黑色素染色法
黑色素染色方法及诊断学应用
性对 照染色， 镜 下控 制观察黑色素呈黑色为止 。如需要可在第五步后用 Ｏ ． ２ ％ 氯 化金 调色 ，也可选用 Ｖ ａ ｎ Ｇ ｉ ｅ ｓ ｎ ，Ｈ ａ Ｅ做对 比染色。银氨液的配制 保存及使用 中 ，各环节要求 洁净 避光等 ，类似网染。脱 色素漂 白法 即酸化高锰酸钾氧化 ２ — ４ ｈ后草酸漂 白。通常 ，要证实是否有黑色素存在 时，应作 连续切 片染 色：Ｈ Ｅ 染 色，黑色素染色、脱色素漂 白染色 ， 并使用 已知 阳性片作 阳性对照 对无 色素 性 黑色素瘤 ，此法不能显示 ，需用 Ｄ Ｏ Ｐ Ａ反应加 以证实 。银氨液浸染 时间不 宜 过 长（ 置３ ７ ￣ Ｃ 温箱作用 １ ｈ即可） ，除黑色素外 ，亲银颗粒 、嗜铬颗粒 、胆色素、 某 些脂褐素均呈黑色 ，应注意 区别。
家庭心理 医生
２ ０ １ ５年 ５ 月第 ５期
Ｆ ａ ｍｉ Ｉ Ｙ ｐ ｓ ｙ ｃ ｈ ｏＩ ｏ ｇｉ ｃ ａＩ ｄ ｏ ｃ ｔ ｏｒ
临 床 医学
黑色素 染色方法及诊 断农垦九三管理局 中心 医院 黑龙江 嫩江 １ ６ １ ４ ４ １ ）
【中 图 分 类 号 】 Ｒ ４ ４ 【 文 献 标 识 码 】Ａ 【文 章 编 号 】 １ ６ ７ ２ — ８ ６ ０ ２（ ２ ０ １ ５ ） ０ ５ — ０ １ ７ １ — ０ １
黑色 素由起源于神经嵴的黑色素 母细胞所产 生 ， 并移行 到皮肤 、眼和中枢神 经 系统 。正常情况下 ， 皮肤 的表面．毛囊、眼的虹膜、睫状体、脉络膜 ， 脑的软 脑膜， 黑质、迷走背核 交感神经节 ，脊神经 节的节细胞等均可有黑色素存在 常用的银氨液 浸染法还作 为亲银反应显示 类癌的亲银 细胞颗粒。虽 然此法大 多已被特异 的黑 色素瘤抗体 的免疫组化染 色所取代。但 常需结合脱色 素漂白法 的应用 。现以对银氨液浸染法和硫 酸亚铁法操 作方法及诊断应用进行分析。 ｌ染色方法
特殊染色
结缔组织染色法Mallory三色染色法：胶原和网状纤维蓝色，软骨、淀粉样变物质淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒红色，髓鞘和红细胞橘红色。
2.Masson三色染色法：胶原纤维绿色，肌纤维红色，红细胞橘红色。
鉴别胶原纤维和肌纤维最宜采用的方法。
3.三联染色法：胶原纤维红色，网状纤维黑色，弹性纤维绿色，肌肉和红细胞淡黄色。
二.胶原纤维染色1.Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法：胶原纤维鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞黄色，胞核蓝褐色。
与胶原纤维染色相比的缺点是：易褪色和对比度差。
2.天狼星红（Sirius Red）苦味酸染色法：胶原纤维红色，细胞核绿色，其他黄色。
在偏光显微镜下可见4种胶原纤维。
三.网状纤维染色：包括：Gomori和James。
Gomori银氨染色法：网状纤维黑色，胶原纤维红色。
鉴别诊断中的应用：1）癌和肉瘤的鉴别。
2)恶性淋巴瘤和组织细胞肉瘤。
3）血管内皮细胞瘤和外皮细胞瘤。
4）黏液纤维瘤和黏液肉瘤。
四.弹性纤维染色：效果最好的固定液是：甲醛生理盐水。
Gomori醛复红染色法：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色），背景不同程度的黄色。
1）配制后需在室温静置1-2日。
2）是碱性品红加入三聚乙醛和盐酸配制而成。
3）醛复红所谓的成熟是颜色为深紫色。
3)可使胃主细胞着色。
5）应放置在冰箱内保存。
五.显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法：维多利亚蓝+丽春红S：弹性纤维蓝绿色，胶原纤维红色，背景淡黄色。
六.横纹肌组织染色：Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、横纹肌等均蓝色；胶原、网状纤维、骨基质及骨黄色或玫瑰红色。
