六种云南产乌头属植物的生物碱成分研究
乌头类中药有效成分的含量测定及分析论文
乌头类中药有效成分的含量测定及分析论文乌头类中药有效成分的含量测定及分析褚晶晶(辽宁省阜新市药品检验所阜新 123000)摘要:目的:了解乌头类中药中新鸟头碱、鸟头碱、次乌头碱、新-t头次碱四种有效成分的含量，为临床提供研究依据。
方法:采用高效液相色谱法进行各种有效成分的测定，色谱柱为Agilent Zobax XDB C18(250.0×2.lmm，Sum)，流动相为O.Ol%氨水溶液一乙腈，流速Iml/min，检测波长240nm，采用LC- MSn法进行生物碱成分的初步鉴定，了解各种成分的含量，将4种生物碱进行加热，分析受热稳定曲线变化情况，给家兔灌服附子，测定入血成分。
结果:新鸟头次碱的热稳定性更好，更适合作为药效指标成分，以新鸟头次碱作为乌头类中药有效成分的测定指标，进样量在0.51,10.2ug范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9998)}平均回收率为102 .1%，RSD= 2.2%(n-6)。
结论:新乌头次碱作为乌头类中药中的有效成分，具有热稳定性好，可作为入血成分，具有良好的检测价值，可作为乌头类中药含量检测、赝品区分的有效指标。
关键词:乌头类中药有效成分新鸟头次碱鉴别指标乌头类中药是临床常用的一类中药材，包括乌头、附子等，此类中药的主要活性成分均为生物碱，同时也属于毒性成分，因此以炮制入药，药物的质量对疗效和安全性有着直接的影响。
就此笔者以附子为对象进行了研究，以分析乌头类中药中目前已知的4种有效成分用于治疗和安全性检测的应用价值。
1材料与仪器采用高效液相色谱法进行有效成分测定，Agilent1200，乙腈为色谱纯，双蒸水，其他试剂均为分析纯，附子从四川江油购入，经鉴定为真品。
2方法与结果2.1生物碱含量测定。
采用LC- MSn法进行生物碱成分的初步测定，根据离子强度大小进行含量判别，结果显示含量新乌头次碱>新乌头碱>乌头碱>次乌头碱。
乌头生物碱含量测定方法现况
乌头生物碱含量测定方法现况提要综述了乌头生物碱的含量测定方法，并对各测量方法进行了分析和比较。
关键词乌头；生物碱；含量测定分类号：R 284.2 文献标识码：B 文章编号：1007-5615(2000)01-0045-03川乌为毛茛科植物Aconrtum carmichaeli Debx的干燥母根，草乌为毛茛科植物Aconitum Kus nezoffii的干燥块根，为临床常用中药，具祛风除湿止痛的功效。
临床多用于治疗风湿性关节炎。
近年，又有用于抗癌止痛的倾向。
但是，乌头有大毒，因此，对乌头中的有效成分和毒性成分进行含量测定，以确保临床用药的安全性和有效性，是很有必要的。
生物碱类成份是乌头的主要有效成份和毒性成份。
以下，对生物碱的含量测定方法做一综述。
1 总生物碱成份的测定1.1 中和法［1］此法为测定生物碱的经典方法，为1990年版中国药典所采用。
分为直接滴定法和回滴定法。
直接滴定法终点突破不明显，难于判断；回滴定法灵敏度低，有较大误差。
1.2 交流示波极谱滴定法［2］此法测定终点直观，准确，但受pH影响大，需特殊仪器。
1.3 酸性染料比色法［3～6］是利用生物碱和酸性染料反应生成离子对而进行比色测定的方法。
根据所用酸性染料的不同，又分为溴麝香草酚蓝法、溴甲酚绿法、甲橙提取比色法等。
利用酸性染料比色法测定生物碱总量时，要注意符合比尔定律的含量范围，水相pH 的选择，呈色的稳定性。
从呈色稳定性考虑，甲橙提取比色法优于溴甲酚绿法。
溴甲酚绿法优于溴麝香草酚蓝法。
1.4 导数分光光度法［7，8］可设定不同的求导阶数以清除干扰组分的吸收。
利用导数分光光度法，样品经乙醇提取后，不经分离即可直接测定，测定结果与药典法比较，无显著差别，但该法更灵敏、准确、简便，且提取溶剂乙醇比氯仿对人体更安全。
以上4种总生物碱提取方法，以导数分光光度法最为简便，且分光光度计为常备仪器，因此笔者认为该法对于测量总生物碱为最佳方法，适于药厂使用。
生物碱乌头碱及其衍生物的研究
生物碱乌头碱及其衍生物的研究
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6.局麻作用 乌头碱能刺激局部皮肤粘膜感觉神经末稍，先兴奋产生 瘙痒与灼热之感，继以麻醉、丧失知觉。乌头碱对神经肌肉 接头活动和神经干复合电位首先是阻遏兴奋神经末稍传导， 高浓度下也可使神经干完全丧失兴奋和传导冲动能力。
