HEK293T细胞培养03
293T细胞培养攻略
293T细胞培养攻略1.培养基准备293T细胞通常使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）作为培养基，配以10%胎牛血清（FBS），1%青霉素/链霉素（Penicillin/Streptomycin）。
在培养293T细胞之前，首先将适量的DMEM加热至37°C，并将相应数量的胎牛血清和抗生素加入其中。
2.细胞传代传代细胞是保持293T细胞健康生长和细胞性能的重要步骤。
当细胞达到80-90%的密度时，可以开始细胞传代。
首先，用无菌PBS（磷酸盐缓冲液）将细胞培养瓶中的培养基洗涤一次，然后用0.25%胰酶/EDTA（乙二胺四乙酸）溶液将细胞溶解5-10分钟。
溶解后，加入与胰酶/EDTA液体相等的培养基，轻轻悬浮细胞，并将其移至新的培养瓶中。
将新的培养基加入新瓶中，以使其达到适当的细胞密度。
3.293T细胞的培养条件4.细胞转染293T细胞被广泛用于转染实验。
细胞转染是将外源DNA转运到293T 细胞中的方法，以研究基因功能或进行蛋白表达。
293T细胞的易于转染性质使其适合于多种转染实验，包括常规的钙磷法和化学法（如聚乙烯亚胺）以及电穿孔法。
在进行转染实验之前，应将细胞培养至80-90%的密度，并在转染之后对其进行恢复。
5.结束实验时的保存和冻存细胞在完成实验后，如果有需要保存细胞的需求，可以将293T细胞冻存。
为此，收集细胞，并用DPBS（无菌磷酸盐缓冲液）洗涤细胞。
然后，用0.25%胰酶/EDTA液解细胞5分钟，并加入相等体积的培养基以停止胰酶的作用。
将细胞离心，并以适当的速度冻存保护液（如10%DMSO和90%FBS）重新悬浮细胞。
将细胞悬浮液分装至冻存管中，并使用液氮保存。
总结：293T细胞是一种常用的细胞系，在生物医学研究中发挥着重要作用。
通过遵循上述培养攻略，可以获得高质量和可靠的293T细胞培养结果。
有针对性的细胞传代、定期更换培养基、温度和CO2的适当控制以及正确的细胞转染和细胞冻存步骤可以确保细胞的生长和稳定性，为细胞实验提供最佳条件。
293T细胞的培养[1]
![293T细胞的培养[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/d6a8872378563c1ec5da50e2524de518964bd36d.png)
293T细胞的培养[1]293T细胞的培养293T细胞是由293细胞派生, 表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。
293T为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。
培养条件为: 完全培养基: 高糖DMEM, 10%胎牛血清; 冻存液: 胎牛血清或完全培养基, 10% DMSO。
传代方法为:1．吸掉293T细胞培养瓶内的培养液;2．吸取适量的无Ca 2+和Mg 2+的PBS, 轻轻把贴壁的细胞洗两遍;3．加少量的0.05%胰蛋白酶-EDTA (一般25 cm2的培养瓶加1 ml, 75 cm 2的培养瓶加2~3 ml), 放到培养箱温育20 s;4．细胞消化完毕, 加适量培养液终止消化, 并吹打细胞, 制成均匀的细胞悬液;5．加足量的培养液, 分装到新的培养瓶中。
值得注意的是, 293T细胞的贴壁性不强, 轻微的干扰就可能使它们脱落。
所以, 在更换新鲜培养液或者用PBS冲洗的时候应该小心地添加新的培液进去, 以液体不冲打到贴壁的细胞为好。
传代的时候, 只需要用0.05%胰蛋白酶-EDTA即可轻松把细胞消化下来, 不需要消化很长时间。
有些同学反映293T细胞容易结团不易被吹打开来。
如果遇到这样的情况可以在加了胰蛋白酶温育一段时间后即拿1 ml移液枪反复轻轻吹打, 直至肉眼看不到大的细胞块为止, 然后加适量的培养液混匀, 这时候在显微镜下观察, 可见大多数细胞都是单个的, 只有少量的2~3个细胞聚在一起。
一般293T细胞可以长在塑料的培养瓶底面上直到90%融合, 再以1∶4~1∶8的比率传代。
合适的传代周期为2~3天。
传代过程中,消化的时间越短越好, 显微镜下观察到80%细胞脱落即可加培养液中止。
完成传代后放入培养箱前,应该把培养瓶或培养皿沿X、Y轴方向水平移动几下, 防止细胞都聚在中间或者四周。
冷冻293T细胞的冻存液可以用95%小牛血清加5%二甲基亚砜, 复苏率很高。
细胞培养(hela, 293,239T等细胞的培养)
Hela细胞传代培养操作步骤1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。
观察时拧紧盖子。
2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。
3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。
不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。
取小离心管一个，置于架子上。
4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。
放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。
5．取待传代的细胞。
打开versene，用酒精灯外焰烧。
烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。
