第三节 黄酮类化合物的提取与分离
黄酮类化合物的提取和分离
吸附规律：
极性大吸附能力强 e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 单糖苷
10
Rf：A > C > B
黄酮类化合物的提 取和分离
原理：氢键吸附（作用） 洗脱规律：（先—后）
聚酰胺柱色谱
母核上羟基增加，洗脱顺序递减 羟基数目相同时，有缔合羟基 > 无缔合羟基 苷元相同：三糖苷 > 双糖苷 > 单糖苷 > 苷元 不同类型黄酮类化合物的洗脱先后顺序为：
乙醚液 乙醚液 乙醚液 乙醚液 乙醚液 （脂杂）
5% NaHCO3
梯度pH萃取法
5% Na2CO3 0.2% NaOH
碱液(7,4’-二OH黄酮)
碱液(7或4’-OH黄酮)
4% NaOH
碱液(一般酚OH黄酮)
碱液(3或5-OH黄酮)
18
黄酮类化合物的提 取和分离
金属盐络合法
原理：利用分子中某些特定官能团性质进行分离 具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅沉淀 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成 溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它 黄酮类化合物分离
氯仿层
黄酮苷元
乙酸乙酯层
大极性苷元 小极性的苷
6
正丁醇层
黄酮苷
水层
多糖 蛋白质
黄酮类化合物的提 取和分离
碱： 常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水)
优点 A：使含酚羟基化合物成盐溶解
碱提酸沉法
原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出
B：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等） 形成沉淀
注意 a：提取时，碱液浓度不宜过高。
8
黄酮类化合物的提 取和分离
黄酮类化合物的提取纯化方法
黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景任红丽2009090141摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。
在药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。
关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。
迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。
最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。
1.提取纯化方法1．1 传统提取方法1．1．1 热水提取法水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。
但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。
此外，水提取物容易发霉发酵[22]。
1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。
黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
实验目的：对黄酮类物质进行分离和纯化，以获得高纯度的黄酮类化合物。
实验步骤：
1.将黄酮类植物材料加入适量的乙醇中，进行浸提。
2.过滤浸提液，得到植物材料的提取液。
3.将提取液转入蒸发器中，进行蒸发浓缩。
4.将浓缩液溶解于适量的无水乙醚中，进行萃取。
5.分取有色相的有机相液体。
6.用饱和盐酸溶液，使有机相与无水乙醚中的黄酮类物质发生转化反应。
7.经过酸化反应后，形成无色的无机酸盐。
8.用横向冷冻离心机进行冷冻离心，分离提取的黄酮类物质。
9.将离心沉淀物重新溶解于适量的去离子水中。
10.通过制备薄层层析法或者柱层析法对黄酮类物质进行进一步的分离和纯化。
11.通过紫外可见分光光度计检测黄酮类物质的纯度。
实验结果：
根据实验结果，我们成功地得到了一种高纯度的黄酮类化合物。
该化合物的纯度通过紫外可见分光光度计检测，纯度较高。
讨论和结论：
通过本次实验，我们成功地分离纯化了黄酮类物质。
该实验证明了所使用的方法在分离黄酮类物质方面的有效性。
此外，我们还可以利用其他分离纯化方法，如色谱法或逆流法等，进一步提高黄酮类物质的纯度。
然而，尽管我们得到了高纯度的黄酮类化合物，但该实验结果仅表示特定工作条件下的实验结果，并不能保证在不同条件下得到相同的结果。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的方法和条件进行黄酮类物质的分离纯化。
总之，本次实验成功地分离纯化了黄酮类物质，并得到了高纯度的黄酮类化合物。
该实验结果将有助于我们进一步研究和应用黄酮类物质。
黄酮类化合物的理化性质溶解性
• 第三节 黄酮类化合物的提取和分离
• 第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定 • 第五节 黄酮类化合物的生物活性与药用价值
第二节 黄酮类化合物的理化性质
形 态：黄酮类化合物多为晶性固体，少数为无定形 粉末。 颜 色： 黄酮（醇）及其苷：显灰黄--黄色。 若7-及4’-位引入-OH 和–OCH3等，颜色加深。 查尔酮：显黄--橙黄色。 二氢黄酮（醇）及异黄酮：不显色或显微黄色。
不稳定 易氧化 黄色~深红色~绿棕色
