紫外分光光度法二
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紫外分光光度法和荧光分析法
可见光区（400~760nm）
1 Beer-Lambort 定律A=log T =Ecl *A为吸收度；
*T为透光率； *E为吸收系数（以 E *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。
1% 1cm
表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值）
适用条件：入射光为单色光 溶液是稀溶液 固体、 液体和气体样品在同一波长 下，各组分吸光度具有加和性
吸收光谱
10-4-10-7g/ml
选择性
高
一般
应用
硫色素荧光法测定维生素B1
维生素B1 在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，在紫（365nm）
照射下呈蓝色荧光（435nm）通过与对照品荧光强度比较。即可测得供试 品含量（课本260页）
荧光分光光度法测定维生素E
采用同步荧光扫描法测定血清中维生素E，有效的消除溶剂拉曼 光谱的干扰，提高灵敏度和准确性。（课本277页）
双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两
束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收 较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、 选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提 高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度 成正比 （例子：课本366页）
其他
卡尔曼滤波法
偏最小二乘法 小波变换
三波长分光光度法
系数倍率法
……
原理 与紫外-可见法异同点
应用
原理
荧光 — 分子吸收电磁波后，从其最低激发 态重新发射紫外线或可见光的现象 利用某些物质被一定波长的光照射后所产 生的，能够反映该物质特性的荧光来进行 定性定量的分析方法——荧光分析法。
1 Beer-Lambort 定律A=log T =Ecl *A为吸收度；
*T为透光率； *E为吸收系数（以 E *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。
1% 1cm
表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值）
适用条件：入射光为单色光 溶液是稀溶液 固体、 液体和气体样品在同一波长 下，各组分吸光度具有加和性
吸收光谱
10-4-10-7g/ml
选择性
高
一般
应用
硫色素荧光法测定维生素B1
维生素B1 在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，在紫（365nm）
照射下呈蓝色荧光（435nm）通过与对照品荧光强度比较。即可测得供试 品含量（课本260页）
荧光分光光度法测定维生素E
采用同步荧光扫描法测定血清中维生素E，有效的消除溶剂拉曼 光谱的干扰，提高灵敏度和准确性。（课本277页）
双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两
束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收 较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、 选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提 高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度 成正比 （例子：课本366页）
其他
卡尔曼滤波法
偏最小二乘法 小波变换
三波长分光光度法
系数倍率法
……
原理 与紫外-可见法异同点
应用
原理
荧光 — 分子吸收电磁波后，从其最低激发 态重新发射紫外线或可见光的现象 利用某些物质被一定波长的光照射后所产 生的，能够反映该物质特性的荧光来进行 定性定量的分析方法——荧光分析法。
第三章紫外可见分光光度法
优点：自动记录， 快速全波段扫描。可 消除光源不稳定、检 测器灵敏度变化等因 素的影响，特别适合 于结构分析。仪器复 杂，价格较高。是目 前用的最多的分光光 度计。
23
3.双波长
将不同波长的两束单色光(λ 1、λ 2) 快束交替通 过同一吸收池而后到达检测器。产生交替信号。无需 参比池。△=1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数 光谱。
