南昌大学基因工程双语
南昌大学2010在江西各专业招生录取分数线 理科
一、博士学位一级学科授权点（8个）序号名称序号名称 1 管理科学与工程 5 生物学 2 食品科学与工程 6 机械工程 3 材料科学与工程 7 环境科学与工程 4 化学 8 临床医学注：博士学位二级学科授权点64个，具体名称略。
二、博士后科研流动站（5个）序号名称序号名称 1 材料加工工程 4 临床医学 2 机械工程 5 环境科学与工程 3 食品科学与工程三、国家级或教育部重点实验室、重点学科、工程中心、研究基地等类别个数名称国家重点实验室1 食品科学与技术国家重点实验室国家工程技术研究中心 1 国家硅基半导体照明工程技术研究中心1 材料物理与化学国家重点学科 2 食品科学国家重点培育学科 1 材料加工工程 1 食品科学教育部重点实验室教育部重点实验室 2 鄱阳湖生态环境与资源利用教育部重点实验室 1 教育部发光材料与器件工程研究中心教育部工程中心 2 教育部生物质转化工程技术研究中心教育部人文社会科学重点 1 中国中部经济发展研究中心研究基地 1 “半导体照明技术”创新团队 2 “食品质量与安全”创新团队教育部创新团队“遗传性心血管病与猝死关联的遗传基础与防 3 治研究”创新团队 1 一附院消化科 2 一附院神经外科 3 一附院心胸外科国家临床重点专科 4 一附院重症医学科 5 二附院心血管内科科技部工程中心分中心 1 国家干细胞工程技术研究中心江西分中心 1 工程力学实验中心国家级实验教学示范中心 2 电工电子实验中心 3 临床医学实验教学中心国家级教学团队 1 公共数学教学团队 1 高等数学国家级精品课程 2 现代汉语国家双语教学示范课程 1 《基因工程》双语课程四、江西省高水平重点学科（5个）序号名称序号名称 1 物理学4 临床医学（内科学） 2 化学工程与技术5 临床医学（外科学） 3 机械工程五、特色专业（26个）序号名称序号名称 1 材料成型及控制工程（国家级）22 化学工程与工艺（省级） 2 通信工程（国家级）23 软件工程（省级） 3 医学影像学（国家级）24 土木工程（省级） 4 汉语言文学（国家级）25 预防医学（省级） 5 生物科学（国家级） 26 化学（省级） 6 计算机科学与技术（国家级）27 新闻学（省级）7 工商管理（国家级）28 数学与应用数学（省级）8 食品科学与工程（国家级）29 水产养殖学（省级）9 软件工程（国家级）30 高分子材料与工程（省级） 10 自动化（省级） 31 环境工程（省级）11 机械设计制造及其自动化（省级） 32 热能与动力工程（省级） 12 麻醉学（省级）33 口腔医学（省级） 13 材料科学与工程（省级）34 行政管理（省级）六、江西省品牌专业（36个）序号名称序号名称 1 哲学 19 自动化 2 经济学 20 电子信息工程 3 法学 21 通信工程4 汉语言文学 22 计算机科学与技术5 英语 23 建筑学（五年）6 新闻学 24 土木工程7 广播电视新闻学 25 食品科学与工程8 历史学 26 环境工程9 数学与应用数学 27 化学工程与工艺 10 应用物理学28 临床医学 11 化学 29 预防医学 12 生物科学 30 医学影像学 13 材料科学与工程 31 口腔医学 14 机械设计制造及其自动化 32 护理学 15 材料成型及控制工程 33 信息管理与信息系统 16 工业设计 34 工商管理 17 热能与动力工程 35 行政管理 18 电气工程及其自动化 36 旅游管理南昌大学2010在江西各专业招生录取分数线理科南昌大学在江西地区录取分数线--文科专业类型平均分最高分最低分录取批次工商管理 524 531 -- 第一批旅游管理 462 462 -- 第二批德语 526 534 -- 第一批口腔医学 533 540 -- 第一批水利水电工程 526 540 -- 第一批英语 479 505 -- 第二批电气信息类 527 554 -- 第一批护理学 481 509 -- 第二批预防医学 522 531 -- 第一批护理学 524 532 -- 第一批建筑学 534 560 -- 第一批测控技术与仪器 522 542 -- 第一批医学检验 523 541 -- 第一批哲学类523 533 -- 第一批电气信息类527 554 -- 第一批物理学 527 539 -- 第一批过程装备与控制工程 523 534 -- 第一批工商管理类 527 543 -- 第一批临床医学 483 515 -- 第二批化学 526 551 -- 第一批医学影像学 526 558 -- 第一批法语 531 540 -- 第一批化学 