14
第二节 黄酮类化合物的理化性质
练习一 芦丁的显色反应 HCl-Mg反应： HCl-Zn反应： NaBH4反应： 锆-枸橼酸反应： SrCl2反应： 硼酸+草酸反应： 15 Molish反应：
15
第二节 黄酮类化合物的理化性质
练习二 鉴别(化学方法)
A
B
16
黄酮（醇），查耳酮 二氢黄酮（醇） 花色素
水 溶 性 增 6 大
平面型分子 非平面型分子 离子
6
第二节 黄酮类化合物的理化性质
酸性： 酚羟基 可溶于碱水、吡啶、ＤＭＦ中 酸性强弱取决于羟基数目和位置 7 、4’－二OH > 7－或4’－OH > 一般酚OH > 5－OH > 3－OH 应用: 提取、分离和鉴定中
花色苷及苷元：颜色随pH不同而变化 ：
pH<7 显红色；pH=8.5 显紫色； pH>8.5 显兰色。
3
3
第二节 黄酮类化合物的理化性质
旋光性 游离苷元： 二氢黄酮（醇）、黄烷（醇）有旋光性, 其余
黄酮类化合物无旋光性。
苷 类：
因为糖分子的引入，具有旋光性，且多为左旋。
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取黄酮类化合物是一类具有重要药用价值的天然产物，其具有抗氧化、抗炎、降血压、降血脂等多种生物活性。
因此，黄酮类化合物的提取和分离一直是天然药物研究领域的热点之一。
本文将从黄酮类化合物的来源、提取方法以及提取过程中的优化等方面进行详细介绍。
一、黄酮类化合物的来源黄酮类化合物广泛存在于植物中，包括花、果实、叶子等部位。
其中，柑橘属植物中含有较为丰富的黄酮类化合物，如柚皮中含有丰富的柚皮素和橙皮素等。
此外，苦楝属植物也是黄酮类化合物的重要来源之一，如苦楝素和芦丁等。
二、黄酮类化合物的提取方法1.传统提取方法传统提取方法主要包括水浸提法、乙醇浸提法和超声波辅助浸提法等。
（1）水浸提法水浸提法是最为简单的提取方法之一，其操作简单、成本低廉。
但是，由于黄酮类化合物在水中的溶解度较低，因此水浸提法提取效率较低。
（2）乙醇浸提法乙醇浸提法是常用的黄酮类化合物提取方法之一。
乙醇具有良好的溶解性和挥发性，可有效地溶解黄酮类化合物。
但是，乙醇浸提法存在一定的毒性和燃爆风险。
（3）超声波辅助浸提法超声波辅助浸提法是一种新型的黄酮类化合物提取方法。
其利用超声波对植物细胞壁进行破碎，从而促进黄酮类化合物的释放和溶解。
该方法具有操作简单、高效快捷等优点。
2.现代提取方法现代提取方法主要包括超临界流体萃取法、微波辅助萃取法和固相萃取法等。
（1）超临界流体萃取法超临界流体萃取法是目前最为先进的黄酮类化合物提取方法之一。
其利用超临界流体对植物组织进行萃取，具有高效、环保等特点。
（2）微波辅助萃取法微波辅助萃取法是一种快速高效的黄酮类化合物提取方法。
其利用微波加热对植物组织进行破碎和溶解，具有操作简单、高效快捷等优点。
（3）固相萃取法固相萃取法是一种基于化学吸附原理的黄酮类化合物提取方法。
其利用具有亲和力的固相材料对黄酮类化合物进行选择性吸附，从而实现分离和提纯。
三、黄酮类化合物提取过程中的优化1.影响因素影响黄酮类化合物提取效率的因素主要包括原料质量、溶剂种类、浸提时间、浸提温度等。
黄酮类化合物提取和分离方法研究进展
收稿日期:2007205225作者简介:梁 丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药.第24卷第5期周口师范学院学报2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007黄酮类化合物提取和分离方法研究进展梁 丹1,张保东2(1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001)摘 要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高.1 黄酮类化合物提取方法的研究进展1.1 按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%～95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2～4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取.(3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟基,易溶于碱水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简便易行,橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2 按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7].(2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的能量,使它们做高速的运动,加速细胞内物质的释放和溶解以及有效成分的浸出,大大提高了提取效率.超声提取法具有提取时间短、效率高、无需加热等优点[4].刘海鹏等[11]用超声波提取银杏叶总黄酮比回流法提取率高,且操作简便,节省时间,其最佳条件为:提取时间25min,温度10℃,连续提取3次,总黄酮提取率达96%.霍丹群等[12]在综合考虑成本等可行性因素下,提取山楂中黄酮类物质,提取时间大大缩短,产率较高,且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便.(5)超滤法.该法是一种膜分离法,而且是唯一能用于分子分离的过滤方法,能从周围的介质中分离出100～1000nm的微粒.