橘黄G6染色液
北京雷根生物技术有限公司
橘黄G6染色液
简介：
细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。
Papanicolaou Stain 最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。
目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。
最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。
橘黄G6染色液为巴氏染色液的组成成分之一，主要由橘黄G(Orange G)、磷钨酸等组成，常与EA36或EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。
常用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 Orange G stain 一般染色2min 即可。
注意事项：
1、 所有染液均需过滤，需经常更换染液。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 DA0080 DA0080 Storage Orange G stain 100ml 500ml RT 避光 使用说明书
1份。
13.巴氏染色液
巴氏染色液说明书【产品名称】巴氏染色液【产品名称】巴氏染色液PAP Staining Solutions【产品编号】PAP-500ml,PAP-1000ml,PAP-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml 2500ml；橘黄G6染色液500ml、1000ml 2500ml；EA50染色液500ml、1000ml 2500ml。
【预期用途】主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。
【检验原理】巴氏染色液由3部分组成：苏木素染色液、橘红G6染色液和EA50染色液。
苏木素染色液，是一种针对正常以及变态细胞学涂片染料，对核膜、核质、核仁染色效果非常清晰。
涂片标本可是妇科或非妇科的，如痰液，尿液及细胞学穿刺样本。
为获得优质的染色效果，苏木素染液技术完全按照帕氏染色法，以及OG-6染液；EA 31染液；同时供应选择性多色复染染料，如EA50试剂；EA65试剂，满足细胞学染色需求。
橘黄G6染色液，是橘黄G (Orange G) 染料添加磷酸（PMA）后的酒精溶液。
Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。
橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。
之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。
测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。
为获得优质的染色效果，OG-6试剂特性与其他用于Papanicolaou染色法中染色试剂-苏木素试剂，EA 31试剂，及对比染色试剂EA50试剂，EA65试剂相符。
EA50染色液,为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒精溶液。
Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。
橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。
之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。
生物学常用染色液汇总
生物学常用染色液汇总在生物学研究和实验中，常常需要使用染色液来观察和分析细胞和组织的结构和功能。
染色液可用于染色细胞核、细胞膜、细胞器、染色蛋白质等。
下面是一些生物学常用的染色液：1.血液染色液：常用的血液染色液有嗜酸性染色液、嗜碱性染色液和中性染色液。
嗜酸性染色液一般用于染色细胞核和染色体，如淡紫色的伊红染色液；嗜碱性染色液一般用于染色细胞质和细胞器，如紫色的甲基蓝染色液；中性染色液则可以同时染色细胞核和细胞质，如黑褐色的赛红染色液。
2.组织切片染色液：常用的组织切片染色液有赛红染色液、伊红染色液、溴甲蓝染色液等。
赛红染色液可染色细胞核和胞质，适用于观察组织细胞的形态和结构；伊红染色液主要染色细胞核和染色体，适用于观察细胞分裂过程和遗传物质的分布；溴甲蓝染色液可染色细胞膜和细胞器，适用于观察细胞内结构和分子分布。
3.核酸染色液：常用的核酸染色液有伊红染色液、乙酰胆碱酯酶染色液等。
伊红染色液可染色DNA和RNA，适用于观察细胞核的形态和结构；乙酰胆碱酯酶染色液可染色DNA片段或蛋白质-DNA复合物，适用于观察转录因子的结合情况和基因表达。
4.蛋白质染色液：常用的蛋白质染色液有银染色液、共染色液等。
银染色液可用于染色蛋白质条带，适用于蛋白质电泳分析；共染色液则可以同时染色蛋白质和核酸，适用于口腔上皮细胞的核蛋白检测和分析。
5.细胞膜染色液：常用的细胞膜染色液有吖啶橙染色液、荧光素DAPI染色液等。
吖啶橙染色液可染色细胞膜，适用于观察细胞膜的形态和分布；荧光素DAPI染色液可染色细胞核和细胞膜，适用于观察细胞形态和细胞数量。
6.细胞器染色液：常用的细胞器染色液有细胞色素染色液、酶染色液等。
细胞色素染色液可染色细胞色素，适用于观察细胞呼吸作用；酶染色液可染色特定酶的活性，适用于观察细胞器功能和代谢情况。
