健康评估 溶血性贫血实验室检查
溶血性贫血的实验室检查
溶血性贫血的实验室检查1.1原理红细胞渗透脆性试验是根据红细胞在低渗盐水溶液可逐渐胀大而破坏的原理来测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。
红细胞的表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大(脆性减低)；反之，则抵抗力较小(脆性增加)。
1.2试剂 10g/L NaCl溶液：取分析纯氯化钠事先于100℃下烘干，再置于干燥器中冷却，准确称取1.00g置100ml容量瓶中，加适量双蒸馏水溶解后，再加双蒸馏水至刻度[1]。
1.3参考值开始溶血 4.2～4.6g/L。
完全溶血 3.2～3.4g/L。
患者与正常对照，溶血管的NaCl浓度相差0.4g/L具有诊断价值。
1.4注意事项 NaCl必须干燥，称量精确，要用前新鲜配制溶液；本试验忌用抗凝血以免影响溶液的渗透压，如需要时可用肝素按10～20IU/ml血液进行抗凝；血液与低渗盐水混匀时避免强烈振荡，以免机械性溶血，黄疸患者开始溶血管不易观察，严重贫血患者红细胞太少，皆可用等渗盐水将红细胞洗涤后再配成50%红细胞悬液进行试验。
2红细胞孵育渗透脆性试验2.1原理将血液置于37℃孵育24h，由于葡萄糖消耗，贮备的 ATP减少，需要能量的红细胞膜对阳性离子的主动传递受阻，造成钠离子在红细胞内储积，细胞膨胀，孵育渗透脆性增加。
有细胞膜缺陷及某些酶缺陷的红细胞能源限快耗尽，孵育渗透脆性明显增加。
2.2试剂10g/L缓冲液(pH7.4)：9g NaCl(AR)。
1.365g Na2HPO4(AR)。
0.184g NaH2PO4(AR)。
蒸馏水加至1 000ml。
此氯化钠磷酸盐缓冲液中氯化钠的浓度为9g/L，但其渗透压相当于10g/L氯化钠溶液[2]。
2.3操作取静脉血3ml，肝素抗凝后分为2份，1份立即试验，另1份在37℃温育24h再作试验；将10g/L氯化钠缓冲液按下表稀释成不同浓度；每管加肝素抗凝血0.05ml，轻轻颠倒混匀；放置室温(20℃左右)30min后，将各管混匀1次，1500r/min离心5min，取上清，波长540nm以8.5g/L氯化钠磷酸盐缓冲液调零，以1g/LNaCl完全溶血管的吸光度为完全溶血管A值，测定各溶血管上清液的吸光度并计算出相应的溶血度；红细胞中间脆性(MCF)，以溶血度为纵坐标、不同浓度氯化钠浓度为横坐标作溶血曲线图，在曲线上，50%溶血的氯化钠浓度为红细胞中间脆性。
溶血性贫血的实验室检查
减低
• Hp增加，提示急慢性感染、恶性肿瘤、创伤、
风湿性关节炎、SLE等 • 鉴别肝内外阻塞性黄疸
– 肝内阻塞性黄疸显著减少或缺乏 – 肝外阻塞性黄疸正常或增高
4.尿含铁血黄素试验 （Rous test）
【意义】 脆性增高 遗传性球形红细胞增多症 脆性减低 缺铁性贫血 珠蛋白生成障碍性贫血
阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)
• 一种后天获得性血细胞膜缺陷的克隆性疾病，临床上可表 现血管内溶血、栓塞、全血细胞减少等，有时可出现骨髓 衰竭。
• 大多数PNH患者异常克隆与正常造血并存，使本病的诊断 和发病机制的研究受到限制。
【原理】膜蛋白缺陷的红细胞对补体敏感增 加，在弱酸血清（pH6.6~6.8）中，经37℃ 孵育后红细胞发生溶血。
【临床意义】正常人阴性，阳性见于阵发性 睡眠性血红蛋白尿（PNH）。该法敏感性较 高。特异性高。
Ham试验