1）要在室温下成熟。
2）可使用高锰酸钾促使PATH成熟。
3）乙醇分化时要保存一定的红色。
4）染色后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。
七.糖类染色：过碘酸的作用是氧化。
过碘酸-Schiff（PAS）染色法：糖原及其他PAS反应阳性物质红色，细胞核蓝色。
黑色素PPT课件
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黑色素鉴定
• 但单独的每一种都无法用来确认黑色素, 只能采用综合鉴 定法, 将各种鉴定实验所表现出的结果进行综合分析, 以此 来确认待测物是否为黑色素。
黑色素鉴定
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黑色素简介
• 天然黑色素是一种广泛存在与生物体的异源多聚芳香族化 合物，一般由吲哚化合物或者多酚氧化聚合而形成。
• 天然黑色素在水中难溶,且不溶于有机溶剂，可溶于碱溶 液，具有结构复杂、分子量高等特点。
• 同时具有很强的金属螯合能力，因为天然黑色素主要有苯 醌和对苯二酚两个功能基团，两个功能基团根据不同的 pH值，分别在金属离子吸收过程起着主导作用。
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黑色素简介
•天然黑色素是黑色食品中的主要活性成分，具有延缓衰老、 增强免疫力、促进造血功能、保护心血管、抗动脉粥样硬化 等功能特性，植物中的黑色素具有促进视红素再合成、Vp样 机能、改善血液微循环、抗溃疡、抗炎症、抗衰老等多种药 理活性。
•黑色素不仅是一类光保护剂、抗辐射剂、螯合剂、生物抗氧 化剂和免疫促进剂，而且还是一类生物半导体材料。
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黑色素合成
植物黑色素合成的底物主要为含有邻位酚羟基的多酚, 如没 食子儿茶素( ga llocatechin)、儿茶素( catech in)、4- 羟基儿 茶素( lecoantocyan-idin) 的聚合物, 经多酚氧化酶催化氧化 形成邻位醌。这些邻苯醌本来并没有太深的颜色, 但因为此 邻苯醌上拥有众多的助色团酚羟基, 因而颜色就迅速加深, 而 且, 在一定范围内, 聚合度越高, 含有的酚羟基越多, 那么其氧 化产物醌的色泽越深, 直至变成黑色。
生物显微技术 第三章 细胞化学和组织化学
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩
教你几种天然染色法
染发前，必须要确保头发是干净得，不能有摩丝、发胶等定型产品。而且，烫发必须要在染发前做，之间要相隔一周。过敏性皮肤要做过敏测试。
齐耳得短发，用一盒染发膏足以了。齐肩得中发，用1到2盒染发膏，至于长发，可能需要2到3盒。
xx的使用方法
15-20分钟，时间越长效果越好。
3．调成糊状的海娜粉放置50分钟，这样使海娜粉溶解的更加均匀，对头发的粘度和上天然植物色很有帮助。
4．将调好的海娜粉均匀涂抹在头发上，白发多的部位多涂抹，轻轻按摩3-5分钟。
5．用浴帽将头发包好停留2-3个小时，如用电加热只需要45分钟（稍长更好）
6．用清水洗干净即可，两日后再用洗发液清洗。
要别用热毛巾也许吹风机加热，使染发成效更好呢？田洪禹得提议是没必要，20摄氏度得室温已经足以了，热毛巾和吹风机反而能使得染发剂上色不均匀。
染发后及时补色
刚染完头发得，别用电夹板等靓发仪器，高温能严重伤害头发。
洗头时，要用温水。有人怕水温高能使头发褪色，索性用冷水洗。那也错误。
用太凉得水洗，洗发水和护发素得杂质能被锁在毛鳞片里，冲不干净，天长日长，
1.xx50xx，用沸水浸泡20分钟。
2.用“菊花水”将全部头发浸湿后，用热毛巾包一个小时，然后风干后用水洗净。
3.连续用3~5天即可见效果。
☆啤酒染发法变色效果：
黄色