把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。
6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。
（加versene 主要是为了将旧培养基洗去）。
在离心管中间部分将液体加入。
吸液体和加液体时都不要对着细胞。
7．打开胰酶，然后将versene弃掉。
换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。
加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。
8．将细胞放入37度孵箱。
放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。
使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。
别忘了用旧培养基中和。
9．取细胞，镜下观察消化情况。
消化程度合适之后（细胞变圆，但不漂起），用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。
用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。
然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。
10．吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。
11．细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。
换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。
12．擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。
不要把枪伸到离心管内。
13．吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。
293、293T细胞培养及转染一点经验
qq ：439572370HEK-293是用DMEM 培养基培养吗？
HEK-293细胞是我在锐赛生物实验室做项目时常培养的细胞，DMEM+10%血清+双抗+谷氨酰胺，这类的细胞贴壁性不是太强，所以不要消化过久，容易损伤细胞。
状态较好的293细胞
细胞生长较快，一般1:3~1:5传代，30%~50%融合度2-3
天即可长满。
细胞状态不好后会变瘦、产生大量黑点（细胞碎片）。
网友咨询：我们这里的293转染质粒效率一直不高，
各种方法均试过了，很少能达到50%，老板说他在
国外做293转染很容易达到80%以上。
我想问一下哪里有好的293细胞卖？非常感谢。
答：293系列的细胞都是非常好转染的：注意点：
1.转染前细胞的铺板密度、细胞状态
2.转染的时间
3.转染试剂与质粒的比值
干扰载体转染293T 细胞48h 的图片，供参考。
293T 细胞生长速度更快，形态较293A 细胞小，贴壁性比293
细胞弱很多，消化时间更要注意，没培养过的刚接手细胞要在注意留种的同时多试验消化几次，掌握经验值。
293
细胞常用于腺病毒包装、293T
细胞常用于慢病毒包装。
HEK293细胞培养心得
HEK293细胞培养心得首先，为了成功培养HEK293细胞，一个优良的细胞培养基是必不可少的。
一般来说，培养基应包含必需的营养物质，比如氨基酸、维生素、糖类和无机盐等。
同时，培养基还应该含有足够的抗生素以预防细菌和真菌的污染。
最好使用无血清的培养基，以避免动物源性成分对细胞培养的影响。
其次，准备一个合适的细胞培养环境也是至关重要的。
温度、湿度和二氧化碳浓度等条件应符合HEK293细胞的生长要求。
一般来说，细胞应在37°C的温度下培养，在5%的二氧化碳气氛中保持培养皿内的湿度。
细胞的传代是维持细胞活力和健康状态的重要步骤。
对于HEK293细胞，通常使用胰酶进行消化和洗涤来分离细胞。
对于细胞的新鲜分离，可以将细胞培养皿放入冰箱中进行预冷却，然后使用含有胰酶的PBS缓冲液进行洗涤。
定期检查细胞的密度和健康状况，并及时进行传代是非常重要的。
在培养细胞的过程中，细胞污染是一个常见的问题。
为了避免细菌和真菌的污染，可以在细胞培养过程中添加抗生素。
此外，操作时应注意细胞培养器具的无菌性，使用经过消毒的培养器具并保持培养环境的清洁是必要的。
细胞的冻存是为了保存和传递细胞的重要方法。
在将细胞冻存之前，应通过使用逐渐降低培养基中血清含量的方法适应细胞在无血清条件下生长。
然后使用冷冻保护剂配制适当的冻存液，将细胞分装到冻存管中，并使用液氮罐进行快速冷冻。
最后，定期检查细胞的健康和生长状态是维持细胞培养的重要步骤。
观察细胞的形态和贴壁情况，并使用显微镜检查细胞的活力和细胞数目。
如果细胞出现异常形态或生长减慢，可能是因为细菌或真菌污染，应及时采取相应的措施。
总之，HEK293细胞的培养需要一定的技巧和经验。
通过优化培养基、培养条件和消毒措施，加强细胞观察和细胞传代，可以有效地培养和维持HEK293细胞的活性和生长。
这些心得经验将有助于研究人员在实验室中更好地使用HEK293细胞进行相关研究。
293T 细胞培养
精心整理293T细胞培养1.培养基:DMEM=丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏：37度融化后，擦干冻存管酒精擦，细胞加入15ml离心管，加5ml培养基，500g离心5min，弃上清，加1ml培养基重悬后加入到培养瓶中，5~6ml左右，记得晃匀。
也不易打散。
