正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
骨骼肌细胞原代培养
骨骼肌细胞原代培养骨骼肌细胞是我们身体中最重要的肌肉组织之一，通过细胞的原代培养可以帮助我们更好地研究肌肉的生理和病理过程。
本文将介绍骨骼肌细胞原代培养的方法和意义。
一、骨骼肌细胞原代培养的方法1. 细胞来源骨骼肌细胞可以从人体或动物体内获得。
人体来源的骨骼肌细胞可以通过手术获取，动物来源的骨骼肌细胞可以通过解剖或抽取组织获得。
2. 细胞分离将获得的骨骼肌组织进行消化，分离出单个的骨骼肌细胞。
常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶，通过适当的温度和时间来进行消化。
3. 细胞培养将分离出的骨骼肌细胞放入培养皿中，加入适当的培养基，提供细胞所需的营养物质和生长因子。
培养基的配方和组成会因实验目的的不同而有所差异。
4. 细胞传代原代培养的骨骼肌细胞会在培养过程中逐渐增殖，达到一定的细胞数量后，可以进行细胞传代。
传代可以保持细胞的稳定性和生物学特性。
二、骨骼肌细胞原代培养的意义1. 生理研究通过骨骼肌细胞原代培养，可以研究肌肉的生理功能和调控机制。
例如，可以研究肌肉收缩机制、肌肉代谢和能量平衡等方面的问题。
2. 病理研究骨骼肌细胞原代培养还可以用于研究肌肉疾病的发生机制和治疗方法。
例如，可以利用培养的肌肉细胞模拟某些疾病的发生过程，寻找治疗的靶点和药物。
3. 药物筛选骨骼肌细胞原代培养可以用于药物的筛选和评价。
通过在培养的肌肉细胞中加入不同的药物，观察细胞的反应和变化，可以评估药物的疗效和毒副作用。
三、骨骼肌细胞原代培养的注意事项1. 细胞来源的选择在进行骨骼肌细胞原代培养前，需要选择合适的细胞来源。
不同的细胞来源可能会影响培养结果和实验的可行性。
2. 培养条件的优化骨骼肌细胞原代培养需要适宜的培养条件，包括培养基的配方、温度、湿度和CO2浓度等。
这些条件需要根据实验的要求进行优化。
3. 细胞的纯度和活性在骨骼肌细胞原代培养过程中，需要保证细胞的纯度和活性。
细胞的纯度可以通过筛选和分离的方法进行提高，细胞的活性可以通过细胞活力试剂盒进行检测。
小鼠成纤维细胞原代培养.docx
实验-小鼠成纤维细胞的原代培养一.实验目的1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养中的取材、消化及无菌操作等基本实验技术和操作过程。
2 •熟悉在倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况的方法。
3•了解细胞原代培养与传代培养的原理和方法。
二.实验原理自17世纪下半叶Robert Hooke提出"细胞”概念直至20世纪中叶，细胞培养(CeIl CUltUre )才逐渐发展起来。
现代生命科学以及相关领域的研究前提是细胞的维持和增殖，因此，细胞培养不仅是细胞生物学的密不可分的组成部分，而且已经成为生物化学、生物物理学、遗传学、免疫学、肿瘤学、生理学、分子生物学和神经科学、甚至临床医学的重要内容。
细胞培养也是细胞生物学延伸至相关学科的一条主要途径。
如今，细胞培养已经成为生命科学和医学研究最常用的基础技术之一。
细胞培养是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下，使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
细胞培养的直接目的是维持或扩增细胞数量。
依据取材于动物组织或培养细胞，细胞培养分为原代培养和传代培养。
1 .原代培养(Primary CUItUre )是从供体取得组织或细胞后在体外进行首次培养直至成功地进行首次传代之前的培养。
但实际上通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。
原代培养是建立细胞系的第一步，其最基本的方法有两种：组织块培养法和消化培养法。
组织块培养法是指直接从机体取下组织和器官，通过组织块直接长出单层细胞，该培养法是最常用的原代培养方法，其将刚刚离体的、生长活力旺盛的组织剪成小块接种在培养瓶中作为实验材料，一天后细胞可从贴壁的组织块四周游出并生长。
组织块培养法操作过程简便、易行，培养的细胞较易存活，适用于一些来源有限、数量较少的组织的原代培养。
