羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
小鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA Kit实验说明书
【产品编号】CSB-E08839m
【预期应用】ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆、组织裂解液中 Hyp 含量。
【产品性能指标】
1、 检测范围：7.8 ng/ml-500 ng/ml
2、 灵敏度：1.95 ng/ml
3、 精密度：批内差 CV%<8%，批间差 CV%<10%
3、 生物素标记抗体工作液 生物素标记抗体液按 1:100倍用生物素标记抗体稀释液进行稀释。如 10μl生物素标记抗体加
990μl生物素标记抗体稀释液，轻轻混匀，在临用前10分钟内配妥。
4、 辣根过氧化物酶标记亲和素工作液 辣根过氧化物酶标记亲和素 按 1:100 倍用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液进行稀释。 如
溶液后每隔一段时间观察一下显色情况以控制反应时间（比如每隔 10 分钟）。当肉眼可
见标准品前 3-4 孔有明显梯度蓝色，后 3-4 孔显色不明显时，即可加入终止液终止反应，
此时蓝色立刻变为黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
7、 底物溶液应为浅蓝色或无色，如果颜色严重变深则必须弃用。底物溶液易受污染，请避
辣根过氧化物酶标记亲和素
生物素标记抗体稀释液
有效期内2-8℃条件下最多可保存一个月。
辣根过氧化物酶标记亲和素
稀释液
样本稀释液
浓洗涤液
底物溶液
终止液
【所需试剂和器材】
标准规格酶标仪；高速离心机；电热恒温培养箱；干净的试管和离心管；容量瓶；
系列可调节移液器及吸头；多通道移液器；蒸馏水 等
【样本采集及保存】
如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4、 温育：为防止样本蒸发或污染，温育过程中酶标板必须覆上板贴，实验过程中酶标板应
人羟脯氨酸Hyp酶联免疫分析
人羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2μg/L -48μg/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中羟脯氨酸(Hyp)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人羟脯氨酸(Hyp)水平。
用纯化的人羟脯氨酸(Hyp)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入羟脯氨酸(Hyp)，再与HRP标记的羟脯氨酸(Hyp)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的羟脯氨酸(Hyp)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人羟脯氨酸(Hyp)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
脯氨酸含量检测试剂盒说明书
脯氨酸（Pro ）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0290规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体45 mL×1瓶（自备）4℃保存试剂二液体45 mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1．试剂一：自备冰乙酸。
2．标准品：脯氨酸10 mg ，临用前加入1 mL 蒸馏水，配成10 mg/mL 标准品。
产品说明：脯氨酸（Pro ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro 含量显著增加。
Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。
因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸（SA ）提取Pro ，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在520nm 测定吸光度。
技术指标：最低检出限：0.1791 μg/mL 线性范围：0.5-40 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器及用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞、细菌或组织样本的制备：细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min ；10000g ，常温离心10min ，取上清，冷却后待测。
组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1320规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体0.16mL×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂4℃保存一周。
产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。
它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。
羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536nm 的吸光度下降，样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样品的制备（1）组织样品的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）血清、果汁等液体样品可直接测定。
（3）提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。
