动物细胞培养技术实验教程内容
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞培养实验2
实验题目：动物细胞培养教师：XXX实验类型：综合学时：26(参考)内容：一、实验目的通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。
初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。
二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌操作。
三、试剂与器材1.材料出生后2-3天的乳鼠2.试剂平衡盐液－Hank液细胞消化液 0.5%水解乳蛋白-Hank液犊牛血清碳酸氢钠 1万单位/ml青、链霉素 3%谷氨酰胺磷酸盐缓冲液3.实验器材镊子解剖刀剪眼科剪眼科镊纱布块玻璃漏斗量筒记号笔试管试剂瓶三角瓶移液管培养皿培养瓶吸管橡皮头显微镜血细胞计数板计数器酒精灯酒精棉球试管架试管解剖板碘酒棉球口罩二氧化碳培养箱超净工作台灭菌锅倒置显微镜四、实验内容原代培养：取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→观察。
传代培养：配置培养液→消化细胞→细胞计数→培养观察。
培养细胞冷冻保存。
五、关键步骤及注意事项1. 注意无菌操作，及时更换培养液。
六、思考题1. 简述细胞传代培养的操作程序注意事项？2. 细胞培养获得成功的关键要素是什么？3. 简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。
动物细胞培养实验方案
动物细胞培养实验方案一、实验目的：1.掌握动物细胞的培养技术；2.了解动物细胞的生长特点和培养条件要求；3.学习观察和分析动物细胞的形态变化和生长状态。
二、实验器材与试剂准备1.器材：细胞培养器皿（如培养皿、蜡烛罩、CO2培养箱等）、离心机、显微镜、细胞计数板、计时器等；2.试剂：细胞培养基、培养液添加剂（如酶、抗生素等）、PBS缓冲液、生长因子、染色剂等。
三、实验步骤1.细胞培养基的配制：按照制定的配方将培养基粉末加入适量的无菌去离子水中，搅拌均匀后，进行高温高压灭菌，冷却后分装至培养器皿中；3.细胞处理和接种：将收集到的组织先用PBS缓冲液洗涤，然后使用细胞裂解酶或胰酶等消化酶消化组织，使细胞分散，处理成单个细胞后，用细胞计数板计数，并将细胞悬液接种到预先准备好的培养器皿中；4.细胞培养条件的控制：将培养器皿置于CO2培养箱中，设定适当的温度（通常为37℃）、湿度和CO2浓度（通常为5%），并保持稳定；5.细胞培养的观察和记录：观察培养皿中细胞的形态变化和生长状态，记录细胞的外观、增殖情况、易于观察的指标等；6.细胞的子培养和冻存：当细胞达到一定密度时，可以进行子培养，即将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中，以促进细胞的增殖和保存细胞生物资料。
此外，也可以将分散的细胞加入由培养液和冻存剂组成的试管中，通过冷冻的方式保存细胞，并用于后续的实验。
四、实验控制与常见问题的解决1.环境控制：细胞培养箱中的温度、湿度和CO2浓度的调整应尽量保持稳定；2.培养基的配制：根据细胞培养物的不同，可以选择不同配方的培养基，确保培养基的质量符合要求；4.洗涤步骤：组织或细胞的洗涤步骤应轻柔，避免对细胞的损伤；5.细胞的接种量：对于粘附性细胞，接种量应适当，以避免细胞过度堆积或过度稀释。
五、实验结果和分析观察培养皿中细胞的生长状态、细胞数量以及形态的变化，记录生长状态、增殖情况和其他可以观察到的指标，并进行数值化分析和统计。
第三章 动物细胞培养基本技术
反应。
• 在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，
迫切需要用无血清培养基培养细胞．
无血清培养基
• 研制策略：在基础培养基中补充各种必需因子，如
激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子 等。 • 由基础培养基和替代血清的补充成分组成。 • 1975 年，Sato 首次成功地用无血清培养基培养了垂 体细胞株，近 20 多年来已报道了几十种细胞系在无 血清培养基中成功地生长和增殖。
பைடு நூலகம்
培养瓶中继续培养，称为传代培养。
• 原代培养物经首次传代成功即成细胞系，
• 已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细
胞系或无限细胞系
• 细胞系可泛指一般可能传代的细胞。其中不能连续
培养的称为有限细胞系。 • 细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从 原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物 的培养物称为细胞株（Cell Strain），也就是说，细 胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单
5. 组织培养细胞一代生存期
• 所谓细胞“一代”一词，系指从细胞接种 到分离再培养时的一段时间，这已成为培 养工作中的一种习惯说法，它与细胞倍增 一代非同一含义。如某一细胞系为第153代 细胞，即指该细胞系已传代153次。它与细 胞世代或倍增不同；在细胞一代中，细胞 能倍增3～6次。细胞传一代后，一般要经 过以下三个阶段：