生物碱乌头碱及其衍生物的研究
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7、镇痛作用 含有显著镇痛作用, 临床上用于缓解癌痛, 尤其适合用于 消化系统癌痛；外用时能麻痹周围神经末梢, 产生局部麻醉 和镇痛作用。
生物碱乌头碱及其衍生物的研究
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C19 二萜碱型生物碱是从乌头属植物中得到最多一类二 萜类生物碱。按照C7 上有没有含氧基团和骨架差异能够分为: 乌头碱型（Aconitines），牛扁碱型（Lycoctonines），7， 17-次裂型（7,17-Seco-type），内酯型（Lactone-type）， 热解型（Pyro-type）和重排型（Rearraged-type）
生物碱乌头碱及其衍生物的研究
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在临床上毒性反应表现: 消化系统主要表现为恶心、呕吐、 流涎、腹痛、肠鸣、腹泻, 严重者可出现大小便失禁; 循环系 统表现为面色苍白, 唇青肢冷或大汗淋漓, 心慌胸闷, 心率迟 缓或节律紊乱, 血压下降以致休克如不及时治疗易引发死亡; 神经系统轻者口、舌发麻, 四肢麻木, 皮肤感觉先减退后消失, 伴有头晕, 头痛、烦躁; 重者全身发硬, 四肢抽搐, 语言及神志 不清, 呼吸先加紧后减慢, 直至麻痹。
生物碱乌头碱及其衍生物的研究
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乌头类生物碱大都属于四环或五环二萜类衍生物， 都在C18、C19 和C20 位上与一个胺基氮原子相连，按 化合物母核结构能够分为:
01 C18二萜类生物碱
论成药中乌头类生物碱含量测定方法及铁牛七化学成分
论成药中乌头类生物碱含量测定方法及铁牛七化学成分二十世纪九十年代以来，世界形成回归大自然的一种潮流，天然植物草药年交易额在世界药品市场中已经突破300亿美元，并且还在持续地增长，但是在有着丰富中药资源的我国，则仅仅占据其中的5%左右。
相关专家研究表明，造成我国中药国际地位不高的原因不仅有出口经营体制不健全、包装不完善、科技含量低以及剂型少等因素，最主要的是由于中药产品质量缺乏稳定性，欠标准化、规范化。
本文结合我国中药市场的发展现状，深入论述了成药中乌头类生物碱含量测定方法及铁牛七化学成分。
标签：铁牛七；乌头属；成分；测定1.前言毛茛科乌头属是一种多年生草本植物，是发展前景非常广阔的一类药用植物资源。
绝大多数的乌头属基本上均是民间药用植物，具有代表性的药用植物主要包括乌头、附子和草乌，雪上一枝篙与铁棒锤近年来也经常性的作为药物应用在成药制剂中。
铁棒锤又被称作是铁牛七，其生长于陕西太白山上，是陕西民间经常用到的一种草药，中药常常将铁牛七的根入药，有大毒，味辛苦，性热，具备着兴奋精神、祛瘀活血、败毒消肿、除湿祛风和镇痛消炎的等功效。
因乌头属药材的有效成分主要是双酯型生物碱这类剧毒物质，并且其治疗剂量接近于中毒剂量，所以，为了充分的保证临床用药的有效及安全，研究成药中乌头类生物碱含量测定方法及铁牛七化学成分，其现实意义及临床价值是尤为重大的。
2.成药乌头类生物碱含量的测定方法从总体上来看，成药乌头类生物碱含量的测定方法可以说是多种多样的，比如酸碱中和法、紫外分光光度法、比色分光光度法、高效液相色谱法、薄层扫描法以及气象色谱法等等，以下主要分析了酸碱中和法、紫外分光光度法和比色分光光度法。
2.1酸碱中和法酸碱中和法是生物碱测定的经典方法，该方法主要分为回滴定法和直接滴定法。
酸碱中和法具体指的是结合生物碱的碱性，加入定量指示剂及酸液，用氢氧化钠进行回滴定，亦或是用酸直接滴定。
直接滴定法往往无法明显的突破终点，给判断带来困难，而回滴定法则误差较大且灵敏度不高。
乌头碱类生物碱的测定
乌头碱类生物碱的测定
乌头碱是一种含氮的生物碱，主要存在于乌头属植物中，如乌头、白附子等。
测定乌头碱的方法有多种，常用的方法有以下几种：1. 酸碱滴定法：将待测样品加入酸性介质中，使乌头碱转变为酸性溶液，再加入酸性碘化钾溶液，溶液呈现深蓝色，用硫酸滴定至溶液颜色变浅为止，根据滴定所需的硫酸量计算乌头碱的含量。
2. 气相色谱法：将待测样品经过提取和洗涤，得到乌头碱的纯化样品。
