HPLC法测定复方氨酚那敏颗粒中人工牛黄的胆红素的含量
高效液相色谱法测定小儿化毒胶囊人工牛黄中胆红素含量
·研究· Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
２０１８年 ３月 ２０日 第 ２７卷第 ６期 Ｖｏｌ．２７牞Ｎｏ．６牞Ｍａｒｃｈ２０牞２０１８
１０μＬ。在此色谱条件下，胆红素可达到基线分离，色谱 图见图 １。
ＡＵ ０．０５
０．０４
０．０３
１
０．０２
０．０１
０．００ ０２４６
Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｂｉｌｉｒｕｂｉｎｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄｌｉｎｅｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０．０１９２３－０．２８８４５μｇ，ｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓ Ｙ＝
１ ８０８．０４７Ｘ－４ ７３４．６２４（ｒ＝０．９９９ ９），ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｗａｓ９８．２８％ ａｎｄ ｔｈｅ ＲＳＤ ｗａｓ２．９０％ （ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
·研究· Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
应值，结果显示，胆红素峰面积响应值逐渐降低，收集峰 面积响应值的 ＲＳＤ在 ４ｈ内为 ２．０％，８ｈ内为 ３．９％， １２ｈ内为 ５．３％，测定值在 ４ｈ时降低 ３．８％，８ｈ时降 低 ８．６％，１２ｈ时降低 １２．３％。故溶液制备好后应在 ４ｈ 内完成测定。 ３．２ 提取溶剂
１２６．５０ １２１．１６ ２４７．０４ ９９．４９
１２６．０１ １２１．１６ ２３９．４５ ９３．６３
ＲＳＤ （％）
２．９０
２．４ 样品含量测定
对 ８批样品牗批号分别为 １００１１，１００２１，１００３１，１００４１，
１００５１，１００６１，２００７１，２００８１牘按已确定的试验方法及色谱
复方氨酚烷胺片中胆红素的HPLC测定方法研究
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ Ｃ ｏｎ ｅｎ ｏ ｉｉ ｕｂｉ ｉ ｏ ｐ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｔ ｔ ｆｂ ｌｒ ｎ ｎ Ｃ ｍ ｏｕｎｄ Ｐａ ａｃ ｔ ｏｌａ ｒ ｅ ａｍ ｎｄ Ａｍ ａｎｔ ｄｉ ａ ｎｅＨｙｄｒ ｃｈ ｏ ｉ ｂｌ ｔ ｏ ｌ ｒ ｄｅＴａ ｅ ｓ
Ｏ ． ｎＩ ｓ ｎ Ｉ ｗａ ｓ ｄｔ ｅｅ ｔ ｍａ ｔｎ ａ ｄｍｅｈ ｄ Ｔ ｅｃ ｌ ｒｔ ｎＣ Ｉ ｅｏ ｂ ｌ ｕ ｉ ｓ ｉ ｅ ｒ ｗｉ ． ｍ１ｍｉ －Ｒｅ ｕ ｓ ｅ ｘ ｅ １ ａ ｄ ｒ ｔ ｏ ． ｈ ａｉ ａｉ Ｈ Ｖ ｆ ｉ ｒ ｂ ｎ ｗａ ｎ ａ ｔ ０ ． ｔ ｕ ｈ ｓ ｂ ｏ ｉ ｌ ｈ
ｂｌｕ ｉ． ｈ ｉｒ ｂｎ Ｔ ｅ ＨＰＬ ｓｃ ｎ ｕ ｔｄｏ ａ ｎ ｉ Ｍ ４６ ｍ ×２ ０ｍｍ， ｍ ） ｔ ｅｒｈ ｄｏｕ ａ ． ｉ Ｃ ｗａ ｏ ｄ ｃｅ ｎａＤｉｍｏ ｓｌ Ｃ１ Ｔ ８（ ．ｒ ａ ５ ５ ｗｉ ｔｔａ ｙ ｒ ｆｒｎ ｈ
ａ ｅｏ ｉ ｉ ．．％ ａ ｃｔｎｔ ｌ ０１ ｍｍｏ ｉｍ ｃ ｔｔ ｐ ． ｒｅ ｎｕ ａ ｅａｅ（ Ｈ４７）（ ２２ ： ３ ４ ：２ ６）ａ ｂｌ ｈ ｓ， ｅｅ ｔｄ ａ ５ ｎ ｆ ｗ ａｅ１ ｓｍｏ ｉ ｐ ａｅ ｄ ｔｃｅ ｔ ２ ｍ；ｏ ｒｔ ． ｅ ４ ｌ
国际 医药卫 生导 报 ２ ０ ０ ９年 第 ｌ ５卷 第 ６期
复方氨酚烷胺胶囊(片)胆红素的含量考察