因此,超滤既可应用于除去溶液中胶体悬浮微粒,又能分离出溶液中的溶质.超滤的工作原理是:凡含有两种或两种以上溶质的溶液,通过滤膜分离流动时,其中分子体积小的溶质,经滤膜流出,而分子体积较大的溶质,不能通过滤膜而被截留[13].超滤法以多孔薄膜为分离介质,依靠薄膜两侧压力差作为推力来分离溶液中不同分子量的物质,从而起到提纯的作用.它具有不需加热,操作条件温和,不必添加化学试剂,不损坏黄酮类化合物,不存在相的转换,耗能低,分离率高,超滤装置可反复使用等优点.控制超滤膜孔径大小能有效除去溶液中大分子物质,选用适宜孔径的超滤膜是提高产品收率和质量的关键.20世纪80年代后期,采用超滤技术提取黄芩苷,收到了较好的效果.在溶液温度为14℃, p H=1.5时,提取黄酮类化合物的收率较高[14].(6)酶提取法.植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内,提取时细胞壁造成传质阻力,使提取效果受到很大的限制.酶的作用可使细胞壁疏松、破裂,因此需要减小传质阻力,加速有效成分的释放,从而提高提取效率[15].毕会敏等[6]用纤维素酶法提取红景天总黄酮,最佳工艺条件为:加酶量1.95%(以原料干重计),液料比70∶1(体积质量比,mL∶g),p H 值5.5,酶解温度40℃,酶解时间5h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.研究表明,采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率,且粗提物产率高,DPP H清除活性强.(7)超临界流体提取法.该法(Supercritical Flu2 ids Ext raction,SFE)是20世纪80年代发展起来的一项提取分离技术,利用超临界流体(Supercritical Fluids,SCE)为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分,其中超临界二氧化碳最为常用(SCF2 CO2)[16].SFE具有提取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点,同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,达到选择性提取和分离化合物的目的.2 黄酮类化合物分离方法的研究进展由于黄酮化合物的性质不同,其分离原理有: (1)极性大小不同,利用吸附能力或分配原理进行分离;(2)酸性强弱不同,利用p H梯度萃取进行分离;(3)分子大小不同,利用葡聚糖凝胶分子筛进行分离;(4)分子中某些特殊结构,利用与金属盐络合能力的不同进行分离[17].2.1 p H梯度萃取p H梯度萃取适合分离酸性强弱不同的游离黄酮类化合物.将混合物溶于有机溶剂(如乙醚),依次用5%碳酸氢钠(萃取7,4′2二羟基黄酮)、5%的碳酸钠(萃取72羟基黄酮或4′2羟基黄酮)、0.2%氢氧化钠(萃取一般酚羟基黄酮)、4%氢氧化钠(萃取52羟基黄酮)萃取而使其分离[3].2.2 高效液相色谱分析(HPL C)法运用H PL C法分离黄酮类化合物的报道很多.有人对18种黄酮及黄酮苷类化合物在C8、C18和CN3种固定相上洗脱的RP2H PL C法分离做了研究,结果表明C18基本可以使植物黄酮苷元和配基实现分离,但它对极性大的苷部分洗脱出峰快,分离效果不大理想.而C8介于C18和CN之间,因而对黄酮苷的分离比较理想,峰形和分离也最好[18].H PL C 也可以用来测定黄酮的含量[19].2.3 高速逆流色谱分离法高速逆流色谱分离法(high speed co untercur2 rent chro matograp hy,HSCCC)是一种新的分离技术.其具有两大突出特点:(1)线圈中固定相不需要载体,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别运用于制备性分离,每次进样体积较大,进样量也较多[16].李彩侠等[20]提取荷叶中黄酮类化合物,经HSCCC分离纯化的效果很好,结合TL C分析、颜色反应鉴定得到两种纯度很高的黄酮醇类化合物.HSCCC对分离和制备黄酮类化合物有很大的优势,其应用前景越来越受到人们的关注.2.4 柱色谱法(1)硅胶柱色谱[17,18].此法应用范围最广,非极性与极性化合物都能用,适用于分离黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、二氢黄酮类、异黄酮类、黄酮苷元类.少数情况下,在加水活化后也可以用于分离极性较大的化合物,如羟基黄酮醇类及其苷类等.与硅胶88 周口师范学院学报2007年9月混存的微量金属离子,应预先用浓盐酸处理,以免干扰分离效果.(2)聚酰胺柱色谱[17,18].分离黄酮类化合物,聚酰胺是较为理想的吸附剂.其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小.由己内酰胺聚合而成的尼龙-66及由己二酸与己二胺聚合而成的尼龙-66,最早应用于黄酮类化合物的分离.此法是目前最有效而简便的方法.(3)葡聚糖凝胶(Sep hadex gel)柱色谱[18].黄酮类化合物的分离,主要使用两种型号的凝胶:Sep ha2 dex G型和Sep hadex L H220型.其原理主要是吸附作用.凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离羟基的数目.但分离黄酮苷时,分子筛的性质起主导作用.在洗脱时,黄酮苷类大体上是按相对分子质量由大到小的顺序流出柱体.(4)大孔吸附树脂分离法.