476 509 -- 第二批制药工程 524 535 -- 第一批应用化学 523 537 -- 第一批公共事业管理 521 524 -- 第一批环境工程523 532 -- 第一批行政管理525 535 -- 第一批麻醉学 528 538 -- 第一批药学 524 533 -- 第一批城市规划 525 535 -- 第一批英语 527 544 -- 第一批物理学 475 495 -- 第二批工业设计 525 534 -- 第一批信息与计算科学 525 537 -- 第一批法学 525 535 -- 第一批生物科学 474 479 -- 第二批生物科学 522 532 -- 第一批计算机软件 519 527 -- 第一批安全工程521 528 -- 第一批化学工程与工艺522 531 -- 第一批日语 527 534 -- 第一批机械设计制造及其自动化 533 555 -- 第一批材料科学与工程 533 553 -- 第一批临床医学 535 577 -- 第一批应用物理学524 540 -- 第一批新闻传播学类 526 542 -- 第一批食品质量与安全 528 538 -- 第一批数学与应用数学 526 547 -- 第一批教育学 521 526 -- 第一批计算机科学与技术 478 495 -- 第二批热能与动力工程 526 538 -- 第一批社会工作 523 527 -- 第一批水产养殖学 522 528 -- 第一批经济学类529 552 -- 第一批生物医学工程524 533 -- 第一批车辆工程 527 534 -- 第一批光信息科学与技术529 538 -- 第一批应用心理学469 474 -- 第二批公共关系学 521 525 -- 第一批食品科学与工程533 555 -- 第一批土木工程 531 554 -- 第一批材料物理 525 539 -- 第一批生物技术 524 544 -- 第一批管理科学523 530 -- 第一批环境科学 523 538 -- 第一批会计学 527 536 -- 第一批应用心理学 525 546 -- 第一批给水排水工程 526 532 -- 第一批生物工程 526 542 -- 第一批工业工程 524 540 -- 第一批信息安全 532 563 -- 第一批工程管理 526 532 -- 第一批软件工程 522 542 -- 第一批材料成型及控制工程 524 548 -- 第一批数学与应用数学 474 496 -- 第二批管理科学与工程类 522 529 -- 第一批高分子材料与工程 528 539 -- 第一批国防教育与管理 473 497。
基因工程综合实验一 康康 生化实验PPT技术文档
接下来实际操作：
2、学习从LB平板挑单克隆, 进行液体培养; 每人练习接种2个克隆；
氨苄青霉素 Amp: 100mg/ml; 1000倍稀释使用 （不加IPTG）；
接下来实际操作：
3.用灭菌的毛笔蘸取pMBP-RFP重组菌液在 IPTG/Amp LB平板上画出任意图案
接下来实际操作：
4、提取pMBP-RFP质粒：每组提取2管；
抗生素不耐热，可以采用过滤灭菌（0.22微米）； 添加方法：固体培养基灭菌冷却到60℃以后添加。
。
接下来实际操作：
1、学习倒LB固体平板; 氨苄青霉素 Amp: 100mg/ml; 1000倍稀释使用;
IPTG：100mg/ml ; 1000倍稀释使用; 每人倒LB固体平板1块；
IPTG:异丙基硫代半乳糖苷，半乳糖结构类似物，作为具有lac或tac等启 动子的表达载体的表达诱导物使用，不被细菌代谢而十分稳定，因此 被实验室广泛应用。
3. 质粒DNA纯化：
方法一
（1）酚/氯仿抽提：使蛋白 质变性并停留于有机相和水 相之间的界面，而DNA存在 于水相之中
（2）盐/乙醇或丙酮沉淀 DNA，高速离心回收DNA
方法二
柱层析：通过硅胶基质过 滤特异吸附DNA和RNA， 与蛋白质分离。
实验操作
质粒DNA的微量快速提取（碱裂解法） (1) 收集细菌：
➢ 酵母粉（Yeast extract）：5克 (0.5%)
➢ 氯化钠：
10克 (1%)
LB固体培养基：
LB培养基中加入1.5%的琼脂粉Agar（质量体积比，即每升培 养基中加入15克），再灭菌。
每小组配制：50ml LB培养基、50ml LBHale Waihona Puke 体培养基LB培养基添加抗生素
基因工程讲稿-1
(Devlin et al. 1994)
Growth hormone expressed in cold waters, unlinked from temperature cue.