max也作为定性的依据。不同物质
的λmax有时可能相同，但ε
定量分析的依据。
max不一定相同。
（6）吸收谱带强度与该物质分子吸收的光子数成正比,
10
3．紫外-可见吸收光谱的产生
由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射，分 子中价电子（或外层电子）的能级跃迁而产生紫 外-可见吸收光谱。 电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动
紫外分光光度计检测；可作为溶剂使用。
39
2、n→ζ＊跃迁
所需能量较大。 吸收波长为150～250 nm，大部分在远紫外区 ，近紫外区仍不易观察到。
含非键电子的饱和烃衍生物(含N、O、S和卤
素等杂原子)均呈现n →ζ*跃迁。 如一氯甲烷、甲醇、三甲基胺n →ζ*跃迁的λ分 别为173 nm、183 nm和227 nm。
38
1、σ →σ ＊跃迁
所需能量最大，ζ电子只有吸收远紫外光的能量 才能发生跃迁。
饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区。
吸收波长λ< 200 nm。 例：甲烷λmax为125 nm , 乙烷λmax为135 nm， 环丙烷（饱和烃中最长） λmax为190 nm。 在近紫外没有饱和碳氢化合物的光谱，需真空
8
2．能级跃迁的讨论
（1）转动能级间的能量差Δ Er：0.005～0.050 eV， 跃迁产生吸收光谱位于远红外区，称为远红外 光谱或分子转动光谱； （2）振动能级的能量差Δ Ev约为：0.05～１eV，跃
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3.双波长
将不同波长的两束单色光(λ 1、λ 2) 快束交替通 过同一吸收池而后到达检测器。产生交替信号。无需 参比池。△=1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数 光谱。
max也作为定性的依据。不同物质
的λmax有时可能相同，但ε
定量分析的依据。
max不一定相同。
（6）吸收谱带强度与该物质分子吸收的光子数成正比,
10
3．紫外-可见吸收光谱的产生
由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射，分 子中价电子（或外层电子）的能级跃迁而产生紫 外-可见吸收光谱。 电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动
紫外分光光度计检测；可作为溶剂使用。
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2、n→ζ＊跃迁
所需能量较大。 吸收波长为150～250 nm，大部分在远紫外区 ，近紫外区仍不易观察到。
含非键电子的饱和烃衍生物(含N、O、S和卤
素等杂原子)均呈现n →ζ*跃迁。 如一氯甲烷、甲醇、三甲基胺n →ζ*跃迁的λ分 别为173 nm、183 nm和227 nm。
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1、σ →σ ＊跃迁
所需能量最大，ζ电子只有吸收远紫外光的能量 才能发生跃迁。
饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区。
吸收波长λ< 200 nm。 例：甲烷λmax为125 nm , 乙烷λmax为135 nm， 环丙烷（饱和烃中最长） λmax为190 nm。 在近紫外没有饱和碳氢化合物的光谱，需真空
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2．能级跃迁的讨论
（1）转动能级间的能量差Δ Er：0.005～0.050 eV， 跃迁产生吸收光谱位于远红外区，称为远红外 光谱或分子转动光谱； （2）振动能级的能量差Δ Ev约为：0.05～１eV，跃
紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证-2
紫外分光光度法测定维生素B1片含量0845051089 以药学一班及陈秋娟方法证验紫外分光光度法测定维生素B 1片含量以及方法验证班级：08级药学一班 姓名：陈秋娟 学号：0845051089 [摘要]目的：采用紫外分光光度法对维生素B 1片含量进行测定及此方法的验证 方法：运用紫外分光光度法在λ=246nm 处测定吸光度，并运用百分吸收系数（1%1cm E ）法（标示量（%）=A ×D ×W 平均×1%1cm E ﹣¹××W ﹣¹×标示量﹣¹×100%和对照品比较法进行计算。
结果：该维生素B 1片维生素B 1含量：用百分吸收系数（1%1cm E ）法计算标示量（%）为93.05%；对照品比较法计算标示量（%）为94.33%；用标准曲线法计算标示量为102.87%。