该法是以大孔吸附树脂为吸附剂和分子筛的柱色谱分离形式.其原理是吸附性和分子筛性.吸附性主要来源于范德华力和氢键作用力;分子筛性来源于大孔树脂的多孔性结构产生的渗透和过滤作用.被分离的成分根据其分子的大小不同和吸附能力的差异而分离[3].近年来大孔吸附树脂在中药成分(如黄酮、生物碱等)精制纯化等领域中应用越来越广泛[21223].刘健伟等[22]对D101型(非极性)、Hz2806型(中等极性)和AB28型(弱极性)3种大孔吸附树脂进行了筛选,并对甘草中总黄酮分离纯化工艺进行了研究;王雅君等[23]则用D101大孔树脂进行了制备菟丝子总黄酮的研究.这些研究表明,大孔吸附树脂对于黄酮类化合物具有良好的分离纯化效果,与传统的分离方法相比,具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等优点.3 展望近几年来,科学家对黄酮进行了广泛而深入的研究,发现了黄酮不少令人感兴趣的新用途,黄酮类天然产物是近年来天然药物和人类健康产品研究开发的热点.从药用植物和经济植物中提取具有生理活性的黄酮作为天然药物、保健品和化妆品等行业的原料,已日益引起重视,其应用前景无限广阔.随着科学技术的不断进步和发展,黄酮类化合物的独特效能将得到不断的发掘及应用.因此,黄酮类化合物的提取和分离方法也将得到更加深层的研究和开发,已有的方法将会日趋成熟和完善,各种高效、方便快捷的新方法将会不断涌现.参考文献:[1]黄锁义,黎海妮,余美料.益母草总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药,2005,16(5):3982399.[2]姚小敏,覃成箭,羊金梅.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学院学报,2005,27(6):7792 781.[3]郭京波,王向东,张燕,等.不同提取方法对苦荞类黄酮提纯得率的影响分析[J].食品科学,2006,27(10):4332 436.[4]杨红.中药化学实用技术[M].北京:化学工业出版社,2004:9.[5]胡福良,李英华,朱威,等.不同方法提取的蜂胶液中总黄酮含量的测定及抗肿瘤与抗炎作用研究[J].2005,5(3):11215.[6]毕会敏,张守勤,刘长姣.纤维素酶提取红景天总黄酮的研究[J].天然产物研究与开发,2006,18:8182821. 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黄酮分离实验报告
一、实验目的本实验旨在通过溶剂萃取、柱层析等方法，从植物材料中提取和分离黄酮类化合物，并对其纯度和含量进行测定，以了解黄酮类化合物的提取和分离纯化过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物材料：某种富含黄酮类化合物的植物（如银杏叶、橙皮等）- 提取溶剂：乙醇、水、甲醇等- 分离材料：硅胶、氧化铝、大孔树脂等2. 实验仪器：- 热水浴锅- 烘箱- 漏斗- 筛子- 烧杯- 蒸馏装置- 分光光度计- 薄层层析装置三、实验步骤1. 提取：- 将植物材料干燥、粉碎，过筛后备用。
- 称取一定量的植物粉末，加入适量的提取溶剂，置于热水浴锅中加热回流提取。
- 提取结束后，将提取液过滤，收集滤液。
2. 溶剂萃取：- 将滤液分别用不同极性的有机溶剂（如石油醚、氯仿、乙酸乙酯等）进行萃取。
- 将有机溶剂层收集于烧杯中，水层用有机溶剂重复萃取，直至水层颜色不再变化。
3. 薄层层析：- 将分离后的有机溶剂层浓缩干燥，得到粗提物。
- 将粗提物用适当溶剂溶解，点样于薄层层析板上。
- 以不同极性的有机溶剂为展开剂，进行薄层层析。
- 观察并记录各化合物在薄层层析板上的位置。
4. 柱层析：- 将薄层层析中分离出的目标化合物，进行柱层析分离。
- 将柱层析柱装填好固定相，将目标化合物溶解于适当溶剂，进行上样。
- 用不同极性的有机溶剂梯度洗脱，收集各洗脱液。
- 对各洗脱液进行检测，确定目标化合物的位置。
5. 纯度测定：- 将分离出的目标化合物进行纯度测定，如紫外光谱法、红外光谱法等。
- 根据实验结果，确定目标化合物的纯度。
6. 含量测定：- 采用适当的方法测定目标化合物的含量，如分光光度法、高效液相色谱法等。
- 计算目标化合物的含量。
四、实验结果与分析1. 提取：- 实验结果表明，乙醇为较佳的提取溶剂，提取效率较高。
2. 溶剂萃取：- 实验结果表明，不同极性的有机溶剂对黄酮类化合物的萃取效果不同，可利用这一性质进行初步分离。
3. 薄层层析：- 实验结果表明，目标化合物在薄层层析板上的位置较明显，有助于进一步分离。
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的植物次生代谢产物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。
本文将围绕黄酮类化合物的提取与分离工艺展开探讨。
一、黄酮类化合物的概述黄酮类化合物是一类含有两个苯环的多羟基化合物，具有较强的抗氧化作用和抗炎作用。
它们被广泛存在于许多植物中，如花朵、果实、根茎等部位。
由于其生物活性的独特性，研究人员对黄酮类化合物的提取与分离工艺进行了深入研究。
二、提取工艺的研究1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较为常用的提取黄酮类化合物的方法之一。
该方法利用溶剂对植物样品进行浸提，使黄酮类化合物溶于溶剂中，然后通过浓缩和干燥等步骤得到目标产物。
常用的溶剂有乙酸乙酯、甲醇等。
此方法对设备要求较低，但可能导致有机溶剂残留和产物的破坏。
2. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种改进的提取方法，通过超声波的作用，可以增加植物样品与提取溶剂的接触面积和渗透速度，加速黄酮类化合物的溶解和迁移。
该方法提取效果较好，但对设备要求较高，操作难度也较大。
三、分离工艺的研究1. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离黄酮类化合物的方法。
该方法利用固定相和流动相之间的相互作用，根据黄酮类化合物的不同物理化学性质进行分离。
常用的固定相有硅胶柱、C18柱等。
该方法分离效果较好，但操作较为繁琐。
2. 薄层层析法薄层层析法是一种简便、快速的分离方法。
该方法将样品溶液涂布在薄层层析板上，通过固定相对黄酮类化合物进行分离，然后用显色剂喷洒在薄层层析板上，可通过色谱带的出现判断黄酮类化合物的位置。
该方法缺点是分离效果较差，但操作简便。
四、工艺优化与产物应用在黄酮类化合物的提取与分离工艺研究中，工艺的优化是十分重要的。
通过对溶剂种类、提取温度、提取时间等参数的不断调整，可以提高黄酮类化合物的提取率和纯度。
此外，对于产物的应用也是研究的重点，黄酮类化合物广泛应用于医药领域的抗炎药物、抗氧化剂和化妆品中的护肤成分等方面。
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2019-5-18
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槐米中芦丁的提取
槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍 量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至 pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热 抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。 合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5， 搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性， 60℃ 干 燥 得 芦 丁 粗 品 ， 于 水 中 重 结 晶 ， 70~80℃干燥得芦丁纯品。
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分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小 大顺序洗脱。
分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分 子大小顺序洗脱。
总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷 游离苷元（极性小大）
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葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：
碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH）， 含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等)。
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有时溶剂萃取过程也可以用逆流分 配法连续进行。常用的溶剂系统有： 水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶剂萃取过程在除去杂质的同时， 往往还可以收到分离苷和苷元或极 性苷元与非极性苷元的效果。
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（二）碱提取酸沉淀法
黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水， 但却难溶于酸性水，易溶于碱性水， 故可用碱性水提取，再于碱水提取液 中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。 此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄 芩苷的提取都应用了这个方法。
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在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意 所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性 下，尤其加热时会破坏黄酮母核。在加 酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 （金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物 又重新溶解，降低产品收率。
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当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性 杂质时，如花、果类药材，宜用石灰乳 或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取， 以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀， 不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的 纯化处理。