然后将样品注入气相色谱仪中，通过样品在色谱柱中的分离和检测，测定乌头碱的含量。
3. 高效液相色谱法：将待测样品经过提取和洗涤，得到乌头碱的纯化样品。
然后将样品注入高效液相色谱仪中，通过样品在色谱柱中的分离和检测，测定乌头碱的含量。
4. 紫外分光光度法：将待测样品溶解于酸性溶液中，然后使用紫外分光光度计测定样品溶液的吸收光谱，根据乌头碱在特定波长下的吸光度值，计算乌头碱的含量。
以上是常用的几种乌头碱的测定方法，具体选择哪种方法可以根据实际情况和实验要求来确定。
HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量
HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量目的建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量的方法。
方法色谱柱为Agilent XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A为乙腈-四氢呋喃（25∶8），B为0.1 mol/L醋酸铵溶液（每1000 mL 加冰醋酸0.5 mL），梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：235 nm；柱温：25 ℃。
结果乌头碱在0.072～0.648 μg具有良好的线性关系（r=0.999 5），平均回收率为99.29%，RSD=1.25%；新乌头碱在0.062～0.648 μg具有良好的线性关系（r=0.999 5），平均回收率为99.12%，RSD=0.85%；次乌头碱在0.064～0.384 μg 具有良好的线性关系（r=0.999 8），平均回收率为99.57%，RSD=1.07%；苯甲酰乌头原碱在0.056～0.672 μg具有良好的线性关系（r=0.999 2），平均回收率为98.11%，RSD=0.61%；苯甲酰新乌头原碱在0.055～0.993 μg具有良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为99.27%，RSD=1.10%；苯甲酰次乌头原碱在0.078～0.702 μg具有良好的线性关系（r=0.999 8），平均回收率为99.08%，RSD=1.38%。
结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好，结果准确，可作为复方藤乌软膏中乌头类生物碱的含量测定方法。
Abstract：Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of the 6 aconitum alkaloids in compound Tengwu Ointment. Methods Chromatographic column was Aglient XDB-C18 column （4.6 mm × 250 mm，5 μm），with the mobile phase A of acetonitrile- tetrahydrofuran （25∶8），phase B was 0.1 mol/L ammonium acetate solution （0.5 mL acetic acid added to the 1000 mL）with gradient elution；the flow rate was 1 mL/min；the detection wavelength was set at 235 nm；the column temperature was 25 ℃. Results Aconitine was in the good linear range of 0.072-0.648 μg （r=0.999 5），with the average recovery of 99.29%，RSD=1.25%. Mesaconitine was in the good linear range of 0.062-0.648 μg （r=0.999 5），with the average recovery of 99.12%，RSD=0.85%. Hypaconitine was in the good linear range of 