• 自动双重纯水蒸馏器，纯水仪
• 耗材：培养瓶，吸管，电动吸引器，培养板， 冻存管
1. 压力蒸汽消毒器
• 湿热消毒，用途广
2. 电热干燥箱
• 干热消毒（160 ℃ ，2 小时）。
• 主要用干玻璃器皿消毒
3. 滤器
• 过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成
实验 动物细胞培养基础实验技术
实验动物细胞培养基础实验技术——器械的清洗与消毒实验目的：学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。
实验用品：1．仪器和用品：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器、紫外灯、0.22μm/0.45μm微孔滤膜。
2．试剂：75%酒精、5%HCl、1‰新洁尔灭、重铬酸钾。
实验内容：1．准备培养用血清瓶（PBS、培养基，约10套，包括20、50ml）、培养瓶（50个）、玻璃滴管（若干）、离心管（10ml）、EP管若干、不锈钢滤器、胶塞、滴头等。
2．分别包装上述物品，其中血清瓶和瓶盖分别包装，玻璃吸管置于不锈钢筒中、玻璃离心管、 EP管分别置于饭盒中。
3．将上述物品置于高压灭菌锅中进行消毒灭菌。
4．实验室准备。
实验步骤（一）清洗1．玻璃器皿的清洗浸泡刷洗浸酸冲洗（1）. 新购玻璃血清瓶先用洗衣粉洗，再以0.1-0.05 mol/l HCl 浸泡数小时，然后用铬酸浸泡过夜，最后用自来水、一次与二次去离子水洗净后才能开始使用。
（2）. 用过之玻璃血清瓶，用洗衣粉洗净后铬酸浸泡过夜，最后用自来水、用一次与二次去离子水冲洗干净。
此外，玻璃器皿的瓶子的盖子必须也泡铬酸，培养瓶瓶盖可以不用泡铬酸，高温灭菌的时候要拧上瓶盖，留有一定的缝隙，灭菌后盖紧。
瓶盖的上面应当用锡箔纸或者牛皮纸包住，用绳子扎紧2．塑料器皿的清洗自来水充分浸泡冲洗 2%NaOH浸泡过夜蒸馏水漂洗3次 2%-5%盐酸浸泡30min 自来水冲洗晾干紫外线照射30min3．胶塞等橡胶类的清洗自来水冲洗 2%NaOH 煮沸15min 自来水冲洗蒸馏水煮沸10min 自来水冲洗5次以上2%-5%HCl煮沸15min 晾干晾干后高压灭菌4．金属器械的清洗新购置的器械用过的器械（二）包装分为局部包装和全包装。
为了防止消毒灭菌后再次遭受污染。
按照不同类别进行包装。
（三）消毒灭菌主要包括物理法和化学法。
物理法：热灭菌、蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、熏蒸消毒、煮沸消毒。
动物细胞培养技术实验
实验十五动物细胞培养技术及其应用一．实验目的通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。
二. 实验内容1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术；2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术；3.细胞污染检测方法与技术；4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。
三．实验用品1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH试纸、酒精棉球等3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。
四．实验方法与步骤（一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏1. 缓冲液及培养基配制Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。
4℃下保存。
胰蛋白酶液：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。
MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。
动物细胞培养教案教学设计
动物细胞培养教案教学设计一、教学目标1.让学生了解动物细胞培养的基本原理和步骤。
2.培养学生动手操作能力，提高实验技能。
3.引导学生思考动物细胞培养在实际应用中的意义。
二、教学内容1.动物细胞培养的基本原理2.动物细胞培养的步骤3.动物细胞培养的应用三、教学重点与难点1.教学重点：动物细胞培养的基本原理和步骤。
2.教学难点：动物细胞培养的具体操作方法。
四、教学过程（一）导入1.利用多媒体展示一些与动物细胞培养相关的图片，如细胞培养皿、细胞培养液等。
2.邀请学生分享他们对动物细胞培养的了解。
（二）基本原理1.介绍动物细胞培养的基本原理，包括细胞生长、细胞分裂、细胞代谢等。
2.通过图示和案例，让学生了解细胞培养过程中所需的营养物质、生长因子、氧气等。
（三）操作步骤1.介绍动物细胞培养的操作步骤，包括细胞悬液的制备、细胞接种、细胞培养、细胞观察等。
2.利用视频或现场演示，让学生直观地了解每个步骤的具体操作方法。
（四）实验操作1.将学生分组，每组分配一个实验任务，如细胞悬液的制备、细胞接种等。
2.指导学生按照操作步骤进行实验，并及时解答他们在实验过程中遇到的问题。