实验方法验证：维生素B 1片含量为7.5μg/ml ~ 17.5μg/ml 时，维生素B 1浓度与吸光度成良好的线性关系；平均回收率(%)为103.53%；RSD(%)为1.17%。
结论：紫外分光光度法对本实验测定专属性好，并且方法简单易操作。
该维生素B 1片维生素B 1含量为93.05%，符合本品含维生素B 1 （C 12H 17ClN 4OS.HCl ）应为标示量的90.0%~ 110.0%的规定为合格。
维生素B 1 紫外分光光度法 含量测定 [实验内容] （一）1、仪器与试药电子天平（XX 公司，编号：XX ），XX 紫外分光光度计（编号：XX ，厂家：XX ）。
维生素B1（批号：XX ，生产厂家：XX 公司），维生素B1对照品（精制原料,由中国药品生物制品检定所提供,批号：xx ）， 辅料空白（根据维生素B1片处方工艺配制），盐酸溶液（9→1000），纯化水 。
2、处方分析：组成 处方量(g)比例(%) 维生素B 1 10 16.39 淀粉 20 32.78 糊精 30 49.18 硬脂酸镁 1.0 1.639 生产1000片根据处方量分析，维生素B 1含16.39%，辅料含83.61%。
第二章 紫外-可见分光光度法
入射光通过溶液时，除一部分被吸光粒子吸收
外，还有部分因散射而损失，使透光度减小，
A实。所以往往发生正偏离。 • 化学因素引起的偏离 吸光物质常因离解、缔合而形成新化合物或 互变异构等化学变化而改变其浓度，导致了偏 离。例如 K2Cr2O7在水溶液中存在下列平衡：
2 2CrO4 Cr2O H 2O + 2 H 2 2 7 稀释或增大pH值 浓缩或减小pH值
如图所示，假设有一束强度为I0的单色平行
光，垂直通过一横面积为s的均匀介质。 当光强度为Ix的单色光通过
吸收层(db)后，光强度减弱
了dIx，则厚度为db的吸收
层对光的吸收率为-dIx/Ix，
另一方面，由于db为无限小，所以截面积上所有 吸光质点所占的面积之和(ds)与横截面积(s)之 比(ds/s)可视为该截面积上光子被吸收的几率， 即：-dIx/Ix=ds/s
降低由于单色光不纯造成负偏的方法： • 选择吸收曲线的max作入射光波长。因为吸收 曲线峰值顶部曲线较平坦，入射光谱带内各波长 的值相近。选择max，偏离光吸收定律较小。 只有当干扰物质存在并对待测物质的max产生
吸收时，才选择没干扰的其它波长作入射光波
长。
• 选择高分辨率仪器，使入射光波长范围尽可
5.传播速度c
c=· 单位：cm/s 二.微粒性 光的微粒性特征为：光由光子组成，而光子 具有能量，其能量与波长之间的关系为： E=h· =hc/ h—普朗克常数 6.626×10-34J· s 由上式可知，不同波长的光具有不同的能量， 波长愈长，光的能量愈低；反之，则愈高。
§2-2 分子光谱概述
若干个振动能级；在同一 电子能级和同一振动能级 中，因转动能量不同而分 为若干个转动能级。 若用E电、E振、E转分别表示三个能级， 则三者的关系为：E电＞E振＞E转。
外，还有部分因散射而损失，使透光度减小，
A实。所以往往发生正偏离。 • 化学因素引起的偏离 吸光物质常因离解、缔合而形成新化合物或 互变异构等化学变化而改变其浓度，导致了偏 离。例如 K2Cr2O7在水溶液中存在下列平衡：
2 2CrO4 Cr2O H 2O + 2 H 2 2 7 稀释或增大pH值 浓缩或减小pH值
如图所示，假设有一束强度为I0的单色平行
光，垂直通过一横面积为s的均匀介质。 当光强度为Ix的单色光通过
吸收层(db)后，光强度减弱
了dIx，则厚度为db的吸收
层对光的吸收率为-dIx/Ix，
另一方面，由于db为无限小，所以截面积上所有 吸光质点所占的面积之和(ds)与横截面积(s)之 比(ds/s)可视为该截面积上光子被吸收的几率， 即：-dIx/Ix=ds/s
降低由于单色光不纯造成负偏的方法： • 选择吸收曲线的max作入射光波长。因为吸收 曲线峰值顶部曲线较平坦，入射光谱带内各波长 的值相近。选择max，偏离光吸收定律较小。 只有当干扰物质存在并对待测物质的max产生
吸收时，才选择没干扰的其它波长作入射光波
长。
• 选择高分辨率仪器，使入射光波长范围尽可
5.传播速度c
c=· 单位：cm/s 二.微粒性 光的微粒性特征为：光由光子组成，而光子 具有能量，其能量与波长之间的关系为： E=h· =hc/ h—普朗克常数 6.626×10-34J· s 由上式可知，不同波长的光具有不同的能量， 波长愈长，光的能量愈低；反之，则愈高。
§2-2 分子光谱概述
若干个振动能级；在同一 电子能级和同一振动能级 中，因转动能量不同而分 为若干个转动能级。 若用E电、E振、E转分别表示三个能级， 则三者的关系为：E电＞E振＞E转。
紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例.