Mud loach
• -actin promoter linked to GH gene. • Growth increase >30 fold. • Gigantism.
supplementation with inorganic P or phytase in feed a means of dealing with excessive P in piggery waste
or eutrophication（富营养化） occurs （富营养化）
GM pigs from Canada
Age = 6 months (Nam et al. 2001)
已获成功的转基因植物
植物
至少35科200种 至少35科200种 35
性状
抗虫、抗病（病毒、细菌和真菌性病害） 抗虫、抗病（病毒、细菌和真菌性病害）
分离外源基因
载体
重组
重组DNA 重组
转化或 转染
整合
筛选
受体细胞
转化子
基因工程的四要素
1、目的基因 、
–expressed sequence –regulatory sequences –suitable codon usage for the host or target organism
2、载体 、 3、转化方法 、
Picture from media release May, 1999 Transgenic triplets produce milk with blood anticoagulant protein（抗凝蛋白） （抗凝蛋白） ATIII ATIII is found in normal plasma and regulates blood clotting
遗传学(南昌大学)智慧树知到答案章节测试2023年
第一章测试1.遗传学是研究（）的科学A:新陈代谢B:遗传C:适应D:变异答案:BD2.镰刀型红血球贫血症的个体与正常个体相比较，血红蛋白发生了（）个氨基酸的变化A:1B:4C:2D:3答案:A3.以下不能使细胞癌变的是（）A:病毒B:细胞癌基因突变C:寄生虫D:病毒癌基因答案:C4.基因工程中常用的筛选性标记基因是（）A:抗除草剂基因B:抗生素抗性基因C:BT基因D:质粒DNA分子答案:B5.以下技术中，能实现去除转基因筛选标记的基因编辑技术是（）A:TALENB:iTAQC:ZFND:CRISPR答案:ACD第二章测试1.以下哪些属于染色体上的结构（）A:端粒B:长臂C:着丝粒D:随体答案:ABCD2.一百个有特定基因型的个体，八十个表现出了预期表型，这称为（）A:表现度B:表型模写C:一因多效D:外显率答案:D3.在减数分裂过程中，发生交叉和交换的是（）A:同源染色体中的姊妹染色单体B:同源染色体中的非姊妹染色单体C:非同源染色体中的姊妹染色单体D:非同源染色体中的非姊妹染色单体答案:B4.在临床上，可能会引发新生儿溶血症的血型包括（）A:Rh血型B:其他选项都不是C:ABO血型D:MN血型答案:ACD5.关于卡平方检验，描述正确的是（）A:卡平方值越大，误差越小B:卡平方值越大，误差越大C:卡平方为正值D:自由度等于项数答案:BC第三章测试1.发生正干涉时，第一次单交换引起邻近位置发生第二次单交换的概率（）A:下降B:不变C:上升D:不定向变化答案:A2.三点测交的结果之中，子代的表型数可能是几个（）A:6个B:10个C:4个D:8个答案:AD3.以下哪种是限性遗传的（）A:芦花性状B:毛耳C:色盲D:血友病答案:B4.XXY性染色体组成的是（）A:间性果蝇B:雌果蝇C:超雌果蝇D:雄果蝇答案:B5.遗传图绘制完成后，连锁群的数量（）染色体的种类A:小于B:不确定C:大于D:等于答案:D第四章测试1.魏斯曼认为（）是可以遗传的A:种质和体质B:原生质C:体质D:种质答案:D2.反式排列时，可以裂解大肠杆菌的是（）A:一个突变位于A亚区，一个位于B亚区B:两突变均位于A亚区C:其他选项都不行D:两个突变均位于B亚区答案:A3.Intron是（）A:沉默子B:增强子C:外显子D:内含子答案:D4.核酸是遗传物质的直接证据是（）A:噬菌体侵染机制实验B:剪小老鼠尾巴的实验C:肺炎球菌转化实验D:豌豆杂交实验答案:A5.以下哪些是乳糖操纵子的结构（）A:调节基因B:结构基因C:O区D:P区答案:ABCD第五章测试1.温和型噬菌体（）A:只有裂解周期B:只有溶源周期C:既有溶源周期，又有裂解周期D:既无溶源周期，又无裂解周期答案:C2.以下哪些是大肠杆菌中可能含有的遗传物质（）A:环形主DNA分子B:线性主DNA分子C:端粒结构D:质粒DNA分子答案:AD3.λ噬菌体的超感染免疫性对象是（）A:P噬菌体B:M13噬菌体C:T偶列噬菌体D:同类的λ噬菌体答案:D4.