PNH不同时间尿样
4.蔗糖水溶血试验
【原理】 蔗糖离子浓度低，增强补体与红细 胞结合，使红细胞膜上形成小孔，蔗糖进 入红细胞而致溶血。
【结果判定】阴性 【临床意义】溶血时阳性
6.血浆高铁血红素白蛋白试验 （methemalbumin test）
血浆中游离血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，接着分 解为高铁血红素，后者与白蛋白结合形成高铁血 红素白蛋白
【结果判定】阴性
【临床意义】见于各种原因所致的严重血管 内溶血
7. 外周血红细胞形态改变
【临床意义】正常阴性。PNH本试验常为阳 性。可作为PNH筛选试验，阴性可排除，阳 性应作Ham 试验。
5.蛇毒溶血试验
溶血性贫血的实验室检查
（三）酸溶血（Hams）试验
实验原理 PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞。
Hams试验即红细胞在酸性（PH6.4-6.5）的 正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细 胞破坏而产生溶血，而正常人RBC不被溶 解，无溶血现象。
试剂
1. 蔗糖 2. 3.8%枸橼酸钠溶液
样本要求
枸橼酸钠抗凝静脉血2ml（ 3.8%枸橼酸 钠与静脉血比为1：9）
操作程序
将一份枸橼酸钠全血加入9份新鲜配制 的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸馏水+0.5ml 抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血）， 混合后，置37℃温箱中孵育30分钟，离心 沉淀。
异丙醇沉淀试验阳性：提示有不稳定血红蛋白 存在
热变性试验 ：沉淀率增高 存在不稳定血红蛋 白，大于10%有诊断意义 镰变性试验阳性：Hbs病 冷热溶血试验阳性：PCH病
血管内和血管外溶血的鉴别
特征
血管内溶血（细胞外溶血） 血管外溶血（细胞内溶血）
病因
RBC破坏 场所
发病特征
红细胞内缺陷，外因素获得性 多见
临床意义
脆性增加
主要见于遗传性球形红细胞增多症，椭 圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血 性贫血。
脆性降低
主要见于珠蛋白生成障碍性贫血，血红 蛋白C、D、E病，低色素性贫血，肝疾病 等。
（二）抗人球蛋白试验
（Coombs试验）
实验原理
抗人球蛋白试验（Coombs试验）
检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体 （IgG）。分为检测红细胞表面有无不完全抗体 的直接抗人球蛋白试验和检测血清中有无不完全 抗体的间接抗人球蛋白试验。直接抗人球蛋白试 验应用抗人球蛋白试剂（抗IgG和/或抗C3d）与 红细胞表面的IgG分子结合，如红细胞表面存在 自身抗体，出现凝集反应。间接试验应用Rh（D） 阳性O型正常人红细胞与受检血清混合孵育，如 血清中存在不完全抗体，红细胞致敏，再加入抗 人球蛋白血清，可出现凝集。
贫血性疾病的实验室检验
贫血性疾病的实验室检验一、溶血性贫血实验室检验(一)红细胞渗透脆性检验1．英文或缩写：Erythrocyte Osmotic Test，EOT。
2．标本采集：取静脉血2ml，立即滴入含有不同浓度NaCl 溶液的试管中。
3．正常参考值：始溶：71.8-78.6mmol/L(0.42-0.46g/dl)，全溶：54.7-58.1 mmol/L(0.32-0.34g/dl)。
