金免疫技术(参考研究)
一、检测原理
• 将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素膜上，制成 抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依 次在膜上滴加标本、免疫金及洗涤液等，液体很快渗 入吸水材料中，阳性反应即在膜上呈现红色斑点。
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二、方法类型
• 双抗体夹心法测抗原 • 间接法测抗体
免疫学检验
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第二十章 金免疫技术
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本章要点
1. 胶体金免疫渗滤技术的检测原理、方法类型和 关键技术。
2. 胶体金免疫层析技术的检测原理、方法类型和 关键技术。
3. 金免疫技术的方法学评价及临床意义。
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目录
1 胶体金免疫渗滤技术 2 胶体金免疫层析技术
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一、检测原理
将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本滴 加在试纸条的一端，通过层析作用使样品在层析材 料上泳动，样本中的待测物与试纸条上的试剂发生 特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层 析条上的特定区域（检测线），无关物则越过该区 域而被分离，通过胶体金的呈色条带判读实验结果。
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3 于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入，洗去 未结合的胶体金标记抗体。
4 在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判定 为阳性反应；反之则为阴性反应。斑点呈色的深 浅相应地提示阳性强度。
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双抗体夹心法测抗原
待测标本 金标抗体
• 目前临床检验中已开展的项目有：HCG、HBV等。新 项目正在不断发展中。
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小结
• 金免疫技术是以胶体金作为标记物的免疫标记技 术。
• 胶体金免疫渗滤试验是将硝酸纤维素膜上包被抗 原或抗体，将其置于渗滤装置中，进行免疫结合 试验，抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合 物，从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。
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前言
• 金免疫技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原/ 抗体检测的一种免疫标记技术。
• 该类试验的最大特点是不需要大型设备，对检测人员 稍加培训即能掌握操作要求和判定标准。
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• 胶体金也称金溶胶，是由金盐被还原成原金后形成 的金颗粒悬液。
• 胶体金颗粒大小多在1nm～100nm，微小金颗粒稳定 、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体 金溶液。
A
B
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。
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第二节 胶体金免疫层析技术
• 免疫层析技术的原理与渗滤技术相同，不同点在于液 体的移动是基于层析作用的横流，而不是通过直向的 穿流。
• 该方法的试剂为试纸条形式，结构简单。 • 测定项目包括HCG等激素、肿瘤标志物、心血管病标
志物、传染病的抗原和抗体等。
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二、方法类型
• 双抗体夹心法测抗原
A
G
T
C
B
