作用，就会使 红细胞溶血，由于糠油抗体血清的稀释度与溶血圈直径或面积的大小成直 线关系，所以可对血清抗体进行定量测定。
EB病毒感染实验室检测方法
EB病毒感染实验室检测方法摘要本文档详细描述了EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染的实验室检测方法，包括病毒培养、血清学检测、核酸扩增和病毒载量测定等。
这些检测方法在临床诊断、流行病学研究以及疫苗研发等领域具有重要意义。
1. 病毒培养1.1 原理EBV属于疱疹病毒科，是一种专性细胞内寄生的DNA病毒。
病毒培养可以充分展示病毒的感染性、复制能力和生物学特性。
1.2 方法1. 选择合适的细胞系，如B95-8或Daudi细胞。
2. 将临床样本（如唾液、血液等）接种至细胞系。
3. 在适宜的条件下（如37°C、5% CO2）培养细胞，观察病毒复制和感染现象。
4. 定期观察细胞病变，如细胞增大、核固缩等。
5. 采用免疫荧光染色、电子显微镜等方法检测病毒颗粒。
2. 血清学检测2.1 原理血清学检测基于病毒感染后诱导的免疫反应，通过检测特异性抗体来诊断EBV感染。
2.2 方法1. 收集患者血清样本。
2. 使用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测EBV特异性抗体，如VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG等。
3. 采用免疫荧光染色、免疫组化等方法进行抗体检测。
4. 根据抗体类型和滴度判断感染状态，如急性感染、慢性感染或回忆性感染。
3. 核酸扩增3.1 原理核酸扩增技术通过特异性引物和DNA聚合酶酶链反应（PCR）来检测EBV的DNA序列。
3.2 方法1. 提取临床样本的DNA。
2. 设计针对EBV DNA的特异性引物，进行巢式PCR或实时定量PCR（qPCR）。
3. 扩增EBV特异性基因，如EBNA1、EBNA2、LMP1等。
4. 分析扩增产物，判断病毒感染情况。
4. 病毒载量测定4.1 原理病毒载量测定通过检测病毒颗粒的数量来评估病毒感染的程度。
4.2 方法1. 提取临床样本的病毒颗粒。
2. 采用实时定量PCR、定量荧光显微镜等方法测定病毒载量。
3. 根据病毒载量判断感染程度，为临床治疗提供依据。
动物微生物--病毒感染实验诊断
病毒传送培养基以Hanks液为基础加 灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加 青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml， 为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml 二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。
五、病毒检验的结果评价
通过实验手段，从标本中获得有 关病毒感染的证据，从而确定病毒 感染和临床疾病之间的因果关系， 是病毒实验诊断的目标。
通过分离和鉴定获得致病性病毒， 发现病毒感染的特异征象，如机 体内产生特异性抗体,急性期和恢 复期血清中相应的特异性抗体有4 倍以上的升高，细胞内包涵体的形 成等,就可得出病原学诊断。
二、病毒抗原检测
病毒抗原是病毒特异性的标志， 通过免疫学技术检测标本中特 异性抗原存在，可以早期诊断 病毒感染。
1．免疫荧光技术 适合于型别少， 细胞培养难以成功的病毒，如流 感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、 巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检 组织中的肝炎病毒、神经组织中 的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂 犬病毒或其他脱落细胞和活检组 织中的病毒抗原检测。
必须通过全面了解其特性才能 得到鉴定。 1.根据临床特点，流行病学资 料，标本来源，大致了解病 毒的一些特性，有助于确认 病毒的种类。
2.动物感染范围及特点 病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。 3.细胞培养特点。 综合上述资料作出鉴定。
病毒鉴定的方法
1.细胞培养的结果观察
病毒增殖后导致细胞发生:①细胞病 变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积 成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞 融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内 出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；