总的来说，不同的染色液在生物学研究中有不同的应用，可以通过染色观察细胞和组织的形态、结构和功能，帮助揭示生物学现象的机制和过程。
实验室常用染色液和试剂配方
实验室常用染色液和试剂配方染色液和试剂在实验室中被广泛使用，用于各种科学研究和实验。
它们可以用来染色细胞、分析化合物和反应产物、诊断疾病等。
下面是一些常用的染色液和试剂配方。
1. Hematoxylin-Eosin染色液：Hematoxylin-Eosin（HE）染色液是一种经典的组织染色方法，常用于病理学研究和诊断。
配方如下：- Hematoxylin染色液：将5 g hematoxylin溶解在100 mL乙醇中，加入2 mL盐酸和900 mL蒸馏水，最后调节pH值为5-6-酸性酒红染液：将0.5g酸性酒红溶解在100mL乙醇中。
- Eosin染色液：将0.5 g eosin溶解在100 mL乙醇中。
2. Giemsa染色液：Giemsa染色液用于染色细胞，特别是白细胞，常用于血液学和微生物学研究。
配方如下：- Giemsa染色液：将4 g Giemsa粉末溶解在1 L蒸馏水中。
可以加入2 mL甲醇增强染色效果。
3.厌氧培养试剂：用于厌氧条件下培养微生物的试剂。
配方如下：- Thioglycollate培养基：将11.5 g thioglycollate溶解在1 L蒸馏水中，加热至溶解。
- Dithiothreitol（DTT）溶液：将1 g DTT溶解在100 mL蒸馏水中，用10 mL离心管分装，-20℃保存。
4. Bradford试剂：用于蛋白质的浓度测定，常用于生物化学和分子生物学实验。
配方如下：- Coomassie Brilliant Blue G-250：将100 mg染料溶解在50 mL浓硫酸中，加热至溶解。
再用1 L蒸馏水稀释至30%浓度。
5. Gill's胶片显影试剂：用于胶片的显影，常用于分子生物学实验。
配方如下：-显影溶液A：将1.5g氯化钴和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.8-显影溶液B：将3g溴化钾和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.86.RIPA裂解缓冲液：用于细胞或组织的裂解，提取蛋白质或RNA，常用于生物化学和分子生物学实验。
六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
仅供科研版本号：180524 六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)【产品组成】【保存条件】4℃，避光,6个月【产品概述】六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。
经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化，使真菌内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。
氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。
海波可以固定并洗去未还原的银离子。
本法采用橙黄G复染对各种真菌的显示效果都很好，特别是马尔尼菲青霉菌的显示特别好，但必须淡染橙黄G。
如需显示曲霉和白色念珠菌，可选用苏木素或者伊红复染，可看到真菌与周围组织的关系。
【使用方法】1、组织固定于甲醛固定液中，常规脱水包埋。
切片4um，脱蜡至水洗。
2、切片入氧化剂氧化20min。
流水稍洗。
3、入漂白液处理1min，以除去氧化剂。
4、流水冲洗5min，蒸馏水浸洗2次，每次30s-60s。
5、切片放入配制好的预热至60℃的六胺银工作液中，加盖60℃恒温染色大约20～60min，切片呈淡黄色即取出经水洗后显微镜观察有否有菌体出现。
如有淡棕色菌体出现，应每隔5-10min观察一次以控制菌体着色深浅，直至显色理想。
6、入蒸馏水中清洗。
7、用氯化金溶液调色1～2min。
蒸馏水洗1～2min。
8、置于海波溶液2min。
流水冲洗5min。
9、滴加橙黄G一小滴复染1s即用水冲洗。
染色时间不能过长，否则将影响最终效果。
10、流水冲洗20s-60s。
11、常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
南京森贝伽生物科技有限公司网址：/第1页【染色结果】【注意事项】1、实验中所用玻璃器皿，应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净，烤干。
2、六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热，温度要达到60℃时，再放人切片进行染色。
如用水浴锅代替恒温箱，需将温度设定在48-50摄氏度，否则切片会很快变黑而难以掌握。
一般建议在恒温箱中孵育染色。
3、在低倍镜检时，菌体不宜着色太黑，否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮，特别需注意菌体成堆的地方的显色。
宫颈脱落细胞诊断要点及质量控制
TBS( 2014)不满意标本
分为两类: ⑴拒绝接收的标本：
①申请单及标本缺乏明确标记。 ②玻片破碎，不能被修复。 (2)经评价不满意的标本 ①保存好的鳞状上皮细胞在常规涂片不足8000个，在 液基薄片不足5000个。 ②由于血液、炎细胞、细胞过度重叠、固定差、过度干 燥、污染等因素影响75%以上的鳞状上皮细胞观察
涂片中有明显的短小球杆菌而无乳酸杆菌,
出现线索细胞：球杆菌均匀地覆盖在鳞状上皮 细胞胞浆上和边缘，细胞膜变得模糊。
NILM(形态符合放线菌的细菌)