消化培养法利用酶或机械方法将组织分散成单个细胞后，在不加任何粘附剂的情况下，直接移植在培养瓶壁上，加入培养基立即进行培养的方法。
原代细胞培养操作步骤
原代细胞培养操作步骤原理：将动物机体的所有组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置适宜的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程之为称原代细胞培养。
操作步骤（一）胰酶消化法1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，放入75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和**浸入体内）然后用碘酒**腹部，取胎鼠带入超净台内（或者将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
上述消化分离的方法是基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。
细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。
（二）组织块直接培养法自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。
翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。
入37℃静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
骨骼肌卫星细胞的原代、传代培养和鉴定
骨骼肌卫星细胞的原代、传代培养和鉴定作者：宋策来源：《新教育时代》2015年第08期一、骨骼肌卫星细胞简介骨骼肌卫星细胞最初被人们认为是骨骼肌的定向祖细胞，对骨骼肌的生长和伤后再生起重要作用。
1961年，Mauro在对青蛙的胫前肌做研究时，利用电子显微镜，从肌膜和基底膜之间发现了骨骼肌卫星细胞。
一般情况下，这些细胞处于静止状态，当骨骼肌受损、坏死或负荷过重等应激出现时，卫星细胞就能被激活，开始迁移至受损部位，然后增殖分化形成肌管，从而达到修复肌肉的目的。
二、骨骼肌卫星细胞的原代培养取SD大鼠一只，使用10%浓度水合氯醛进行腹腔注射麻醉，其计量约为0.4ml/100g。
静置大鼠数分钟直至其结膜反射消失，用镊子将其浸泡在75%酒精中消毒2-3分钟后，仰卧位固定，使用采血针吸除血液，提取腓肠肌和比目鱼肌，置入事先消毒并预冷的生理盐水中，然后迅速转移至超净工作台，取冰袋置于操作容器下方。
使用双抗PBS骨骼肌清洗液对获得的肌肉清洗3-4次，快速清除血管、肌筋膜以及脂肪等组织后，将肌肉均匀剪碎至1mm3 大小左右。
再次加入骨骼肌清洗液清洗，静置后弃漂浮物。
将适量的II型胶原酶消化液（0.1%）加入被剪碎的肌肉中，使用37℃磁力搅拌机让肌肉均匀消化约60分钟，转移至离心管，以1000rpm离心10分钟，吸除上清液。
根据沉淀体积加入适量的胰酶细胞消化液，磁力搅拌消化约20分钟，加入细胞种植液终止消化，将此时的肌肉悬液转移至离心管，以1000rpm离心10分钟，吸除上清液，在肌肉沉淀中加入10ml细胞种植液，均匀吹打成细胞悬液。
将细胞悬液依次加入200目、400目的细胞筛中过滤纯化。
均匀吹打滤液并接种于6孔细胞培养板中，置于培养箱（5%CO2，37℃，100%空气湿度）中培养2小时，细胞进行第一次差速贴壁后，将细胞液转移至新的6孔板中继续在培养箱（5%CO2，37℃，100%空气湿度）里培养2小时。
然后将细胞悬液转移至提前用0.001%多聚赖氨酸工作液包被过的6孔板中。
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代之flamerking图文版[精华]很多战友发email或PM向我询问小鼠MSC的培养方法，我零零散散地一个个回复过几次，由于我平时时间不是很多，所以回答地时候有些内容写的不是很详细。
今天又有一个战友PM我，询问我培养方法。
看来做小鼠MSC的战友越来越多。
一遍遍地重复写很费时间（想粘贴复制又找不到上次写的在哪～惨！），所以我想还是发贴公布一下。
其实我小鼠MSC在我的课题中不是主角，只是起一个control的作用，因此我在这方面的经验可能没有一些专门做小鼠MSC的战友丰富，不过我还是很愿意把我的经验写出来供大家参考，希望能够起到“抛砖引玉”的作用。