第一节标本采集与运送
医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检
原则：与细菌类似 •用于分离培养的标本： 采取采取急性期标本、使用抗生素处 理防细菌污染
无菌操作、低温保存、尽快送检
•血清学诊断的标本： 双份血清？
早期采集
标本的采集和送检六原则
无菌采集 采集合适的标本
采集双份血清
尽快送检 正确标记
❖ 种类：常用的传代细胞有HeLa（宫颈癌）细胞、KB（口 腔癌）细胞、HEp-2（喉癌）细胞、Vero（非洲绿猴肾） 细胞等。
❖ 特点及作用：由于传代细胞系能有规律地持续传代，容
易保存（-70℃~-196℃）且对某些病毒易感，因此，在
诊断、科研等非疫苗生产的项目中常被采用。目前广泛 用于病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性 ，选择敏感的细胞系使用传代细胞系
病毒1:100稀释
病毒1:1000稀释
中性红染色：活细胞呈红色，受病毒感染破坏的细胞不着色
三、病毒感染的诊断
1.病毒形态学检查 2.病毒成分（病毒蛋白和核酸）检查 3.病毒感染的血清学（病毒抗体）检查
❖ 标本类型？ 与细菌标本类似 ❖ 好的标本？ 正常无菌性体液 ❖ 标本内容物一般需要含有宿主细胞
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒的实验室诊断方法
动物接种
病 毒
鸡胚培养
分离培养方法（金标准）
检 细胞培 养 测 病毒成分检测
活细胞
血清学诊断
（一）病毒的分离培养
1.动物接种
❖ 最原始的病毒培养方法 多用于没有敏感细胞进行细胞培养的病毒 （乙肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒等）
二倍体细胞培养(diploid cell culture )
病毒感染的实验诊断
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）
含0.5%明胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉
细胞变圆、融合、肿胀、细胞空 泡、核浓缩、形成嗜酸性或嗜碱 性包涵体等。
某些病毒感染细胞后不出现CPE
3. 干扰现象（interference）
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时， 其中一种病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为 病毒的干扰现象。
干扰现象也可被相应特异性抗体抑制，称为干 扰抑制现象
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
优点 鸡胚来源充足，操作简便，有多种接种途径 病毒增殖快，可收获大量病毒
鸡胚本身是无菌的，对接种的病毒不产生抗 体
缺点
易感病毒少，目前主要用于流感病毒、腮腺 炎病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养。
某些病毒在鸡胚内传代后，其毒力下降
3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。 不同病毒对动物的敏感性不同，根据病毒种类
一般比细菌强，耐甘油，对抗生素及磺胺类药物不 敏感，干扰素可抑制病毒复制。
病毒感染的实验诊断方法
病原学诊断
✓ 病毒分离培养 ✓ 显微镜检查 ✓ 抗原检测 ✓ 核酸检测
血清学诊断
✓ 抗体检测 IgM、IgG
一、标本采集、运送和处理
（一）标本采集
➢ 采集时间：尽早采集（越早越好） ➢ 标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类
醚作用后，失去感染性 4. 耐酸试验 肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳
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病毒感染的实验诊断病毒感染的实验诊断（一）●考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染[讲义编号NODE70103300270100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