在日本，有研究证明啤酒花的提取物可以用于染黑头发，但是我们用的啤酒和提取啤酒花毫无关联，而且实验证明，低浓度酒精褪色力很强。
染发步骤：
专家点评：
这两个方法是针对不同情况的白发而产生的，效果都很明显，都是充分发挥了何首乌的药用价值，而且安全无毒，环保健康，还有养发、护发和生发等多重作用。操作简单、经济实惠，可以尝试。
粒毛盘菌YM404黑色素发酵、纯化及其染色效果
郭赓 艺， 等： 粒毛盘 菌 Ｙ Ｍ４ ０ ４黑色素发 酵、 纯化及其染 色效果
色素 的影 响 ， 确 定最 佳 发酵 条件 。
１ ． ５ 分级 分 离
１ ０ １
染发剂 ， 但 其 提取液 对天 然 白发 的染 发效果 较 差［ ７ ］ 。因此 ， 研究与开发天然染料的无毒染发剂
１ ０ ｄ 。发 酵 液 抽 滤 ２ ～ ３次 ， 收集发 酵液， 在
Ｚ ＨＷＹ 一 ２ １ ０ ２ 气浴摇床 ， 苏州净化设备有限公 司； 冷冻干燥机 ， 北京博 医康实验仪器有 限公 司； ７ ５ ２ 紫外可见分光光度计 ， 上海 菁华科技仪器有 限公 司； Ａ Ｃ ＱＵ Ｉ Ｔ Ｙ Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ Ｌ ＵＴ 液 质 联 用 仪 ， 美国
Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ 公 司。
吸 光度值 ， 绘 制 其 洗 脱 曲线 。收 集 主要 组 分 经 减
压 浓缩后 ， 于截 留分 子量 为 ２ ０ ０ Ｄ ａ的透 析袋 中透
１ 材料 与方法
１ ． １ 菌株
析４ ８ ｈ ， 冷 冻干燥 后 获得 Ｌ Ｅ Ｍ４ ０ ４的均一组 分 。
１ ． ６ 质 谱 分析
采用 质 谱 联 用 仪 对 Ｌ Ｅ Ｍ ４ ０ ４均 一 组 分 （ Ｌ Ｅ Ｍ４ Ｏ ４ 一 ａ ） 进行质谱 分析。分析条 件Ｅ ］ ： 电喷
果进 行 了评 价 ， 为粒 毛 盘 菌 黑 色 素 资 源 的 开 发利 用 提供 科学 依 据 。
黑色素（ Ｉ Ｅ Ｍ４ ０ ４ ） 。参考文献 ［ ７ ］ 的方法， 采用葡 聚糖 Ｇ － １ ０ ０ 凝胶柱 ， 以０ ． ５ Ｎａ Ｃ Ｏ。 为洗 脱 液 ，
Ｌ Ｅ Ｍ４ ０ ４的质 量 浓 度 为 ２ ０ ｍｇ ／ ｍＬ ， 进 样 量 为 ｌ ｍＬ ， 控 制 流速 为 ３ ０ ０／ ￣ Ｌ ／ ｍｉ ｎ ， 每 管 收集 ５ ｍＬ， 柱温保持 ２ ０℃。收集洗脱液于 ５ ２ ０ ｎ ｒ ｎ下测定
规培考试笔记｜特殊染色技术总结
规培考试笔记｜特殊染色技术总结【常用染色方法】•各类间叶组织染色1、结缔组织多色染色：Masson三色染色法。
2、胶原纤维染色：Van Gieson苦味酸酸性品红染色法。
3、网状纤维染色：醋酸氨银染色法。
4、弹力纤维染色：Verhoeff铁苏木素染色法。
5、横纹肌染色：Mallory磷钨酸-苏木素（PTAH）染色法。
•神经组织染色1、尼氏小体染色：硫堇染色法。
2、神经元和神经纤维染色：Bielschowsky改良法。
3、神经髓鞘染色：Weil染色法。
4、神经胶质细胞染色：Cajal神经胶质细胞染色。
5、能同时显示髓鞘和尼氏小体的染色方法是Luxolfastblue染色法。
•各类聚集物质染色1、脂类物质染色：苏丹Ⅲ染色法。
2、黏液物质染色：过碘酸雪夫染色（PAS染色），又称糖原染色。
3、黑色素染色：氨银染色法（Masson-Fontana染色法）。
4、淀粉样物质染色：刚果红特殊染色法。
•病原菌染色1、抗酸杆菌染色：改良的Ziehl-Neelsen染色法。
2、真菌染色：Grocott六胺银染色法。
3、螺旋体染色：Warthin-Starry染色法。
【染色结果及用途】•各类间叶组织染色1、结缔组织多色染色用苯胺蓝复染时，胶原纤维、软骨、黏液呈蓝色；用亮绿色复染时，胶原纤维、软骨、黏液呈绿色。
肌纤维、红细胞、神经胶质呈红色，胞核呈清晰的蓝黑色。
主要用于肝脏和肾脏穿刺病理的诊断和鉴别。
2、胶原纤维染色镜下胶原纤维呈鲜红色，肌纤维胞质、神经胶质及红细胞呈黄色。