欢迎各位同道对我的方案进行批评和指正，与大家一起分享你们的经验和智慧。
提纲一，简版主要步骤及操作要点。
二，完整版1. 试剂及材料准备2. 动物手术及取材3. 原代细胞培养4. 细胞传代5. 讨论时间关系，今天先给个简版。
我先顶一下,由于我还是新手,故不能说是经验介绍,只好讲让你们指出缺点,谢谢斑竹1. 试剂及材料准备MEM,10%FCS,手术器械,培养瓶,200目滤网,5ml注射器2. 动物手术及取材CR小鼠1只,酒精浸泡5分钟,取股,胫,肱骨,用基培冲出骨髓,滤过,1000转离心,完培重悬,接种于25厘米培养瓶3. 原代细胞培养:,3天后首次换液,自己发现一周贴壁细胞就铺满达90%,自行传代4. 细胞传代:消化下来很少,能下来的增长很慢5. 讨论:没经验欢迎斑竹的继续讲解,希望有经验的老师们能不啬指教羽之无限版主,能有空再讲讲吗这几天,我的原代就是不长,42天了,25平方厘米的培养瓶还未铺慢,不能传代真是天天盼着你啊呵呵，不好意思，最近我的sony笔记本又坏了，上次坏了几次维修部修不好，给我换了台新的，结果以用了没2个月又不能启动了，真是麻烦，我的资料都在里面，最近实验又忙，没空去维修部……不过明天我就去了。
……呵呵，跑题了。
小鼠原代成肌细胞分离、纯化及培养
小鼠原代成肌细胞分离、纯化及培养熊雷;何衍佶;戴威;赵圆;高彦飞;邓忠良;聂茂【期刊名称】《现代医药卫生》【年(卷),期】2017(33)3【摘要】Objective To establish the methods of isolation,purification and culture of primary mouse myoblast,then to induce its myogenic differentiation and to detect the expression of microRNA-1(miRNA-1) and miRNA-155 during this process. Methods The primary mouse myoblast was isolated and purified from the hind leg of neonatal mouse with collagenase digestion , and difference of cell adherence. Its myogenic differentiation was induced by the differentiation culture medium containing horse serum. The myogenic ability of primary myoblast was identified by myosin heavy chain antibody (MF20) immunofluorescence staining. The expression of miRNA-1 and miRNA-155 during the myogenic differentiation was detected by Taqman real time PCR. Result The primary mouse myoblast was successfully isolated and purified;the myogenic differentiation of primary myoblast was successfully induced and MF20 immunofluorescence staining was positive. The miRNA-1 expression was dramatically up-regulated, while the miRNA-155 expression was down-regulated during the myogenic differentiation of primary mouse myoblast ,the difference was statistically significant(P<0.05). Conculsion The isolation and purification method of primary mouse myoblast issuccessfully constructed by this study ,which provides a model in vitro for investigating the miRNA gene regulation during myo-genic differentiation process.%目的建立小鼠原代成肌细胞分离、纯化及培养方法，并诱导其成肌分化，检测成肌分化过程中微小RNA-1（miRNA-1）和miRNA-155表达情况。
