1 细胞大小的测量
医学-细胞制片与观察和细胞大小测量
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[作业思考] 1、绘人口腔黏膜上皮细胞结构图，注明各部
分(包括线粒体)名称。 2、根据实验结果判断，你的制片中口腔黏膜
细胞是活细胞还是死细胞？为什么？ 3、将目镜测微尺校正结果填入表，为什么换
用不同倍数目镜或物镜时，须重新校正目尺？
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[材料用品] 人口腔粘膜细胞、大鼠、鸡血涂片标本、
显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、无菌 牙签、解剖器具、染色缸、染色架、载玻 片、盖玻片、滴管、吸水纸、0.9％生理盐 水、0.1％碘液、0.02％詹纳斯绿、醋酸洋 红染液、甲基绿-派洛宁染液、卡渃氏固定 液、丙酮、二甲苯、中性树胶、蒸馏水、 水
胞，勿将深部细胞刮下。 ➢ 涂片 材料均匀分散，细胞不重叠，以易于观察。 ➢ 加盖玻片 镊子夹住盖玻片的一侧，将另一侧首先
接触载玻片和溶液，然后慢慢放下盖玻片，避免产 生气泡。 2、口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体 ➢ 涂布口腔黏膜细胞后即刻染色，以保证活细胞染色。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
本、显微镜、解剖器具、蜡盘、载玻片、 盖玻片、烧杯、染色缸、大头针、棉花、 0.65％生理盐水、1％硝酸银溶液、甘油、 香柏油、0.1％亚甲基蓝、甲醇、吉姆萨染 色液、蒸馏水、乙醚
实验二 动物组织的制片及观察
[操作要点] 1、制作蛙肠系膜平铺片（铺片法） ➢ 完好地剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成
功的关键。当用眼科剪剪取肠系膜时，应用镊子 夹住剪开的膜的边缘，防止膜皱缩成团。用镊子 将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。 ➢ 载（盖）玻片洁净。 2、制作蝗虫骨骼肌装片（分离法） 用解剖针分离肌丝时越细越好。
细胞形态观察及大小测量
细胞形态观察及大小测量
一、实验目的
1. 了解动、植物细胞的一般形态结构特点
2. 掌握显微测量的基本方法
二、实验原理
任何动、植物细胞都具有特定的形态结构，对其进行固定和染色等处理，便可以在显微镜下分辨清楚，然后借用目镜测微尺和镜台测微尺，便可测量大小。
三、实验用品
器具：显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、目镜测微尺、镜台测微尺
材料：H.E染色标本：小白鼠肝细胞、睾丸组织细胞
I.H染色标本：洋葱根尖细胞
新鲜材料：洋葱、紫鸭趾草
四、实验方法步骤
（一）细胞形态观察
1. 投影各种形态的细胞
2. 观察小白鼠肝细胞
3. 观察睾丸组织细胞
4. 观察紫鸭趾草叶片表皮细胞及气孔保卫细胞
5. 观察洋葱表皮细胞
（二）细胞大小测量
1. 目镜测微尺的校正
2. 细胞大小测量
① 选取一肝细胞，测细胞及核的大小（直径）
② 选取一曲细精管，测精原细胞，初级精母细胞和次级精母细胞的大小及核的大小（直径）
③ 选一洋葱表皮细胞，测细胞大小（长X宽）及核的大小（直径）
④ 测紫鸭趾草表皮细胞的大小（长X宽）及核的大小（直径）。
实验四细胞计数和大小测量
采用更精确的测量工具、对多个角度和维度进行测量等方法可以 提高测量的准确性。
细胞形态观察结果分析
观察误差来源
观察误差可能来源于观察者主观判断、染色 效果不佳等因素。
观察内容
观察细胞的形态、结构、染色质分布等特征。
观察准确性提高方法
采用标准化染色方法、提高显微镜分辨率等 方法可以提高观察的准确性。
02
实验原理
细胞计数原理
显微镜直接计数法
通过显微镜观察，直接数出样品中全部细胞的数量。这种方法适用于数量较少的细胞，但对于数量较多的细胞， 由于观察视野有限，容易造成计数不准确。
血球计数板法
利用血球计数板在显微镜下直接计数细胞数量。血球计数板是一种特制的载玻片，上面有划分好的网格区域，每 个区域有一个小的计数室。将待测样品滴加到计数室中，然后在显微镜下观察并计数。这种方法能够快速准确地 计数大量细胞。
细胞形态观察
选择观察工具
选择适当的观察工具，如 显微镜、电子显微镜等。
观察方法
采用适当的观察方法，如 光学显微镜观察或电子显 微镜观察，对细胞形态进 行观察。
形态特征描述
根据观察结果描述细胞的 形态特征，如形状、大小、 染色质结构等。
04
实验结果分析
细胞计数结果分析
细胞计数原理
通过在显微镜下观察细胞，并使用计数器对视野中的细胞进行计 数，以获得细法