多见于用宫内避孕器(IUD)的妇女, 镜下菌团呈棉絮状伴有周围肿胀的菌丝,常有许多白细 胞贴附在菌落, 涂片背景中常有以中性粒细胞为主的急性炎性改变。
• 非典型腺细胞（颈管/不能明确来源）-倾向肿瘤(AGC-N) • 宫颈管原位腺癌(AIS) • 腺癌（颈管、宫内膜、子宫以外）
不满意涂片
TBS(2014)细胞学判读
总体分为三类： ● 未见上皮内病变细胞或恶性细胞（Negative for
Intraepithelial Lesion or Malignancy，NILM） ● 其它（宫内膜细胞出现在45岁以后妇女涂片中） ●上皮细胞异常
TBS (2014)细胞学判读
NILM(菌群失调，提示细菌性阴道病)
挖空细胞（清晰勾画的、明亮的核周带和致密、深染的 胞浆缘）。
LSIL
LSIL随访结果
hr-HPV阳性率: 75%-85%(82.3%)。 活检组织病理结果为HSIL(CIN2+)的发生率: 14%-20%(15.6%)。
LSIL随访结果
高度鳞状上皮内病变(HSIL)
主要由hr-HPV持续感染引起, 形态学改变常发生在较小、较不成熟的鳞状上皮细胞, 细胞核浆比例明显升高, 有高的危险进展到浸润癌。
病理学特殊染色技术肥大细胞（醛品红橘黄G法硫堇法）
病理学特殊染色技术肥大细胞（醛品红橘黄G法硫堇法）
肥大细胞(Mast cell)
某些过敏性疾病诊断和显示与鉴别某些肿瘤；
诊断和研究肥大细胞增生性疾病
Halmi改良醛品红橘黄G法
①醛品红液：
②橘黄G液：橘黄G 2克，溶于蒸馏水100毫升，加磷钨酸5克，过滤使用
方法：
⑴组织用甲醛生理盐水固定
⑵切片脱蜡至水
⑶70%酒精洗涤
⑷醛品红液10~20分钟
⑸70%酒精洗去多余染料，蒸馏水稍洗
⑹橘黄G液染数秒，蒸馏水洗
⑺95%酒精分色，无水酒精快速脱水
⑻二甲苯透明，中性树胶封片
结果：
肥大细胞深紫色
红细胞橘黄色
其他组织黄色
硫堇染色
试剂：
①硫堇液：硫堇0.5克溶于蒸馏水100毫升，稍加温溶解
②醋酸液：冰醋酸0.2%毫升，蒸馏水100毫升
方法：
⑴组织用中性甲醛生理盐水溶液固定
⑵切片脱蜡至水
⑶硫堇液染色30~60分钟，蒸馏水洗
⑷醋酸水溶液分色数秒，水洗2分钟
⑸用滤纸吸干
⑹二甲苯透明，中性树胶封片
结果：
肥大细胞颗粒呈紫红色，细胞核呈蓝色。
脱落细胞学基本检验技术
脱落细胞学基本检验技术
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
第二十六章
脱落细胞学基本知识和检验技术
吉林医药学院 郭素红
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
概述
➢脱落细胞学 (exfoliative cytology) 检验是采集人体各 部位管腔器官表面的脱落细胞，经染色后在显微镜下观察细 胞的形态，并作出细胞学诊断的一门临床检验学科，又名诊 断细胞学 (diagnostic cytology) 或临床细胞学 (clinical cytology)，属于临床病理学的一个分支。
如脂肪肉瘤、骨肉瘤
增生
恶性淋巴瘤
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白血病
良性畸胎瘤
恶性畸胎瘤
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
受累范围 细胞膜 细胞体积 核染色质 细胞器 溶酶体 后期 炎症反应
凋亡
坏死
多为单个细胞 仍保持完整性 减小、固缩 聚集在核膜下、呈半月状 仍保持完整，未崩解 保持完整，酶不外溢 凋亡小体、被吞噬 不引起周围的炎症反应
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
分布: 体表及与外界直接相通的腔道，如皮肤、口腔、 咽、食管、子宫颈外口等部位。
临床基础检验学技术 第二十六章 脱落细胞学基本知识和检验技术
巴氏染色液(Papanicolaou EA65)操作步骤及注意事项
巴氏染色液(Papanicolaou EA65)操作步骤及注意事项货号：G1614规格：4×100ml/4×500ml有效期：6个月有效。
产品内容：产品组成4×100ml4×500ml Storage试剂(A):苏木素染色液100ml500ml RT避光试剂(B):蓝化液100ml500ml RT试剂(C):橘黄G6染色液100ml500ml RT避光试剂(D):EA65染色液100ml500ml RT避光产品说明：细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。
Papanicolaou Stain最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。
橘黄G6与EA36或EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。
目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。
最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。
目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。
染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。
细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。
巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞胞浆呈粉红或橘红色。
