酪蛋白的提取
牛奶中酪蛋白的提取

实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为3.5/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物,相对密度1.25~1.31,不溶于水、醇、有机溶剂,等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的PH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物,除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中,隔水水浴小火加热,不断搅拌,加热至沸腾时停止搅拌和加热。
在牛奶中加入少量盐,并慢慢加入白醋,并轻轻搅拌,观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后,停止搅拌和加醋,静置10min。
待上述悬浮液冷却至室温,用滤纸过滤,得到滤渣。
用水清洗滤渣3次,每次都过滤得滤渣。
滤渣再用白酒清洗3次,每次都过滤得滤渣。
将滤渣摊在滤纸上风干,得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白(g/100ml)=(酪蛋白(g)/200ml或250ml )*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=(13.3g/200ml)*100=6.65 g/ml
结论:闻起来有较大的奶香味和酒精味。
在过滤的过程中,粘在滤纸上跟纱布,抠不下来,所以数据应该会偏小了。
酪蛋白的提取与测定

牛乳中酪蛋白得制备与浓度测定一、实验目得1、学习从牛乳中分离酪蛋白得原理与方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质得方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度得原理,熟悉紫外分光光度计得使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理:牛乳中主要含有酪蛋白与乳清蛋白两种蛋白质,其中酪蛋白占了牛乳蛋白质得80%、牛乳在PH4。
7时酪蛋白等电聚沉后剩余得蛋白质统称为乳清蛋白、酪蛋白就是白色、无味得物质,不溶于水、乙醇等有机溶剂,但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子得水与能力很强,分散性高,在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低得原理,将牛乳得PH调至4。
7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯得酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度得原理:大多数蛋白质由于有酷氨酸与色氨酸得存在,在紫外光280nm有吸收高峰,可以进行蛋白质含量得测定。
但就是核酸在280nm也有吸收,干扰测定,不过核酸得最大吸收峰在260nm,通过测定在280nm与260nm时A得比值,然后通过计算消除核酸存在得影响,可以求得有核酸存在时蛋白质得浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理:考马斯亮蓝能与蛋白质得疏水微区相结合,这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250得磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm、当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰改变为595nm,考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物得高消光效应导致了蛋白质定量测定得高敏感度。
在一定范围内,考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系,故可以用于蛋白质浓度得测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白:烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法:紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法:紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、考马斯亮蓝、0。
酪蛋白提取及定量测定

实验酪蛋白提取及定量测定摘要本实验通过调节pH至酪蛋白等电点的方法,从蒙牛牛乳中提取酪蛋白并计算得率,然后分别用双缩脲和考马斯亮蓝G250染色法测定提取出的物质中酪蛋白的含量,实验的结果将在下文陈述出来。
因为提取出的酪蛋白不太纯,所以导致后面的定量测试中有一定的误差,这是要注意的。
材料与方法蒙牛牛乳酪蛋白的提取试剂的配制1 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲液(4.6):准确称量1.15ml的乙酸,用氢氧化钠调至pH为4.6,加水定容至1000ml。
2 95%乙醇3 乙醚4 乙醇-乙醚混合液:取乙醇,乙醚各30ml按1:1的比例混合。
5 1% 氢氧化钠:取0.1g氢氧化钠溶于10ml去离子水中方法取新鲜蒙牛牛乳100ml,放入250ml烧杯中,加热至40℃.加入100ml加热至同样温度的醋酸缓冲液,边加边摇动,并用pH计检测,调整混合液的pH4.6(用1%氢氧化钠溶液或10%醋酸溶液进行调整),冷却至室温,静置5min,然后用细沙布或滤纸过滤,收集沉淀物。
将沉淀物用少量蒸馏水洗几次,过滤。
将洗净的沉淀物悬浮在约30ml 95% 乙醇溶液中,用布氏漏斗抽滤。
所得沉淀物用无水乙醇和乙醚等量混合液洗涤两次,抽干。
最后用50ml乙醚洗一次并抽干。
取出抽干的粉状物,摊开在表面皿上,使乙醚完全挥发,干燥后得到的是酪蛋白纯品。
准确称重并计算其产量。
酪蛋白的得率=测得含量/理论含量*100% (理论含量为35g/L)结果提取出的酪蛋白净重为32.2g,为白色粉末状,中夹杂黄色块状物体。
酪蛋白得率为92%。
酪蛋白的测定双缩脲法试剂配制(1)酪蛋白溶液:5mg/mL,用0.1mol/LNaOH溶液配制;(2)双缩脲试剂:称取1.5gCuSO4和6.og酒石酸钾钠,溶于500mL水中,在搅拌下加入10%NaOH溶液300mL,用水稀释至1000mL,用棕色瓶避光保存。
方法将各管混匀后,在室温(15~25℃)下放置30min ,在波长540nn 处比色,已1号管调零点测定各管吸光度,一吸光度为纵坐标,蛋白质含量为横坐标,绘制标准曲线。
酪蛋白的提取与定性鉴定