悬浮的293T细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。
293T细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性：1、细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长,换液293T时动作要轻。
一般用高糖的DMEM培养基。
2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞脱落,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
12小时-24小时90%以上细胞贴壁。
293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比其它的经验：1、用大瓶培养较小瓶要好，可能是更有利于293均匀的分布，利于营养的摄取2、培养液要新鲜，每次只配1000ml，分为2-4瓶，不用的培养液，冻存在-20度，3、要及时传代，最好是细胞基本铺满培养瓶底部，但是细胞之间还没有完全贴紧，总是多少有空隙的时候最好。
4、如果细胞贴壁不好，可能是消化过久，或是培养瓶不够干净，当然要除外细胞污染。
细胞的复苏：快速取出冻存的低代次293细胞，将其安放在底端1／2浸于37℃水浴中，轻轻晃动以加速融解。
在超净工作台中，以70％乙醇对细胞培养皿表面消毒，将细胞转移至75cm的细胞培养瓶中，加入10mL低代次293细胞培养基置于细胞培养箱内培养。
6～8h后待细胞贴壁更换培养基。
(1)利用低代次293细胞贴壁的特性，在复苏和传代时不离心，而是加入10mL培养基中和细胞消化液，培养6～8h，细胞贴壁后更换新鲜培养基，从而避免了离心剪切力对细胞造成的机械损伤；(2)在消化细胞时，振荡培养瓶，避免直接反复剧烈吹打细胞。
293t细胞培养说明书
293T细胞培养说明书一、实验简介293T细胞是由肾脏细胞系统转染外源基因而产生的细胞系，具有较好的培养性和转染性。
因此，293T细胞常用于基因表达研究，尤其是蛋白表达和病毒载体的构建。
二、培养条件1. 培养基：293T细胞培养最常用的培养基是Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)，其次是RPMI-1640培养基。
2. 氧气浓度：293T细胞培养一般需要一个较高的氧气浓度，如5%~10%。
3. 温度：293T细胞的培养温度一般为37℃。
4. 水分：293T细胞的培养液中的水分一般为95%~100%。
5. 添加物：293T细胞的培养液中通常会添加10%的牛血清，以促进细胞生长。
三、细胞培养步骤1. 将293T细胞从细胞库中取出，放入清洗后的培养皿中，以DMEM培养基浸泡；2. 将培养皿放入培养箱，调节温度为37℃，氧气浓度为5%~10%；3. 将添加10%牛血清放入培养液中，搅拌均匀；4. 用细胞活性检测试纸测定细胞活性；5. 根据细胞活性的变化情况，调整培养液中的水分，以维持细胞的生长；6. 将培养液更换，每1~2天更换一次；7. 定期观察细胞形态，记录细胞生长情况。
四、注意事项1. 在培养293T细胞时，需要注意细胞的温度、氧气浓度以及水分，以保证细胞的正常生长；2. 培养液的清洗和更换要及时，以保证细胞的正常生长；3. 在操作293T细胞时，一定要注意实验室的清洁卫生，以防止细胞的污染。
五、总结293T细胞培养是一种常用的培养方法，在培养293T细胞时，要注意培养液的温度、氧气浓度以及水分，并及时更换培养液，以保证细胞的正常生长。
在实验操作中，还要注意实验室的清洁卫生，以防止细胞的污染。
293T 细胞培养
293T 细胞培养1.培养基: DMEM =丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏：37 度融化后，擦干冻存管酒精擦，细胞加入15ml 离心管，加5ml 培养基，500g 离心5min，弃上清，加1ml 培养基重悬后加入到培养瓶中，5~6ml 左右，记得晃匀。
3. 传代:吸出旧培基，加5mlPBS 洗一遍，用移液管加1ml 胰酶，洗一遍吸出，37 度放1min 左右计时，看到大片大片脱落了即加入新培基吹打，吹洗充分后，吸1ml加到事先加好10ml 新培育基的新瓶里。
293T 细胞是用5 型腺病毒75 株系转化，含有Ad5 E1 区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1 区缺陷互补细胞系。
293T 细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5 和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293T 细胞的大规模培养。
293T 细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10％FBS-DMEM 中能生长很好。
一般来讲，1:10 传代后，一周可以长满。
严禁过度生长，这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。
悬浮的293T 细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。
293T 细胞在传代120 次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293 细胞培养特性：1、细胞明显适应酸性环境,pH 值在6.9～7.1 时,可顺利贴壁生长, 换液293T 时动作要轻。