以下哪些结构存在于质粒载体上（）A:复制起始原点B:选择性标记C:多克隆位点D:裂解基因答案:ABC5.以下对应关系中细菌能正常生长的是（）A:含有抗生素的培养基-培养合成代谢缺陷型的细菌B:含有抗生素的培养基-培养分解代谢缺陷型的细菌C:完全培养基-培养合成代谢缺陷型的细菌D:基本培养基-培养合成代谢缺陷型的细菌答案:C第六章测试1.真核生物的基因组（）A:编码区域远远少于非编区域B:少量存在重复序列C:大多为单顺反子结构，少数为多顺反子结构D:不存在重叠基因答案:A2.RFLP标记无法检出（）A:酶切位点上的碱基替代B:非酶切位点上的碱基插入C:酶切位点上的碱基插入D:非酶切位点上的碱基替代答案:D3.以下关于持家基因和奢侈基因说法正确的是（）A:持家基因表达的情况下，奢侈基因关闭，反之亦然B:持家基因在几乎所有细胞中都表达，与细胞的生长密切相关C:奢侈基因在几乎所有细胞中都表达，与细胞的生长密切相关D:持家基因表达的情况下，奢侈基因关闭，反之则不然答案:B4.真核生物基因组上的甲基化主要包括哪些（）A:5-甲基胞嘧啶B:7-甲基鸟嘌呤C:N6-甲基腺嘌呤D:18-甲基胞嘧啶答案:ABC5.微卫星DNA的重复序列单位长度，最接近以下哪个数据（）A:20-40B:2-20C:40-60D:60-80答案:B第七章测试1.细胞质遗传指由细胞质基因所决定的遗传现象和遗传规律，也叫核外遗传。
《基因工程》双语教学的探讨
、
目前 ， 高校双语教 学一般采 用三种方 式： ①全外语 教学 ， 即使用外 语原版 教材 ， 外语讲 解 、 书 、 疑 ， 板 答 也 常要求 学生用外 语提 问 、 语作业 、 外 外语 考试 ； 使用 ②
乎可 涉及人类 生存 所必需 的各个 行业圜 目前 ， 语是 。 英 当今 国际交 流的通 用语言 。基 因工 程相关 的权威 论文
特点 是 内容 丰富先 进 ， 图文并茂 ， 国际上使 用广泛 ， 在 具有权威性和时代感 。 国外教材 内容广泛 ， 但 知识的的 系统性和逻辑性不强 ， 对理论论述 也不够详 细。一些基 础不好 的学生学习起来会很 吃力 。因此在教学过程中 ， 我们配套选用一本 中文教材 ，还将一 些 国内教材列 为 教学参考书 。 （ ） 三 把握好双语 教学 中的 中、 文讲述 比例 ， 到 英 做 循序渐进
学 的质 量 。
关键词 ： 因工程 ； 基 双语教 学； 学质量 教 中图分类号 ： ４ ． Ｇ０ — １７ ０ １７ — ３ ４２ １ ）９ ０ ５— ２
随着经济全球化 ，我国经济与科技 发展与 国际联
系越来越密切 ，需要一批具 有国际视野 和国际竞争力 的人 才 ，以应 对经 济 全球 化 和科 技革 命 的挑 战 。 由
【 高教研 究 】
《 基因工程》 双语教学的探讨
（ 湖南农业 大学
黄丽华 ， 燕 ， 赵 张学文 生物科学 技术学 院 ， 湖南 长沙
４０２ ） １ １８
摘要 ： 因工程是 生命科学的前沿学科 ， 基 其技 术被 广泛应用 于生物技 术、 医学等领域 。为培养适应全球 化发展 的复合 型本科 生， 开展 了基 因工程双语教 学， 且对教 学 内容、 学方法、 教 教材选 用等进 行 了探讨 ， 以期提 高双语教
生物工程
生物工程生物工程（biological engineering；bion）生物工程，是20世纪70年代初开始兴起的一门新兴的综合性应用学科。
所谓生物工程，一般认为是以生物学(特别是其中的微生物学、遗传学、生物化学和细胞学)的理论和技术为基础，结合化工、机械、电子计算机等现代工程技术，充分运用分子生物学的最新成就，自觉地操纵遗传物质，定向地改造生物或其功能，短期内创造出具有超远缘性状的新物种，再通过合适的生物反应器对这类“工程菌”或“工程细胞株”进行大规模的培养，以生产大量有用代谢产物或发挥它们独特生理功能一门新兴技术。
生物工程包括五大工程，即遗传工程(基因工程)、细胞工程、微生物工程(发酵工程)、酶工程(生化工程)和生物反应器工程。
在这五大领域中，前两者作用是将常规菌(或动植物细胞株)作为特定遗传物质受体，使它们获得外来基因，成为能表达超远缘性状的新物种——“工程菌”或“工程细胞株”。
后三者的作用则是这一有巨大潜在价值的新物种创造良好的生长与繁殖条件，进行大规模的培养，以充分发挥其内在潜力，为人们提供巨大的经济效益和社会效益。
生物工程的应用领域非常广泛，包括农业、工业、医学、药物学、能源、环保、冶金、化工原料等。
它必将对人类社会的政治、经济、军事和生活等方面产生巨大的影响，为世界面临的资源、环境和人类健康等问题的解决提供美好的前景。