[讲义编号NODE70103300270100000102：针对本讲义提问]一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
[讲义编号NODE70103300270100000103：针对本讲义提问]2.结构[讲义编号NODE70103300270100000104：针对本讲义提问]（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
[讲义编号NODE70103300270100000105：针对本讲义提问]异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种[讲义编号NODE70103300270100000106：针对本讲义提问]（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
[讲义编号NODE70103300270100000107：针对本讲义提问]（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
[讲义编号NODE70103300270100000108：针对本讲义提问]二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
[讲义编号NODE70103300270100000109：针对本讲义提问]第二节病毒感染的实验诊断病毒学实验室诊断有三个方面：①直接检测和分离鉴定；②检测病毒蛋白抗原成分和核酸；③检测抗体。
[讲义编号NODE70103300270100000110：针对本讲义提问]一、标本采集、运送及处理（一）标本采集1.采样时机：应在病人急性期或发病初期采集标本。
2.标本种类：根据不同病毒感染采集不同标本，如鼻咽分泌物、脑脊液、血液、粪便等。
（二）标本的运送及保存快速传递，立即处理和接种。
采集和运送过程注意冷藏。
如不能立即处理和接种，可在4℃保存数小时，长时间保存需置-70℃。
[讲义编号NODE70103300270100000111：针对本讲义提问]（三）标本处理凝固的血液需先离心，得到的血清可以用于病毒分离。
肝素抗凝全血、脑脊液、胸腔液、水痘液以及尿液均可直接用于病毒分离培养。
有些标本如粪便等,常需粗提、提纯和浓缩等复杂处理过程。
[讲义编号NODE70103300270100000112：针对本讲义提问]二、分离培养与鉴定（一）分离培养1.组织培养包括器官培养、组织块培养和细胞培养。
目前常用的方法是细胞培养；常用细胞：①原代和次代细胞培养；②二倍体细胞株；③传代细胞系。
[讲义编号NODE70103300270100000113：针对本讲义提问]2.鸡胚接种一般选用9-12日龄鸡胚。
鸡胚中的部位适宜病毒卵黄囊嗜神经病毒，如乙型脑炎病毒羊膜腔流感病毒尿囊腔流感病毒、腮腺炎病毒，还可制备疫苗和大量病毒抗原绒毛尿囊膜天花病毒、单纯疱疹病毒脑内狂犬病病毒3.动物接种实验室常用新生小鼠或乳鼠进行病毒分离。
[讲义编号NODE70103300270100000114：针对本讲义提问]（二）病毒鉴定1.初步鉴定根据临床症状、流行病学特点、标本来源、易感动物范围、细胞病变特征及生物学特征、理化性质可初步判断2.最终鉴定在初步鉴定的基础上，选择适当的血清学方法对病毒分离株进行最后鉴定，常用中和试验、补体结合试验、血分子生物学方法也在病毒鉴定方面得到应用。
[讲义编号NODE70103300270100000115：针对本讲义提问]细胞病变效应（CPE）：细胞形态变化病毒细胞圆缩，分散，不聚集，全部细胞被破坏肠道病毒细胞肿大，颗粒增多，病变细胞聚集呈葡萄状腺病毒细胞融合成多核细胞副粘病毒，空泡状，多核巨细胞麻疹病毒脂溶剂敏感实验：有包膜（+），无包膜（-）；耐酸实验：肠道病毒（R），鼻病毒（S）。
[讲义编号NODE70103300270100000116：针对本讲义提问]三、病毒感染的诊断（一）显微镜检查1.用光学显微镜直接检查病毒包涵体。
可作为病毒感染的辅助诊断，不是特异性试验。
核内包涵体：常见DNA病毒。
如巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒和腺病毒等。
胞浆内包涵体：常见RNA病毒。
如呼吸道合胞病毒、狂犬病病毒和痘类病毒等。
胞质内和胞核内包涵体：麻疹病毒等。
2.用电子显微镜直接检查病毒颗粒。
数小时即可从病毒形态上作出明确的鉴别诊断。
应用免疫电镜灵敏度更高。
[讲义编号NODE70103300270100000117：针对本讲义提问]（二）病毒抗原检查利用特异性免疫血清检测标本中的病毒抗原。
常用方法有：免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫法、反相间接血凝和对流免疫电泳等方法。
