基层医院如何开展临床微生物检测
微生物检验中细菌培养与涂片镜检的运用对比
微生物检验中细菌培养与涂片镜检的运用对比一、前言检验科是临床较重要的科室，对微生物样本的检验有着较高准确度及精准度，是临床较重要的检验方法。
长期以来，临床采用传统的检验方法，需要较长的检验时间，极易耽误患者治疗时机，进而加重了患者病情[1]。
因此，临床应选择适宜的检验方法来检验，进而提高检验准确性。
本文现比较细菌培养与涂片镜检在微生物检验中的应用效果。
二、现状分析微生物检验主要是对患者身体采集标本，通过合适的方法来处理标本，根据标本的检验表现，来判断患者身体是否存在一定疾病。
临床诊断中微生物检验是其常用方法，可为患者治疗提供相关依据。
近年来，随着人们生活水平的提高，对微生物检验质量提出了更高要求，应如何选择微生物检验方法至关重要。
三、问题确立随着现代技术的发展，医学技术也在向上发展，微生物检验是医院检验中较重要的一环，需引用更多的医学技术来提高临床检验率。
当前，临床对微生物的检验，常将细菌培养作为检验金标准，但细菌培养的时间相对较慢、镜检准确度较低，从而限制了检验效率。
在此背景下，本文对细菌培养与涂片镜检进行对比分析。
四、目的通过比较细菌检验与涂片镜检的检验，旨在提高临床检验准确率。
五、文献查证当前，临床学者对微生物检验方法进行了相关研究，且形成了深厚的理论基础。
如：马菊元[2]学者选择200例患者作为此次研究对象，均实施微生物检验，通过研究发现无菌体液标本合格率为100%,痰液标本符合率为80%。
杨绪良[3]学者选择300个样本进行对比，分别进行细菌培养和涂片镜检,结果发现300例标本中，涂片镜检合格率为86.33%，涂片镜检出的细菌检出率为74.13%。
以上研究充分证实涂片镜检可做出较精确报告，能够为临床提供合理用药。
六、实验方法1研究对象选取89例检验科不同类型标本者为此次研究对象，时间来源于我院自2020年1月-2021年12月，纳入标准：提供标本者年龄的超过18岁，不超过70岁；签署知情同意书；患者临床资料较完整；自愿参与此次研究。
基层医院检验科怎样做好生化质控
基层医院检验科怎样做好生化质控检验科为医院常见科室，是基础医学、临床医学桥梁，包括血液学、临床免疫学、临床微生物学、临床化学等，在疾病的诊疗中具有显著应用价值。
血液生化检验作为常规检测方法，广泛应用于疾病控制与疾病治疗中。
当前，我国医疗技术、临床诊断发展迅猛，生化检验要求逐渐提高，需加强室内质控与质间控制。
笔者将结合多年临床经验，总结基层医院检验科的生化检验的控制措施。
一、什么是生化检验生化检验就是只用生物或者是化学的方法，来对人进行身体检查。
或者说，生化检验是对身体进行一次全面的检查和对身体情况的一种了解，有时候也可以检查出来潜伏的疾病。
当前，临床常见的生化检查项目包括肝功能、肾功能、血糖、血脂、电解质，详细内容有:谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血清总蛋白、血清白蛋白、球蛋白、白蛋白与球蛋白之比、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白、血糖测定、肌酐、尿素氮、尿酸、乳酸脱氢酶、肌酸激酶，以及钾、钠、氯、钙离子测定等。
其中，肾功能包括肌酐和尿素氮，是反应人体肾功能的。
电解质包括钠、钾、镁，钙。
例如，我们常见的糖尿病患者的生化检验，检验样本包括指尖采血、静脉采血，由检验科护士采集血液生化检验标本，依据有关规定、皮肤采血和静脉采血要求，严格开展各项操作。
临床常用的生化检验常用的仪器是日立系列，东芝系列、奥林巴斯系列、贝可曼系列以及西门子，主要用于常规体检普查，也可以用于疾病的筛查和确证试验。
二、生化检验过程的误差产生原因分析血液的基本组成结构是最基础血液血液检查事项，包括有形细胞、液体连部分，在血液中，包含三种细胞，分别为血小板、白细胞、红细胞，不同细胞功能存在差异。
血液生化检验过程中存在诊断误差现象，受到多种因素影响，对疾病的治疗十分不利。
国内一项研究分析基层医院生化检验误差产生原因，结果显示，1000例样本中，58例出现标本不合格现象，占比5.80%，产生问题如下所示：20例抗凝不全，12例溶血问题，8例凝血问题，5例标本放置时间长，5例容器不合格，4例同侧采集血液，2例采血者准备不充分，1例标签不规范，1例标本污染。
如何加强基层医院微生物检验工作
如何加强基层医院微生物检验工作医院环境对病人的身体恢复有着不可忽视的影响，而由于医院中的病人患有各种各样的疾病，因此各种致病微生物也层出不穷。
所以，对医院微生物的检验是十分重要的。