主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别诊断。
3、网状纤维染色镜下网状纤维呈黑色。
在免疫组化开展前用于癌与肉瘤、血管内皮肿瘤与血管外皮肿瘤的鉴别诊断，目前用于观察病变组织纤维化程度。
4、弹力纤维染色镜下弹力纤维呈黑蓝色。
用于显示真皮弹力纤维增生和变性等多种皮肤疾病，观察心内膜和血管壁中弹力纤维增生程度，显示肿瘤组织中的弹力纤维等。
5、横纹肌染色横纹肌纤维呈紫蓝色，胶原纤维和网状纤维呈棕红色。
染色法
各种染色方法苏木精—伊红染色法（HE染色法）石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
活体染色活体染色是指一个获得动物或植物的细胞活组织被染色。
至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞活一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。
活体染色与体外活体染色的主要区别：活体染色是在有机体内部，因此不在空气中而是在还原的环境中进行的，至于体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行的。
所以一种真正的活体染色剂就是在一种生物的活细胞的某种构造上面的染料，但对于细胞、对于组织和对于生命本身不发生任何有害的作用。
活体染料多为碱性染料，如中性红、健那绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。
例如，中性红染液泡系，健那绿染线粒体。
DNA-Feulgen染色方法是DNA定量测定的主要染色方法之一。
其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA 分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。
Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。
也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
Masson-Fontana黑色素染色液
Masson-Fontana 黑色素染色液简介：黑色素属于非血源性内生色素，是一组由黑色素母细胞产生的颜色从浅棕色到黑色的色素。
这种色素通常出现在皮肤表皮、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。
黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成的黑色素可与蛋白质紧密结合。
黑色素另一个物理性质是能够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。
在病理情况下，这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。
在常规HE 染色中不呈黑色而是呈棕黄色或棕黑色。
许多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞，如还原方法，如Masson-Fontana 银技术和Schmorl 三价铁-铁氰化钾还原实验；酶方法(如多巴反应)；荧光方法；免疫组织化学。
Leagene Masson-Fontana 黑色素染色利用黑色素具有将银氨溶液还原为金属银特性即嗜银反应原理来显示黑色素，染色后黑色素呈黑色，该法属于常用的黑色素特殊染色法，效果较其他染色理想。
组成：自备材料：1、 10%中性福尔马林固定液2、 温箱或水浴锅3、 蒸馏水操作步骤(仅供参考)：1、 固定: 10%中性福尔马林是最好的固定液，应当避免使用铬酸盐和氧化汞等固定液。
2、 切片: 所有类型的切片都可以处理，数值切片可能需要做一些调整。
3、 将实验切片及对照切片入蒸馏水中。