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
A 1 V D
含量%
E 1% 1cm
100
100 %
m
0.582 1 250 100
715 100
5 100% 99.05%
0.0411
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度 ，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度， 摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为 0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用 稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀 释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲 氧苄啶标示量百分含量。
Байду номын сангаас
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
标示量%
cR
Ax AR
D
每支容量
100%
S
0.05134 0.420 25 100 2 25100 0.416 1 1 100% 103.7%
0.1
药物分析/药物的含量测定
紫外可见分光光度 法测定药物含量的 计算实例
制作人：谭韬
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml， 置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇 匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。 按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含 量
第二章 紫外-可见分光光度法-2
（3）温度的影响 在分光光度法测定中，通常都选用室温 显色反应。当温度对显色反应速度可能有较 大的影响时，需要考虑温度的影响。 合适的温度可用单因素实验来确定。
（4）显色时间 这里包括两种时间：一种是由于显色反 应速度不同，达到反应完全所需的时间；另 一种是有色化合物维持稳定的时间。 这两种时间均可用单因素实验来考察。
c. 快速扫描分光光度计陆续问世 利用光分析可以跟踪化学反应历程，一 般分光光度计只适于历程为20~30 min以上的 反应，要研究速度较快的反应，就需要设计 出快速扫描分光光度计，如：多道分光光度 计（采用：多道光子检测器，整个光谱扫描 时间不到1 s）。
4. 仪器的最新进展 (1) 仪器的自动化程度大大提高；
精确求取摩尔吸收系数的方法是：在 不同带通宽度时测定表观摩尔吸收系数， 绘制表观摩尔吸收系数对带通宽度的曲线 关系图，将曲线外推到带通宽度为零处， 这时相应的摩尔吸收系构造、类型及 发展趋势 1. 构造 通常由以下5个部分组成— （1） 一个或多个辐射源； （2）波长选择器； （3）试样容器 (吸收池) ； （4）辐射换能器； （5）信号处理器和读出装置。
对吸收池的要求：主要是能透过所研究的 光谱区辐射线。
吸收池的两个光学面必须平整光洁，使用 时不能用手触摸。
按材料可分为：玻璃吸收池和石英吸收池 两种。
吸收池有多种尺寸和不同结构，吸收池 的光径可在0.1 cm~10 cm之间变化，其中以 1 cm光径吸收池最为常用，根据使用要求 选用。 在用于高浓度或低浓度测定时，可相 应地采用光径较小或较大的吸收池。
(3) 蓝移 由于取代基或溶剂极性的影响，使吸收 谱带的最大吸收波长向短波方向移动的现象 称为短移、紫移或蓝移。
紫外可见分光光度法
波长和颜色的关系
λ（nm） 400-450 450-480 480-490 490-500 500-560 560-580 580-610 610-650 650-760
颜色 紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 橙 红
互补光 黄绿 黄 橙 红 红紫 紫 蓝 绿蓝 蓝绿
二、物质对光的选择性吸收
1、物质对光的吸收的本质
定性分析： 1、与标准品或标准图谱对比，鉴定未知物； 2、鉴别异构体 如：顺反异构、互变异构（如酮-烯醇式） 3、纯度检查
定量分析： 1、单一组分测定 2、多组分同时测定
第二节 紫外可见分光光度计
一、紫外可见分光光度计的构造
光源
单色器 吸收池
检测 系统
信号显 示系统
（一）光源
1、作用：提供符合要求的入射光。
3、分类： （1）可见光光源：
①钨丝灯：是最常见的可见光光源，它可发射波长 为325-2500nm范围的连续光谱，其中最适宜的使 用范围是320-1000nm，除用作可见光源外，还可 用作近红外光源。
②卤钨灯
在钨丝中加入适量的卤化物或卤素，灯泡用石 英制成，具有较长的寿命和高的发光效率。
（2） 紫外光光源： 多为气体放电光源，其中应用最多的是氢灯和
➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面 凹面光栅）Βιβλιοθήκη （三）吸收池（又称比色皿）
1、作用：盛装被测溶液和参比溶液。 2、分类： （1）玻璃比色皿：适用于可见光区。（能否用于紫 外光区？） （2）石英比色皿：适用于紫外及可见光区。
3、主要规格： 0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm等。
紫外可见分光光度计基本组成
钨灯卤素 灯或氘灯
棱镜或光 栅，玻璃 或石英
紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用2
紫外-可见光分光光度法在食品工业中的应用摘要：紫外--可见分光光度法是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。
操作简单、准确度高、重现性好。
其应用范围包括：①定量分析，广泛用于各种物料中微量、超微量和常量的无机和有机物质的测定。