一般用高糖的DMEM 培养基。
2、传代：倒去废液，PBS 洗一次（轻），用0.02%EDTA 与0.25%Trypsin 消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin 作用30s,镜下观察细胞脱落,就可加DMEM 终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
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细胞污染问题与解决方案
细胞的真菌污染
梅雨季节进行细胞培养更易污染。污染培养细胞的多为烟曲
霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。
真菌污染后，霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色
漂浮物。
细胞污染问题与解决方案
细胞的真菌污染检测
镜检有丝状物
细胞污染问题与解决方案
常见的真菌污染
污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药
后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。
细胞污染问题与解决方案
细胞污染的解决方法
加抗生素
细胞污染问题与解决方案
何时需更换细胞液
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，
按时更换培养基即可
细胞污染问题与解决方案
何时需更换细胞液
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，
按时更换培养基即可
细胞污染问题与解决方案
可否使用与原先培养条件不同之培养基
不能，每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基若
骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无
法立即适应， 造成细胞无法存活
细胞污染问题与解决方案
稳定转染
这种细胞系中转染的目的基因整合到宿主染色体DNA中并指导适量的目 的蛋白的合成。一般来说转染细胞的效率要比瞬时转染的效率低1-2个
数量级。
HEK293细胞
HEK293细胞生长条件
完全培养基
10%的胎牛血清
DMEM(4.0mM L-谷氨酰胺 4500mg/ml葡萄糖 )
1%双抗(1000units /L penicillin 1000mg/L streptomycin) 37℃ 5%CO2
取准备冻存的细胞，弃去培养基，以DPBS2-3ml洗细胞一次
加入0.5-1.0ml 0.05%的胰酶消化
加入新鲜培养基10-12ml吹打成细胞悬液
收集细胞悬液至50ml无菌离心管，1000rpm，5min离心.弃上清，加入适量培养基
取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，DMSO最后浓度为10%
加入0.05%（37 ℃预温 ）胰酶消化
加入12ml完全培养基（37 ℃预温 ）将细胞从细胞瓶底部冲下
1:4传代即取3ml细胞悬液加入有9ml完全培养基的新细胞瓶中
放入37℃、5%CO2继续培养
HEK293细胞的传代
1
刚 加 入 胰 酶 细 胞 还 是 致 密 单 层
加入0.05%胰酶消化
2
细 胞 开 始 皱 缩 持但 细不 胞明 正显 常， 形仍 态维
LOGO
细胞间的操作注意事项
每一个人操作结束后，必须及时清理操净工作台内的物品，不得在工作台内留 置或堆积杂物。 清理操净工作台后，用75%酒精擦拭消毒操净工作台面。 每一个操作结束后，必须及使用84消毒液消毒管道，并清理废液瓶，及时弃去 废液。 操作结束后，确认倒置显微镜电源关闭。 操作结束后，确认二氧化碳培养箱的两道门均处于关闭状态。 离开细胞间前，确认空调已关闭（夏季高温季节除外）。
每日最后一人离开细胞间前，打开紫外灯消毒。
进入或离开细胞间时，注意观察二氧化碳钢瓶上的压力表压力是否正常（减压 阀出气口的压力应在0.06-0.08Mpa之间）。 注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。 定期打扫细胞间：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、操净工作台等，
冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色，以
小体积分装，4℃避光保存
低温损伤主要发生在0℃～-60℃这一温度区内，这一温度范
围内不宜过久
HEK293细胞的复苏
当细胞传代次数过多(超过50代)，细胞状态变差时或
细胞出现污染事故时，需要丢弃并对开始冻存的细胞 进行复苏
原则：快复
细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去 除DMSO
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株 （包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有1015ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以 去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或 贴附之问题。
