黄铜类成分分析
黄酮类化合物
黄酮类化合物一概述黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的重要有机化合物。
黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多的色彩。
这类化合物多存在与高等植物及蕨类植物中。
苔藓类植物中部分存在黄酮类化合物，而藻类，微生物（如细菌）及其他海洋生物中没有发现黄酮类化合物的存在。
黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。
绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方起着重要的作用。
它是很多中药的活性成分，具有抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、抗癌等生物活性。
1.1黄酮类化合物的基本结构以前黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮（flavone见图1）结构类的化合物。
现在泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳基团相互连接而成的一系列化合物。
图1它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。
黄酮类化合物结构中常见的取代基团有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等。
1.2黄酮类化合物的生物合成黄酮的基本骨架是由三个丙二酰辅酶A和一个桂皮酰辅酶A生物合成而产生。
经同位素标记，大体合成过程如下图5所示：上述标记实验同时证明了间苯三酚不是黄酮类化合物的生物合成前体，而桂皮酸和对羟基桂皮酸是黄酮类化合物B环更适合的生物合成前体。
1.3黄酮类化合物的分类（见图2）：根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置（2-或3-）以及三碳链是否构成环状等特点，可将主要的天然黄酮类化合物分类。
图2 黄酮类化合物的分类1.3.1黄酮类及黄酮醇类黄酮及黄酮醇类是数量最多、分布最广的黄酮类化合物。
木犀草素是最常见的黄酮类化合物，在植物界分布较广，具有抗菌作用。
清热解毒中药黄芩含有较多的黄酮类化合物，主要成分为黄芩苷和次黄芩苷等。
槲皮素及及其苷类则是植物界分布最广、最常见的黄酮化合物。
1.3.2二氢黄酮类及二氢黄酮醇类二氢黄酮和二氢黄酮醇类是黄酮和黄酮醇的2,3-双键饱和结构，绝大部分天然来源的二氢黄酮是2S构型，二氢黄酮醇是2R,3R构型。
天然药物化学黄酮类结构解析天然药化结构鉴定
黄酮类化合物在其他天然药物开发中的应用
05
CHAPTER
黄酮类化合物研究展望
01
02
黄酮类化合物药理活性的深入研究
针对黄酮类化合物在预防和治疗重大疾病方面的应用进行深入研究，为其临床转化提供科学依据。
深入探索黄酮类化合物在抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗衰老等方面的药理活性，揭示其作用机制和靶点。
黄酮类化合物提取分离技术的改进与创新
优化黄酮类化合物的提取工艺，提高提取效率和纯度，降低生产成本。
开发新型的分离纯化技术，如超临界流体萃取、分子印迹技术等，实现对黄酮类化合物的快速、高效分离。
黄酮类化合物结构修饰与新药研发
对黄酮类化合物进行结构修饰，改善其药理活性、代谢特性及稳定性，提高疗效和降低副作用。
基于黄酮类化合物的新药研发，发掘具有自主知识产权的创新药物，满足临床治疗需求。
提取
黄酮类化合物的分离可通过柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法等技术实现。
分离
黄酮类化合物的提取与分离方法
02
CHAPTER
黄酮类化合物结构解析
黄酮类化合物的基本母核是由2-苯基色原酮组成，通常包括A、B、C三个环。
母核结构
黄酮类化合物分子中常有羟基、甲氧基、烃基等取代基，这些取代基的种类和位置对化合物的性质和生物活性有重要影响。
天然药物化学黄酮类结构解析与天然药化结构鉴定
目录
黄酮类化合物概述 黄酮类化合物结构解析 天然药化结构鉴定技术 黄酮类化合物在天然药物开发中的应用 黄酮类化合物研究展望
01
CHAPTER
黄酮类化合物概述
黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，通常具有多个酚羟基，并具有C6-C3-C6的基本碳架结构。
黄酮类成分分析分析
中药名称:葛根 成分: 葛根素
定性鉴别方法：取本品粉末0.8g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，
滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根对 照药材0.8g，同法制成对照药材溶液。再取葛根素对照品，加甲醇制 成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502） 试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使 成条状，以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，取 出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照 药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。