②定性和结构分析，紫外吸收光谱还可用于推断空间阻碍效应、氢键的强度、互变异构、几何异构现象等。
③反应动力学研究，即研究反应物浓度随时间而变化的函数关系，测定反应速度和反应级数，探讨反应机理。
④研究溶液平衡，如测定络合物的组成，稳定常数、酸碱离解常数等。
紫外-可见光分光光度法在食品行业中的应用主要可大致分为在食品成分分析中的应用和在食品安全检测中的应用，其中在食品成分分析中的应用主要有紫外-可见分光光度计在食品酶分析中的应用、酸奶中维生素A的测定、水果汁中果糖的测定、番茄红素的测定、甜蜜素的测定等；而在食品安全检测中的应用主要有分光光度法测定食品中硼砂、紫外可见分光光度法检测食品中的镉、紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红Ⅲ、用分光光度法测定食品中吊白块的含量等。
本文分别就紫外-可见光分光光度法在食品工业中的这些应用作了简要介绍。
目前利用紫外-可见光分光光度法的各种方法正在逐步发展，而且随着社会的发展和人们生活水平的提高，紫外-可见光分光光度法在食品行业中的应用也会越来越广泛。
一：紫外--可见分光光度法简介紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。
操作简单、准确度高、重现性好。
波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。
分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。
描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而变的函数关系曲线，称为吸收光谱或吸收曲线。
紫外-可见吸收光谱通常由一个或几个宽吸收谱带组成。
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三、样品的分离纯化
（2）蒸馏法
适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、 丹皮酚等 最常用的水蒸气蒸馏法：
共水蒸馏法
通水蒸气蒸馏法
水上蒸馏法
利用盐析作用，提高蒸馏效果
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（3）液-液萃取法
直接萃取法 萃取剂的选择：亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚； 弱亲脂性的溶剂，如乙酸乙酯、正丁醇等
柱填料：硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔硅 藻土、离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18等
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析，强烈保留碱性化合物
洗脱顺序：极性小→大
氧化铝：弱碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、酸、内 酯等类型的化合物分离 中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于中性、酸性成分的分离 键合相硅胶（C18或ODS）：分开脂溶性和水溶性成分
离子对试剂的选择
有机溶剂的选择
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱 操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱 装柱方法：湿法装柱、干法装柱 操作程序：①柱的活化；②上样；③清洗；④洗脱。
微柱色谱（固相萃取）
相的分配色谱
Байду номын сангаас
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
离子交换树脂：用于除去样品中的离子及萃取可离解化合物(弱酸、 弱碱药物) （5）固相微萃取（SPME） 集萃取、浓缩、进样于一
体的样品前处理新方法
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（6）消化法--测定中药制剂中的无机元素
洗脱顺序：极性大→小 药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
大孔树脂：分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性（苯乙烯和二乙烯苯 的共聚物）型 非极性型（XAD-2等）：分开脂溶性和水溶性成分 ※ 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗 聚酰胺：与溶质形成氢键而产生吸附作用，常用于含酚、酸、醌类药物样 品液的净化分离 硅藻土、纤维素：以水基质液作为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动
目的：破坏有机物，使无机物游离 湿法消化：
硝酸-高氯酸法：适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制
剂的破坏，无机金属离子均为高价态。 ※ 对含氮杂环类有机物破坏不够完全。
硝酸-硫酸法：适用于大多数有机物的破坏。
※ 与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。 硫酸-硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到 三价砷或锑。 药物分析学 科
时，费溶剂
药物分析学 科
§1 样品的处理
二、样品的提取
（二）回流提取法
采用回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热提取 优缺点及适用范围： 提取效率高，提取时间短，为0.5～2小时；提取杂质较多， 不适用于热不稳定或具有挥发性的成分 （三）连续回流提取 用索氏提取装置，少用混合溶剂，其余操作同回流提取法。 优缺点及适用范围：提取效率高，所需溶剂少，提取杂质较少