利用光学显微镜观察细胞的形态特征，如细胞的形状、大小、边缘、胞质、核 等结构。通过观察这些特征，可以对细胞的类型和功能进行初步判断。
电子显微镜观察法
利用电子显微镜观察细胞的超微结构特征，如细胞器的形态、分布和数量等。 电子显微镜的分辨率更高，能够观察到更细微的结构特征。
试验1细胞大小测定
《细胞生物学》实验（养殖：1——3；生技、海科：1——6）实验一细胞器的分离、提取与测量【目的】掌握叶绿体分离的一般原理和方法，学习用测微尺测量细胞与细胞器大小的测定方法，并了解应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。
【原理】叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。
利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4mol／L蔗糖溶液)中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。
将匀浆液在1000r／min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000 r／min离心，可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
在室温下进行分离要迅速。
用显微测微尺可以直接测量细胞大小，精确度较高。
显微测微尺分为物镜测微尺和目镜测微尺2种。
目镜测微尺是1块小玻璃圆片(可放人目镜内，其大小正好卡人目镜筒内)，在圆片正中央刻有1cm长的直线，直线上均匀分为100小格或50小格，每小格的长度，随目镜和物镜的放大倍数而变动。
物镜测微尺是一块特制的玻璃载片，载片中央刻有一条1mm长的直线，均匀地刻分为100个小格，每小格为1／100mm (为10μm)，用一小圆形玻璃盖片封盖着，物镜测微尺较目镜测微尺小格的间距精确，通过目镜测微尺测量细胞与细胞器的大小(小格数)，然后换以物镜测微尺校测小格数的精确数值，即为测量的细胞与细胞器大小结果。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光(称为自发荧光)，如叶绿素的火红色荧光。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
【材料】菠菜叶片。
【实验用品】1．试剂：蒸馏水，0.35 mol／L氯化钠溶液，0.01% 吖啶橙。
实验四 细胞计数和大小测量
细胞计数法是细胞培养的一项基本技术。 它是了解细胞生长状态、绘制生长曲线 等的重要手段。在动物细胞原代与传代 培养、细胞冷冻与复苏等众多技术中需 要细胞计数；植物细胞和微生物进行悬 浮培养也需测定细胞数目。
实验室中计数细胞常用电子细胞计数仪 和细胞计数板
细胞计数器
手持式细胞计数器 血细胞计数仪 细胞计数板
计数器样品台的功能示意图 。 当管闩F打开时，压力计储液槽R中的 水银被连接至P的小型真空泵抽吸， 所产生的压力差会在管闩F关闭后使 得水银柱J移动，使样品悬浮液E通过 带孔圆片A从样品槽流入样品管B中。 带孔圆片和样品管由介电材料制成， 其电阻率比悬浮介质的电阻率要大得 多。通过连接线H和I，电极C和D通 过小孔将电流连接起来，且将所产生 的信号脉冲送至放大器和脉冲计数器 （没有显示）。需要分析的样品的体 积由三个控制电极(K, L, M)测定，这 三个电极穿过了压力计管的管壁；当 流动的水银造成K和L之间有电接触时 ，脉冲计数器启动，而当水银与M接 触时会使计数器停止工作（M与L之 间的距离经过了校准）。只有当悬浮 液以恒速流过小孔时才会对细胞进行 计数，这样使得可测定细胞的浓度， 因为悬浮液体积等于电极L和M之间 的水银的体积。第二个管闩G只在下 列情况下打开，即用清洁的悬浮介质 通过O来填充或冲洗样品管时。观察 小孔的显微镜没有显示。
1mm
红
在血球计数板上，刻有一些符号和 数字其含义是：
XB-K-25为计数板的型号和规格，表示 此计数板分25个中格； 0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高； 1/400mm2表示计数室面积是1mm2 ，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
中间大方格有25 个中方格，每个 中方格有16个小 方格 四角的每个大方 格有16个中方格
微生物细胞大小的测定方法
微生物细胞大小测定一、实验目得了解目镜测微尺与镜台测微尺得构造与使用原理,掌握微生物细胞大小得测定方法. 二、实验原理微生物细胞得大小就是微生物重要得形态特征之一，由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小得工具有目镜测微尺与镜台测微尺。
