毛鸡骨草中总黄酮含量测定方法_袁旭江

［摘要］ 目的： 建立毛鸡骨草总黄酮含量的专属性测定方法。方法： 采用紫外-可见分光光度法研究三乙胺显色剂及其 不同含水乙醇溶液对黄酮类成分光谱吸收变化影响。结果： 不同黄酮类显色后光谱吸收峰变化存在明显差异； 三乙胺法适应 于芹菜素黄酮类含量测定，且不同体积分数乙醇对其吸收光谱具有显著影响，当加入 50% 乙醇显色后光谱吸收值稳定在 400 nm，经方法学考察，芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖苷对照品在 0. 507 ～ 101. 4 mg·L －1 与吸光度具有良好的线性关系 （ r = 0. 999 5） ，平均加样回收率为 98. 01% ，ＲSD 2. 1% 。结论： 毛鸡骨草总黄酮含量的测定可采用三乙胺-50% 乙醇显色法，该方法 对于芹菜素母核黄酮类具有良好的专属性和准确性，操作简单易行。
成含 0. 5 g·L － 1 的 2 种不同溶剂对照品溶液。 2. 1. 2 TEA 法 取 TEA 5 mL 置于 500 mL 的量瓶 中，加乙醇至刻度，摇匀，配成 1% TEA 乙醇溶 液。 分别取对照品溶液 1 mL 于 10 mL 量瓶中，加 1% TEA 乙醇溶液 5 mL，摇匀，分别用 95% 乙醇 50% 乙 醇定容至刻度，摇匀，测定。 2. 1. 3 NaNO2 -Al（ NO3 ） 3 -NaOH 法 取对照品溶液 1 mL 于 10 mL 量瓶中，加乙醇 4 mL，加 5% NaNO2 溶液 0. 3 mL，摇匀，反应 6 min，加 10% Al（ NO3 ） 3 溶 液 0. 3 mL，摇匀，反应 6 min，加 1 mol·L －1 NaOH 溶液 4. 0 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，10 min后测定。 2. 1. 4 AlCl3 法 取对照品溶液 1 mL 于 10 mL 量 瓶中，加 0. 1 mol·L － 1 AlCl3 溶液 2 mL，用 95% 乙醇 定容，摇匀，测定。 2. 1. 5 显色结果 分别取对照品溶液适量，以相应 溶剂作空白，于 190 ～ 700 nm 进行光谱扫描分析，得 显色前的吸收光谱图，再分别取 2. 1. 2 ～ 2. 1. 4 项下 制得的显色溶液，光谱扫描得到显色后的吸收光谱 图，分析光谱图吸收峰，结果见表 1。
1% TEA 乙醇溶液 5 mL，分别加入不同体积分数乙 醇 （ 95% ，90% ，85% ，80% ，75% ，70% ） 定 容 至 刻 度，摇匀，以相应溶剂为空白参比，于 190 ～ 700 nm 进行光谱扫描，最后在 70% 乙醇的测定溶液中滴加 水降低乙醇量至 60% ，光谱扫描。再取芹菜素-6-C葡萄糖-8-C-葡萄糖苷对照品溶液 1 mL 于 10 mL 量 瓶中，加 1% TEA 乙醇溶液 5 mL，分别加入不同体 积分数乙醇（ 95% ，90% ，80% ） 定容至刻度，摇匀， 以相应溶剂为空白参比，于 190 ～ 700 nm 进行光谱 扫描，最后在 80% 乙醇的测定溶液中分别逐步滴加 水降低乙醇量至 70% 和 30% ，光谱扫描。见图 1。
由表 1 分析可见，芦丁和芹菜素-6-C-葡萄糖-8C-葡萄糖苷 在 显 色 前 不 同 乙 醇 溶 剂 中 光 谱 未 见 变 化，芹菜素的光谱吸收峰波长却存在变化； TEA 法 中采用 95% 乙醇时三者的吸收光谱明显出现不同 的吸收位移值，但在 用 50% 乙 醇 作 为 溶 剂 时 芦 丁 UV 吸收波长红移至 415 nm，而芹菜素及其苷类均 红移 至 400 nm； 在 NaNO2 -Al （ NO3 ） 3 -NaOH 法 和 AlCl3 法中 3 个黄酮成分均出现变化不同的 UV 吸 收波长。结果表明，采用芦丁法难以用于评价含芹 菜素类黄酮成分的药材质量，而芹菜素类黄酮成分 在不同溶剂中 TEA 显色现象不同，主要受含水量的 影响。 2. 2 不同体积分数乙醇水对 TEA 法显色光谱影 响 取芹菜素对照品溶液 1 mL 于 10 mL 量瓶中，加
第 21 卷第 11 期 2015 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 21，No． 11 Jun，2015
毛鸡骨草中总黄酮含量测定方法
袁旭江，张平，吴燕红，霍务贞
（ 广东药学院 中药研究开发所，广州 510006）
中药材中总黄酮含量测定的方法主要有 NaNO2 -Al （ NO3 ） 3 -NaOH 法［8］，Al （ NO3 ） 3 或 AlCl3 法［9］， NaOH 或三乙胺法 （ TEA） ［10］等。文 献 报 道 的 毛 鸡 骨 草 总 黄 酮 测 定 方 法 为 芦 丁-NaNO2 -Al （ NO3 ） 3 NaOH 法［8，11］，该法对于毛鸡骨草总黄酮测定的吸 收峰不一致。针对上述现象，本文通过比较分析芦 丁、芹菜 素、芹 菜 素-6 -C-葡 萄 糖-8 -C-葡 萄 糖 苷 在 不 同溶剂及其显色前后的紫外吸收光谱的差异，建立 适合于毛鸡骨草总黄酮含量测定的专属方法，为毛
芦丁 360，275 360，275 400，280 415，280 500，360，280 415，300，280
最大吸收波长 / nm 芹菜素
326，292 340，275 360，300，280 400，320，280 395，310，280 390，340，300，280
芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖苷 340，275 340，275 380，275 400，340，280 360，295 385，340，300，280
Vol． 21，No． 11 Jun，2015