4．临床意义：脆性增加：见于遗传性球形红细胞性贫血，也可见于自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多等疾病。
脆性减低：见于各型地中海贫血、Hb-C、D、E 病、缺铁性贫血、脾切除术后等。
5．注意事项：患者与正常对照溶血管的NaCl 浓度相差7.18 mmol/L(0.04g/dl)时，具有诊断价值。
(二)酸溶血试验1．英文或缩写：Acid Hemolysis Test，Ham’s test。
2．标本采集：抽静脉血1-2 ml，送检。
3．正常参考值：阴性。
4．临床意义：本试验阳性主要见于阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)，某些自身免疫性溶贫发作严重时也可出现阳性。
5．注意事项：本试验阴性并不能排除PNH，应多次复查或加做蛇毒溶血试验。
(三)蔗糖(葡萄糖)水溶血试验1．英文或缩写：Sucrose Hemolysis Test，SHT。
2．标本采集：枸橼酸钠防凝血。
3．正常参考值：阴性。
4．临床意义：PNH 患者阳性，因此，本试验为PNH 的过筛试验。
再生障碍性贫血、巨幼红细胞贫血和免疫性溶贫患者，也偶有阳性。
5．注意事项：试验中的PH 和温度一定要恒定。
(四)热溶血试验1．英文或缩写：Heat Hemolysis Test，HHT。
2．标本采集：静脉采血2 ml，取下针头，沿试管壁缓缓注入消毒试管中，加少许消毒石蜡油封盖，置37℃孵育保温24 小时。
3．正常参考值：正常人无溶血现象发生。
4．临床意义：阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者本试验为阳性，即有溶血现象发生；其他溶血性贫血患者有不同程度的溶血现象。
溶血性贫血的实验室检查
溶血性贫血的实验室检查溶血性贫血是由于红细胞寿命缩短、破坏增加，超过骨髓造血的代偿能力而发生的贫血。
要准确诊断溶血性贫血，实验室检查起着至关重要的作用。
接下来，让我们详细了解一下溶血性贫血的实验室检查项目。
一、血常规检查血常规是最基本的检查之一。
在溶血性贫血患者中，通常会出现血红蛋白降低，也就是贫血的表现。
红细胞计数减少，但程度可能不如血红蛋白降低那么明显，导致红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）大多在正常范围或轻度降低。
网织红细胞计数通常会显著增高，这是因为骨髓造血功能增强，试图弥补红细胞的破坏。
此外，外周血涂片检查也很重要，可能会观察到球形红细胞增多、红细胞碎片、嗜多色性红细胞等异常形态。
二、骨髓象检查骨髓象检查可以反映骨髓的造血情况。
溶血性贫血患者的骨髓通常增生活跃，粒红比例倒置，即红细胞系增生明显活跃，以中、晚幼红细胞增生为主，粒系相对减少。
同时，还可以观察到细胞形态大致正常，可见核分裂象增多。
三、胆红素代谢检查胆红素代谢异常也是溶血性贫血的一个重要特征。
由于红细胞破坏增加，释放出大量的血红蛋白，经过代谢转化为胆红素。
血清总胆红素升高，以非结合胆红素增高为主，结合胆红素基本正常。
尿胆红素阴性，而尿胆原明显增加。
四、抗人球蛋白试验（Coombs 试验）这是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要试验。
直接抗人球蛋白试验（DAT）检测红细胞表面是否被不完全抗体或补体致敏；间接抗人球蛋白试验（IAT）检测血清中是否存在不完全抗体。