目镜测微尺（图－1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍm长度刻成50等分，或把10 mｍ长度刻成1０0等分。
测量时，将其放在接目镜中得隔板上（此处正好与物镜放大得中间像重叠)来测量经显微镜放大后得细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合得放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示得长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上得镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小方格所代表得相对长度.镜台测微尺（图２0-2）就是中央部分刻有精确等分线得载玻片，一般将ｌmm等分为10０格，每格长l0μm(即０、0ｌmm）,就是专门用来校正目镜测微尺得.校正时,将镜台测微尺放在载物台上，图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜得两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数得放大而放大，因此从镜台测微尺上得到得读数就就是细胞得真实大小，所以用镜台测微尺得已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表得长度,然后移去镜台测微尺，换上待测标本片,用校正好得目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
三、实验器材1.活材料：酿酒酵母（Sacchaｒomyces ｃerｅvisｉae)、枯草杆菌（Bacｃiｌlｕｓｓubｔili ｓ)染色标本片。
2。
器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、实验方法１．目镜测微尺得校正把目镜得上透镜旋下，将目镜测微尺得刻度朝下轻轻地装入目镜得隔板上，把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上.先用低倍镜观察，对准焦距，视野中瞧清镜台测微尺得刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺得刻度平行,移动推动器,使两尺重叠，再使两尺得“0”刻度完全重合,定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合得刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺得格数与镜台测微尺得格数.因为镜台测微尺得刻度每格长ｌ0μｍ,所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表得长度.例如目镜测微尺5小方格正好与镜台测微尺5小方格重叠,已知镜台测微尺每小方格为l0μm，则目镜测微尺上每小方格长度为=5×10μｍ/5＝10μm用同法分别校正在高倍镜下与油镜下目镜测微尺每小方格所代表得长度。
实验二细胞大小的显微测量
3.记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。 按下式计算出目镜测微尺每格的长度（μm）：
例如：目镜测微尺20小格等于镜台测微尺3小格，已 知镜台测微尺每格10μm ，则3小格的宽度为3×10 ＝ 30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格大小 为：
4 .从显微镜载物台上取下镜台测微尺，换上细胞 装片，测量并计算细胞大小，计算平均值。
※：当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正 目镜测微尺每一格所代表的长度。
【实验报告与作业】
1、分别求出使用10X倍镜，40X倍镜时目镜测 微尺每格代表的长度。 2、测量10个细胞及细胞核的大小并记录：
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 范围
编号
细胞 直径
均 值
例如：目镜测微尺在显微镜下经过校正，当使用高倍 镜时，每格相当于1.5 μm。如果测量细胞的长度相 当于目镜测微尺的两格，则细胞真实长度应为1.5 μm×2 = 3.0 μm。一般测定细胞大小时，通常测量 10个细胞左右，用最大和最小的数值来表示细胞大小 的范围。例如长为3—5μm，宽为1—2μm，则其大小 为l—2×3—5μm。
实验二
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