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• 竞争法测抗原
A
G
T
C
B
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三、关键技术
（一）试剂盒组成
A、B两端分别粘贴吸水材料，G处为干燥固定在玻璃纤 维膜等材料上的胶体金结合物，T处粘附有已知的抗体 或抗原，C处为粘附的质控品（抗免疫金抗体），T、C 点物质往往以直线的形式包被在膜上。
A
G
T
C
B
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（二）技术要点
以双抗体夹心法为例： 1 将试纸条标记线一端浸入待测标本中2秒～5秒或在
标本加样处加一定量的待检标本，平放于水平桌面 。 2 5min～20min内观察结果。 3 结果判断。
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双抗体夹心法测抗原
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三、关键技术
（一）试剂盒组成
• 胶体金反应板 • 胶体金标记物 • 洗涤液 • 抗原参照品或抗体阳性对照品
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（二）技术要点
1 将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待 测抗原的标本1～2滴，待完全渗入，待测抗原与 膜上的抗体反应而结合在膜上。
2 于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1～2滴，待完 全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上的待测 抗原反应。
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• 胶体金免疫层析试验是以硝酸纤维素膜为载体将胶 体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的免疫分析 技术。原理与渗滤试验相同，不同的是液体的移动 不是通过直向的穿流作用，而是基于层析作用的横 流。
• 方法学评价 金免疫技术简便、快捷，应用广泛，适 合“床边检验”。
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层析 待 测 标 本
吸 水 垫
金标抗体
包 被
抗
体
包 被 抗 金
标
NC
抗 体
结
膜
合
观
物
察
垫
窗
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吸 水 垫
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阳性 阴性 无效
结果观察
TC
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• 金免疫技术具有操作简便、快速以及操作人员不需 技术培训，除试剂外无需特殊仪器设备，且试剂稳 定，便于保存等优点，因此特别适用于急诊检验。
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优质
胶体金
劣质
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第一节 胶体金免疫渗滤技术
• 免疫渗滤试验始创于1985年，最初以酶作为标记物。 • 20世纪90年代初金免疫渗滤技术得到了快速发展，用
于检测各种传染病的抗体和肿瘤标志物等。 • 目前临床中用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试
剂就是应用这种方法。
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究胶体金免疫层析技术是一种在食品检测中广泛应用的方法。
该技术利用胶体金颗粒的特性，在固体支撑上进行免疫层析反应，实现对分析物的检测。
本文将从胶体金免疫层析技术的原理、方法和应用等方面进行介绍，并探讨该技术在食品检测中的优势和未来发展方向。
首先，胶体金免疫层析技术是基于免疫学原理的一种快速、灵敏、特异的检测方法。
该技术利用胶体金颗粒的特殊性质，即在纳米尺度下具有高度可控的光学和电化学性质。
由于胶体金颗粒的尺寸和形态可以通过调整合成条件进行控制，因此可以用于检测不同大小和形态的分析物，包括蛋白质、DNA、细菌等。
其次，胶体金免疫层析技术的方法简单、操作便捷、成本低廉。