酪蛋白的提取与定性鉴定酪蛋白的提取与定性鉴定摘要牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L,本实验以市面上出售的伊利纯牛奶为原料进行酪蛋白的提取。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的PH调至4.7时,酪蛋白就会沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后,便可得到较纯的酪蛋白。
利用显色反应对所提取的酪蛋白进行定性鉴定,结果发现它能与双缩脲反应生成紫红色化合物;与印三酮反应生成蓝紫色物质;与浓硝酸发生黄色反应,在碱性溶液中进一步形成深黄色的硝醌酸钠。
关键词酪蛋白提取定性鉴定双缩脲反应茚三酮反应黄色反应牛奶对人体有很多好处,可以促进心血管的健康,控制高血压,增强免疫机能,还能改善睡眠状况,对人类有很大的益处。
而牛奶的主要成分是酪蛋白,所以我们去提纯分析牛奶中酪蛋白的含量很有意义,可以此来初步判断市场销售牛奶的质量。
另外,通过对提取的酪蛋白进行定性鉴定,可以了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式,知道其与某些氨基酸的呈色反应原理,并学习常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
1材料和方法1.1材料伊利纯牛奶(从超市购得)离心机抽滤装置(布氏漏斗)精密pH试纸电炉电子称烧杯试管移液管玻璃棒滤纸温度计药匙锥形瓶1.2酪蛋白的提取取两个锥形瓶,分别放入50mL牛奶和50mL醋酸缓冲液,在水浴锅中加热至40℃。
在搅拌下慢慢将两者混合。
用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟(3000r/min),弃去上清夜,得酪蛋白粗制品。
用蒸馏水洗沉淀3次,每次离心10分钟(3000r/min),弃去上清液。
在沉淀中加入30mL乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2 次,最后用乙醚洗沉淀2次,抽干。
将沉淀摊开在表面皿上,风干;得到酪蛋白纯品。
准确称重,计算含量和得率。
含量:酪蛋白g/100mL 牛乳(g%)得率:测得含量/理论含量X100%1.3双缩脲反应取少量尿素结晶,放在干燥试管A中。
酪蛋白的提取与测定

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理,熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理:牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质,其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质,不溶于水、乙醇等有机溶剂,但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水和能力很强,分散性高,在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的PH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理:大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在,在紫外光280nm有吸收高峰,可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收,干扰测定,不过核酸的最大吸收峰在260nm,通过测定在280nm和260nm时A的比值,然后通过计算消除核酸存在的影响,可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理:考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合,这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰改变为595nm,考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内,考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系,故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白:烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法:紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法:紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃,在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7,可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温,4000rpm离心5min,弃上清,得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次,3000rpm离心5min,弃上清6、在沉淀中加入20mL95%乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次(10ml/次),最后用乙醚洗涤沉淀2次(10ml/次),抽干8、将沉淀摊开在表面皿上,风干,得酪蛋白纯品9、准确称量,计算含量和得率紫外光吸收法1.取待测样品溶液置于的石英比色皿中,于分光光度计波长280nm和260nm,分别读取A280nm和A260nm,用生理盐水为比色空白对照。
从牛奶中提取酪蛋白实验报告

从牛奶中提取酪蛋白实验报告实验目的:通过牛奶中的酪蛋白提取实验,学习酪蛋白的结构、性质和提取方法,掌握酪蛋白的分离技术和纯化技术,进一步了解蛋白质的基本研究方法。
实验原理:酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质成分,它具有重要的营养和功能作用。
酪蛋白是一种具有多种构象和功能的复合蛋白质,在水溶液中可形成多种不同类型的聚集体,如微胶粒、聚集和凝胶,这些聚集类型与酪蛋白的结构和功能密切相关。
酪蛋白具有一定的疏水性,分子内具有四个疏水和一个亲水的疏水环和亲水链结构,酪蛋白还含有大量的氨基酸残基,其中包括5%左右的带电氨基酸。
牛奶中的酪蛋白可以通过离心、酸沉淀、盐析和凝胶过滤等方法进行分离和纯化。
酸沉淀法是目前常用的分离和提取方法,其原理是在酸性条件下,酪蛋白分子失去电荷平衡,发生凝固,形成凝胶状物,从而与其他物质分离。
实验步骤:1、准备工作(1) 将所有试剂和设备准备好,并洗涤干净。
(2) 将牛奶样品加热至80℃,进行杀菌处理。
2、酸沉淀法提取酪蛋白(1) 取适量的牛奶样品置于容器中,加入适量的盐酸调节至pH值为4.6,搅拌均匀。
(2) 加入同等体积的乙醇,混合均匀。
(3) 离心分离出沉淀,用纯净水洗涤数次,使沉淀中的酸性物质除去。
(4) 将沉淀转移到干燥皿,放置于低温干燥箱中干燥。
(5) 称取干燥后的酪蛋白样品重量,计算得到收率。
3、检测酪蛋白的含量和纯度(1) 构建标准曲线,按照酪蛋白样品体积一定比例浓度溶液进行稀释,分别取10μl、20μl、30μl、40μl、50μl的样品,加入PBS缓冲液中,浓度从高到低依次用Bradford 法进行检测吸光度,并通过标准曲线计算出待测样品的酪蛋白含量。
(2) 通过SDS-PAGE方法检测酪蛋白的纯度和电泳图谱。
将待测样品和已知浓度的酪蛋白标准品一同进行SDS-PAGE电泳,经过染色和脱色处理后,观察分离出的蛋白条带,利用比色、图像分析软件等工具进行定量测定,并计算出待测样品中酪蛋白的纯度和分子大小。
酪蛋白和乳蛋白素的提取流程

