常用染色液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制一、Harris氏苏木精染色液的配制1．试剂准备：苏木精10 g，硫酸铝钾80 g，无水乙醇200 ml，蒸馏水2000 rnl，氧化汞3 g，冰乙酸40ml。
2．配制步骤(1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内，加入80 g硫酸铝钾后置电炉或电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。
(2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内，加入10 g苏木精摇动使之完全溶解。
(3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体中，继续加热至液体沸腾关闭电源。
此时液体应呈透明的玫瑰红色。
(4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中，边加氧化汞边搅拌。
此时苏木精被氧化，液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。
(5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。
(6)用湿毛巾保护，将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。
(7)密封瓶口室温避光直射储存备用，临用前每100 ml苏木精液加入2～3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制l. 试剂准备；伊红Y 20 g，蒸馏水1500 ml，95％乙醇500 ml，冰乙酸lml。
2．配制步骤(1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中，用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀，液体呈深红色。
(2)加入500 ml 95％乙醇并搅匀，此时液体由深红色转变为荧光绿色。
(3)加入lml冰乙酸并搅匀，密封瓶口室温储存备用。
三、HE染色分化液的配制0.5％盐酸乙醇液：蒸馏水300 ml与95％乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。
四、HE染色返蓝液的配制0.5％氢氧化氨液：在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀。
常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
实验室常用染色液和试剂配方
实验室常用染色液和试剂配方染色液和试剂在实验室中被广泛使用，用于各种科学研究和实验。
它们可以用来染色细胞、分析化合物和反应产物、诊断疾病等。
下面是一些常用的染色液和试剂配方。
1. Hematoxylin-Eosin染色液：Hematoxylin-Eosin（HE）染色液是一种经典的组织染色方法，常用于病理学研究和诊断。
配方如下：- Hematoxylin染色液：将5 g hematoxylin溶解在100 mL乙醇中，加入2 mL盐酸和900 mL蒸馏水，最后调节pH值为5-6-酸性酒红染液：将0.5g酸性酒红溶解在100mL乙醇中。
- Eosin染色液：将0.5 g eosin溶解在100 mL乙醇中。
2. Giemsa染色液：Giemsa染色液用于染色细胞，特别是白细胞，常用于血液学和微生物学研究。
配方如下：- Giemsa染色液：将4 g Giemsa粉末溶解在1 L蒸馏水中。
可以加入2 mL甲醇增强染色效果。
3.厌氧培养试剂：用于厌氧条件下培养微生物的试剂。
配方如下：- Thioglycollate培养基：将11.5 g thioglycollate溶解在1 L蒸馏水中，加热至溶解。
- Dithiothreitol（DTT）溶液：将1 g DTT溶解在100 mL蒸馏水中，用10 mL离心管分装，-20℃保存。
4. Bradford试剂：用于蛋白质的浓度测定，常用于生物化学和分子生物学实验。
配方如下：- Coomassie Brilliant Blue G-250：将100 mg染料溶解在50 mL浓硫酸中，加热至溶解。
再用1 L蒸馏水稀释至30%浓度。
5. Gill's胶片显影试剂：用于胶片的显影，常用于分子生物学实验。
配方如下：-显影溶液A：将1.5g氯化钴和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.8-显影溶液B：将3g溴化钾和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.86.RIPA裂解缓冲液：用于细胞或组织的裂解，提取蛋白质或RNA，常用于生物化学和分子生物学实验。
常用染色液的配制
常用染色液的配制１．染料饱和酒精溶液的配制配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。
配制饱和酒精溶液，应先用少量95％酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95％酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。
附表1 几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26℃)染料名称美蓝结晶紫龙胆紫碱性复红沙黄溶100mL95％酒精中的重量(g) 1.4813.8710.003.203.412．常用染色液的配制（１）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01％氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。
此染色液在密闭条件下可保存多年。
若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。
（２）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1％草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。
（３）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。
再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。
此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。
（４）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。
将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。
此液保存期以不超过4个月为宜。
（５）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5％石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。
（６）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。
（７）3％盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。
（８）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。
将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。
将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。
此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。
常用染色液配制
常用染色液配制The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 20201．草酸铵结晶紫染色液A液：结晶紫，95%乙醇25mL。
B液：草酸铵，蒸馏水1000mL。
制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合静止48h后，过滤后使用。
2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液碘，，蒸馏水300mL。
先用3~5mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。
3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL4．沙黄（番红）染色液％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红），95%乙醇100mL。
此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。
5．％美兰染色液溶解于100mL蒸馏水中。
6．吕氏碱性美蓝色染色液A液：美蓝，95%乙醇30mL。
B液：，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。
7．瑞氏染色液瑞氏染料粉未,甘油3mL，甲醇97mL。
将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。
8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用）孔雀绿,蒸馏水100mL。