在实际操作中，只需将样品滴加到含有胶体金颗粒和特异抗体的免疫纸条上，然后等待几分钟即可观察到胶体金颗粒在纸条上的迁移情况。
通过观察纸条上的色带出现与否以及色带的颜色变化，可以判断样品中是否存在目标分析物，并进行定量分析。
相比于传统的基于酶标记技术的免疫层析方法，胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备和多步酶标记过程，因此更加简便快速。
再次，胶体金免疫层析技术在食品检测中具有广泛应用前景。
目前，该技术已被应用于多种食品中的残留物检测，包括食品中的农药、重金属、毒素等。
例如，研究人员利用胶体金免疫层析技术能够检测到食品中的抗生素残留、农药残留、酶毒素等，在食品安全监测中起到了重要的作用。
此外，胶体金免疫层析技术还可以应用于快速检测食品中的转基因成分、食品中的过敏原等。
最后，尽管胶体金免疫层析技术在食品检测中已经取得了一定的成就，但仍面临一些挑战和未解决的问题。
例如，该技术在样品预处理、灵敏度、特异性等方面还需要进一步优化和改进。
此外，胶体金颗粒的稳定性和存储问题也需要解决，以确保该技术能够在实际应用中长期稳定地实现。
因此，未来的研究方向应该着重解决这些问题，提高胶体金免疫层析技术的准确度和可靠性。
综上所述，胶体金免疫层析技术作为一种快速、灵敏、特异的检测方法，具有广泛的应用潜力。
免疫胶体金的技术
2. 凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 ? TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集洗脱液
1. 光镜免疫金银法 3 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 3 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 3 阳性部位呈黑色颗粒状 32. 电镜免疫金银法 3 包埋前染色, 包埋后染色
【IGSS法优点】
1. 可被用于光镜和电镜观察 2. 敏感性高 3. 定位准确 4. 背景清晰, 对比度好 5. 方法简便, 安全 6. 成本较低, 标本可长期保存
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 u 电解质 u 胶体金浓度 u 温度 u 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
( 七) 标记探针的鉴定
1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜( 支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
四. 免疫胶体金染色方法
( 一 ) 免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
( 五）标记
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
免疫金技术
六、胶体金的应用
1、胶体金可用于标记许多生物大分子，如：免 疫球蛋白、卵白素、植物血凝素、脂蛋白、糖蛋 白等。
2、用胶体金可制备不同的免疫金探针。 3、胶体金主要在电镜水平的应用。 4、胶体金在光镜水平的应用。 5、凝集实验 6、免疫印迹技术
七、胶体金在电镜水平的应用
1、胶体金在电镜水平的研究最早，应用最泛，其最大优 点是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重 或多重标记。直径为3~15nm胶体金均可用作电镜水平 的标记物。3~15nm的胶体金多用于单一抗原的检测， 而直径15nm多用于检测量较多的感染细胞。
二、什么是胶体金
胶体金是氯金酸在还原剂如：白磷、抗坏血酸、
柠檬酸钠和鞣酸等作用下，聚集成特定大小的金 颗粒，由于静电作用成为一种稳定胶体状态的水 溶胶，具有高电子密度，在碱性环境中带负电， 能与蛋白质分子的正电荷基团借静电吸引而形成 牢固结合。 胶体金颗粒由一个基础金核(原子金Au)及包围在 外的双离子层构成，紧连在金属表面的是内层负 离子，外层离子层则分散在胶体间溶液中，
②取出透析蛋白溶液，4℃ 10000g/min离心1h，取上清液，弃 沉淀，去除聚合物。 ③用0.2mol/Lk2co3或0.1mol/LHCl调节胶体金的PH ④根据待标记蛋白质的要求，调节胶体金溶液的PH后，分装10 管，每管1mL。 ⑤将待标记蛋白用PH9.0、0.005mol/L硼酸盐缓冲液做系列稀 释为5~50ug/Ml,分别取1mL加入1管金溶胶液内。混合均匀。
四、胶体金的制备
根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体