小鼠细胞实验培养步骤
小鼠细胞试验培养步骤小鼠细胞常用的分别方法有两种，一种是贴块法，一种是消化法，这两种方法都可以用于分别和培养原代细胞。
一、试验分别和培养步骤1. 小鼠颈椎脱臼处以死刑后，剃除腹胸部的被毛，放入装有75%酒精的烧杯中浸泡5min。
2. 取出小鼠，在无菌环境下打开胸腔，取出心脏组织，注入盛有无菌1×PBS的培养皿中，洗净组织表面的血液。
3. 将清洗干净的心脏组织转入装有75%酒精的培养皿中浸泡15s以杀死大多数的心脏被膜细胞，浸泡完成后赶忙转入装有无菌1×PBS的培养皿中震荡清洗。
4. 清洗完成后，用剪刀镊子搭配除掉自动脉弓和心房组织，仅保管心室部分，再次用1×PBS清洗去除心室内的血液。
5. 将清洗干净的心室组织用剪刀减成1mm3大小左右的碎块，之后用PBS清洗若干次后按下述两种方法之一进行后续操作。
A. 贴块法6. 将清洗好的碎块转入另一培养皿中，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡组织，室温消化3—5 min。
7. 消化完成后，添加数毫升FBS停止消化，之后吸弃液体，加PBS清洗组织块1伺次后，用200 ul吸头将组织块平均接种于T—25培养瓶的培养面上，之后将培养瓶放置于37℃二氧化碳培养箱中，静置2—4h。
8. 待组织处于略微脱水的状态时，小心添加2ml培养基，添加时注意尽量不要将组织块冲起，要使培养基接触全部的组织块。
9. 之后放入培养箱中连续培养，一般2—4天后成纤维细胞会从组织块四周爬出，待爬出的细胞有较多数量时，可将细胞消化下来，去除组织块，转入另一培养瓶中培养。
B. 消化法6. 将清洗好的碎块转入另一离心管中，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型胶原酶）37℃水浴消化8 min后，吸取上层混悬液弃去。
7. 余下组织加入混合消化液10 ml，37℃水浴震荡消化10 min；吸取上层悬液至另一离心管中，加入适量FBS停止反应；剩余沉淀物再加消化液消化3—5次，直至组织块消化。
乳鼠心肌细胞的培养ppt课件
实 验 目 的 意 义 实 验 材 料
实 验 方 法
操作步骤及人员落实 预 期 结 果
目的：掌握原代细胞培养的一般方法和步骤及培 养过程中的无菌操作技术，熟悉原代培养细胞的 观察方法。 意义：原代培养是指直接从机体取出细胞、组织 和器官后立即置于培养基中培养，使细胞得以生 存、生长和繁殖。原代培养细胞离体时间短，细 胞保持体内原有的基本性质，适用于研究。 一般说来，幼稚状态的组织和细胞（如动物的胚 胎、幼仔的脏器）等更容易进行原代培养。
•消 化 组 织
•培 养 细 胞
前 期 准 备
1. 将备用物品（手术 器械、培养皿、烧 杯、离心管等）进 行高压灭菌； 2. 用酒精擦拭层流台， 将高压灭菌后的物 品放入层流台，紫 外线消毒30分钟。
用镊子夹住小鼠尾巴将小 鼠在酒精中浸泡两次，约 2~3秒； 2. 用剪刀将小鼠头部剪去； 3. 将动物固取材器官范围的 被毛，定在解剖板上并将 胸部剪开暴露出心脏，用 另一个剪刀将小鼠心脏剪 下； 4. 放入装有预冷的Hanks液的 培养皿中，将心脏剪开,剪 碎组织至1mm³左右，清洗 残留的血液。
1.
1. 将心肌组织转移至另一个装有预冷的Hanks液的培 养皿中进一步剪碎心脏后，加入等体积的0.125％ 胰酶； 2. 将心肌组织转移至离心管中，用吸管反复吹打（使 消化下来的细胞彻底从组织团快上掉下来）10min, 静置2min后，弃上清； 3. 再次加入Hanks液和等体积的0.125％胰酶，常温下 用吸管反复吹打10min，静置2min后将上层液转移 至100ml容器中，加入含10%小牛血清的1640培养 基终止消化； 4. 重复上一步骤至组织完全消化，适当控制消化时间。
仪器：培养箱（调整至37℃）、培养瓶、