对于一些血清型别不多或在一般细胞培养系统中尚不能成功增殖的病毒，直接检测病毒抗原是快速而实用的方法。
[讲义编号NODE70103300270100000118：针对本讲义提问]（三）病毒抗体检查利用特异性抗原检测病毒感染者血清中的IgM和IgG抗体。
常用的方法有中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验及免疫扩散等，还可以利用放射免疫法及酶联免疫吸附法。
IgM抗体出现在病毒感染的早期，所以标本采集时间对检测结果的影响很大。
IgG抗体检测需采集感染急性期与恢复期双份血清，恢复期IgG效价必须比急性期增高4倍或4倍以上时，才有诊断意义。
（四）病毒核酸检测利用核酸杂交和PCR技术检测病毒特异基因片段。
检出病毒核酸并不等于检出具有传染性的病毒颗粒。
[讲义编号NODE70103300270100000119：针对本讲义提问]第三节各类病毒感染的简介一、呼吸道病毒六、疱疹病毒二、肠道病毒七、肝炎病毒三、急性胃肠炎病毒八、反转录病毒四、黄病毒九、狂犬病病毒五、出血热病毒十、人乳头瘤病毒[讲义编号NODE70103300270200000101：针对本讲义提问]一、呼吸道病毒（一）流行性感冒病毒（二）呼吸道合胞病毒（三）麻疹病毒（四）风疹病毒[讲义编号NODE70103300270200000102：针对本讲义提问]（一）流行性感冒病毒1.生物学性状（1）形态：具有多形性，一般为球形或丝状，丝状多见于新分离株，感染性较强。
（2）结构：[讲义编号NODE70103300270200000103：针对本讲义提问]（2）分型与变异1）分型：根据核蛋白抗原和M蛋白的不同，将流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）型；甲型流感病毒根据NA和HA的抗原性不同又分为若干亚型。
2）变异：变异的物质基础是HA和NA。
抗原变异幅度小时称为抗原漂移；变异幅度大形成新的亚型，引起大规模流行，为抗原转变。
（3）培养特性：常用鸡胚接种培养，初次分离接种羊膜腔为最佳，传代适应后可移种尿囊腔。
细胞培养一般用原代猴肾细胞（PMK）或犬肾传代细胞（MDCK）。
利用红细胞凝集试验确定病毒的存在。
（4）抵抗力：不耐热，对干燥、日光、紫外线以及甲醛、乙醇等均敏感。
[讲义编号NODE70103300270200000104：针对本讲义提问]2.微生物检验（1）标本采集和处理：在发病急性期，以前3天为最好。
采集鼻腔洗液、咽拭子、鼻拭子等，置于Hanks液中。
放入冰壶中，速送实验室。
若48小时内未能进行接种，标本应放于低温中保存。
（2）分离培养与鉴定：标本接种于鸡胚羊膜腔，35℃3天后，收集羊水和尿囊液进行血凝试验并测定滴度。
血凝阳性者，用已知抗体作血凝抑制试验进行鉴定。
若血凝阴性时，需用鸡胚盲传1～2次，仍不出现血凝阳性者，方可判断病毒分离阴性。
也可接种原代猴肾细胞（PMK）或犬肾传代细胞（MDCK）。
[讲义编号NODE70103300270200000105：针对本讲义提问]（3）快速诊断1）免疫荧光技术和酶免疫技术。
2）分子杂交技术。
3）PCR技术。
4）免疫电镜技术。
（4）血清学诊断：需同时检测急性期（5天以内）和恢复期（2～4周）血清，在相同条件下进行血凝抑制试验，如恢复期抗体效价比急性期高[讲义编号NODE70103300270200000106：针对本讲义提问]3.临床意义病毒随飞沫传播进入易感者呼吸道，依靠血凝素与黏膜柱状上皮细胞相应受体结合，感染细胞。
主要在呼吸道柱状上皮细胞内复制增殖，很少入血，但代谢毒素样物质可进入血流引起发热、头痛和全身酸痛。
甲型流感可以是散发，也可以是全球性大流行。
乙型流感的播散速度及范围不如甲型。
[讲义编号NODE70103300270200000107：针对本讲义提问]（二）呼吸道合胞病毒1.生物学性状：属副粘病毒科、肺病毒亚科、肺病毒属。
球形，具有多形性。
核酸为单负股RNA，不分节段。
包膜上有两种刺突：G蛋白作用于类似于流感病毒的血凝素蛋白HA；F蛋白是融合蛋白，介导病毒穿入和细胞融合。
[讲义编号NODE70103300270200000108：针对本讲义提问]2.微生物学检查（1）标本采集和处理：可采用鼻腔洗液或鼻咽拭子，置转运培养基中冷藏（4℃）运送至实验室，尽可能立即接种。
（2）分离培养与鉴定：不能在鸡胚中增殖，可在人类上皮细胞传代细胞系内增殖。
培养后3～7天，细胞病变为合胞体形成即细胞融合成多核巨细胞，胞质内形成嗜酸性包涵体。
（3）直接检测病毒抗原：可利用免疫荧光技术和酶免疫技术。
（4）血清学诊断：常用中和试验、免疫荧光试验和酶免疫试验检查血清中IgG、IgM及IgA。