阳性结果对于自身免疫性溶血性贫血的诊断具有重要意义。
五、酸溶血试验（Ham 试验）主要用于诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）。
患者的红细胞在酸化的血清中（pH 68-70），经过 37℃孵育后会发生溶血。
六、蔗糖溶血试验同样对 PNH 有一定的诊断价值。
阳性结果提示可能存在 PNH 克隆，但特异性不如 Ham 试验。
七、蛇毒因子溶血试验也是用于诊断 PNH 的一种方法，其原理与 Ham 试验相似。
溶血性贫血的实验室检查
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ 1.红细胞寿命缩短，破坏增加的有关检验
❖ (1)红细胞寿命测定：用 51Cr标记红细胞测定红细胞的 半小衰于期15(天T1。/2)寿，命正缩常短红是细确胞诊25溶～血32性天贫。血溶最血直性接贫而血确时实常 的证据。
❖ (2)红细胞形态改变：血片中见到红细胞破裂的征象及 典型的异形红细胞。
验呈阳性。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ (5)含铁血黄素尿试验(Rous试验)
❖ 原理 含铁血黄素的铁离子在低铁氰化钾溶液中作用， 生成蓝色的铁氰化铁，即普鲁士蓝反应。如尿液中脱 落的肾小管上皮细胞中含有含铁血黄素，用尿沉渣进 行此反应，在显微镜下观察尿沉渣中有深蓝色物质者 即为阳性。
❖ 正常结果 阴性
二、溶血性贫血确诊的实验室检验
❖ (一)显示红细胞破坏增加的依据 ❖ 1.红细胞寿命缩短，破坏增加的有关检验 ❖ 2.血浆中游离血红蛋白增高的有关检验 ❖ 3.胆红素代谢异常的表现 ❖ (二)显示红细胞代偿增生的依据 ❖ 1 .外周血网织红细胞增多。 ❖ 2.外周血涂片中见到提示骨髓中红细胞系增生旺盛的
❖ 临床意义 慢性血管内溶血可呈现阳性，并持续数周。 常见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ 3.胆红素代谢异常的表现 ❖ (1)血清非结合胆红素增高。 ❖ (2)尿中尿胆原排泄量增高，尿胆红素阴性。
(二)显示红细胞代偿增生的依据
1 .外周血网织红细胞增多。
2.外周血涂片中见到提示骨髓中红细胞系增生 旺盛的红细胞形态改变。如红细胞大小不均、 嗜多色性红细胞、点彩红细胞、Howell—Jo1ly 小体、Cabot环、有核红细胞等。
2.3溶血性贫血的实验室检查
1．血浆游离血红蛋白测定 血浆游离血红蛋白测定： 【参考值】 ＜40mg ／L 【临床意义】 血管内溶血时血浆游离血红 蛋白明显增高。血管外溶血时血浆游离血红蛋 白正常或仅轻度增高。
2．血清结合珠蛋白测定 血清结合珠蛋白测定：
【参考值】0.8～2.7g/L(免ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ火箭电泳法) 【临床意义】 （1）结合珠蛋白减低 各种溶血时结合珠蛋白均 结合珠蛋白减低： 可 减低，以血管内溶血减低为显著，严重者可明显减 低，甚至测不出（血浆游离血红蛋白超过1.3g /L时）。 巨幼细胞贫血、严重肝病、口服避孕药、先天性无结 合珠蛋白血症等也可减低或消失。
（二）血浆游离血红蛋白增高的有关检验 血浆游离血红蛋白增高的有关检验