一、基层医院微生物检验的工作现状1、微生物检验观念淡薄由于我国经济发展的快速进步以及人们生活水平的改善，导致人们所患的疾病也开始出现不同于以往的新症状，其中慢性病作为当今社会的主要病症之一，其有着很高的致病率和死亡率，而慢性病的诊断和治疗，微生物检验检验可以为其提供重要依据。
但基层医院医务人员因为各种条件限制，人员专业水平参差不齐、设备落后、检验科与临床科室沟通不畅等，导致基层医院的的微生物标本送检率低，医生送检意识不强。
2、检验教才陈旧通过对不同地区医院的微生物检验培训教材的抽样调查可以发现，大部分基层医院所使用的培训资料仍然是其他医学相关专业的简化版本，其中的主要内容没有针对当下医学研究的变化进行及时的更新，是脱离于临床实验的，培训课程所学的知识也只是对旧案例的讲解，不能及时学到最新的微生物检验新技术，不了解专业知识新进展。
二、如何加强基层医院微生物检验工作1、提高师资培训条件要实现理论和实践的一体化，优先要做到师资一体化，负责培训的教师要能做到及时“充电”，吸收新知识，掌握当下专业新技术，新进展。
还要做到对实践和理论两个方面内容的熟悉，能够通过容易被接受和理解的方式将实践和理论的教导结合起来，传授给基层检验人员，所以对于培训教师的综合能力要有很高的要求。
2、加强硬件配置条件而要想对理论实践一体化教学的结果进行审查，检验室是必不可少的。
因此为了保证培训质量，这就要要求检验室的设备质量要过硬，才能使培训教师在培训过程中能够通过现场实验的方式提高教学的质量，让理论实践一体化培训能够在良好的环境中进行。
要想从根本上完善院内微生物检测，就要从以下三个方面入手:(1) 建立微生物检测思想，提高对微生物检测结果价值的重视程度。
临床微生物检验在控制医院感染中的作用
临床微生物检验在控制医院感染中的作用摘要】伴随着现代医学的迅速发展，各种学科新技术的渗透，新材料、新方法、侵袭性技术应用于临床，给临床诊治患者带来便利的同时，不可避免地造成医院感染。
如何趋利避害、控制医院感染，已成为当前医学发展中的重要环节。
本文结合笔者的研究实践，探讨临床微生物检验在控制医院感染中发挥的作用及价值，以供参考。
【关键词】临床;微生物检验;医院感染;控制效果;作用价值多年的实践发现，医院感染的发生有三个重要的环节, 包括传染源的存在、传播途径和易感人群,每个环节都和微生物学检验有着极为密切的关系。
医院感染的发生有两种类型，外源性感染和内源性感染。
要对不同类型的感染作出正确的诊断，必须进行微生物学检验。
因此，微生物检验是医院感染监控的重要手段，在医院感染的诊断、监测、病原学调查、消毒灭菌效果评价，特别是抗菌药物的合理使用等方面具有极其重要的作用。
1.医院感染中微生物检验应用现状分析医院临床过程中，感染风险较大，加上使用抗菌药物，引发用药的不良反应，提高并发症的发生概率。
在基层医院当中，检验者由于其的专业能力有限，并且还受到检测仪器与设备的影响，将会造成微生物的检验速度缓慢，未能满足实际医院感染预防的工作需要。
据有关的资料显示[1]，我国国内大部分医院在进行微生物的检验当中，容易出现假阳性与假阴性的情况，最终出现临床的漏诊以及误诊等的现象，此外，在控制医院感染过程中，仍忽视了条件致病菌与致病菌的鉴定环节，而且对细菌感染关系没有进行的探讨，致使医院感染的范围进一步扩大，人群受到感染的可能性也会加大。
2.微生物检验在控制医院感染中的作用2.1诊断感染性疾病不同种类的微生物能够导致医院感染，需要对微生物学进行检验，更好地为临床控制提供有效诊断与参考价值。
近年来，疾病的不断增多使得更多的抗菌药物在临床上得到普遍应用，不利于医院的临床管理，因此采取有效的预防措施对感染进行控制，同时还应该对病原学进行诊断检验、进行药敏试验等方面的分析，有效地控制感染，防止其的进一步蔓延，有利于病患与医护人员的健康。
临床微生物学检验标本课件
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常见病原体
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◈真菌血症
病原体：真菌 特点：
☆多数伴有细菌感染 ☆主要发生于菌群失调患者 ☆常可播散累及肝、肺、和心内膜等
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脑脊液
采集方法
◈ 腰椎穿刺术 ◈ 小脑延髓池穿刺术 ◈ 脑室穿刺术
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采集量：1～3ml 送检要求
☆置无菌管内立即送检，不超过1h。 ☆特殊培养保温送检或床旁接种。
物的培养基 ◈ 间歇性寒战或发热：寒战或发热高峰到来之前
0.5～1h、寒战或发热后1h采血