2、操作表：在1.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一（mL）0.150.150.15试剂二（mL）0.30.30.3试剂三（mL）0.30.30.3充分混匀，防止颜色不均一。
样品（mL）--0.15试剂四（mL）-0.150.15HO（mL）0.750.600.452混匀后37℃孵育60min。
HYP 测定法
HYP 测定法1.原理试样在6M的盐酸溶液中水解,释放出羟脯氨酸。
经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。
用高氯酸破坏过量的氯胺T。
羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。
2.试剂配制(1).醋酸/柠檬酸缓冲液(pH6)醋酸钠57g柠檬酸钠37.5g柠檬酸 5.5g异丙醇385ml 定容至1L称取醋酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸，溶解于蒸馏水中，再加入异丙醇，混合均匀，用精密pH计调pH=6.0，定容至1L(2).氯胺T溶液7% 50ml(3).Ehriche 试剂P-二甲胺-笨甲醛100g60%高氯酸150ml称取对二甲氨基苯甲醛，将其溶解于高氯酸中，贮存于棕色瓶中(4). A液：氯胺T 7% 1mlbuffer 4mlB液：Ehriche试剂 6ml异丙醇 26ml3.样品处理以1：5的比例将鱼鳞胶原（浓度约3-4mg/ml）用6M HCl稀释，混合均匀后，用针筒取3ml稀释液于安剖瓶中，将安剖瓶用酒精喷灯封口，在110℃下处理24h左右。
待水解完全后，将水解液全部转移到旋转蒸发瓶中，用旋转蒸发器抽真空蒸馏，水浴温度设为60℃。
蒸发后瓶内固体完全转移到25ml容量瓶中，用缓冲液（pH=6.0）定容，待用。
4.操作步骤取试样液300μl，加入600μl异丙醇，搅拌均匀后加入300μl A液，搅拌均匀静置4min，然后加入4ml B液，搅拌均匀。
在60℃水浴中显色25min，冷却2min，用紫外可见分光光度计在558nm处测吸光度。
5.数据处理分别测定吸光度并按标准曲线方程计算羟脯氨酸质量浓度，乘以稀释倍数和体积后得到样品中的羟脯氨酸含量，最后再乘以胶原与羟脯氨酸之间的换算系数（依据氨基酸分析结果），得到样品中的胶原含量。
6.羟脯氨酸标准曲线。
绵羊羟脯氨酸（Hyp）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
绵羊羟脯氨酸（Hyp）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆、组织等样本中羟脯氨酸（Hyp）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊羟脯氨酸（Hyp）水平。
用纯化的绵羊羟脯氨酸（Hyp）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入绵羊羟脯氨酸（Hyp），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的绵羊羟脯氨酸（Hyp）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊羟脯氨酸（Hyp）含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
羟基脯氨酸说明书
羟基脯氨酸说明书一、产品概述羟基脯氨酸是一种重要的氨基酸补充剂，能够帮助促进身体的蛋白质合成和细胞再生，提高肌肉恢复和生长能力。
本说明书将详细介绍羟基脯氨酸的成分、用途、剂型、剂量和注意事项，以帮助用户正确使用本产品。
二、产品成分羟基脯氨酸主要成分包括羟基脯氨酸粉末、辅料（如胶囊、溶剂等），其中羟基脯氨酸粉末含量符合产品标签上所示。
三、产品用途羟基脯氨酸是一种重要的营养补充品，适用于以下情况：1. 体育锻炼者：可促进肌肉恢复，提高训练效果；2. 肌肉疲劳者：可缓解肌肉酸痛和疲劳感；3. 需要增加蛋白质摄入量的人群：可帮助补充蛋白质，促进身体健康；4. 需要维持肌肉质量的老年人：可减少肌肉流失，提高肌肉功能。
四、产品剂型及规格羟基脯氨酸目前主要有片剂、胶囊和粉剂等剂型。
不同剂型的羟基脯氨酸含量、包装规格和用法用量各有差异，请用户按照产品标签和说明书上的指导服用。
五、产品剂量羟基脯氨酸的剂量应根据个人情况而定，建议在医师或专业营养师的指导下使用。
一般情况下，推荐的剂量为每天1-3次，每次剂量为500-2000毫克。
具体剂量应根据个体身体状况、饮食习惯和运动强度等因素进行调整。
六、产品禁忌1. 对羟基脯氨酸过敏者禁用本产品；2. 未满18周岁的儿童禁用本产品；3. 孕妇、哺乳期妇女和正在怀孕计划的女性慎用；4. 有严重肾脏疾病的患者慎用或遵医嘱使用。
七、产品储存1. 请将羟基脯氨酸产品放置于阴凉干燥处，避免阳光直射；2. 请保持原包装完好，避免受潮；3. 请将产品放置于儿童难以触及的地方。
八、产品注意事项1. 请严格按照产品标签和说明书上的剂量和使用方法使用本产品；2. 请咨询专业医生或营养师的指导以了解个人适宜的剂量和使用频率；3. 本产品不能替代正常饮食，不可过量使用或长期使用；4. 使用过程中如有不适，请及时停用并就医；5. 请勿将本产品与其他保健品或药物混合使用，以免产生不良反应。
九、产品效果及副作用羟基脯氨酸作为氨基酸补充剂，能够帮助促进身体的蛋白质合成，提高肌肉恢复和生长能力，但效果因个人差异而异。
羟脯氨酸
一种新型优化的肝组织羟脯氨酸含量测定方法的建立修贺明郭争荣徐铮【摘要】目的：建立一种可信度、敏感度高，适合于微量组织羟脯氨酸含量的测定方法―胃酶酸解法。
方法：在组织、重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二氨基苯甲醛（PDAB）一定的条件下，对胃酶法和传统盐酸水解法进行了比较。
结果：在相同条件下，传统方法测得HYP含量为0.045ug/ml－1.547ug/ml，平均0.7789ug/ml；胃酶酸解法测得羟脯氨酸含量为2.955ug/ml－4.500ug/ml，平均为3.921ug/ml，两者比较有显著性差异（P＜0.01）。
结论：胃酶酸解法的可信度、敏感度均优于传统方法，其更适合于微量组织羟脯氨酸的测定。