鸡骨草总黄酮成分含量测定和质量评价提供参考。 1 材料 1. 1 仪器 UV-1700 型紫外-可见分光光度仪（ 日 本岛 津） ，BS124S，BP211 型 电 子 分 析 天 平 （ 德 国 Sartorius） 。 1. 2 试剂与药品 芦丁对照品（ 中国食品药品检 定研究院，批号 100080-200306） ，芹菜素对照品（ 阿 拉丁试剂公司，批号 22806） ，芹菜素-6-C-葡萄糖-8C-葡萄 糖 苷 对 照 品 （ 自 制，经 HPLC 检 测 纯 度 ＞ 99% ） ； 毛鸡骨草采自广西和广东，经广东药学院中 药鉴定教研室李书渊教授鉴定为豆科植物毛相思子 Abrus mollis 的干燥全草； 氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸 钠、三乙胺（ TEA） 、乙醇等试剂均为分析纯，水为超 纯水。 2 方法与结果 2. 1 3 个黄酮成分显色现象差异 2. 1. 1 对照品溶液配制 分别取芦丁、芹菜素、芹 菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖苷对照品各 2 份，精密 称定，一份加 95% 乙醇，另一份加 50% 乙醇，分别制
［Key words］ Abrus mollis； 6-C-glycopyranosyl-8-C-glycopyranosyl apigenin； total flavonoids； UV-VIS
毛鸡骨草为华南地区常用草药，常作鸡骨草的 替代品使用，主产广东和广西［1-2］，用于治疗和预防 急慢性 肝 炎 等［3］。毛 鸡 骨 草 富 含 生 物 碱［4］、皂 苷 类［5］和酰胺酸类成分［6］，还含有丰富的芹菜素为母 核的黄酮类成分，如芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖 苷、芹菜 素-6 -C-阿 拉 伯 糖-8 -C-葡 萄 糖 苷、芹 菜 素-6 C-葡萄糖-8-C-阿拉伯糖苷、芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C木糖苷等［7］。 黄 酮 类 成 分 紫 外 吸 收 光 谱 和 显 色 现 象受所含羟基数目和位置不同而不同。目前应用于
Determination of Total Flavonoids in Abrus mollis YUAN Xu-jiang， ZHANG Ping， WU Yan-hong， HUO Wu-zhen （ Ｒesearch ＆ Development Institute of Chinese Materia Medica， Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China）
［收稿日期］ 20140802（ 009） ［第一作者］ 袁旭江，副研究员，博士，从事中药质量分析与新药研究，Tel： 020-39352540，E-mail： xjyuan． xj@ 163. com
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第 21 卷第 11 期 2015 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
［Abstract］ Objective： To establish an exclusive method to determine the content of total flavonoids in Abrus mollis． Method： UV-VIS spectrophotometry was used to study the absorption spectrum changes of flavonoids in triethylamine （ TEA ） chromogenic agent with different concentrations of ethanol aqueous solution medium． Ｒesult： There was obvious difference between different flavonoids before and after coloration． The TEA method could be used to determine the content of apigenin flavonoids and and their absorption spectra were remarkably influenced by different concentrations of ethanol aqueous solution with the stable absorption wavelength of 400 nm after coloration in 50% ethanol aqueous solution． After the methodological study，6-C-glycopyranosyl-8-Cglycopyranosyl apigenin had a good linearity in the ringe of 0. 507-101. 4 mg·L － 1 （ r = 0. 999 5 ） ，the average recovery was 98. 01% with ＲSD of 2. 1% ． Conclusion： The content of total apigenin flavonoids in A． mollis can be determined by the TEA method in 50% EtOH aqueous solution with good specificity，accuracy and simple operation．