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特殊的全身性和局部感染患者采血培养建议
♦ 可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨 髓炎、关节炎或肺炎，应在不同部位采集2～3份血 标本。
♦ 不明原因发热，先采集2～3份血标本，24～36h后 估计体温升高之前再采集2份以上。
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◈ 烧伤创面感染最常见G-杆菌感染（如铜绿假单胞 菌）
◈ 急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、溶血 性链球菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌感染导致
◈ 慢性化脓性骨关节炎、慢性骨髓炎常由结核分枝 杆菌感染引起
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痰液
标本采集
➢ 采集指征：有下列指征时，应采集痰标本
◈咳嗽、咳痰
乙型脑炎病毒
新型隐球菌
柯萨奇病毒A
白色假丝酵母菌
柯萨奇病毒B
钩端螺旋体
脊髓灰质炎病毒
新肠道病毒68～71
狂犬病毒
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临床意义
➢ 正常人脑脊液无菌 ➢ 病原体通过血脑屏障进入中枢神经系统引起
临床微生物学检验标本的采集
快速运输
03
在运输过程中应尽量缩短时间，选择适当的交通工具，保持容
器密封、避光、防震，以确保标本质量不受影响。
05
临床微生物学检验标本采集的常见问
题及解决方案
采集方法不当
总结词
采集方法不正确可能导致微生物污染或样本质量下降，影响检验结果的准确性。
详细描述
采集过程中应遵循无菌操作原则，正确使用采集工具，避免交叉感染。对于不同种类的标本，应采用不同的采集 方法和注意事项。
尿液标本
尿常规检查
检测尿液中的蛋白质、糖、酮体等成分，辅助诊断肾脏疾病和糖尿病等。
尿培养
用于检测尿液中的病原菌，如尿路感染等。
粪便标本
粪便常规检查
检测粪便中的红细胞、白细胞、寄生 虫等，辅助诊断消化道疾病。
粪便培养
用于检测粪便中的病原菌，如细菌性 痢疾等。
呼吸道标本
痰液检查
通过痰液中的细胞和病原菌，辅助诊断呼吸道感染。
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采集时机不当
总结词
采集时机不合适可能影响微生物的存活和繁殖，进而影响检验结果。
详细描述
应根据检验目的和要求选择合适的采集时机，如空腹采集血液、尿液等。同时，应注意采集过程中的 时间控制，避免长时间暴露在空气中。
采集容器选择不当
总结词
采集容器选择不当可能导致微生物死亡或繁殖受限，影响检验结果。
详细描述
量。
减少外界干扰
在采集过程中应尽量减少外界因 素的干扰，如避免过度挤压、避 免接触非采集部位等，以降低外
界微生物的混入。
采集后的保存和运
及时处理
01
采集后的标本应及时进行处理，避免长时间放置，以免影响微
高通量测序技术在临床感染性疾病实验室诊断中的应用
高通量测序技术在临床感染性疾病实验室诊断中的应用【摘要】随着测序技术的不断进步，高通量测序技术在临床实验室中受到越来越多的关注，其在感染性疾病的诊断和治疗中有着重要价值。
与传统的微生物实验室诊断手段相比，高通量测序技术在对复杂和混合感染的诊断、敏感性、准确性、检测时间等方面均显现出优势。
然而，该技术在检测规范、成本、报告解读等方面还有一些问题亟待解决，在感染诊断的临床应用中仍存在许多挑战。
近年来，在国家政策的支持与规范下，测序行业持续健康发展，其应用市场也逐渐走向成熟；同时，国内外微生物专家努力推动相关共识及标准的形成，医院也在提高实验室测序相关仪器以及人员和知识储备，以促进高通量测序技术的临床应用，充分利用其优势，使其更好地服务于临床诊疗。
本文主要从高通量测序技术在临床微生物感染性疾病实验室诊断中的应用现状以及政策体系支持及发展方向等方面进行阐述。
微生物感染性疾病具有较高的发病率，不能及时诊断、治疗会带来严重的后果，是导致人类死亡的重要原因。
感染性疾病实验室检测能够及时准确地为临床提供客观的医学数据，对临床病情的诊断以及针对性治疗方案的确定有着积极意义，是各级医疗机构控制感染不可或缺的检测项目。
传统的感染性疾病实验室检测方法，如炎性标志物和细菌分离培养在解决临床问题方面尚存在局限性。
高通量测序技术可直接获取样本中的物种基因信息，实现微生物的鉴定，已经逐渐从科研走向临床应用，成为临床微生物实验室诊断的重要手段。