（五）应用拓展1.介绍动物细胞培养在实际应用中的意义，如疾病治疗、药物研发等。
2.通过案例分析，让学生了解动物细胞培养在科研和生产中的应用。
（六）课堂小结2.鼓励学生在课后进一步了解动物细胞培养的相关知识。
五、教学反思1.学生对动物细胞培养的基本原理和步骤的理解程度。
2.学生在实验操作中的表现，如动手能力、实验技能等。
3.学生对动物细胞培养在实际应用中的认识和理解。
4.教学过程中存在的问题和不足，如何改进教学方法和手段。
通过本次教学，教师应努力提高学生的实验技能和动手能力，激发他们对生物科学的兴趣，为培养创新型人才奠定基础。
【重难点补充】一、教学重点与难点教学重点：动物细胞培养的基本原理和步骤。
教学难点：动物细胞培养的具体操作方法。
（二）基本原理1.教师讲解：同学们，我们知道细胞是生物体基本的结构和功能单位。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告实验目的本实验的目的是通过培养和观察动物细胞，了解细胞的结构和功能。
实验材料和设备•动物细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养罩•无菌移液器•显微镜•离心机实验步骤步骤一：准备工作1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒，确保无菌环境。
2.准备所需的实验材料和设备。
步骤二：细胞培养基的制备1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中，每个培养皿倒入适量的培养基。
2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。
3.将培养皿放入细胞培养罩中，用透明膜封闭。
步骤三：细胞的收获1.从实验动物体内提取所需的组织样本，保持组织样本的完整性和无菌状态。
2.将组织样本置于离心管中，加入少量的预先准备好的细胞培养基。
3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。
4.将混合液转移到培养皿中，确保液体均匀覆盖培养皿表面。
步骤四：细胞培养1.将培养皿放入孵化器中，设置合适的温度和湿度，提供细胞生长所需的最佳环境条件。
2.定期观察培养皿内细胞的生长情况，记录细胞的数量和形态变化。
步骤五：细胞观察1.从培养皿中取出一小部分细胞，放入显微镜载玻片上。
2.将载玻片放入显微镜下，使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞器的结构。
3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。
实验结果和讨论通过以上步骤，我们成功地进行了动物细胞的培养实验，并观察到了细胞的生长和形态变化。
在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构，可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段，通过培养和观察细胞，我们可以深入了解细胞的生命活动和疾病发生机制。
在实验过程中，我们需要保持无菌操作，以确保细胞的纯度和生长条件的良好。
细胞培养实验的结果和观察对于生物医学研究和药物开发具有重要意义。
通过改变培养条件和添加适当的药物，我们可以研究细胞的响应和代谢途径，为新药物的筛选和评估提供重要依据。
结论通过本次实验，我们成功地培养和观察了动物细胞。
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实验1 细胞培养概述（一）细胞培养室的设置和无菌操作【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
【实验目的】①了解培养室的设置和设备。
②学习无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下几点：①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照射的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过2米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流动。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。
2．实验室常用设备（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③干燥箱：洗涤完的玻璃器皿用干燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培养室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
根据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，基本原理大致相同，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
但两种净化台的气流方向不同。