金颗粒。常用来制备胶体金颗粒的方法如下。 ①白磷还原法 ②抗坏血酸还原法 ③柠檬酸三钠还原法 ④硼氢化钠还原法 ⑤鞣酸-柠檬酸钠还原法 (参考书上第146-147页）
免疫胶体金技术
面临挑战与解决策略
技术挑战
提高胶体金的合成效率、稳定性和生物相容性，降低生产成本，推动技术的实际应用。
应用挑战
拓展免疫胶体金技术在生物医学领域的应用范围，提高其在实际应用中的准确性和可靠 性。
法规与伦理挑战
建立健全相关法规和标准体系，规范免疫胶体金技术的研发和应用，确保其安全性和有 效性。同时，关注伦理问题，尊重人类生命和尊严，推动技术的健康发展。
环境毒理学研究
毒性评估
利用免疫胶体金技术，可以研究 环境污染物对生物体的毒性作用 ，评估其对生态系统和人类健康
的影响。
毒理机制研究
该技术可用于揭示环境污染物与生 物体相互作用的分子机制，为环境 毒理学的深入研究提供有力工具。
污染物代谢研究
通过免疫胶体金技术，可以研究环 境污染物在生物体内的代谢过程， 了解其在生物体内的转化和排泄途 径。
食品营养成分分析
蛋白质检测
利用免疫胶体金技术，可以准确测定食品中的蛋白质含量，为食品 的营养价值评估提供依据。
维生素检测
该技术可用于食品中多种维生素（如维生素A、维生素E等）的定量 分析，有助于评价食品的营养成分组成。
矿物质检测
通过免疫胶体金技术，可以检测食品中的矿物质元素含量，如钙、铁 、锌等，为食品的营养价值提供全面数据。
02
免疫胶体金制备技术
原料选择与处理
01
02
03
氯金酸的选择
选择高纯度的氯金酸作为 原料，确保胶体金的合成 质量。
还原剂的选择
常用还原剂如柠檬酸三钠 、抗坏血酸等，用于将氯 金酸还原为金颗粒。
溶液配制
将氯金酸溶解在适量超纯 水中，配制成一定浓度的 氯金酸溶液。
胶体金合成方法
免疫胶体金技术的基本原理及其在兽医临床中应用的研究进展
3、多指标并行检测：未来免疫胶体金技术可能发展为多指标并行检测的能 力，同时检测多种病原体或指标，提高检测的广度和深度，满足兽医临床更为复 杂的需求。
4、生物信息学结合：将免疫胶体金技术与生物信息学相结合，可以实现大 数据分析、机器学习等算法在免疫胶体金技术中的应用，从而进一步提高其诊断 准确性和流行病学调查的精细程度。
五、未来展望
免疫胶体金技术在兽医临床中的应用前景广阔，未来其可能的应用场景和发 展方向包括：
1、拓展应用范围：免疫胶体金技术在兽医临床中的应用领域仍有待进一步 拓展。例如，可以探索其在兽药残留检测、动物食品质量安全监控等方面的应用， 提高动物产品的质量安全水平。
2、集成化与自动化：随着科技的进步，免疫胶体金技术的操作流程可能实 现更高程度的集成化和自动化，提高检测效率和准确性。例如，通过引入微流控 技术，实现样本的前处理、反应液的快速混合、洗涤等步骤的自动化操作。
二、免疫胶体金技术在兽医临床 中的应用意义
免疫胶体金技术在兽医临床中具有广泛的应用价值，其主要体现在以下几个 方面：
1、疾病诊断：免疫胶体金技术可用于动物体内多种病原体的快速诊断。例 如，可用免疫胶体金技术检测动物血清中的病毒抗原或抗体，辅助诊断禽流感、 猪瘟等重大动物疫病。此外，免疫胶体金技术也可用于动物体内其他细菌感染、 寄生虫感染等疾病的诊断。
一、免疫胶体金技术的基本原理
免疫胶体金技术是一种将抗体或抗原固定在胶体金颗粒表面的标记技术。胶 体金颗粒在溶液中由于静电作用而形成稳定的胶体溶液，当加入特异性抗体或抗 原时，抗体或抗原的特异性识别作用与金颗粒表面结合，形成特定的免疫胶体金 复合物。当加入样品溶液后，免疫胶体金复合物可与样品中的目标抗原或抗体结 合，形成肉眼可见的红色或紫色斑点或线条，从而实现定性或定量分析。
金免疫技术
胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核， 胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核，较 小的胶体金颗粒基本是圆球形的， 小的胶体金颗粒基本是圆球形的，较大的胶体金 颗粒（一般指大于30nm以上的 多呈椭圆形。 以上的） 颗粒（一般指大于30nm以上的）多呈椭圆形。在 电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态。 电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态。
第一节 胶体金与免疫金的制备
一、胶体金特性及其制备 二、免疫金的制备 三、免疫金的保存
一、胶体金特性及其制备
1.胶体金的结构 1.胶体金的结构 2.胶体金性状 2.胶体金性状 3.胶体金的制备 3.胶体金的制备 4.胶体金鉴定 4.胶体金鉴定 5.胶体金保存 5.胶体金保存 6.注意事项 6.注意事项