血管内溶血时， 大量血红蛋白游离至血浆中，使血 浆游离血红蛋白增高 游离血红蛋白增高。血浆中的游离血红蛋白需与结合 珠蛋白（haptoglobin，Hp）结合后被输送至肝分解，故 使血浆结合珠蛋白减低 结合珠蛋白减低。通常每升血液中结合珠蛋白的 1.3g 含量可以结合1.3g 游离血红蛋白。当血浆中的游离血红 蛋白量超过结合珠蛋白的结合能力时, 血浆中结合珠蛋 白便被消耗殆尽。剩余的游离血红蛋白有一部分可转变 为高铁血红蛋白，与血浆中清蛋白结合形成高铁血红素 高铁血红素 清蛋白（methemalbumin），在血浆中出现。 清蛋白
三、临床分类 按发病和病情可分为： 临床分类 1．急性溶血 急性溶血：红细胞在血管内以溶解方式 破坏。破坏数量多、速度快，临床症状常较为明 显，并伴有高血红蛋白血症 血红蛋白尿或含铁 高血红蛋白血症、血红蛋白尿或含铁 血黄素尿。 血黄素尿 2．慢性溶血 慢性溶血：红细胞多在脾脏被破坏，破 坏数量较少、速度较慢，临床症状一般较轻，血 中游离血红蛋白轻度增高，不伴有血红蛋白尿或 含铁血黄素尿。
溶血性贫血的实验室检测
四、珠蛋白生成异常的检测
（二）胎儿血红蛋白酸洗脱试验
1.原理 HbF抗酸能力较HbA强。把经固定后的血涂片置酸性缓冲液中保湿一定时间，只有含HbF 的红细胞不被洗脱，再用伊红染色而呈鲜红色。 2.临床意义 （1）脐带血、新生儿、婴儿阳性，成人小于1% （2）地中海贫血病人轻型者（杂合子）仅少数红细胞呈阳性，重型者阳性红细胞明显增多
二、红细胞膜缺陷的检测
（三）自身溶血试验及纠正试验
1.原理 红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，以维持红细胞内的钠泵作 用。病人红细胞无菌条件下在自身血浆中温育48小时，使ATP储备减少，钠泵作用减弱，导 致溶血增强。在孵育过程中，分别加入葡萄糖和ATP作为纠正物，并以氯化钠溶液为对照， 观察溶血是否能被纠正。 2.参考值 ➢ 正常人红细胞经孵育48小时后，仅轻微溶血、溶血度<3.5% ➢ 加葡萄糖和加ATP孵育，溶血明显纠正，溶血度均<1%
溶血性贫血的实验室检测
一、溶血性贫血的筛查检测
（一）血浆游离血红蛋白测定
1.参考值 <50mg/L（1～5mg/dl） 2.临床意义 （1）血管内溶血时血浆游离血红蛋白明显增高； （2）血管外溶血时血浆游离血红蛋白不增高； （3）自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻度增高。
一、溶血性贫血的筛查检测
二、红细胞膜缺陷的检测
（二）红细胞孵育渗透脆性试验
1.原理 红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，贮备的ATP减少，导致红细胞膜对阳离子 的主动传递受阻，钠离子在红细胞内集聚，细胞膨胀，渗透脆性增加。 2.参考值 未孵育：50%溶血为4.00～4.45g/L NaCl 37℃孵育24h：50%溶血为4.65～5.9g/L NaCl 3.临床意义 （1）脆性增加：遗传性球形细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶 血性贫血等； （2）脆性减低：珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、镰形细胞贫血等。
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一、红细胞破坏过多的检查1.外周血液常规红细胞计数、血红蛋白含量减低，血涂片中可见破碎红细胞、异形红细胞等。