巴氏染色液(Papanicolaou EA50)细胞质染色采用EA50染色液，细胞核染色采用无毒改良型苏木素染色液，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。
自备材料：1、固定液(如95%乙醇-冰乙酸固定液)2、系列乙醇3、显微镜4、盐酸乙醇分化液操作步骤(仅供参考)：1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10～15min。
2、95%的乙醇浸泡1min。
3、80%的乙醇浸泡1min。
4、70%的乙醇浸泡1min。
5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。
6、苏木素染液染色5～10min。
肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G法)
肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G 法)简介：肥大细胞(Mast cell)是疏松结缔组织内常见的细胞，常成群的沿着小血管和淋巴管分布，也常见于支气管和胰腺的小叶间导管周围，一般细胞较大，直径约为20-30μm ，呈圆形或椭圆形，胞核较小、胞质内充满粗大且具有异染性嗜酸性颗粒。
醛品红-橙黄G 染色机理在于醛品红对含有硫酸基团的酸性黏多糖物质有很强的亲和力，肥大细胞颗粒中含有羧基和硫酸根的肝素，所以易与醛品红结合呈复合物而着色；橙黄G 属于酸性染料，可把其他组织成分染成黄色。
Leagene 肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G 法)能够显示异染性颗粒，染色后肥大细胞颗粒被染成深紫色，其他细胞多不着色，背景呈橙黄色，对比较为鲜明。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜组织立即固定于10%中性福尔马林固定液中，常规脱水包埋。
2、 切片厚度4-5μm ，常规脱蜡至水。
3、 入Weigert 碘液，室温孵育。
4、 稍微水洗。
5、 Weigert 分化液分化。
6、 流水冲洗。
7、 70%乙醇稍洗。
8、 入醛品红染色液，加盖浸染。
9、 用70%乙醇洗去多余染色液。
10、稍微水洗。
11、用橙黄G 染色液滴染。
12、稍微水洗。
13、常规脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。
编号 名称DA0048 4×50ml Storage试剂(A): Weigert 碘液 50ml RT 避光 试剂(B): Weigert 分化液 100ml RT 试剂(C): 醛品红染色液 50ml RT 避光 试剂(D): 橙黄G 染色液 50mlRT 避光 使用说明书1份染色结果：肥大细胞颗粒紫色或深紫色弹力纤维紫色红细胞橙黄色其余组织淡黄色注意事项：1、肥大细胞染色时，应注意组织要新鲜，取出后立即固定。
2、如无10%中性福尔马林固定液，可用4%的甲醛生理盐水代替。
3、橙黄G染色应注意控制染色程度，避免过染，否则会掩盖紫色颗粒。
4、分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。
巴氏染液配制
巴氏染液配制1、苏木精：Harris苏木精：苏木精5g溶于无水乙醇50ml ，硫酸铝钾100g溶于蒸馏水1000ml ，混合后煮沸，待稍冷加入氧化汞2.5g，再煮沸2min，用前加冰醋酸20ml改良Gill氏半氧化苏木精：苏木精2g, 无水乙醇250ml, 硫酸铝17.6g,（可减半量）碘酸钠0.2g, 柠檬酸2g，甘油50ml, 蒸馏水750ml。
配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，完全溶解后两液混合，依次加入碘酸钠，柠檬酸，甘油。
此配方特点：配制时勿须加温。
配后即可应用。
性能稳定，基本消除了过度氧化的苏木精结晶污染涂片的麻烦。
唯染色时间较长，须5～10min。
2、桔黄G6(orangeG6)：桔黄G 0.5g，溶于95%酒精100ml, 加磷钨15mg。
3、EA染液：EA36：由三种贮备液按比例混合而成：0.5%亮绿(light green)酒精溶液45ml，0.5%裨士麦褐(bismark brown)酒精溶液10ml，0.5%伊红Y(eosin yellowish)酒精溶液45ml，混合后，再加磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。
EA50：3%亮绿水溶液10ml，纯甲醇250ml，20%伊红Y 水溶液20ml，冰醋酸20ml，磷钨酸2g (水溶后加入)，95%酒精700ml 。
染色方法1、经固定的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返兰同HE染色。
2、70%、80%、95%酒精逐级脱水各1min。
3桔黄G6 3～ 5 min 。
4、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
5、EA36或EA50 5 min 。
6、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
7、无水酒精二缸漂洗各 1 min 。
8、二甲苯二缸透明各 1 min 。
9、中性树胶封片。
染色结果核深蓝色, 鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞浆染绿色，表层不全角化细胞胞浆染粉红色, 完全角化细胞胞浆呈桔黄色, 红细胞染鲜红色，粘液染淡蓝色或粉红色。