测定时先将缓冲液加在D处层析至C处使金标物复溶， 测定时先将缓冲液加在D处层析至C处使金标物复溶，然后将 标本加在E处使其与染料一起在膜的层析作用下向F端移动， 标本加在E处使其与染料一起在膜的层析作用下向F端移动， 若标本中有待测抗体存在， 若标本中有待测抗体存在，则与膜上抗原结合形成抗原抗体 复合物，待有色染料延伸至膜上标记线G处时， 复合物，待有色染料延伸至膜上标记线G处时，在F处加缓冲 合上测试卡， 处的强大吸水作用使膜上液体反向流动， 液，合上测试卡，A处的强大吸水作用使膜上液体反向流动， 标本中非特异性IgG及无关物向 处反向层析， 及无关物向E 标本中非特异性IgG及无关物向E处反向层析，随后而来的金 标羊抗人抗体与抗原抗体复合物结合，出现棕红色线条。 标羊抗人抗体与抗原抗体复合物结合，出现棕红色线条。无 棕红色线条出现则表明血清中无特异性抗体。 棕红色线条出现则表
金免疫技术
金免疫技术（ 金免疫技术（colloidal gold immunoassay technique） technique）是一种以胶体金作为标记物的免 疫标记技术。 疫标记技术。 1970s由Faulk和Taylor始创 1970s由Faulk和Taylor始创，最初用于免疫 始创， 电镜技术。 电镜技术。 金免疫技术用于: 免疫组织化学染色; 金免疫技术用于: 免疫组织化学染色; 金 免疫测定
胶体金免疫层析技术原理
胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是一种常用的生物分析方法，其原理基于抗原与抗体之间的特异性结合。
在这种技术中，胶体金颗粒被用作标记物，以便在样品中检测特定的抗原或抗体。
胶体金颗粒是一种具有特殊化学和物理性质的纳米材料。
它们具有高度可控的形状和大小，并且表面易于修饰。
这使得它们成为生物学研究和诊断中广泛使用的标记物。
在胶体金免疫层析技术中，首先需要制备具有特异性结合能力的抗体。
这通常涉及到将目标分子（即要检测的抗原）注射到动物中，以刺激其产生相应的抗体。
然后从动物血清中提取这些抗体，并进行纯化和检验。
接下来，需要将这些抗体固定在固定相上。
通常使用聚合物或硅胶微球作为固定相。
这些固定相表面通常都含有活性基团，可以与抗体上的氨基酸或半胱氨酸等官能团发生化学反应，从而将抗体固定在固定相上。
然后，将这些固定相与样品混合，并加入胶体金颗粒。
这些胶体金颗粒表面通常都含有某种亲和剂，例如羧基、胺基或硫醇基等。
这些亲和剂可以与固定相表面上的活性基团发生化学反应，从而将胶体金颗粒与固定相结合。
当样品中存在目标分子（即要检测的抗原）时，它们会与固定相上的抗体结合。
这会导致在胶体金颗粒表面形成一层薄薄的抗原-抗体复合物。
由于胶体金颗粒具有特殊的光学性质，在紫外线或可见光照射下会呈现出明显的色泽变化。
因此，通过观察样品中是否存在红色或紫色条带，就可以判断样品中是否存在目标分子。
需要注意的是，在进行胶体金免疫层析技术时需要控制多个因素以确保准确性和稳定性。
其中一个重要因素是选择适当的抗原和抗体对。
必须确保它们之间具有高度特异性的结合能力，以避免误报和假阳性结果。
此外，还需要控制反应时间、温度和pH值等因素，以确保反应的可重复性和稳定性。
总之，胶体金免疫层析技术是一种简单、快速、灵敏和特异性高的生物分析方法。
它在生物学研究、医学诊断和环境监测等领域中得到了广泛应用。
金免疫测定技术
（2）于小孔内滴加免疫金试剂3滴，待完全渗入。
（3）于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入。 （4）目测观察结果
结果判断
在膜中央有清晰的红色斑点者判为阳性反应，说
明标本HCG阳性；反之则为阴性反应，说明标本 HCG阴性。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
结果书写
例如：1号标本醋酸纤维膜中央出现红色斑点，该
抗体、毒品类药物及HCG等检测。
金免疫测定技术灵敏度不及酶标法和酶发光免疫
测定法，在临床应用中意事项
（1）打开层析条包装后应在1h内应用。
（2）将层析条插入样品中，样品的液面不 能超过试剂条的标记线。
应用与评价
这两种方法具有操作简便、快捷以及操作人员不
需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定、便 于保存等特点，因此特别符合POCT项目的要求。
只作为定性或半定量试验，常用于传染病抗原和
滤出膜片。其后加入的免疫金在渗滤过程中与已
结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，
阳性反应即在膜中央显示红色斑点（胶体金聚
集）。
免疫金
HCG 抗HCG抗体 醋酸纤维素膜
主要材料
试剂盒：渗滤装置、免疫金、洗涤液
器材：一次性滴管
标本：尿液