出现典型的异形红细胞或自身凝集现象时，可提供溶血原因的线索。
2.血浆游离血红蛋白测定意义正常血浆只有微量游离血红蛋白，>40mg/L是溶血尤其是血管内溶血的重要指标，如阵发性睡眠血红蛋白尿、血型不合输血反应等。
血管外溶血，如遗传性球形细胞增多症，一般不增高。
3.血清结合珠蛋白测定（Hp）意义1.血清结合珠蛋白降低见于：⑴各种溶血性贫血，包括血管内或血管外溶血；⑵肝细胞损害、传染性单核细胞增多症、先天性无结合珠蛋白血症等。
2.血清结合珠蛋白增高见于感染、组织损伤、肝外阻塞性黄疸、恶性肿瘤等。
4.血浆高铁血红素白蛋白试验意义本试验有助于鉴别血管内或血管外溶血，阳性表示严重血管内溶血。
如阵发性睡眠性血红蛋白尿时，出现一条高铁血红素白蛋白区带，而球形细胞增多症系血管外溶血则无此区带。
5.尿液检查⑴尿胆原排出增多；⑵隐血试验阳性，这是因为当血浆游离血红蛋白显著增高，超过结合珠蛋白的量和肾小管再吸收功能时，出现的血红蛋白尿；⑶尿含铁血黄素试验呈阳性反应，是反映慢性溶血，尤其是血管内溶血。
6.红细胞寿命测定是检测溶血的可靠指标，常用51Cr、3P-DFP或二异丙基氟磷酸标记红细胞法，能反映红细胞寿命的指数。
此项测定显示红细胞寿命缩短表明有溶血。
二、红细胞代偿性增生的检查1.网织红细胞增多在5%～20%以上。
2.外周血出现幼红细胞，主要是晚幼红细胞。
由于网织红细胞及幼红细胞的出现，故可表现大红细胞增多。
3.骨髓幼红细胞显著增生，以中幼红和晚幼红细胞增生为主，粒红比例常发生倒置。
三、红细胞膜缺陷的检查1.红细胞渗透脆性试验意义1. 红细胞渗透脆性增高见于：遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多等。
2.红细胞渗透脆性减低见于：缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血等。
2.红细胞孵育渗透脆性试验意义本试验对轻型遗传性球形细胞增多症的检出敏感，也见于丙酮酸激酶缺乏症等酶缺陷的溶血性贫血。
3.自身溶血试验及纠正试验意义1. 遗传性球形细胞增多症，在低渗盐水中溶血显著增强，加葡萄糖后溶血明显纠正，加ATP后溶血明显纠正。
2. 先天性非球形细胞溶血性贫血Ⅰ型（G-6-PD缺乏症），低渗盐水中正常或溶血稍增强，加葡萄糖后溶血部分纠正，加ATP后溶血部分纠正。
3. 先天性非球形细胞溶血性贫血II型（PK缺乏症），低渗盐水中溶血显著增强，加葡萄糖后溶血不能纠正，加ATP后溶血明显纠正。
四、红细胞内酶缺陷的检查1.高铁血红蛋白还原试验意义当红细胞G-6-PD活性正常时，还原率>75%；如G-6-PD缺陷，形成高铁血红蛋白，还原速度远较正常红细胞慢，还原率显著降低。
本试验是反映红细胞对高铁血红蛋白的还原能力，特异性较低，可用作G-6-PD缺乏的筛选试验。
2.变性珠蛋白小体检查意义当G-6-PD缺乏时变性珠蛋白小体易于检出，变性珠蛋白小体增多可见于某些药物中毒、不稳定血红蛋白病、脾切除术后。
3.红细胞G-6-PD活性测定意义 G-6-PD缺乏时，常延迟出现或不出现荧光点，可作G-6-PD较特异的筛选试验。
进一步可用紫外线分光光度测量法，对G-6-PD活性作定量测定。
4.红细胞丙酮酸激酶测定意义丙酮酸激酶缺乏时，常延迟消失或达60min仍不消失，可作丙酮酸激酶较特异的筛选试验。
进一步可用紫外分光光度测量法，对丙酮酸激酶活性作定量测定。