参考文献[1] 国家药典委员会. 中国药典（2015年版一部）[S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 191-193.[2] 方东伟, 彭佳庆. HPLC法同时测定附子理中丸（浓缩丸）中甘草苷和甘草酸的含量[J]. 中国药房, 2017, 28(36): 5147-5149. [3] 甘嘉荷, 王淳, 宋志前, 等. 附子理中丸质量标准研究进展[J]. 中国中医基础医学杂志, 2017, 23(8): 1183-1186.[4] 薛盛剑, 郑敏霞. 超滤-纳滤联用用于干姜中指标性成分6-姜辣素的浓缩[J]. 中国药师, 2019, 22(9): 1613-1617.[5] 杨晓颖. 附子理中丸临床用药情况调查分析[J]. 临床合理用药杂志, 2018, 11(30): 98-100.[6] 周兴卓, 于俊杰, 于晓阳, 等. 附子理中丸联合用药研究进展[J].科技视界, 2019, (19): 233-236.[7] 高亮亮, 张妍林, 张鹏, 等. 干姜标准汤剂的质量评价[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019, 25(5): 161-166[8] 李洁, 任爱农, 赵妍. 高效液相色谱法同时测定干姜甘草配伍后6-姜辣素、甘草酸和甘草苷的含量变化[J]. 中南药学, 2016, 14(9): 994-997.[9] 薛盛剑, 郑敏霞. 超滤-纳滤联用用于干姜中指标性成分6-姜辣素的浓缩[J]. 中国药师, 2019, 22(9): 1613-1617.[10] 于江泳, 陈求芳, 卢国勇. 运用HPLC结合PCA技术对不同炮制程度的姜炭中5个姜辣素成分的含量比较研究[J]. 中国中药杂志, 2015, 40(21): 4200-4204.[11] 刘琳琪, 刘玉环, 赵晨曦, 等. 不同产地生姜主要活性成分的比较分析[J]. 天然产物研究与开发, 2015, 27(6): 1016-1021.复方氨酚烷胺胶囊（片）胆红素的含量考察张裕民，杨国宁，毕天琛，闫培培，王 静（菏泽市食品药品检验检测研究院，山东菏泽 274000）摘要：目的采用高效液相色谱法（HPLC）考察复方氨酚烷胺胶囊（片）中胆红素的含量。
小儿氨酚黄那敏颗粒中人工牛黄和体外培育牛黄的研究_张轶华
小儿氨酚黄那敏颗粒中人工牛黄和体外培育牛黄的研究张轶华，姜建国，孙婷，郭永辉（河北省药品检验研究院，河北石家庄050011）收稿日期：2014-03-07作者简介：张轶华（1979—），女，硕士，从事药品质量标准和药物分析研究。
E-mail ：zhangyihua0915@163．com 摘要：目的建立小儿氨酚黄那敏颗粒（对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、人工牛黄）中人工牛黄和体外培育牛黄的TLC 鉴别方法和胆红素的HPLC 定量测定方法。
方法胆酸和猪去氧胆酸的鉴别采用TLC 法；胆红素的HPLC 测定以甲醇-三氯甲烷-0.1%磷酸（88ʒ6ʒ6）为流动相，检测波长为449nm 。
结果TLC 法可同时鉴别胆酸和猪去氧胆酸；胆红素的HPLC 测定方法，线性范围较宽（0.01 0.1mg /mL ），平均回收率在98.6%以上。
结论建立的方法可快速区分人工牛黄和体外培育牛黄。
关键词：小儿氨酚黄那敏颗粒；人工牛黄；体外培育牛黄；胆酸；猪去氧胆酸；胆红素中图分类号：Ｒ927.2文献标志码：A文章编号：1001-1528（2015）02-0329-03doi ：10.3969/j．issn．1001-1528.2015.02.021Identification of artificial and in vitro cultivated Bovis Calculus in chlorphena-mine maleate granulesZHANG Yi-hua ，JIANG Jian-guo ，SUN Ting ，GUO Yong-hui（Hebei Provincial Institute for Drug Control ，Shijiazhuang 050011，China ）KEY WOＲDS ：Chlorphenamine Maleate Granules ；artificial Bovis Calculus ；in vitro cultivated Bovis Calculus ；cholic acid ；hyodeoxycholic acid ；bilirubin小儿氨酚黄那敏颗粒为感冒用药类非处方药药品，适用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的发烧、头痛、四肢酸痛、打喷嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等症状。
高效液相色谱法测定测定氯酚黄敏片中人工牛黄的胆红素的含量
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海 峡药 学
２０ 年 Ｏ６