主要课程：有机化学、生物化学、化工原理、生化工程、微生物学、细胞生物学、遗传学、生物化学、分子生物学、基因工程、细胞工程、微生物工程、生化工程、生物工程下游技术、发酵工程设备等。
主要实践性教学环节：包括教学实习、生产实习和毕业论文(设计等，一般安排10-20周。
修业年限：四年授予学位：工学学士相近专业：生物科学生物技术生物信息学生物信息技术生物科学与生物技术动植物检疫生物化学与分子生物学医学信息学植物生物技术动物生物技术生物工程生物安全开办院校：北京北京航空航天大学中国农业大学北京理工大学北京化工大学北京工商大学北京联合大学天津天津大学天津理工大学天津科技大学天津商学院天津农学院上海上海交通大学华东理工大学上海大学东华大学重庆重庆大学西南农业大学重庆工商大学重庆工学院河北燕山大学河北大学河北工业大学河北农业大学河北科技大学河北经贸大学河南周口师范学院平顶山工学院河南大学河南师范大学河南农业大学河南工业大学郑州轻工业学院南阳师范学院河南科技学院商丘师范学院山东山东大学中国海洋大学山东农业大学山东科技大学曲阜师范大学山东理工大学青岛科技大学聊城大学烟台大学烟台师范学院莱阳农学院山东建筑大学泰山医学院山西山西大学太原理工大学中北大学山西农业大学安徽合肥工业大学安徽大学淮北煤炭师范学院安徽工程科技学院安徽技术师范学院合肥学院江西南昌大学江西师范大学江西农业大学江西理工大学江西中医学院宜春学院江苏东南大学中国矿业大学苏州大学南京理工大学南京农业大学南京工业大学江南大学中国药科大学南京林业大学淮海工学院盐城工学院浙江浙江大学浙江工业大学宁波大学浙江工商大学浙江万里学院中国计量学院浙江中医学院浙江科技学院湖州师范学院湖北华中科技大学华中农业大学湖北大学长江大学武汉科技大学三峡大学中南民族大学湖北工业大学武汉工程大学武汉科技学院武汉工业学院湖北民族学院孝感学院武汉生物工程学院湖南中南大学中南林业科技大学湘潭大学长沙理工大学湖南农业大学吉首大学湖南理工学院湖南中医学院湖南工程学院邵阳学院怀化学院湖南科技学院广东华南理工大学华南师范大学华南农业大学广东工业大学广州大学广东医学院广州医学院嘉应学院广西广西大学桂林电子科技学院广西工学院云南昆明理工大学贵州贵州大学贵州工业大学遵义医学院四川四川大学成都大学西南交通大学成都理工大学西南石油大学四川农业大学西华大学四川理工学院宜宾学院攀枝花学院陕西西安交通大学西北大学西北农林科技大学陕西科技大学西安工程科技学院陕西理工学院西安生物医药技术学院黑龙江哈尔滨工业大学黑龙江大学东北林业大学东北农业大学齐齐哈尔大学哈尔滨商业大学黑龙江八一农垦大学吉林吉林大学吉林农业大学延边大学长春工业大学东北电力大学吉林工程技术师范学院吉林化工学院辽宁大连理工大学东北大学沈阳农业大学沈阳药科大学沈阳大学辽宁石油化工大学辽宁科技大学大连大学沈阳化工学院大连轻工业学院大连民族学院新疆新疆大学内蒙古内蒙古大学内蒙古农业大学内蒙古科技大学内蒙古工业大学海南海南大学福建厦门大学福州大学福建师范大学华侨大学集美大学福建师范大学闽南科技学院甘肃兰州理工大学兰州交通大学甘肃农业大学西北民族大学现代生物工程技术现代生物技术(生物工程)是指对生物有机体在分子、细胞或个体水平上通过一定的技术手段进行设计操作，为达到目的和需要，以改良物种质量和生命大分子特性或生产特殊用途的生命大分子物质等。
基因工程第1讲概论课件
理论上的可行性。
41
二、分子遗传学新方法是基因工程的 技术基础（六大技术）
首当其冲的是要解决: ① 如何自如地得到目的基因； ② 如何在体外改造基因，得到重 组体； ③ 如何在体外转移重组基因；
直到20世纪70年代中期，相继出现了 几项关键性技术，梦想成真。
42
实际上的可操作性 材料、实验条件、时空条件、
经济条件和政策。 基础方面的基本条件（可能性+ 可行性+ 可操作性）具备, 尚需人的科学创新 思维+ 艰苦的实践。才能得到创新的发明、 发现
49
1970年, MIT 的 科学家率先提出在体 外把不同来源的遗传 物质进行重组的设想, 但遭到反对, 不予支
50
办
不
不
到
到
的
的
22
第一节 基因工程的 发生与发展
23
一、基因工程诞生的理论基础
2生物遗传的物质基础是 DNA 肺炎链球菌光滑型和粗糙型的转化 试验
24
● 1944年, 美 国微生物学家 Avery证明基 因就是DNA分 子, 提出 DNA 是遗传信息的 载体。
32
遗 传 密 码 表
目 录33
mRNA分子上从5 至3 的方向,每3个核 苷酸构建一个密码子, 编码某一特定氨基酸或 作为蛋白质合成的起始、终止信号, 称为三联 体密码(triplet codon), 也称遗传密码子(genetic codon)。
解决了信息语言的对应关系。
34