操作步骤
（1）将反应板平放于实验台上，于小孔内滴加尿 液5滴，待完全渗入。
标本为HCG阳性
注意事项
注意试剂的保存及使用温度。
正确操作，注意加入尿液样品量和免疫金 试剂量。
斑点金免疫层析试验
原理
主要材料
层析条
标本：尿液
操作步骤
（1）将试剂条的加样端浸入尿液中2-5s，取
出，平放于桌面上。
胶体金免疫层析法实验报告
胶体金免疫层析法实验报告胶体金免疫层析法实验报告胶体金免疫层析法是一种常用的生物化学实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
本实验旨在通过胶体金免疫层析法检测目标蛋白质的存在与浓度。
1. 实验原理胶体金免疫层析法基于抗原与抗体的特异性结合原理，利用胶体金颗粒的特殊性质进行检测。
胶体金颗粒具有较大的比表面积和表面增强效应，能够与抗体发生特异性结合。
当抗原与抗体结合形成免疫复合物时，会导致胶体金颗粒的聚集或分散，从而产生可见的颜色变化。
2. 实验步骤2.1 样品制备：将待检测的目标蛋白质样品进行提取和纯化，获取高纯度的目标蛋白质溶液。
2.2 胶体金标记：将胶体金颗粒与特异性抗体进行结合，形成胶体金-抗体复合物。
这一步需要注意控制反应条件，使得胶体金颗粒均匀分散，避免团聚。
2.3 免疫层析：将样品和胶体金-抗体复合物混合，使其发生特异性结合。
然后将混合物加载到层析柱中，通过重力或离心作用，将未结合的物质流出。
2.4 结果分析：观察层析柱中的颜色变化，根据颜色深浅判断目标蛋白质的存在与浓度。
3. 实验结果实验结果显示，当目标蛋白质存在于样品中时，胶体金颗粒会与其特异性抗体结合，导致胶体金颗粒聚集，层析柱呈现深色。
而当目标蛋白质不存在或浓度较低时，胶体金颗粒不会聚集，层析柱呈现浅色或无色。
4. 实验优势与应用胶体金免疫层析法具有以下几个优势：4.1 灵敏度高：胶体金颗粒具有较大的比表面积和表面增强效应，能够增强目标物的检测信号，提高灵敏度。
4.2 特异性强：通过特异性抗体与目标蛋白质结合，可以准确检测目标物，避免干扰物的干扰。
4.3 操作简便：实验步骤简单，无需复杂的仪器设备，适用于实验室和临床现场。
4.4 多样性应用：胶体金免疫层析法可用于检测血清中的生物标志物、药物残留、病原微生物等，广泛应用于临床诊断、食品安全和环境监测等领域。
5. 实验注意事项5.1 样品处理：样品的提取和纯化过程需要严格控制，以避免杂质的干扰。
17.2-金免疫标记技术
一 洗 净 双 手
四
立 即 加 1 2 滴 缓 冲 液
操作
二 用 采 血 针 采 指 尖 血
样三 孔将 1 滴 指 尖 血 滴 入 加
？？结果
步骤5：15分钟读 取结果
？？结果
讨论分析
胶体金标记技术 (Immunogold labeling technique)
是以胶体金作为示 踪标记物，应用于 抗原抗体反应的一 种新型免疫标记技 术。
讨论分析
制备高质量胶体金的注意事项
（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃 器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双 馏水冲洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活 化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。 （2）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用 双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的 试剂经超滤或微孔滤膜（0.45µ m）过滤，以除去其中 的聚合物和其它可能混入的杂质。
讨论分析
2．鞣酸—枸橼酸钠还原法 A液：1％HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。 B液：1％枸橼酸三钠4ml，1％鞣酸0.7ml，0.1Mol/L K2CO3液0.2ml，混合，加入双馏水至20ml。
将A液、B液分别加热至60℃，在电磁搅拌下迅速将 B液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变 成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm。如需 要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字 调整鞣酸及K2CO3的用量
讨论分析
示踪剂：以胶体金为指示剂，本 身形成免疫分析过程后的颜色标记
符号显示结果
自带质控对照
快速：全部检测过程 仅需 3-20分钟。
简便、经济实用
可单份检测，稳定性好