三、含量测定
中药制剂中含有黄酮类成分，可按要求测定总黄酮含量、黄酮类单
体含量或两者均须测定。含量测定方法主要有分光光度法、薄层色谱法、 高效液相色谱法等。
（一）、总黄酮含量测定
1.分光光度法一般用于总酮类成分的含量测定。大多数黄酮类化合 物在甲醇溶液中的紫外吸收光谱ห้องสมุดไป่ตู้两个主要吸收带组成。 带Ⅰ—出现在300~400nm之间的吸收带 带Ⅱ—出现在240~285nm之间的吸收带 含黄酮类化合物的原料药及部分制剂经必要的提取纯化后，可直接 于最大吸收波长附近测定总黄酮的吸光度，对照品的选定应以最大吸收 波长与总黄酮的相近为原则，单体黄酮和总黄酮均可作为对照品，常以 芦丁等对照品计算总黄酮的含量。 《中国药典》2015版中淫羊藿总黄酮的含量测定（书P156页）
色谱法
1.薄层色谱法 硅胶--分离鉴别弱极性黄酮类化合物 • 遵循正相色谱原理，化合物极性越大，所选择的展开剂极性也 相应增大，同时根据化合物酸性强弱调节展开剂的酸碱性。常 用展开剂有苯-甲醇等。 聚酰胺--分离检识含游离酚羟基的黄酮及其苷 • 利用氢键吸附原理，由于聚酰胺和黄酮类化合物上酚羟基形成 氢键缔合，所以作用力较强，需要极性强的展开剂，而在展开 剂中大多含有醇、酸或水，或兼有两者。所以，分离检识游离 黄酮常用有机溶剂作为展开剂，如氯仿- 甲醇等；而分离检识黄 酮苷常用含水有机溶剂作为展开剂，如甲醇- 水等。 纤维素--分离黄酮类多糖苷混合物 • 展开系统：正丁醇-乙酸-水，5%~40%乙酸 展开好的色谱，常在紫外灯（365nm）下观察荧光斑点及其颜 色；亦可喷三氯化铝试剂，在日光灯或紫外灯下观察荧光是否加 强；也可氨熏，是否出现黄色、棕色荧光斑点等。
黄酮类化合物的检识与结构鉴定
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（三） C环质子
1. 黄酮类
O
3 H
O
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H-3, 6.3
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2. 异黄酮类
O 2H
3
O
H-2位于羰基位，同时受羰基和苯环的负屏 蔽作用，且通过碳与氧相连，故较一般芳香 质子低场，δ7.6-7.8。 若用DMSO-d6作溶剂，则δ8.5-8.7。
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3. 二氢黄酮和二氢黄酮醇
1) 二氢黄酮
O
H 2
3 H
O
H-2, dd, δ5.2,
Jtrans = 11Hz （反偶）, Jcis = 5Hz（顺偶）
两个H-3, 分别为dd峰，中心位于δ2.8 ，J = 17Hz（偕偶），5Hz（顺偶）及J = 17Hz（偕 偶），11Hz（反偶）
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2．7-OH黄酮
HO
8O
6
5 O
H-5 7.7-8.2 (d, J=9Hz) H-6 6.4-7.1(dd, J=9, 2.5Hz) H-8 6.8-7.0 (d, J=2.5Hz)
H-5较H-6、H-8低场，是由于羰基的负屏蔽 效应的影响。
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2. 薄层层析(TLC)
１）硅胶薄层 用于弱极性黄酮较好。 常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）； 苯：甲醇（95：5）或苯：甲醇：冰醋酸 （35：5：5）等。
黄酮类成分分析PPT
波谱法主要包括紫外可见光谱法、红外光谱法、核磁共振波谱法等，通过测定黄酮类成分的吸收光谱或发射光谱， 确定其结构和含量。该方法具有高精度和高分辨率的特点，但操作较为复杂，需要专业人员操作。
04 黄酮类成分的生理活性与 功能
抗氧化活性
总结词
黄酮类成分具有显著的抗氧化活性，能够有效清除自由基，保护细胞免受氧化应激损伤。
抗氧化剂
黄酮类成分具有抗氧化作 用，可保护细胞免受自由 基损伤，延缓衰老。
日化产品
护肤品
黄酮类成分具有抗氧化、 抗炎和美白等作用，可用 于护肤品中，改善皮肤质 量。
洗发水、沐浴露
黄酮类成分具有抗菌、抗 炎和滋润等作用，可添加 到洗发水、沐浴露等日化 产品中。
口腔护理产品
黄酮类成分具有抗菌、抗 炎和抗龋齿等作用，可添 加到牙膏、漱口水等口腔 护理产品中。
要点二
详细描述
黄酮类化合物具有广谱的抗菌和抗病毒活性，对多种细菌 、真菌和病毒具有抑制作用。它们可以通过破坏病原体的 细胞膜、抑制酶的活性等机制发挥抗菌和抗病毒作用，为 治疗和预防感染性疾病提供新的药物候选。
05 黄酮类成分的应用
食品添加剂
01
抗氧化剂
黄酮类成分具有较好的抗氧化性 能，可以延缓食品氧化变质，延 长食品保质期。
深入研究黄酮类成分的生物合成途径，了解关键酶和调 控因子，为优化黄酮类成分的产量提供理论基础。
基因工程与代谢工程的应用
通过基因编辑、基因敲除或过表达等技术手段，调控黄 酮类成分的生物合成过程，提高其产量和品质。
分析方法的改进与创新
高效分离纯化技术的研发
改进现有的分离纯化方法，提高黄酮类成分的提取纯 度与效率，降低生产成本。
优化提取温度和时间
无花果中黄酮类化学成分及抗氧化活性研究