第１ ８卷 第 ５期
高 效液 相色谱 法测 定 测定 氯 酚 黄敏 片 中人 工 牛 黄的 胆红 素 的含 量
李华 英 （ 明市药 品检验 所 三 明 ３ ５ Ｏ ） － ６ Ｏ Ｏ
摘要 ： 目的 建立 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法测定氯 酚黄敏 片 中人 工牛黄 的胆红 素的含量 。方 法 色谱柱 Ｃ８ （．ｍ １ ４６ ｍ￣２０ 柱 ６ｍｍ）流动相 甲醇 ： ， 氯仿 ：
氯 酚黄 敏 片 中人 工 牛 黄 的胆 红 素 的含 量 控 制 。
本 法简便快速 ， 定量准确 ， 可用于
关 键 词 ： Ｐ Ｃ法； ＨＬ 氯酚黄敏片 ； 人工牛黄 ； 含量测定
中 图 分 类号 ： ９ ７ ２ 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ：０ ６３ ６ （０ ６ ０ —０ ６Ｏ Ｒ ２． Ａ １０ —７ ５ ２ ０ ） ５０ ７ 一 １
果 （ 表 １。 见 ）
哀 １ 回 收 试 验 （ ＝ ９ ｎ ）
３ １ 溶 液 的 制 备 对 照 品 溶 液 ： 密 称 取 胆 红 素 对 照 品 ． 精 １． ２ ， ｌＯ ３ ２ｍｇ 置 ＯｍＬ量 瓶 中 ， 氯 仿 适 量 使 溶 解 ， 氯 仿 稀 释 加 加 至刻 度 。 样 品溶 液 ： 本 品 ５片 ， 细 ， 氯 仿 ５ｍＬ， ６ ℃水 浴 取 研 加 ０ 在 Ｏ 中 振摇 １ ， 速 冷却 ， 过 ， 渣 及 滤 纸 用 氯 仿 ２ｍＬ分 次 洗 ｈ迅 滤 残 ０ 涤 ， 并 滤 液 及 洗 液 ， 浴 蒸 干 ， 渣 加 少 量 流 动 相 使溶 解 并 合 水 残 转 移至 ｌｍＬ量 瓶 中 。 Ｏ ３ ２ 选 择 性 试 验 取 对 照 品 溶 液 ， 品 溶 液 ， 上 述 色 谱 条 ． 样 按 件进样 ， 色谱 图 （ 图 １ 。 见 ）
HPLC-ELSD法区分小儿氨酚黄那敏颗粒中体外培育牛黄和人工牛黄
HPLC-ELSD法区分小儿氨酚黄那敏颗粒中体外培育牛黄和人工牛黄程岁寒;张双庆;马灿;张彦【摘要】通过建立HPLC-ELSD法检查猪去氧胆酸(HA)来区分小儿氨酚黄那敏颗粒中体外培育牛黄和人工牛黄.采用Intersil ODS-3 C18色谱柱,0.5％甲酸-乙腈(62:38)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为40℃,进样量为20μL.采用蒸发散射光检测器,漂移管温度:110℃,载气为高纯氮气,流量:2.8 L/min.HA保留时间为19.43 min,检测限为2μg(浓度0.1 mg/mL),含体外培育牛黄的小儿氨酚黄那敏颗粒未检出HA,含人工牛黄(0.2 mg/mL)的小儿氨酚黄那敏颗粒可以检出HA.建立的方法可区分小儿氨酚黄那敏颗粒中的人工牛黄和体外培育牛黄,该法快速、简便、灵敏度高.【期刊名称】《三峡大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(040)006【总页数】3页(P101-103)【关键词】HPLC-ELSD;猪去氧胆酸;人工牛黄;体外培育牛黄;小儿氨酚黄那敏颗粒【作者】程岁寒;张双庆;马灿;张彦【作者单位】安琪酵母股份有限公司湖北省酵母功能重点实验室,湖北宜昌443003;三峡大学生物与制药学院,湖北宜昌 443002;中国疾病预防控制中心营养与健康所,北京 100050;安琪酵母股份有限公司湖北省酵母功能重点实验室,湖北宜昌 443003;安琪酵母股份有限公司湖北省酵母功能重点实验室,湖北宜昌443003【正文语种】中文【中图分类】R927.2牛黄(Bovis calculus)是脊索动物门哺乳纲牛科动物牛(Bos taurus domesticus Gmelin)肝脏的胆结石，始载于《神农本草经》，具有一定的镇静作用、明显的抗惊厥作用和解热作用，主治咽喉肿痛，口舌生疮，痈疽疔毒[1]．牛黄是临床急重病症常用药，也是配制中成药的重要原料，但是天然牛黄稀少难得，远远不能满足含牛黄制剂的药品需求．为了解决天然牛黄稀缺的状况，国家食品药品监督管理局陆续批准3种牛黄代用品：人工牛黄、培植牛黄和体外培育牛黄．《中国药典》2015版规定，天然牛黄中按干燥品计算，含胆红素不得少于25.0%，含胆酸不得少于4.0%[2]70．人工牛黄由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸、胆红素、胆固醇、微量元素等加工制成，含胆红素不得少于0.63%，含胆酸不得少于13%[2-3]．