•密码: 43 = 64
14
（4）利用重组DNA技术可以在体外大 量扩增、纯化人们感兴趣的基因, 研 究其结构、功能及调控机制, 从而拓 宽了分子生物学的研究领域。
基因工程基础
基因工程基础School Pharmacy of Yantai University Pharmacy of Yantai University
* 化学合成法获取目的基因
School
由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列
基因工程基础School Pharmacy of Yantai University Pharmacy of Yantai University
第二节 目的基因的获得
一 目的基因的获得: 化学合成 聚合酶链式chool Pharmacy of Yantai University School Pharmacy of Yantai University
✓化学合成法: 要求:1)已知目的基因的序列或其产物 的氨基酸序列 2)片段不宜太长 工具:自动化DNA合成仪 应用:1)合成PCR引物 2)寡核苷酸探针 3)人工接头序列及较小的基因
基因工程基础School Pharmacy of Yantai University School Pharmacy of Yantai University
• 需要的物质:模板DNA,引物,dNTP(Mg2+),TaqDNA 聚合酶
4种反应混合物经历变性、退火、延伸三步
94℃,热变性,双链解开 55℃,冷却退火,引物与模板的单链DNA
基因工程基础School Pharmacy of Yantai University School Pharmacy of Yantai University
基因工程基础School Pharmacy of Yantai University School Pharmacy of Yantai University
基因工程基础School Pharmacy of Yantai University School Pharmacy of Yantai University
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对药物和重金属离子抗性 R因子 R1质粒(94kb) 使宿主对氯霉素(Cm)、链霉素(Sm)、磺胺(Su)、 氨苄(Ap)和卡那霉素(Km)抗性 对金属离子抗性 碲 (Te+6)、砷 (As3+)、汞 (Hg2+)、镍(Ni2+)、 钴(Co2+)、银(Ag+)、镉(Cd2+)等
②较为抵抗机械(超声波)切割；
③多拷贝，给克隆基因提供了剂量效应； ④对内切酶提供多切点的机会大为减少。 2、了解载体上基因位置/限制酶作用位点。 3、包含可供选择的标记性状(基因) 4、最大限度地具有MCS的单切点 5、改造或增加表达基因的调控序列 6、安全性能改造
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常用质粒
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pBR 322
4361 bp
Ampr Ampr
Tetr LacZ
pUC 18/19 pGEM-3Z
2686 bp 2743 bp
Ampr LacZ Ampr LacZ
pUC 118/119 3162 bp
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1. pBR322 has an origin of replication, ori. This sequence is required to LOGO propagate the plasmid and maintain it at a level of 10 to 20 copies per cell. 2. The plasmid contains two genes that confer resistance to different antibiotics (tetR, ampR). 3. Several unique recognition sequences in pBR322 (PstI, EcoRI, BamHI, SalI, PvuII) are targets for different restriction endonucleases, providing sites where the plasmid can later be cut to insert foreign DNA. 4. The small size of the plasmid (4,361 bp) facilitates its entry into cells and the biochemical manipulation of the DNA.