0.064-0.384 μg （r=0.999 8），with the average recovery of 99.57%，RSD=1.07%. Benzoylaconine was in the good linear range of 0.056-0.672 μg （r=0.999 2），with the average recovery of 98.11%，RSD=0.61%. Benzoylmesaconine was in the good linear range of 0.055-0.993 μg （r=0.999 9），with the average recovery of 99.27%，RSD=1.10%. Benzoylhypaconine was in the good linear range of 0.078-0.702 μg （r=0.999 8），with the average recovery of 99.08%，RSD=1.38%. Conclusion This method is simple，sensitive，repeatable and accurate，which can be used for determination of aconitum alkaloids in compound Tengwu Ointment.Key words：compound Tengwu Ointment；aconitine；mesaconition；hypaconitine；benzoylaconine；benzoylmesaconine；benzoylhypaconine；HPLC復方藤乌软膏是山东大学附属省立医院骨伤科专家与药学人员遵循中医药理论共同研制的传统中药制剂，由鸡血藤、生川乌、生草乌、自然铜等组成，具有消肿止痛、续筋接骨等功效，主要用于治疗运动劳损、急性扭伤、挫伤、闪伤及轻度骨折引起的疼痛，临床应用30余年疗效较好。
乌头属植物生物碱高效液相色谱研究Ⅱ
摘要 ： 目的
建 立 高效 液相 色谱 法 测 定 多种 乌 头 属植 物 生物碱 的 方 法 。方法 Ｘ ｒａ Ｐ （ ５ × Ｔｅｒ ５ ｍ， ２ ０ ＭＲ
该
４６ ． ｍｍ） 色谱 柱 ； 流动相 为 乙腈 ： ０ ３ ｍｍｏ／ ｌＬ碳 酸 氢铵 梯度 洗 脱 ； 流速 １ ０ ／ ｎ 检 测 波 长 ２ ３ ｍ。结 果 ． ｍｌｍｉｌ ３ｎ
酰基一４苯 甲酰 基 生 物 碱 的研 究 ， 乌 头 碱 、 １一 如 中乌 头
碱、 次乌头碱等Ｅ ４ ｌ］ ￣ 而对 ８（ 乙酰基－４茴香酰基生 一Ｉ ） １一
物碱 的研究 甚少 ， 如滇 乌碱 、 茎 乌碱 甲、 粗 黄草乌 碱 丙 等 ， 们 是 黄 草 乌 Ａ． ｖｌ ｏｉｉｎｍ、 草 乌 Ａ． 它 ｉ ｒ ａｕ 紫 ｍ ｎ
方 法可成 功应 用于黄草 乌 、 紫草 乌 、 短距 牛扁 、 山乌 头 ４种 乌 头属植 物 生物 碱 成分 分析 。结论 保 提 示乌 头属 植物 中毒案件 检验 应 注意是 否含 有 ８（ 乙酰基一４茴香 酰基生物碱 。 一） Ｉ １一
关 键 词 ： 乌 头属 植 物 ； 物碱 ； 生 高效 液 相 色谱 中 图分 类 号 ： Ｆ ９． 文 献 标 识 码 ： Ｄ ７５１ Ａ 文 章 编 号 ： ０ ８３ ５ （ ０ ８０ —０００ １０ －６０ ２０ ） ２０ １—２
维普资讯
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技 术 交 流
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型童堇
生高 效 液 相 色 谱 研 究 Ｉ Ｉ
王朝 虹 李 虹。 （． ， １公安部物证鉴定中心， 北京 １０３ ； ． ００８ ２云南省公安厅刑警总队， 昆明 ６００） ６００
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乌头类药材中的生物碱质谱检测技术的研究进展
2019年10月乌头类药材中的生物碱质谱检测技术的研究进展59乌头类药材中的生物碱质谱检测技术的研究进展钟达财(东华理工大学化学生物与材料科学学院，江西南昌330013)摘要:乌头类中药是一种兼具“毒效双性”中药，具有回阳救逆、祛风除湿、消炎止痛等功效，但服用过量易中毒，甚至死亡，每年服用乌头类中药中毒死亡的案例屡见不鲜。