第四章
中药制剂的含量测定
【目的要求】
掌握中药制剂含量测定的样品前处理方法及测定方法
的效能指标。
掌握可见-紫外分光光度法、TLCS、HPLC、 GC在中 药制剂分析中的应用。
熟悉荧光分光光度法及原子吸收光度法在中药制剂分 析中的应用。
了解双波长、三波长、差示、导数光谱法在中药制剂
分析中的应用。
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（6）消化法--测定中药制剂中的无机元素
目的：破坏有机物，使无机物游离 干法消化： 灼烧灰化
(+NaCO3/MgO) ※ 控制温度在420℃以下 ※不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。 ※如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（1：3）或稀盐酸-水（1：3） 水浴上蒸干后，继续小火灰化 药物分析学 科
操作简便；不适用于受热易分解的成分。
药物分析学 科
§1 样品的处理
二、样品的提取
（四）超声提取法
样品置容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器中进行提取 优缺点及适用范围： 提取效率高，速度快30min；超声波可引起化学成分的改变 （五）超临界流体提取法（SFE） 优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性高、节省 溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂， 能与色谱和光谱等分析仪器直接联用
药物分析学 科
§1 样品的处理
样品处理的主要作用
释放被测组分，制成稳定试样
除去杂质，纯化 浓缩
试样形式符合测定的要求
一、样品的粉碎
目的——取样均匀，提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机 ※ 粒度大小合适，全部过筛 ※ 防止污染或损失
药物分析学 科
§1 样品的处理
样品处理的主要作用
释放被测组分，制成稳定试样
除去杂质，纯化 浓缩
试样形式符合测定的要求
一、样品的粉碎
目的——取样均匀，提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机 ※ 粒度大小合适，全部过筛 ※ 防止污染或损失
药物分析学 科
§1 样品的处理 掌握每种提取方法的操
二、样品的提取
（一）冷浸法
作、优缺点及应用范围
操作：样品→精密称定→置容器内→精密加入溶剂→称定重量 →浸泡（12~24h）→称重→补足重量→测定 测定方法： 全部测定法：过滤→滤液→蒸干→定容→测定（低浓） 部分测定法：过滤→滤液→取若干体积进行测定（高浓） 优缺点及适用范围： 操作简便，适用于热不稳定的样品，提取杂质较少，但是费
多次萃取（3-4次）
调整水相酸度，提取有机酸、有机碱
利用盐析作用，提高提取率
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（3）液-液萃取法
离子对萃取法 BH++ In- → BH+· In-（水相）→ BH+· In-（有机相） 适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃
水相酸度的控制
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（1）沉淀法
处理样品的 核心
样品+沉淀剂 →沉淀→过滤→滤液→测定 →沉淀→重量法或溶解后测定 复方益母草口服液中水苏碱的含量测定 利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部 分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。
药物分析学 科
§1 样品的处理
（2）蒸馏法
适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、 丹皮酚等 最常用的水蒸气蒸馏法：
共水蒸馏法
通水蒸气蒸馏法
水上蒸馏法
利用盐析作用，提高蒸馏效果
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（3）液-液萃取法
直接萃取法 萃取剂的选择：亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚； 弱亲脂性的溶剂，如乙酸乙酯、正丁醇等
柱填料：硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔硅 藻土、离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18等
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析，强烈保留碱性化合物
洗脱顺序：极性小→大
氧化铝：弱碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、酸、内 酯等类型的化合物分离 中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于中性、酸性成分的分离 键合相硅胶（C18或ODS）：分开脂溶性和水溶性成分
离子对试剂的选择
有机溶剂的选择
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱 操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱 装柱方法：湿法装柱、干法装柱 操作程序：①柱的活化；②上样；③清洗；④洗脱。
微柱色谱（固相萃取）
相的分配色谱
Байду номын сангаас
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