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λ-DNA载体的主要类型
插入灭活型载体: Charon2、Charon6、λgt11 取代型载体λ: EMBL4、λgtλc、λNM762、 Charon40 正选择型载体:λEMBL1、λL47、λ1059
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野生型的λ噬菌体不能在P2噬菌体溶源性的细菌中 繁殖（Spi+）， 这种生长抑制表型受λ-DNA上的 red和gam两个基因控制。若将外源DNA取代red和 gam ，重组噬菌体便拥有Spi-表型，能在P2噬菌体 溶源性的大肠杆菌受体菌中繁殖，并形成透明斑
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表型效应
致育性
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F因子（fertility factor）：是在某些大肠杆菌中发现 的一种最有代表性的接合型质粒。是雄性决定因子。
有三种存在方式：F+、F’、线性形式
接合作用（ conjugation ）:在合适的条件下，将雄性
细胞和雌性细胞混合培养，由于性须的作用，形成雌
λ 噬菌体由外壳包装蛋白和λ-DNA组成
λ-DNA全长48502个核苷酸 λ-DNA上至少有61个基因
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cos位点（cohesive end site):
在DNA两端各有12nt的5`单链突出，彼此 序列互补。它是包装时的切割信号。
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LOGO 构建琥珀密码子的突变体 琥珀型突变（sup)是指由CAG（Gln）向UAG（stop） 的突变。大肠杆菌的某些菌株含有特异性的校正基 因，其编码产物校正tRNA能专一性地纠正这一突变。 将野生型λ-DNA上D和E两个头部包装蛋白的基因中 的CAG密码子突变成UAG。当这种λ-DNA进入一般 的大肠杆菌菌株后，不能合成有活性的头部蛋白， 也就不能被包装和裂解细菌，这样就可以阻止有害 重组体的生物污染及扩散，而基因工程实验中使用 的受体则是具有琥珀型突变体校正功能的菌株
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其他 共生质粒：豆科植物共生固氮的根瘤菌结(nod) 和固氮(fix)基因 EcoRI:大肠杆菌Ry13质粒 乳糖的利用等特性也与质粒有关 隐秘质粒(cryptic plasmid):不显示任何表型效 应的质粒
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质粒的复制类型和拷贝数
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复制类型 严密型（stringent plasmid） 松弛型（relaxed plasmid 拷贝数 质粒拷贝数一般与其分子量成反比关系， 质粒拷贝数=质粒DNA量/染色体DNA量 ×MWc/MWp 调控：反义RNA或关键蛋白与重复区结合
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利用异常营养物 Pseudomonas• 、克氏杆菌、短黄杆菌等 将许多化学毒物降解。 降解酶由降解性质粒编码 特殊有机物：樟脑、水杨酸、二甲苯、辛烷 对植物的致病性 Ti、Ri
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穿梭质粒载体shuttle plasmid vector
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是指一类由人工构建的具有两种不同
复制起点和选择标记，因而可在两种不同的
寄主细胞中存活和复制的质粒载体。由于这
类质粒载体可以携带外源DNA序列在不同物
种的细胞间，特别是在原核和真核细胞之间
往返穿梭，因此在基因工程的研究中是十分 有用的。