培植牛黄是利用活牛体，以外科手术的方法在牛的胆囊内插入致黄因子，使之生成牛黄[4-5]．体外培育牛黄以牛科动物牛的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成．《中国药典》2015版规定，体外培育牛黄中按干燥品计算，含胆红素不得少于35.0%，含胆酸不得少于6.0%[2]．由于牛黄用途广泛，但来源少、价格昂贵，故有时以人工牛黄或体外培育牛黄作代用品，但由于牛黄与其替代品的性状特征极为相似，价格又相差较大，市场上用其他牛黄掺伪品时有出现，故牛黄的真伪、质量应受到认真重视．如何鉴别牛黄与其替代品仅见少量报道[6]．小儿氨酚黄那敏颗粒是由马来酸氯苯那敏(Chlorphenamine maleate， CM)、对乙酰氨基酚(Paracetamol， PT)及人工牛黄制成的抗感冒复方制剂[6]，市售小儿氨酚黄那敏颗粒大多使用人工牛黄，只有三家药厂采用体外培育牛黄．对药品小儿氨酚黄那敏颗粒中体外培育牛黄和人工牛黄的鉴别较少，仅见张轶华等[7]通过检测胆红素含量和薄层色谱法鉴别猪去氧胆酸(HA)的方法进行鉴别．体外培育牛黄不含HA，是区别体外培育牛黄和人工牛黄的依据之一，为了更准确鉴别体外培育牛黄和人工牛黄以及含牛黄的药品小儿氨酚黄那敏颗粒中牛黄种类，本文采用高效液相-蒸发光检测器(HPLC-ELSD)法检测HA．该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好．1 仪器与试药Chromaster高效液相色谱仪(chromaster 5310柱温箱，5210自动进样器，5110泵，配有Clarity软件，日本日立公司)；电子天平(XS205 1127423589梅特勒-托利多)；超声处理器(HU010260B，田间恒奥科技发展有限公司)；Alltech ELSD 6000型蒸发散射光检测器(美国奥泰公司)．乙腈、甲醇、甲酸为色谱级；HA标准品购自中国食品药品检定研究院；安琪康普力星小儿氨酚黄那敏颗粒(安琪酵母股份有限公司，规格为6 g，每包含PT 0.125 g、CM 0.5 mg、体外培育牛黄5 mg)；三九小儿氨酚黄那敏颗粒剂(三九医药股份有限公司，规格为6 g，每包含PT 0.125 g、CM 0.5 mg、人工牛黄5 mg)．2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：岛津Intersil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，4.6 μm)；流动相：0.5%甲酸∶乙腈=62∶38；柱温：40℃．流速：1.0 mL/min，进样量：20μL．ELSD漂移管温度110℃，载气为高纯氮气，流量：2.8 L/min．2.2 对照溶液的制备HA对照品溶液的制备：精密称取HA对照品约10 mg置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得浓度为1 mg/mL HA对照品溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪．HA色谱峰保留时间为19.43 min．1. HA， 1 mg/mL图1 HA对照品溶液色谱图2.3 检测限将1 mg/mL HA对照品液逐级稀释，进样，信噪比3倍值作为HA的检测限．本法HA的检测限为2 μg(质量浓度0.1 mg/mL)．1. HA，0.1 mg/mL图2 HA检测限色谱图2.4 体外培育牛黄和人工牛黄的鉴别分别取体外培育牛黄和人工牛黄，各精密称取约25 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇约20 mL，超声10 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，即得供试品溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪．体外培育牛黄和人工牛黄色谱图见图3，人工牛黄在19.43 min出现HA色谱峰，而体外培育牛黄却没有检出HA．A. 人工牛黄，1 mg/mL;B. 