分析检测无花果中黄酮类化学成分及抗氧化活性研究董丽梅，孔令熙，陈玳欣，蓝乐淇，吴梓怡，赵 彤*（广东生态工程职业学院，广东广州 510520）摘 要：采用多种色谱分离技术从无花果中分离得到4个黄酮类化合物，经波谱分析，分别鉴定为槲皮素、山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。
抗氧化活性测试表明，山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷显示出比维生素C更强的ABTS自由基清除活性；槲皮素、山奈酚、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷显示出比维生素C更好的DPPH自由基清除活性。
关键词：无花果；黄酮；化学成分；抗氧化活性Study on Chemical Constituents and Antioxidant Activities ofFlavonoids in FigDONG Limei, KONG Lingxi, CHEN Daixin, LAN Leqi, WU Ziyi, ZHAO Tong*(Guangdong Eco-Engineering Polytechnic, Guangzhou 510520, China) Abstract: Four flavonoids were isolated from figs by various chromatographic separation techniques. On the basis of spectral data, they were identified as quercetin, kaempferol, kaempferol-3-O-β-D-glucoside, quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside. Antioxidant activity test demonstrated that kaempferol, kaempferol-3-O-β-D-glucoside and quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside showed stronger ABTS free radical scavenging activity than vitamin C. Quercetin, kaempferol and quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside showed better DPPH free radical scavenging activity than vitamin C.Keywords: fig; flavonoid; chemical constituents; antioxidant activity无花果又称奶浆果、文仙果，为桑科榕属植物无花果（Ficus carica Linn.）的聚花果，富含膳食纤维、维生素和矿物质[1-2]，有润肺止咳、健脾开胃、润肠通便等功效[1,3]。
第二节黄酮类成分分析
中药的甲醇或乙醇粗提取物常显酱 红色，在进行盐酸-镁粉反应时，可观 察加盐酸后升起的泡沫颜色，如果泡 沫是红色则为正反应。
例： 清喉咽合剂 处方：黄芩、连翘、地黄、麦冬、玄参
【鉴别】 取本品5mL，加醋酸乙酯5mL，振 摇提取，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干， 残渣加甲醇2mL使溶解，加镁粉少量及盐酸 3~4滴，即显红色。（黄芩苷）
2. 与金属盐的配位反应
C3-OH、C4=O，C5-OH、C4=O,邻二-OH可与金属 离子络合显色。
常用下列试剂的醇溶液 硝酸铝 三氯化铝 二氯氧锆
Al3+、Zr4+能与大多数黄酮类药物产生黄绿 色荧光。
O
O O Zr O
Cl H2OO OOAl来自：银黄口服液 处方：金银花、黄芩
【鉴别】（1）取本品1mL，加5%硝酸钠溶液和10% 硝酸铝溶液各0.3mL，生成黄色沉淀；再加5%氢氧 化钠溶液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显棕红色。 （黄酮类） （2）取本品0.1mL，加水10mL，摇匀，取溶液2mL， 加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液显黄色，再加盐 酸1~2滴，黄色不褪。（黄酮类） 表示B环无邻二-OH
OH O HO
葛根素
OH O OO
CH3 CH2CH C CH3
O
O
OH O CH3
淫羊藿苷
O
2
O OH
O
1
（2）极弱碱性 1-O
可与强酸成盐而显特殊颜色
H2SO4或HCl
·· · ·O
烊盐
O
4. 显色反应
（1）盐酸-镁粉反应
个别显 紫 ~ 蓝
黄酮类
二氢黄酮类 黄酮醇类
HCl
Mg(Zn)
红
~ 紫红
总黄酮的测定方法
总黄酮的测定方法黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。
黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。
近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。
因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
一、方法（一）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。