离子交换树脂：用于除去样品中的离子及萃取可离解化合物(弱酸、 弱碱药物) （5）固相微萃取（SPME） 集萃取、浓缩、进样于一
体的样品前处理新方法
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（6）消化法--测定中药制剂中的无机元素
洗脱顺序：极性大→小 药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
大孔树脂：分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性（苯乙烯和二乙烯苯 的共聚物）型 非极性型（XAD-2等）：分开脂溶性和水溶性成分 ※ 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗 聚酰胺：与溶质形成氢键而产生吸附作用，常用于含酚、酸、醌类药物样 品液的净化分离 硅藻土、纤维素：以水基质液作为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动
目的：破坏有机物，使无机物游离 湿法消化：
硝酸-高氯酸法：适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制
剂的破坏，无机金属离子均为高价态。 ※ 对含氮杂环类有机物破坏不够完全。
硝酸-硫酸法：适用于大多数有机物的破坏。
※ 与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。 硫酸-硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到 三价砷或锑。 药物分析学 科
时，费溶剂
药物分析学 科
§1 样品的处理
二、样品的提取
（二）回流提取法
采用回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热提取 优缺点及适用范围： 提取效率高，提取时间短，为0.5～2小时；提取杂质较多， 不适用于热不稳定或具有挥发性的成分 （三）连续回流提取 用索氏提取装置，少用混合溶剂，其余操作同回流提取法。 优缺点及适用范围：提取效率高，所需溶剂少，提取杂质较少
第四章
中药制剂的含量测定
【目的要求】
掌握中药制剂含量测定的样品前处理方法及测定方法
的效能指标。
掌握可见-紫外分光光度法、TLCS、HPLC、 GC在中 药制剂分析中的应用。
熟悉荧光分光光度法及原子吸收光度法在中药制剂分 析中的应用。
了解双波长、三波长、差示、导数光谱法在中药制剂
分析中的应用。
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（6）消化法--测定中药制剂中的无机元素
目的：破坏有机物，使无机物游离 干法消化： 灼烧灰化
(+NaCO3/MgO) ※ 控制温度在420℃以下 ※不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。 ※如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（1：3）或稀盐酸-水（1：3） 水浴上蒸干后，继续小火灰化 药物分析学 科
操作简便；不适用于受热易分解的成分。
药物分析学 科
§1 样品的处理
二、样品的提取
（四）超声提取法
样品置容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器中进行提取 优缺点及适用范围： 提取效率高，速度快30min；超声波可引起化学成分的改变 （五）超临界流体提取法（SFE） 优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性高、节省 溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂， 能与色谱和光谱等分析仪器直接联用
药物分析学 科
§1 样品的处理
样品处理的主要作用
释放被测组分，制成稳定试样
除去杂质，纯化 浓缩
试样形式符合测定的要求
一、样品的粉碎
目的——取样均匀，提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机 ※ 粒度大小合适，全部过筛 ※ 防止污染或损失
药物分析学 科
§1 样品的处理
样品处理的主要作用
释放被测组分，制成稳定试样
除去杂质，纯化 浓缩
试样形式符合测定的要求
一、样品的粉碎
目的——取样均匀，提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机 ※ 粒度大小合适，全部过筛 ※ 防止污染或损失
药物分析学 科
§1 样品的处理 掌握每种提取方法的操
二、样品的提取
（一）冷浸法
作、优缺点及应用范围
操作：样品→精密称定→置容器内→精密加入溶剂→称定重量 →浸泡（12~24h）→称重→补足重量→测定 测定方法： 全部测定法：过滤→滤液→蒸干→定容→测定（低浓） 部分测定法：过滤→滤液→取若干体积进行测定（高浓） 优缺点及适用范围： 操作简便，适用于热不稳定的样品，提取杂质较少，但是费
多次萃取（3-4次）
调整水相酸度，提取有机酸、有机碱
利用盐析作用，提高提取率
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（3）液-液萃取法
离子对萃取法 BH++ In- → BH+· In-（水相）→ BH+· In-（有机相） 适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃
水相酸度的控制
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（1）沉淀法
处理样品的 核心
样品+沉淀剂 →沉淀→过滤→滤液→测定 →沉淀→重量法或溶解后测定 复方益母草口服液中水苏碱的含量测定 利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部 分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。
药物分析学 科
§1 样品的处理