4、 入Fontana 氨银溶液，避光浸染或温箱孵育。
4、 蒸馏水多次洗净(5～6次)。
5、 入海波溶液处理切片。
6、 自来水处理。
7、 (可选)入中性红染色液，轻轻复染。
编号 名称DJ0021 3×50mlDJ0021 3×100mlStorage试剂(A): Fontana 氨银溶液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂(B): 海波溶液 50ml 100ml RT 试剂(C): 中性红染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书1份8、蒸馏水冲洗。
百度文库-黑色素染色液(硫酸亚铁法)说明书
过程说明： 1.组织常规脱水包埋，切片脱蜡至蒸馏水。 2.标本入硫酸亚铁液内恒温水浴（37℃）处理 20-30min，
蒸馏水洗 3 次，每次 1 分钟。 3.标本入铁氰化钾醋酸液恒温水浴（37℃）处理 20-30 分
钟。
4.用移液抢吸取冰醋酸溶液稍冲洗标本。 5. Van Gieson 染液滴染 2-3 分钟（Van Gieson 染液临用 前 Van Gieson A：Van Gieson B=1:9 混合，临用前混合） 6.蒸馏水速洗，无水乙醇迅速脱水，二甲苯透明。中性树 胶封固。
染色结果：
产品组成：
货号 S-1526
广州市外显子生物技术有限公司
黑色素染色液（硫酸亚铁法）
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产品说明： 黑色素属于非血源性内生色素，是一组颜色从浅棕色到
黑色的色素。这种色素通常出现在皮肤、眼睛、大脑的黑质 和毛囊中。黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于 大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成 的黑色素可与蛋白质紧密结合。黑色素另一个物理性质是能 够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。在病理情况下， 这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。许 多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞，该染色方法为 亚铁离子吸附法，黑色素能摄取亚铁离子，即把亚铁离子吸 附在黑色素上，形成黑色素亚铁复合物，其后铁氰化钾与亚 铁离子结合，在酸性环境下生成铁氰化亚铁即滕氏蓝反应。
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产品
硫酸亚铁液 铁氰化钾醋酸液
冰醋酸液 Van Gieson 染液
说明书
规格 储存条件
20ml RT 避光 20ml RT 避光 20ml RT 避光 20ml RT 避光
1份
皮肤组织 ×400 结果判定：黑色素呈绿色或墨绿色，胶原纤维呈红色，肌 纤维呈黄色。
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黑色素染色法
【试剂配制】
（1）硝酸银染色液：
在5%硝酸银水溶液中滴加氨水，至其沉淀被溶解，然后再加5%硝酸银水溶液数滴，至溶液呈浑浊为度。
此溶液最好临用时新鲜配置。
（2）5%硫代硫酸钠水溶液
硫代硫酸钠 5 g
蒸馏水100ml
（3）氯化金溶液
氯化金0.2g
蒸馏水100ml
【染色方法】
（1）石蜡切片，脱蜡至水。
（2）投入硝酸银染色液中，并置于暗处12～18小时。
（3）蒸馏水洗2分钟。
（4）以0.2%氯化金水溶液增色5-10分钟。
（5）蒸馏水洗。
（6）投入5%硫代硫酸钠水溶液2分钟。
（7）自来水洗。
（8）如需复染，可用苏木素-伊红染色法。
（9）酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
【结果】黑色素呈黑色。