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依据功能分： 1、克隆载体：用于在宿主细胞中克隆和扩增 外源片段 2、表达载体：用于在宿主细胞中获得外源基 因的表达产物。
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质粒载体的一般特征
Basic biology of plasmid
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pUC18/19
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pUC118/119
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使噬菌体或处于溶原状态，或处于溶菌状态.
DNA重组技术一般需要λ噬菌体进入溶菌状态
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λ-DNA载体的构建：缩短长度
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野生型λ-DNA包装的上限为51kb，本身长度为 48.5kb，只有当插入的外源DNA片段不大于 2.5kb时，才能被包装成有感染力的噬菌体颗粒。 因此缩短野生型λ-DNA的长度，可以提高装载量。 其实野生型λ-DNA上约有40-50%的片段是复制 和裂解所非必需的。根据切除的多少，可将λDNA分成两大类载体： 插入型载体 取代型载体
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λ-DNA重组分子的体外包装
λ-DNA重组分子需在体外人工包装成有感染力的噬 菌体重组颗粒，方可高效导入受体细胞 用于体外包装的蛋白质可直接从感染了λ噬菌体的 大肠杆菌中提取，现已商品化。这些包装蛋白通常 分为相互互补的两部分： 一部分缺少E组份，另一部分则缺少D组份。包装时，
Basic biology of plasmid and phage vectors
载体(vector)
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目的基因进入原核或真核细胞并高效复制和表 达蛋白质，需要装入载体才能实现。 作为基因工程载体所需具备的基本条件：
1.能自我复制，并具一定的拷贝数。 2.带有便于检测的遗传标记，便于筛选和鉴定。 3.在适当的位置有单酶切位点，便于重组操作。 4.带有强启动子，驱动目的基因在宿主细胞内高 效表达。 5、具有较高的遗传稳定性。
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质粒载体缺点
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CaCl2转化效率低
克隆片段小于10kb
大量筛选时需要细胞裂解
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噬菌体(phage)克隆载体
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λ噬菌体克隆载体
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λ 噬菌体的生物学特性： λ 噬菌体是大肠杆菌的温和型噬菌体
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质粒载体多种用途
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转录、测序、亚克隆、表达
转化E.coli容易，重复性高 容易大量分离提纯
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质粒载体筛选方法
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插入失活 α－互补：IPTG,X-GAL 直接筛选：抗生素 表达筛选（抗体筛选） Probe筛选
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当这两部分包装蛋白与重组λ-DNA分子混合后，包
装才能有效进行，任何一种蛋白包装液被重组λDNA污染后，均不能被包装成有感染力的噬菌体颗 粒，这也是基于安全而设计的