关键词：羟脯氨酸胃酶酸解法【abstract】objective：羟脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）是一种非必需氨基酸，是机体胶原蛋白的主要成份之一，几乎所有的HYP都存在于胶原中，被认为是胶原中的特征性氨基酸。
因此，HYP含量的测定已成为衡量机体胶原含量的一个重要指标，寻求一种合理、优化的HYP含量的测定方法已成为众多学者关注的焦点。
目前，人们对传统的HYP含量的测定方法－盐酸水解法已达成了共识，但是传统方法对组织要求量比较大，水解不够彻底等缺点限制了其广泛应用。
近年来大批的学者对HYP的测定条件进行了多方面、多层次、多途径的研究，同时也深入的探讨了不同测定方法，虽然在时间、试剂用量、所需器材等方面有了很大的改进，但对其测定方法的研究欠少，仍未能找到一种方便、快捷、可靠性高的测定方法。
笔者对HYP含量测定方法进行了仔细的研究，针对传统方法的缺点对传统方法进行了改进，在组织、重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二氨基苯甲醛（PDAB）一定的条件下，对两种方法进行了比较，探索出一条更为先进、更为稳定可靠的HYP 检测方法。
现报道如下：一，材料及其方法1，主要实验材料1.1 羟脯氨酸标准品北京鼎国生物技术发展中心1.2 酶标仪美国VERSAmax1.3 微量电子天平瑞士METTLer AE2601.4 对二氨基苯甲醛天津市博迪化工有限公司1.5 氯胺－T 天津市精细化工研究所2，试剂配制2.1 标准HYP储存液（1mg/ml）：称取100mgHYP标准品，用0.1mol/l盐酸溶解并定容至100ml，置棕色瓶于4℃保存。
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羟脯氨酸（HYP）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0250
规格：50T/48S
产品内容：
O（V/V）=1:1，室温保存。
提取液：6mol/L盐酸，自备。
浓盐酸：H
2
试剂一：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：液体1mL×1支，0.5mg/mL羟脯氨酸标准品，4℃保存。
产品说明：
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。
通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、羟脯氨酸提取
1.组织：称取约0.5g样品于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。
加入5mL的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至没有可见大的团块，16000rpm，25℃，离心20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），用10mol/LNaOH（约3mL）调节pH值至6～8范围内。
蒸馏水定容至8mL，取上清待测。
（过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质）
2.细胞：取500万个细胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至透明状，16000rpm，
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25℃，离心20min，用10mol/LNaOH（约0.5mL）调节pH值至6～8范围内。
蒸馏水定容至2mL，取上清待测。
二、测定操作：
1．将标准品稀释为15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117µg/mL的标准溶液。
2．分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。
3．按下表进行操作：
空白管测定管标准管样本（μL）200
标准溶液（μL）200
试剂一（μL）200200200
混匀，室温静置20min
试剂二（μL）200200200 O（μL）600400400
H
2
混匀，60℃，20min，取出后室温静置15min，用1mL比色皿，在560nm下分别测定空白管、测定管、标准管的OD值，并记为A空白管、A测定管、A标准管。
三、羟脯氨酸含量计算公式
1.标准曲线的绘制：
以标准溶液的浓度为x轴，∆A标准（∆A=A标准管-A空白管）为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。
将∆A测定（∆A=A测定管-A空白管）带入方程得到x。
2.羟脯氨酸含量的测定：
（1）按样本鲜重计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/g鲜重）=x×V样品÷（W×V样品÷V组提）=8x÷W
（2）按样本蛋白浓度计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/mg prot）=x×V样品÷（Cpr×V样品）=x÷Cpr
（3）按细菌或细胞数量计算：
细胞羟脯氨酸含量（µg/104cell）=x×V样品÷（细胞数量×V样品÷V胞提）=2x÷细胞数量。
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V样品：加入的样品体积，0.2mL；V组提：组织提取液体积，8mL；V胞提：细胞提取液体积，2mL；W：样本鲜重，g；细胞数量：以104为单位，万个；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
注意事项：
1、OD值大于1，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
3、按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。
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