先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。
9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）。
将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。
10．硝酸银鞭毛染色液A液：单宁酸，，福尔马林(15%)，1%，蒸馏水100mL。
B液：,蒸馏水100mL。
将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。
再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。
常用染色液和试剂的配制
一、埃利希(EhrIiCh)氏苏木精染液先将苏木精2g溶于IOOm1乙醇中，再加冰醋酸IOm1,混合后加蒸储水IOOm1和IOOm1甘油，然后加硫酸铝钾(约Iog)至饱和，搅拌均匀，倒入瓶中。
将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上，放在暗处通风的地方，并经常摇动促进“成熟”，直到液体颜色变为深红色为止。
成熟时间约2-4周。
若加0.4g碘酸钠可加快成熟。
二、吉姆萨(GiemSa)氏母液将吉姆萨粉末Ig先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66m1)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。
然后再加入甲醇(66m1),搅匀后保存于棕色瓶中。
母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用PH6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。
三、瑞(Wright)氏染液称取瑞氏染料粉末OJg于研钵内研细后，加入少量甲醇再反复研磨，最后将全部甲醇(总共60m1)加入研匀，染料全部溶解后，将染液保存于棕色瓶内备用。
四、醋酸洋红染液将洋红粉末Ig倒入IOOm145%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤，即可使用。
也可再加入1%~2%铁明矶水溶液5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。
如制作永久标本染色时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴，至染色液呈浅蓝色为止。
五、硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇Ig或2g溶于Ioom150%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠∙3H2O9.7g,巴比妥钠14.7g,溶于50Om1蒸储水中；③0.1mo1/1盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2,即得硫堇工作液。
六、0.02%盾纳斯绿B(JanusGreenB)用0.9%生理盐水溶液配制。
七、甲基绿一派洛宁染液(Unna试剂)派洛宁0.25g,甲基绿0.15g,95%乙醇20m1,甘油20m1。
常用染色液的配制
一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。
山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。
⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
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附录二：常用固定液和染色液的配制
1. 番红水液
番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。
2. 番红酒液
番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml。
3. 固绿染液
固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。
4. 碘-碘化钾染液
碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。
5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液
将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
6.改良苯酚品红染液
原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。
原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。
原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。
染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g 山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。
7. 间苯三酚染液
将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。
8. 中性红染液
将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。
9. 钌红染液
将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。
10.龙胆紫染液
将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。
现常用结晶紫代替。
必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。
11.铁醋酸洋红染液
先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（切记不可一次倒入）。
待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min 后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。
静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。
12.苏木精染液
苏木精的配方很多，常用的有如下3种：
配方Ⅰ：苏木精水溶液
0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
配方Ⅱ：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）
甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml
乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml
丙液：甘油25ml + 甲醇25ml
分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加
入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
配方Ⅲ：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin）
苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。
配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。
混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。
13.席夫试剂（Schiff’s regent）
将0.5g碱性品红溶入煮沸的蒸馏水，搅拌使其充分溶解。
冷却至50℃时，过滤于棕色细口瓶中，加入10ml1mol/L盐酸。
冷却至25℃左右，加入1g偏亚硫酸钾或钠（Na2S2O5或K2S2O5），振荡使其溶解，密封瓶口，置于黑暗低温处过夜。
次日检查，若染色液透明无色或呈淡茶色，即可使用。
若染色较深，可加入少量优质活性炭（0.5~2g），振荡1min，置于4℃冰箱中过夜，过滤使用。
此液配好后，应塞紧瓶塞，外包黑纸，贮藏于冰箱中。
14.硫堇染液
将0.25g硫堇粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。
使用此液时。
需用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能产生多色反应。
15.亚甲基蓝染液
0.1g亚甲基蓝溶入100ml蒸馏水即可。
16.詹纳斯绿B（Janus green B）染液
5.18g詹纳斯绿溶入100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。
用时需稀释，稀释倍数应视材料而异。
17.苏木精-曙红(HE)染液
曙红（Eosin），酸性染料，为最优良的动物细胞染料，与苏木精配合使用（复染）对动物组织进行对比染色。
苏木精的染液的配方同上。
曙红有以下配制方法：
配方Ⅰ：曙红0.5g + 95%酒精100ml
配方Ⅱ：曙红0.5g + 蒸馏水100ml
配方Ⅲ：曙红0.5g + 95%酒精25ml +蒸馏水75ml
【上页】常用固定液的配制。