使用超净工作台应注意的几点问题：A．净化工作台最好安装在无尘的房间内，最好为隔离好的无菌间内，以免尘土过多易使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。
B．新安装的或长期未使用的工用台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
C．每次使用工作台时，应先用75%酒精擦洗台面，并提前以30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内积累的微生物。
在关闭紫外灯后应启动送风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
D．净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流型不受干扰。
E．一般情况下，高效过滤器三年更换一次。
更换高效滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。
要定期将粗过滤器中的过布（无纺布）拆下清洗，时间应根据环境洁净程度而定，通常间隔3~6个月进行一次。
F．每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品，并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。
②4℃冰箱和低温冰箱：③CO2培养箱：A．一定浓度的CO2对细胞生长，尤其是原代培养和单细胞培养有促进作用（5%）。
B．一定浓度的CO2可维持培养液恒定的pH。
适用于开放培养，培养箱封口后，可在一般恒温培养箱内培养，但是采用培养皿或多孔板培养时，则需要高湿度和高CO2含量的空气。
C．它增加了湿度，箱体内装有水浴，可以保证培养箱内的湿度。
D．培养箱内装有紫外灯。
E．通过气体流量计可以调节CO2和空气的比例。
F．在水中可加入防腐剂（二氧乙酸）。
可防止因CO2培养箱中湿度较高，易长霉菌。
④离心机：⑤CO2钢瓶：⑥液氮罐：⑦储品柜：用来存放杂物⑧紫外灯：⑨空气净化系统⑩倒置显微镜3．无菌操作（1）无菌室的灭菌：①紫外灯无人时就要打开；②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩；③每周清洗消毒一次；④所用物品要以外科手术方式严格消毒；⑤室内台面要要保持洁净，做完实验后，用75％酒精或千分之三新洁尔灭棉球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等；⑥所用物品要一次性准备好；⑦瓶口要用酒精火焰消毒；⑧尽量减少出入。
（2）实验人员的无菌准备：①肥皂洗手②穿好隔离衣③酒精棉球擦手【实验报告】画出一个标准细胞培养室的草图，标明各室的必须设备。
【思考题】1．观看演示填写出无菌操作的要领。
2．在无菌室工作时应注意的事项是什么？3．实验过程中如何才能在头脑中形成良好的无菌概念？（二）器械的清洗与消毒【实验原理】在组织培养过程中，离体细胞对任何毒性物质都十分敏感。
毒性物质包括解体的微生物及细胞残余物以及非营养的化学物质，因此对新采用和重新使用的培养皿等培养用品都要严格清洗和消毒。
【实验目的】学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。
【仪器、材料及试剂】1．仪器：超净工作台，干燥箱，高压锅，过滤器。
2．材料：0.22μm微孔滤膜。
3．试剂：75%酒精，0.1%新洁尔灭，高锰酸钾，重铬酸钾，浓硫酸。
【操作步骤】1．清洗（1）玻璃器皿的清洗步骤：按浸泡→刷洗→浸酸→冲洗等四步程序进行。
①浸泡：新购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、碑等有害物质，故先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%~5%盐酸浸泡过夜或煮沸30min，水洗。
要领：培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能顺利进行。
用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。
②刷洗：用软毛刷、优质洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干。
要领：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以易选用软毛刷和优质洗涤剂。
禁止用去污粉。
因其中含有砂粒。
会严重破坏玻璃器皿的光洁度。
特别注意刷洗瓶角部位。
酸浸之前要把洗涤剂冲干净。
③浸酸：将器皿浸泡于清洁液24h，如急用也不得少于4h。
清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成，具有很强的氧化作用，去污能力很强。
经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的末刷洗掉的微量杂质可被完全清除。
④冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲流10min，瓶皿需每瓶灌满、倒掉，反复10次以上。
然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。