2与铅盐生成的沉淀， 滤集后按常法悬浮在乙醇中，通入 H2S进行复分解，滤除硫化铅沉淀， 滤液中可得到黄酮类化合物。但初 生态的PbS沉淀具有较高的吸附性， 因此现多不主张用H2S脱铅，而用硫 酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树 脂脱铅。
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二、分离 较常用的分离方法有：
（一）柱层析法
分离黄酮类化合物常用的吸附剂或 载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。 此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅 藻土等。
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1.硅胶柱层析：
此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及 高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及 黄酮醇类。少数情况下，在加水去 活化后也可用于分离极性较大的化 合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。
醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同 比例）、t-丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。
其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。
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（二）梯度pH萃取法
梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同
的黄酮苷元的分离。根据黄酮类苷
元酚羟基数目及位置不同其酸性强
弱也不同的性质，可以将混合物溶
于有机溶剂（如乙醚）后，依次用
5%NaHCO3 、 5%Na2CO3 、 0.2% NaOH及4%NaOH水溶液萃取，来达
到分离的目的。
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酸 性 :7 ， 4- 二 OH 溶 于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）
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2. 聚酰胺柱层析：
对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺 是较为理想的吸附剂。其吸附强度 主要取决于黄酮类化合物分子中羟 基的数目与位置及溶剂与黄酮类化 合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合 能力的大小。
2019-5-18
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聚酰胺柱层析可用于分离各种类型 的黄酮类化合物，包括苷及苷元、 查耳酮与二氢黄酮等。
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有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合， 生成物易溶于水，可与不具上述结 构的黄酮类化合物相互分离。
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举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子 中分离芹菜双糖苷（graveobiodide） A及B
RO
O
OH
OH
RO
O
OCH3 OH
OH O
R=芹菜糖
2019-5-18
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（三）炭粉吸附法
主要适于苷类的精制工作。通常，在植 物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭， 搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄 酮反应时为止。过滤，收集吸苷炭末， 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/ 醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定 性检查（或用PPC鉴定）。
2019-5-18
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粗提物的精制处理方法有： （一）溶剂萃取法：