乌头生物碱分析方法对于医学诊断及刑侦方面具有重要作用。
因此，本文简述了乌头类生物碱的毒理作用，综述了乌头类药材中的生物碱不同的质谱技术，比较了不同检测技术的优缺点,并对乌头类生物碱的质谱检测技术进行了总结和展望。
关键词:乌头生物碱分析方法研究进展1引言近年来，随着我国药学家屠呦呦在2015年以发现青蒿素，开创疟疾治疗新方法荣获诺贝尔生理学奖，国 家越来越重视中药产业的发展。
附子具有回阳救逆、散寒止疼的功效，在临床上主要用于治疗重症疾病，在 传统中药有极其重要的地位。
但附子有毒，纯品乌头毒死一个成年人剂量为2 ~3mg,每年临床上因乌头碱中毒死亡的案例数以万计。
因此，为更好使用附子类中药，就必须充分了解附子类药材功效成分及有毒成分，而质谱技术具有灵敏度高、检出限低、分析速度快等特点，在食品安全、公共安全、代谢组学、蛋白质分析、临床诊断、环境监测等方面具有广泛应用。
乌头类中药是乌头类药材及其制剂的统称，按学名可分为附子、草乌、川乌等[1]，乌头类中药在临床应用中主要有祛风散寒、温经止痛、补火助阳等功效，用 于治疗经中医诊断患有风寒湿痹、心腹冷痛、肾阳虚衰等病症的患者。
现代医学研究认为，此类中药具有良好的消炎、止痛、免疫抑制、降血压等作用，主要用于治疗现代医学诊断为慢性风湿病、慢性肾功能衰竭等疾病[2'3]。
乌头类药材是典型的“毒效双性”中药，其药效成分主要为二萜类生物碱，根据结构不同可分为双酯型生物碱、单酯型生物碱、醇胺型生物碱，双酯型生物碱药效活性好，但毒性强;单酯型生物碱药效活性好，毒性小，是临床应用中最主要的药用成分;醇胺型生物碱毒性、药效性都弱[4]，研究表明，通过不同的炮制方法与配伍方法可以达到减轻乌头类中药的毒性，达到增强药效活性的目的，但缺少统一的解毒标准，且因为个体差异，中毒剂量也不同，每年因炮制、误服或投毒等原因引起中毒死亡的案例屡见不鲜，而质谱技术具有灵敏度高、分析速度快、样品用量少、可实现样品中多组分同时测定等特点。
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六种云南产乌头属植物的生物碱成分研究乌头属(Aconitum)属于毛茛科(Ranunculaceae),全球约350种,分布于北温带。
我国约170种,其中76种民间药用,多用于镇痉、镇痛、祛风湿和解热。
二萜生物碱是该属植物的有效成分和毒性成分,也被认为是特征化学成分。
二萜生物碱复杂的分子结构和显著的生理活性,吸引着天然药化研究者广泛而持久的关注。
本论文第一章至第六章对六种云南产的乌头属植物黄草乌(A. vilmorinianum Kom.)、宾川乌头(A. duclouxii Levl.)、保山乌头(A. nagarum Stapf)、剑川乌头(A. handelianum Comber)、玉龙乌头(A. stapfianum Hand.-Mazz.)和独龙乌头(A. taronense Fletcher et Lauener)的化学成分组成和结构进行了系统的研究。
运用多种色谱分离材料和手段,结合现代波谱分析技术和X-单晶衍射技术,从六种乌头属植物中分离鉴定了131个化合物。
所得的二萜生物碱有107个,结构类型涉及C18-高乌宁碱型、C19-乌头碱型、C19-7,17-次裂型、C19-牛扁碱型、C20-光翠雀碱型和C20-纳哌啉型,其中有19个新的生物碱,包括两个新颖的二萜生物碱骨架：vilmorine A分离自黄草乌,其B环中C(8)-C(9)键断裂重排为C(8)-C(10)键而形成六元B环；保山乌头中得到的nagarines A和B,其D环C(8)-C(15)键断裂而开环。
同时也探讨了这两类新骨架C19-二萜生物碱可能的生源途径。
其他16个新化合物分别为1个苯甲酰胺衍生物,1个C18-高乌宁碱型,1个C20-光翠雀碱型,2个C19-重排型及11个C19-乌头碱型二萜生物碱。
此外,还对所得二萜生物碱的植物化学分类学意义进行了讨论。
第七章对所得部分化合物的抗肿瘤活性和抗氧化活性进行了筛选。
第八章归
纳总结了2009年至2016年间乌头属植物的研究进展,内容包括最新报道的乌头属中化学成分的结构分类、来源及生物活性等。
本研究进一步丰富了乌头属植物二萜生物碱的化学和药理活性研究,进一步为乌头属植物的开发利用提供了科学依据,有利于促进云南省特色药用草乌资源的深入开发和综合利用,同时为乌头属植物化学分类学提供了参考依据。