晾干或烘干备用。
对已用过的器皿，凡污染者必先经煮沸30min或放3%盐酸中浸泡过夜，未污染者可不需灭菌处理，但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜，冲洗等。
【附】清洁液的配制和使用注意事项1.清洁液(配方见表2-1)配方成分弱酸次强液强液重铬酸钾（g）清水（ml）浓硫酸（ml）硫酸浓度（v/v）501000908%100100016014%6020080080%①选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。
②先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。
③缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险(绝不可将重错酸饵液倒入浓硫酸中)。
④清洁液配好呈棕红色，待变绿色时表明失效。
由于清洁液的腐蚀性极强，配制与应用时必须小心，并做好防护。
2．矽酸钠洗液贮存液(×100)砂酸纳80克加偏磷酸钠9克加热溶在1000ml水中。
使用时用水稀释100倍，将器皿放入煮沸20min，冷却后冲洗，再用2%HCl浸泡2h后，自来水冲洗。
矽酸钠洗液较清洁液安全，但价格较贵。
（2）塑料器皿清洗自来水充分浸泡→冲洗→2%NaOH浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水冲洗→蒸馏水漂洗3次→晾干→紫外线照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外线照射30min)。
凡能耐热的塑料器皿，最好经101.3kPa(121.3℃)高压灭菌。
（3）胶塞等橡胶类处理新购置者先经自来水冲洗→2%NaOH煮沸15min→自来水冲洗→2%~5%HCl煮沸15min→自来水冲洗5次以上→蒸馏水冲洗5次以上→蒸馏水煮沸10min，倒掉沸水让余热烘干瓶塞等。
或蒸馏水冲洗晾干，整齐摆放于小型金属盒内经101.3kPa高压灭菌。
（4）金属器械的清洗新购进的金属器械常涂有防锈油，先用沾有汽油的纱布擦去油脂，再用水洗净，最后用酒精棉球擦拭，晾干。
用过的金属器械应先以清水煮沸消毒，再擦拭干净。
使用前以蒸馏水煮沸10min，或包装好以101.3kPa 高压15min。
（5）除菌滤器的处理用过的滤器将滤膜去除，用三蒸水充分洗净残余液体，置干燥箱中烘干备用。
2．包装包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。
包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。
包装分为局部包装和全包装两类，前者用于较大瓶皿，一般用硫酸纸和牛皮纸将瓶口包扎好；后者适于较小培养瓶皿、吸管、注射器、金属器械和胶塞等，以下为常用瓶皿、吸管、无菌衣帽等的包装方法，其它物品可参照处理。
①瓶类：硫酸纸罩以瓶口,外罩二层牛皮纸用绳扎紧。
②小瓶皿、胶塞、刀剪等器械可装人饭盒，饭盒再以牛皮纸包好，绳扎好。
③吸管、滴管口用脱脂棉塞上(不要太紧或太松)装人消毒筒内，滤器、滤瓶、橡皮管等都要用牛皮纸包好瓶口等，外罩一层牛皮纸包好，再用包布包好。
④无菌衣、帽、口罩，均以牛皮纸或包布包好，绳扎好。
3．消毒灭菌严格的消毒灭菌对保证细胞培养的成功是极为重要的，其方法分为物理法和化学法两类。
前者包括干热、湿热、滤过、紫外线及射线等，后者主要指使用化学消毒剂等。
①热灭菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。
②蒸气灭菌：用于玻璃器皿、滤器橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品其有效灭菌压力和时间不同，如培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min；布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121.3℃)高压灭菌15~20min。
③滤过除菌：适于含有不耐热成分的培养基和试剂的除菌，用孔径为0.22μm微孔滤膜可除去细菌和霉菌等，用此滤膜过滤两次，可使支原体达到某种程度的去除，但不能除去病毒。
④紫外线：紫外线的波长为200~300nm，最强是在254 nm，6~15平方米最少一只紫外灯，高度要在2.5m 以下，湿度45%~60%，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，实验前应不低于30分钟的照射时间。
⑤熏蒸消毒：当遇有细胞培养出现多次污染，或实验室两个月一次的常规消毒，均可用高锰酸钾5~7.5g，加甲醛（40%）10~15ml，混合放入一开放容器内，立即可见白色甲醛烟雾，消毒房间需封闭24h，至少4h 以上。
⑥煮沸消毒：紧密情况时使用，金属器械和胶蹇在水中煮20~30分钟，趁热倾去水分即可使用。
⑦化学消毒：化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制进行消毒灭菌的方法。
实验室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。