体外培育牛黄，1 mg/mL； 1. HA图3 人工牛黄与体外培育牛黄色谱图2.5 小儿氨酚黄那敏样品的检测分别取含体外培育牛黄(安琪康普力星)和人工牛黄(999)的小儿氨酚黄那敏颗粒各10袋，研细，精密称取约12 g(约相当于牛黄10 mg)，置25 mL量瓶中，加甲醇约20 mL，超声20 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取5 mL续滤液置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得约含牛黄0.2 mg/mL 的样品溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪．样品色谱图见图4，安琪康普力星小儿氨酚黄那敏颗粒中使用体外培育牛黄，并不含HA，而999小儿氨酚黄那敏颗粒中使用人工牛黄，检出HA．A.含人工牛黄颗粒(999)；B.含体外培育牛黄颗粒(安琪)； 1.HA图4 小儿氨酚黄那敏颗粒样品色谱图3 讨论目前国内含有牛黄成分的中成药共有500余种，其中多数中成药中的牛黄成分是价格低廉、药效较差的人工牛黄，国家食品药品监督管理局于2004年发布了关于牛黄及其代用品使用问题的通知(国食药监注[2004]21号)，规定对于国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病症用药品种(42种)和国家药品监督管理部门批准的含牛黄的新药，可以将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄替代牛黄等量投料使用，但不得以人工牛黄替代，其他含牛黄的品种可使用代用品．因此快速鉴别人工牛黄和体外培育牛黄极为重要，吕浩然等[8]通过性状、显微及薄层色谱的手段鉴别人工牛黄和体外培育牛黄．性状鉴别虽简单易行，但需要鉴别者具有丰富的中药材知识和实际工作经验．而薄层色谱法在鉴别HA虽具有快速直观的优点，但是同时具有灵敏度低的缺点，小儿氨酚黄那敏颗粒及其他药品中牛黄含量仅为几个mg，其中HA含量会更低，很难鉴别出来．本法通过HPLC-ELSD法可在含人工牛黄(0.2 mg/mL)的小儿氨酚黄那敏颗粒样品溶液中准确检出HA，从而鉴别人工牛黄和体外培育牛黄，具有灵敏度高的特点．参考文献：【相关文献】[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草(下册)[M]．上海：上海科学技术出版社，1998：2526-2535．[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典[S]．北京：中国医药科技出版社，2015年版，一部．[3] 赵艳红，阮金秀．牛黄及其代用品的药理作用及临床应用[J]．军事医学科学院院刊，2007，31(2)：175-178．[4] 金玉琴，潘幽燕，叶会洲．关于天然牛黄及替代品的基本情况[C]．浙江：浙江省中药学术年会论文集，2005：100-101．[5] 任立波，周虹．天然牛黄、人工培植牛黄与人工牛黄的鉴别[J]．中国药业，2004，13(10)：63．[6] 国家食品药品监督管理局．10001-(HD-0214)-2002．小儿氨酚黄那敏颗粒标准(试行)[S]．[7] 张轶华，姜建国，孙婷，等．小儿氨酚黄那敏颗粒中人工牛黄和体外培育牛黄的研究[J]．中成药，2015，37(2)：329-331．[8] 吕浩然，郭月秋，陈代贤，等．牛黄、体外培育牛黄及人工牛黄真伪快速检定探讨[J]．中外健康文摘，2013，10(12)：44-46．。
用高效液相色谱法测定复方氨酚烷胺片中胆红素的含量
电离与吸收剂量的准确转换 （ 根据 ＩＥ ２ ７号报告标准 ） 。 ＡＡ７
３４ 半影区宽度 ２ ５ｍ ． － ｍ ，具有 “ ”的特 征，辐射野直径 刀
在 ２ － ５ｍ ０ ０ ｍ时半影 宽度 不大 于 ５ｍ ｍ ，从 图表看 ￣ ５ｍ准直 ２ｍ
器半 影较 大使用 时 “ ”的特 征会有所下降 ，可能情况下尽量 刀
１ ３ ． ５
效液相色谱法测定复方氨酚烷胺片中胆红素的含量 用高
张 艳
ｆ 江苏省连 云港药品检验所 中医室
２ ２０ ２０３
［ 摘
要］ 目的 建立复方氨酚烷胺 片中胆红素 的含量 测定方法。方法
采 用高效液相 色谱法“ ，色谱柱 ： ｈ ｎ ｍ ｎ ｘ Ｐ ｅｏ ｅ ｅ Ｃ ｓ
２ １５— ２１ ． ６
片、冲洗 条件 的一致 性，同时充分利用胶片分析 软件 的各项功 能，以保证此类误差控制在可接 受的范围 内。另外，在条件许
可情 况下应使用如 Ｋ ｄｋ ＥＲ 、ＩＡ Ｅ Ｔ等剂量／ ｏａ Ｄ２ Ｂ Ｂ 灰度线性范
［】蒋国良． ４ 现代肿瘤放射治疗学 ［ ． Ｍ 上海科技出版社，２ ０ ， 】 ０３
胆
柱 （ ５ ×４６ ５ ０ ．ｍｍ） ２ ，流动 相 ： 甲醇 一 氢 呋 喃 一 。％醋 酸 （０ ０ ｏ ，流 速 ：１５ ｌ ｍｉ－ ，检 测 波 长 ：４０ｎ＇ 果 四 ０ ５ ８ ：１ ：１） 。 ・ ｎ ｍ ５ ｎ。结 ｉ