细胞间的操作注意事项
病毒学、分子生物学等领域已得到广泛的应用
原代培养 传代培养
细胞的培养具体方法与步骤
原代培养
用直接从机体获得的细胞进行的培
养称为原代培养。这种培养过程主
要是采用无菌操作的方法，把组织 （或器官）从动物体内取出，经酶
消化处理，使分散成单个细胞，然
后在人工条件下培养，使其不断地 生长和繁殖。原代培养是建立各种
HEK293细胞的复苏
复苏前的准备
DMEM完全培养基(含10%胎牛血清)：试验前置室温下
将水浴锅预热至37℃
取新培养瓶（75cm2），标记细胞编号、时间，加入10ml DMEM培
养基(37℃预热)，润湿底面
HEK293细胞复苏步骤
根据冻存记录从液氮灌中取出冻存的细胞
迅速投入已经预热至37 ℃的水浴锅中，并快速晃动，在1-2 min内使完全融化
细胞的支原体污染检测
试剂盒检测法： 目前已有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片进行检 测
间接免疫荧光法和免疫印迹：简便、快速、特异性
细胞污染问题与解决方案
常见的支原体污染
支原体污染的电镜下图片
细胞污染问题与解决方案
细胞污染的解决方法
控制环境污染；严格实验操作
原则上弃掉
加抗生素
如大肠杆菌、假单胞菌等。其中又以白色葡萄球菌较常见。
细菌污染后，会很快出现培养液变混浊，pH改变。也有少数
培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。
细胞污染问题与解决方案
细胞的细菌污染检测
16S RNA PCR法
细胞污染问题与解决方案
常见的细菌污染
白色链球菌污染以及革兰氏染色图片
细胞培养技术
蔺帅
2013年4月
主要内容
1
2 3 4 5
细胞简介
细胞培养技术平台
HEK293T细胞的培养具体方法与步骤
细胞培养的常见问题与解决方案
细胞间的操作注意事项
细胞简介
细胞是生命活动的基本单位
1665年英国学者Robert Hooke，用自制的显微镜观察软木的
薄片，第一次发现植物的细胞结构，并首次借用拉丁文Cella
HEK293细胞冻存步骤
细胞浓度为1～5×106cells/ml（细胞计数），分装于已标示完全之细胞冻存管中
将细胞冻存管放入程序冻存盒中（已加250ml异丙醇），置-80℃超低温冰箱
第二天将细胞放入液氮灌，并记录
HEK293细胞冻存步骤
细胞冻存的注意事项
欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态
培养细胞 能做什么
治病机理
试管婴儿
组织工程
细胞的培养具体方法与步骤
细胞培养细胞培养(cell culture) 的含义，简单地说即是把来
自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内的体外环境 中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以观察细胞的生长、繁
殖、衰老等生命现象。细胞培养技术在遗传学、免疫学、肿瘤学、
未经许可，任何人不得进入细胞间。
不得在细胞间内做任何与试验无关之事。
不得携带任何与实验无关或可能导致污染的物品进入细胞间。 必须随时保持细胞间的整洁、卫生，及时清理杂物、垃圾。 所有设备、物品，使用后必须及时归位。 进入细胞间必须更换细胞间专用拖鞋与工作服。不得将细胞间专用拖鞋与工作
（小室）词.
细胞简介
细胞是生命活动的基本单位
1983-39德国植物学家施莱登和动物学家施旺确立
了“细胞学说”的基本原则
1、细胞是有机体，动植物都是由细胞发育来的 2、每个细胞都作为一个相对的独立单位，有自己的“生命” 3、新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生
细胞培养技术平台
基因诊疗 药物筛选
基因诊断
出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存， 以保证实验的稳定性和持续性。
在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。
原则：慢冻
HEK293细胞的冻存
冻存前的准备
DMEM完全培养基(含10%胎牛血清)：试验前置室温下。
0.05%的胰酶消化液：37℃预温。
程序冻存盒（加250ml异丙醇）、二甲基亚砜(DMSO)、2ml细胞冻
HEK293T和HEK293细胞
HEK293细胞简介
HEK293细胞株是转染腺病毒E1A基因的人胚肾上皮细胞，由于 容易转染且容易培养，常被用于转染试验。
HEK293T SV40大T抗原 瞬时转染 转染效率更高
HEK293
稳定转染
HEK293T和HEK293细胞
瞬时转染
在瞬时转染中重组DNA导入感染性强的细胞系已获得目的基因暂时但高 水平的表达。转染的DNA不必整合进宿主染色体，当用大量的样品需要 在短时间内分析时，尤其是在转然后的1-4天内收获细胞，所得的溶解 产物用于检测目的基因的表达，可以采用瞬时表达的方式。
细胞系的第一步。
细胞的培养具体方法与步骤
传代培养
传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或其他比率转移，接种到
另一培养瓶的培养。贴壁培养细胞的传代通常是采用胰蛋白酶消
化，把细胞分散成单细胞再传代，而悬浮型生长细胞则用直接传 代法或离心法传代。
HEK293T和HEK293细胞
HEK293细胞简介
HEK293细胞在倒置显微镜下的形态
存管（标记细胞名称、代数、日期）、DPBS（不含钙镁）
HEK293细胞的冻存
冻存前的准备