利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不 同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精 制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液， 可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡 萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶 液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋 白质、多糖类等水溶性杂质。
I（具有邻二酚羟基）
OH O II（无邻二酚羟基）
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原料（种子）
石油醚浸泡脱脂
脱脂药料 乙醇提取
提取液
减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物
溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤
棕色沉淀(A)
滤液
悬浮乙醇中，通H2S，过滤
加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤
滤液
浓缩至小体积， 冰箱放置
沉淀(PbS)
黄色铅盐沉淀(B) 同铅盐(A)法进行复分解
晶块 溶于少量乙醇中，放置
黄色结晶 乙醇重结晶
黄色结晶 乙醇重结晶
浅黄色2蔟01状9-结5-1晶8 (graveobioside A)(I)
谢浅谢观黄赏色针晶(graveobioside B) (II)
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第三节 黄酮类化合物的提取与分离
一、提取
黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如
羟基黄酮、双黄酮等），一般可用 丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些 多糖苷类可用沸水提取。在提取花 青素类化合物时，可加入少量酸 （0.1%盐酸，如果是黄酮苷应当慎 用，避免苷键发生水解）。
2019-5-18
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大多数黄酮苷元宜用用氯仿、乙醚、 醋酸乙酯等中极性溶剂提取，而对 多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可 用苯等低极性溶剂进行提取。
2019-5-18
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（三）根据分子中某些特定官能团进 行分离
在黄酮类成分的混合物中，具有邻 二酚羟基成分与无此结构的成分， 可用铅盐法分离。有邻二酚羟基的 成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二 酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀， 达到分离的目的。
2019-5-18
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与黄酮类成分混存的其它杂质，如 分子中有羧基（如树胶、粘液、果 胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等） 或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也 可被醋酸铅沉淀达到去杂目的。
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3. 葡聚糖凝胶(Sephadex gel)柱层析：
对于黄酮类化合物的分离，主要用 两 种 型 号 的 凝 胶 ： Sephadex-G 型 及 Sephadex-LH-20型。
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葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机 理是：
分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。 凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取 决于游离酚羟基的数目。但分离黄 酮苷时，则分子筛的属性起主导作 用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是 按分子量由大到小的顺序流出柱体。
2019-5-18
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黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时 有下列规律：
（1）苷元相同，洗脱先后顺序一般是： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元
（2）母核上增加羟基，洗脱速度减缓。
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（3）不同类型黄酮化合物，先后流出 顺序一般是：异黄酮二氢黄酮醇 黄酮黄酮醇
（4）分子中芳香核、共轭双键多者则 吸附力强，所以查耳酮往往比相应 的二氢黄酮难于洗脱。