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黄酮类成分分析
一、概述
黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。
它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟
基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。
黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，
小部分以游离态（苷元）的形式存在。
绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用。
生长在南太平洋所罗门群岛中的向天果这种野生植物同样含有丰富的黄酮化合物成分，具有很广范的药用功效，《马来西亚草药目录》中记载，向天果味苦、涩、性凉，解热、收敛、种仁强壮！其种子主治：糖尿病、高血压。
中文名
黄酮类化合物
英文名
flavonoids
别称
黄碱素、黄酮
化学式
以C6-C3-C6为基本碳架的系列化合物
外观
多显黄色；多为结晶性固体，少数为无定型粉末
二、定性鉴别
（一）显色反应
1、盐酸-镁粉还原反应
取药材粉末少许与试管中，用乙醇或甲醇数毫升温浸提取，取提取液加镁粉少许振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2min内即出现颜色。
大多黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类显红-紫红色，黄酮类显橙色，异黄酮及查尔酮类无变化。
如芦丁的盐酸镁粉反应中溶液由黄色变红色。
其他还原反应还有：盐酸-锌粉反应，黄酮、黄酮醇类常不显色，只有二氢黄酮醇类可被锌粉还原呈深红色；钠-汞齐反应，黄酮类成分可产生黄、橙、红等色；四氢硼钠（钾）反应，仅二氢黄酮醇类可被四氢硼钠还原呈红色，其他黄酮类不反应。
例大山楂丸的鉴别
主要组成：山楂、六神曲（麸炒）、麦芽（炒）。
鉴别：取本品9g，剪碎，加乙醇40ml，加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，加正丁醇15ml振瑶提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，滤过。
取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸2-3滴，加热4-5分钟后，即显橙红色。
2、与金属盐类试剂的配合反应
黄酮类成分和铝盐、镁盐、铅盐、锆盐等试剂反应，生成有色的络合物，可供某些类
型黄酮的鉴别。
产生络合作用的条件是黄酮类成分必须具备下列条件之一，如5-羟基、3-羟基或邻二羟基。
根据有色络合物的最大吸收波长，可进行定量测定。
常用的试剂有三氯化铝、醋酸铅、醋酸镁与二氯氧化锆等试剂。
例银黄口服液中黄芩提取液的鉴别
主要组成：金银花提取物、黄芩提取物。
鉴别：取本品少量，加水2ml，滴加亲氧化钠一滴，容液显橙黄色，滴加稀醋酸使溶液颜色基本褪去，再滴加5%二氯化痒锆容液1滴，容液显黄色，加稀盐酸颜色不褪。
（二）色谱鉴别
1、纸色谱：适用于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类混合物。
混合物的鉴定常采用双向色谱法。
以黄酮苷类来说，一般第一向展开采用某种醇性溶剂，如正丁醇-醋酸-水（4：1：5，上层）等，主要是根据分配作用原理进行分离。
第二向展开溶剂则用水或其他含水溶液，如2～6%醋酸等，主要是根据吸附作用原理进行分离。
黄酮类化合物苷元中，平面性分子如黄酮、黄酮醇、查耳酮等，用含水溶剂如3%～5%HOAC 展开时，几乎停留在原点不动（Rf＜0.02）；而非平面性分子如二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮等，因亲水性较强，Rf值较大（0.10～0.30）。
医学教育|网收集整理黄酮类化合物分子中羟基苷化后，极性随之增大，在醇性展开剂中Rf值相应降低，同一类型苷元，Rf 值依次为：苷元＞单糖苷＞双糖苷。
但在用水或2～8%醋酸、3%氯化钠水溶液或1%盐酸展开时，则苷元几乎停留在原点不动，Rf值大小顺序为：苷元＜单糖苷＜双糖苷。
2.硅胶薄层色谱：用于分离和鉴定弱极性黄酮类化合物。
分离黄酮苷元常用的展开剂是甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1）。
3.聚酰胺薄层色谱：特别适合于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。
展开剂中多含有醇、酸和高效液相色谱法（HPLC）
4.高效液相色谱法：适用于极性大、沸点高、分子量大、热稳定性差的化合物分析，是黄酮类化合物分离检测中使用非常广泛的一种方法，具有效率高、灵敏度高、分离效率高等优点。
高效液相色谱法采用液体为流动相，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
黄酮类化合物的分离中常用的色谱柱是C18柱，对复杂化合物的分析经常采用梯度洗脱系统，实现高效率的分离，紫外检测器、二极管阵列检测器是黄酮类化合物分析中最常用的检测器，具有灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱的特点。
水。