五、珠蛋白合成异常的试验1.血红蛋白电泳意义1.如HbA、HbA2、HbF减少，见于α-珠蛋白生成障碍性贫血；2.如HbA减少，HbF明显增加，见于β-珠蛋白生成障碍性贫血；3.缺铁性贫血时HbA2常减少，巨幼红细胞性贫血时HbA2可增高；4.若出现新的区带则可能为异常血红蛋白，应进一步检查。
2.胎儿血红蛋白（HbF）测定1．抗碱血红蛋白测定意义⑴抗碱血红蛋白显著增高见于：β-珠蛋白生成障碍性贫血。
轻度增高除见于：β-珠蛋白生成障碍性贫血外，也见于正常孕妇、再生障碍性贫血、遗传性球形细胞增多症、阵发性睡眠性血红蛋白尿、白血病、骨髓转移癌等。
2．HbF酸洗脱意义同抗碱血红蛋白测定。
3.HbH包涵体染色意义明显增高见于：珠蛋白生成障碍性贫血（α-海洋性贫血），HbH病、某些血红蛋白病时可见轻度增高。
4.红细胞镰变试验意义出现镰形红细胞的多少与HbS含量有关，除HbS病外，某些血红蛋白病也可出现镰形红细胞。
5.不稳定血红蛋白检查1．异丙醇沉淀试验意义不稳定血红蛋白病加入异丙醇溶剂在5min后即可发生沉淀，20min可成絮状。
HbH、HbF或高铁血红蛋白升高时也可出现阳性。
2．热变性试验意义同异丙醇沉淀试验。
六、免疫性溶血的检查1.抗人球蛋白试验意义1.直接试验阳性见于：①自身免疫性溶血性贫血（AIHA），除原发AIHA外，也可继发于结缔组织病、恶性淋巴瘤、白血病、某些感染、药物等引起的AIHA；②新生儿溶血病③少数冷抗体型的免疫性溶血性贫血。
2.间接试验慢性见于Rh和ABO血型妊娠免疫性溶血，母体血清中不完全抗体。
2.酸溶血试验意义本试验阳性，支持PNH的诊断。
严重的AIHA、明显的球形细胞增多症偶可阳性。
3.蔗糖水溶血试验意义本试验在PNH患者常呈阳性，且较酸溶血试验敏感，但特异性不强。
再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、遗传性球形细胞增多症等也可呈轻度阳性反应。
4.冷热溶血试验意义本试验阳性支持PCH的诊断。
某些病毒感染如传染性单核细胞增多症、流行性腮腺炎偶可见阳性。
溶血性贫血实验室检查的目的有二：①肯定溶血证据；②寻找溶血原因；③确定主要溶血部位，以便分类和制订治疗方案。
本节叙述有关溶血的一般实验室检查方法，至于某些病因学检查在有关疾病中讨论。
（一）反映红细胞破坏过多、血红蛋白大量分解的实验室检查（图２０-6）。
１．血红蛋白血症正常血浆只有微量的游离血红蛋白，约１～１０mg/Ｌ。
当大量溶血时，主要是急性血管内溶血时，可高达１０００mg/Ｌ以上。
２．血清结合珠蛋白降低血清结合珠蛋白是血浆中一组α2糖蛋白，作用似血红蛋白的转运蛋白质，在肝脏内产生。
正常血清含量为５００～１５００mg/L。
血管内溶血后，１分子的结合珠蛋白可结合１分子的游离血红蛋白。
此种结合体很快地从血中被肝实质细胞所清除，其清除速度大约为１３０mg/Ｌ小时。
约３～４天后，血浆中结合珠蛋白才复原。
血清结合珠蛋白的降低可以提示溶血。
结合珠蛋白在肝病时可降低，而在感染及恶性肿瘤中可升高。
３．血红蛋白尿游离血红蛋白和结合珠蛋白相结合的产物，由于分子量大，不能通过肾小球排出。
但当血浆中游离血红蛋白超过了结合珠蛋白所能结合的量，多余的血红蛋白即可从肾小球滤出。
一般血浆游离血红蛋白量大于１３００mg/Ｌ时，临床出现血红蛋白尿。
血红蛋白尿必须与肌红蛋白尿或血尿相鉴别。
４．高铁血红素白蛋白血症（meｔhemalbｕminemia）血浆中游离血红蛋白很易氧化为高铁血红蛋白，接着分解为高铁血红素。
后者与血浆白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白，是溶血的一种指标，但不敏感。