高效液相色谱法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中胆红素含量
高效液相色谱法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中胆红素含量李香荷;王强;高燕霞;张冬;郭毅;张轶华【摘要】目的建立测定人工牛黄甲硝唑胶囊中胆红素含量高效液相色谱(HPLC)法.方法色谱柱采用Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1％冰醋酸溶液(95∶5),检测波长为453 nm,柱温为30℃,流速为1.0mL/min,进样量为5μL.结果胆红素质量浓度在0.442 ～11.05 μg/mL(r =0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好;平均回收率为99.45％,RSD为1.02％(n=9).结论该法简便、精密度好、结果准确,可用于人工牛黄甲硝唑胶囊中胆红素的含量测定.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2019(028)013【总页数】3页(P39-41)【关键词】人工牛黄甲硝唑胶囊;胆红素;高效液相色谱法【作者】李香荷;王强;高燕霞;张冬;郭毅;张轶华【作者单位】河北省药品检验研究院,河北石家庄 050011;河北省药品检验研究院,河北石家庄 050011;河北省药品检验研究院,河北石家庄 050011;河北省药品检验研究院,河北石家庄 050011;河北省药品检验研究院,河北石家庄 050011;河北省药品检验研究院,河北石家庄 050011【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R988.2人工牛黄甲硝唑胶囊主要用于治疗急性智齿冠周炎、局部牙槽脓肿、牙髓炎、根尖周炎等，具有清热、解毒、祛疾、定惊之功效[1]。
牛黄是方中主药，胆红素含量是评定人工牛黄其质量的重要指标。
2015年版《中国药典（一部）》[1]人工牛黄项下胆红素的测定方法为紫外-可见分光光度法，以三氯甲烷为溶剂提取，毒性较大，且紫外测定法易受其他药味的干扰，因此无法应用到牛黄制剂中。
而2015年版《中国药典（二部）》尚未收载人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准，国家药品标准[2]及文献[3-7]均采用高效液相色谱法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中胆红素的含量，流动相为甲醇-氯仿-1%磷酸，流动相用到氯仿，氯仿毒性较大，对液相色谱的PEEK 管有侵蚀作用，且对色谱柱损伤较大。
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取2.6项下的第3份溶液，按上述色谱条件取10ul注入液相色谱仪测定峰面积，连续进样6次，RSD＝0.8%（n＝6）
2.8重复性试验和稳定性试验
取同一样品的6份按含量测定项下方法测定，结果为99.8%，RSD为0.9%（n＝6）取上述供试品溶液1份，按以上色谱条件测定峰面积，分别在0,0.5,1,1.5,2,3,4h测定峰面积RSD为0.8%（n＝7），表明本样品溶液在实验所需的时间内稳定。
1仪器与试药
1.1仪器
岛津LC-2010A高效液相色谱仪，超声波药品处理机（济宁金百特）
1.2试药
胆红素对照品购自中国药品生物制品检定所。复方氨酚那敏颗粒，万荣三九药业有限公司（批号：090803 100309 100608 100707 100505）甲醇为色谱纯试剂，磷酸、三氯甲烷为分析纯，水为蒸馏水。
取复方氨酚那敏颗粒5批，照2.3项下的方法操作，在上述色谱条件下，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10ul注入色谱仪，测定峰面积，以外标法计算含量，结果人工牛黄含量分别为10.1、10.5、10.0、9.9、10.0mg/袋。
3讨论
从含量测定的结果可以看出，用高效液相色谱法测定其含量，简便快捷、定量准确，样品中其他成分与胆红素分离较好，可通过测定人工牛黄的含量有效的控制药品质量。
2.5干扰试验的测定
取对照品溶液、供试品溶液，空白样品溶液各10ul，按2.1项下色谱条件进行测定，记录色谱图，结果空白无干扰。色谱图见图1.