细胞大小的显微测量
【实验目的】
学会使用显微测微尺，掌握显微测量细胞的方法。
【实验用品】
1、材料 ： 血涂片 2、器材 ： 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺
【实验原理】
测微尺分目镜测微尺和镜台测微 尺，两尺配合使用。 (1)目镜测微尺：
(2)镜台测微尺：
（1）目镜测微尺:是一个放在目镜像平面上的 玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分 为若干格，每格代表一定的长度，但所代表的 的真实具体长度随不同物镜的放大倍数而异。 因此，用前必须标定校准，以确定目镜测微尺 每小格所代表的相对长度。
实验一 细胞的形态观察及其大小测量
实验一细胞的形态观察及其大小测量一、实验目的1. 观察细胞形态。
2. 掌握细胞大小的测量方法。
二、实验原理细胞是生命的基本单位，是生物体内最基本的形态结构。
由于其极小的体积，需要借助显微镜来观察。
在显微镜下，细胞呈透明圆形或长方形结构，包括细胞核和细胞质两部分。
细胞大小的测量是衡量细胞形态大小的一种方法，一般使用显微镜和标尺等工具进行测量。
三、实验器材和试剂1. 显微镜：10×、40×、100×梯形物镜、10×和16×目镜。
2. 小片玻片。
3. 缺口玻璃滴管。
4. 普通培养皿。
5. 滴定管。
6. 甲醛：10%浓度。
四、实验步骤1. 取用甲醛液将到手的细胞样本处理，使其纤维化、固定，并保持在透明的状态。
2. 将处理均匀的细胞悬液滴于小片玻片上。
在表面打一个平口，倒入水或细胞培养液。
3. 轻轻地将另一片小片玻片斜放在溶液上，使其尽量靠近悬液表面，并且使两片玻璃片之间尽量少的包含气泡。
4. 用载物架夹住两片玻璃片，置于显微镜镜头下面，用低倍物镜先扫描一遍细胞涂片下方，保证顶点在物镜的中央，并移动至最佳观察位置。
5. 同时调整镜片高低位，目镜内外的距离，使物镜滚轮表面接触到目镜。
6. 在目镜中调整微动盘，让细胞涂片视野平滑，移动目镜板，看到悬浮细胞。
7. 分别使用不同倍数的物镜对细胞的形态进行观察。
一般来说，使用10×的物镜可以清楚地观察到细胞核和周围细胞质的形态，而使用40×和100×的物镜则可更详细地观察到细胞内部结构和细节部位。
8. 用计数尺、标尺等工具对已观察到的细胞大小进行测量。
9. 完成实验后，将玻片倒掉，用纯净水或极其减量的甲醛显微镜氧化置换去甲醛。
再用纯净水进行冲洗。
五、实验要点1. 操作时要谨慎，避免对显微镜等仪器进行过度推拉等操作。
2. 使用时需注意玻璃片的干净和平整。
3. 需要防止玻璃片之间捏入气泡。
4. 细胞涂片的厚度应适当，过厚则不便进行观察，过薄则会付着小颗粒和杂质，影响观察效果。
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物镜测微尺：是在一个物镜中央封固的尺，长1毫米 (1000μm)，被分为100格，每格长度是10微米。
Hale Waihona Puke 三、实验方法1、卸下目镜上的透镜，将目镜测微尺装入，再旋上目镜上的透
镜。旋转目镜，使目镜测微尺水平。
2、将物镜测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺 刻度位于视野中央。调焦至看清物镜测微尺的刻度。 3、小心移动物镜测微尺，对齐目镜测微尺的“0”与物镜测微 尺的某段刻度线，然后仔细寻找目镜测微尺的“50”所对应 的物镜测微尺的刻度线，计数重合刻度之间物镜测微尺的格 数。（通过移动物镜测微尺，重复三次，求出平均格数）
第 一 次 测 量 第 二 次 测 量 第 三 次 测 量 平均格数 的格数 的格数 的格数 低倍镜 （10x10） 高倍镜 （10x40） 格值（um）
2、算出蛙血细胞的长径、短径。
蛙血细胞
长径 格数（格） 长度（um）
短径 格数（格） 长度（um）
低倍镜 （10x10）
高倍镜 （10x40）
三、实验方法
5、按下式计算目镜测微尺每格的长度（μ m）：
目镜测微尺每格的长度（μ m）
物镜测微尺的平均格数 50格（目镜测微尺的格数）
=
X 10
6、从显微镜载物台上取下物镜测微尺，换上细胞装
片，测量，并计算细胞大小。
【作业】 1、分别求出使用10X倍镜，40X倍镜时 目镜测微尺每格代表的长度。
实验一、细胞大小的测量
一、实验目的
学会目镜测微尺的使用 ，掌 握显微测量细胞大小的方法。
二、实验原理
测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺，两尺配合使用。 目镜测微尺： 是一个放在目镜像平面上的玻璃圆 片。圆片中央刻有一条线段，此线 被分为50格，这些刻度没有绝对值， 用它测量标本的长度时，必须在显 微镜下，观察物镜测微尺进行标定， 才能代表其真实长度。