５．血结素（hemopexin）缺乏血结素系在肝内合成，正常血清中含５ｇ～１０g/Ｌ，能结合循环中由高铁血红蛋白分解的游离血红素，最后被肝脏清除。
在血管内溶血时，血结素被大量结合而耗竭，因此它的缺乏常提示严重的血管内溶血。
６．含铁血黄素尿被肾小管重吸收的游离血红蛋白，在肾曲小管上皮细胞内被分解为卟啉、铁及珠蛋白。
铁以含铁血黄素形式沉积在上皮细胞内，当细胞脱落随尿排出，即成为含铁血黄素尿。
含铁血黄素尿主要见于慢性血管内溶血。
急性血管内溶血时，含铁血黄素尿要几天后才阳性，并可持续一段时间。
７．高胆红素血症大量溶血时，血清游离胆红素增高，因此结合胆红素常少于总胆红素的１５％。
由于肝脏清除胆红素的能力很强；所以黄疸常仅是中度或轻度的，即使急性大量溶血时，一般也不超过８５．5μmol／Ｌ。
血清胆红素浓度除取决于血红蛋白分解的程度外，尚与肝脏清除胆红素的能力密切有关。
慢性溶血性贫血患者由于长期高胆红素血症，导致肝功能损害，可合并肝细胞性黄疸。
８．粪胆原排出增多正常人每日粪便内排出粪胆原量为６８～４７３μmol／Ｌ。
当血红蛋白大量分解时，每日粪胆原排泄量可增至６８０～１７００μmol/L；甚至可高达２５５０μmol/L。
约１０％～２０％粪胆原可能来自骨髓中红细胞无效生成和非血红蛋白血红素在肝内转换所致。
此外排泄量易受腹泻、便秘及抗生素等药物的影响，每日波动很大，故宜连续测定３～４天，以求其平均数。
粪胆原排泄与患者原先的血红蛋白基数及体重有关。
应根据下列公式算出其纠正值和溶血指数：纠正的粪胆原排泄量=测得的２４小时粪胆原量×１５（g／ｄl）6０（ｋg）患者血红蛋白（g /dl）×患者体重溶血指数=纠正的粪物循环血红胆原排汇量红蛋白总量×１００（正常值11～２１）９．尿液中尿胆原排出增多正常人每天从尿中排出的尿胆原为０～５．９μmol。
急性大量溶血时，尿胆原排出量可明显增加。
慢性溶血患者尿胆原量并不增多，仅在肝功能减退，无法处理从肠道吸收的粪胆原时，尿中尿胆原才会增多。
（二）反映红细胞寿命缩短、易于破坏的实验室检查１．红细胞的形态改变球形红细胞的直径较正常红细胞小但厚度增加，体积相似而表面面积减少。
涂片染色，球形细胞中间缺少苍白区，染色较深，正常人血片中也可偶见。
如球形细胞数量增多，常提示红细胞寿命缩短易于破坏，因为球形红细胞不能变形，当通过脾索时，易被阻滞而破坏。
引起球形细胞增多的原因有遗传性红细胞膜的缺陷或后天获得因素，如化学中毒、烧伤、自身免疫等。
其它红细胞畸形尚有靶形、镰形、椭圆形、口形、棘形、短锯齿形、碎裂细胞等，其形态及临床意义参阅有关疾病。
２．海因小体经体外活体染色（甲基紫或煌焦油蓝）后，在光学显微镜下发现１～２μ大小颗粒状折光小体，大多分布在红细胞膜边缘上。
电镜观察，海因小体使红细胞膜变形并有皱纹，原有双层膜消失。
海因小体是受损红细胞内的一种包涵体，是红细胞内变性血红蛋白的沉淀物，发生于不稳定血红蛋白病、葡萄糖６磷酸脱氢酶缺陷症及芳香族的苯胺或硝基类化合物中毒所致的溶血性贫血。
３．红细胞脆性增加常用的红细胞脆性试验有红细胞渗透性脆性试验和自体溶血试验。
红细胞的渗透性脆性显示红细胞面积和体积的比例关系，如红细胞面积、体积比例缩小则脆性增加，比例增大则脆性减低。
球形细胞渗透性脆性增加，显示对低渗盐水的抵抗力减低。
靶形和镰形红细胞则相反，显示对低渗盐水的抵抗力增强。
如将去纤维蛋白血在３７℃孵育２４小时后，可增加脆性试验的敏感性。
自体溶血试验与渗透性脆性试验是相一致的，脆性增加时自体溶血也增加，主要用于遗传性球形细胞增多症的诊断。