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1. 准备原料,新鲜牛奶或脱脂牛奶。
实验四、酪蛋白的制备

(三)准确称重,计算含量和得率。
含量=酪蛋白g/10mL牛乳(g%)
得率=﹝测得含量/理论含量﹞X100%
式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项
1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质,故调节牛奶液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂,最好在通风橱内操作。
取A液1770ml,B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液
乙醇:乙醚=1:1(V/V)
(二)器具
1、离心机2、抽滤装置
3、精密pH试纸或酸度计4、恒温水浴箱
5、烧杯
四、操作步骤
(一)酪蛋白的粗提
10mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品,不是纯净牛奶,所以计算时应按产品的相应指标计算。
六、实验报告
1、根据实际操作,以流程图形式总结酪蛋的制备方法。
2、合理分析实验所得率
七、思考题
1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么?
2、试设计另一种提取酪蛋白的方法?
琼州学院实验项目卡
生物科学与技术学院生化实验室设日期_ห้องสมุดไป่ตู้_年__月__日
实验项目
酪蛋白的制备
面向专业
课程性质
1、必修
2、选修
实验类型
1、还未开设的新实验
2、手段更新的实验
3、已开设过的实验
本实验学时数
4
实验分组概况
所用主要仪器
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实验原理
酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质,占乳蛋白的 80%~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合 80%~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合 蛋白质混合物,以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相 结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸,但不 含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L,比较稳定, 含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L,比较稳定, 利用这一性质可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电和为零,同种电荷间的排斥 作用消失,溶解度很低,利用这一性质,将牛乳调到 pH4.6,酪蛋白就可从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙 pH4.6,酪蛋白就可从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙 醇,这个性质被用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂志除去。
仪器、 仪器、原料和试剂
仪器:温度计、布氏漏斗、pH试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、 仪器:温度计、布氏漏斗、pH试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、 量筒、表面皿、天平等 原料:市售牛乳 试剂:95%乙醇和乙醚 试剂:95%乙醇和乙醚 pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L 乙醇、乙醚混合液:乙醇:乙醚=1: 乙醇、乙醚混合液:乙醇:乙醚=1:1(体积比)
实验步骤
1、酪蛋白等电点沉淀 将100mL牛乳放到500mL烧杯中,加入至40℃左右的乙 100mL牛乳放到500mL烧杯中,加入至40℃ 酸钠缓冲液,直到pH达4.6左右,用pH试纸或酸度剂调试。 酸钠缓冲液,直到pH达4.6左右,用pH试纸或酸度剂调试。 将上述悬浮液冷却至室温,然后放置5min,用细布过滤, 将上述悬浮液冷却至室温,然后放置5min,用细布过滤, 收集沉淀。 2、除脂类杂质 将上述沉淀用少量水洗数次,然后悬浮于30mL95%的 将上述沉淀用少量水洗数次,然后悬浮于30mL95%的 乙醇中。将此悬浮液倾入布氏漏斗中,抽滤除去乙醇溶液, 再倒入乙醇再倒入乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀两次,最后再用乙醚洗 涤沉淀两次,抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去,在表面皿 上摊开以除去乙醚,干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称 重后,计算出每100mL牛乳所制备出的酪蛋白质量 重后,计算出每100mL牛乳所制备出的酪蛋白质量 (g/100mL),并与理论产量(3.5g/100mL)相比较,求 g/100mL),并与理论产量(3.5g/100mL)相比较,求 出实际获得百分率。
思考题
用乙醇、乙醇用乙醇、乙醇-乙醚和乙醚洗涤蛋白质的顺 序是否可以变换?为什么? 试设计一个利用蛋白质其他性质提取蛋白 质的实验?