A图对照品B图样品C空白样品
2.6线性关系
精密量取浓度为0.1614mg/ml的胆红素贮备液，精密量取适量，分别加三氯甲烷-甲醇-水（90:10:0.3）的混合液制成浓度为3.228、4.842、6.456、9.684、12.912、16.140ug/ml的胆红素对照品溶液。取上述溶液各10ul按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品浓度X（ug/ml）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归r＝0.9997。结果表明，在3.229～16.14ug/ml范围内与峰面积的线性关系良好。
2.3供试品溶液的制备
取装量项下的供试品，精密称定，研细，精密称取适量（约1.0g），置25ml棕色量瓶中，加三氯甲烷-甲醇-盐酸-水（90:10:0.015:0.3）的混合液适量使溶解，超声10分钟稀释至刻度摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.4空白样品溶液制备
制备不含样品的空白样品，照供试品溶液的制备项同法操作，即得。
【关键词】人工牛黄胆红素高效液相色谱法含量测定
复方氨酚那敏颗粒作为常用的解热镇痛药，目前复方氨酚那敏颗粒中人工牛黄的胆红素的含量的含量测定方法未建立，人工牛黄具有解热、消炎、祛痰、定惊等功能。胆红素是人工牛黄的主要成分，也是评价人工牛黄品质优劣的依据，故考察胆红素的提取工艺及含量测定具有现实意义。本文采用HPLC测定人工牛黄的含量，结果简便、准确，可用于复方氨酚那敏颗粒中人工牛黄含量测定。
2.9回收率试验
精密称取本品约0.5g，取6份置25ml的棕色量瓶中，分别加入已配置好的浓度为79.3ug/ml胆红素对照溶液各1ml。挥干溶剂，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液。胆红素对照品浓度为6.344ug/ml。各取10ul注入液相色谱仪，计算平均回收率为98.8%，RSD为1.2%。
2.10样品测定
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：AgillentTCC18柱（200mm×4.5mm,5um），流动相：以甲醇-三氯甲烷-1%磷酸溶液（84:9:7），检测波长：453nm。流速：1.0ml/min。
2.2对照品溶液的制备
精密称取胆红素对照品对照品0.0085g，置50ml棕色量瓶中，加三氯甲烷溶解稀释至刻度，摇匀，作为储备液。临用前，精密量取储备液，用三氯甲烷-甲醇-水（90:10:0.3）的混合液定量稀释制成浓度为6.5ug/ml的溶液摇匀、滤过，取续滤液，即得。
HPLC法测定复方氨酚那敏颗粒中人工牛黄的胆红素的含量
摘要】目的建立HPLC法测定复方氨酚那敏颗粒中人工牛黄的胆红素的含量。方法液相色谱法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-三氯甲烷-1%磷酸溶液（84:9:7）为流动相，检测波长为453nm，流速：1.0ml/min。结果在3.229～16.14ug/ml范围内与峰面积的线性关系良好r＝0.9997，平均回收率为98.8%（RSD＝1.2%，n＝6）。结论方法准确快捷，可用作含量测定。
参考文献
[1]中国药典[S].2010年版一部.
[2]复方氨酚那敏颗粒质量标准WS-10001-（HD-0256）-2002，国家药品标准第三册.