01、临床微生物感染性疾病实验室诊断1. 临床微生物感染性疾病实验室诊断的重要性实验室诊断是临床感染性疾病诊断最直接、最客观的证据之一。
常规感染性疾病实验室诊断可分为感染相关标志物检测和病原体检测两大类。
人体感染病原微生物后，由于免疫系统应答会出现一系列生理和病理反应，继而产生与感染相关的特异性生物标志物改变。
通过检测感染特异性生物标志物可帮助临床医师进行感染性疾病的诊断或鉴别诊断、指导药物使用、评估病程进展和判断预后。
如何做好基层卫生微生物检验
如何做好基层卫生微生物检验微生物检验是临床医学中重要的检查手段之一，可以帮助医生诊断和治疗疾病。
在基层卫生服务中，微生物检验也扮演着重要的角色。
然而，由于基层医疗卫生服务的特殊性，基层卫生微生物检验存在一些困难和挑战。
如何做好基层卫生微生物检验，保障检验结果的准确性和可靠性，是基层医疗卫生服务的重要问题之一。
1.建立规范化的微生物检验流程标本采集：标本采集是微生物检验的关键环节，采集前需要告知患者注意事项，如禁食、禁药等，避免影响检验结果；采集时需要使用无菌器具，避免污染；不同类型的标本采集方法不同，需要根据标本类型选择合适的采集方法。
标本运输：标本运输是微生物检验的重要环节，需要在规定时间内送达检验实验室，运输过程中需要避免温度过高或过低、震动等不良影响；运输时需要使用密闭容器，避免标本泄漏或污染。
标本处理：标本处理需要在无菌条件下进行，避免污染；不同类型的标本处理方法不同，需要根据标本类型选择合适的处理方法。
培养：培养条件需要根据不同的微生物类型选择合适的培养基和培养条件；时间需要根据不同的微生物类型选择合适的培养时间。
鉴定与药敏试验：需要根据不同的微生物类型选择合适的鉴定方法、鉴定试剂和药敏试验方法、药敏试剂。
均需要在无菌条件下进行，避免污染。
建立规范化的微生物检验流程需要注意以上细节，以确保检验结果的准确性和可靠性。
同时，需要根据实际情况不断完善和优化微生物检验流程，提高检验效率和质量。
2.保证标本采集的质量保证标本采集的质量是微生物检验的重要保障，在进行标本采集前，需要告知患者注意事项，如禁食、禁药等，避免影响检验结果。
例如，如果需要采集尿液标本，需要告知患者在采集前不要进行排尿，以便采集到足够的标本量。
采集时使用无菌器具，需要使用无菌针头和无菌采血管。
标本采集部位的选择也很重要，不同类型的标本采集部位不同，需要根据标本类型选择合适的采集部位。
例如，采集咽拭子标本时需要采集咽喉后壁，避免采集到口腔表面的细菌。
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• 涂片镜检： 初步判断细菌革兰染色阴、阳性，球菌、 杆菌、酵母菌等。
革兰阳性
革兰阴性
• 影响因素：涂片过厚将使脱色不完全，酒 精脱色时间过长将导致过度脱色；染液储 存过久由于蒸发而影响浓度，特别是碘液 久存或见光而形成碘酸，失去媒染作用； 95%酒精如果密封不佳易挥发，失去脱色 作用；细菌形态学检查以对数生长期的细 菌形态最为典型，菌龄过长易致阴性。
结果报告的解释
• 敏感
是指分离菌株能被使用推荐剂量在感染部位 通常可达到的抗菌药物浓度所抑制。
• 中介
包括这些菌株，其抗菌药物 MIC 接近于血液 和组织中通常可达到的水平，而抗微生物药治疗 的反应率可能低于敏感株。“中介”分类意味着 药物在生理浓集的部位具有临床效力(如尿液中的 喹诺酮类和β-内酰胺类)或者可用高于正常剂量的 药物进行治疗(如β-内酰胺类)。
5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放 置3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。
6.根据选择的菌株挑选相应的抗菌纸片。
◆肠杆菌科：氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林/ 他唑巴坦、
头 孢噻肟、环丙沙星、亚胺培南、氨曲南、庆大霉素；
◆铜绿假单胞菌：头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、阿米卡
星、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南；
结果报告的解释
• 耐药
是指分离菌株不被常规剂量用药通常可 达到的药物浓度所抑制，和/或证明抑菌环 直径落在可存在某些特定的微生物耐药机 制范围(如β-内酰胺酶)，并且治疗研究显示 药物对分离菌株的临床疗效不可靠。
关于药敏报告！
• 不是所有的抗生素都需要做药敏实验，可 以根据已报告的某种药物进行推定； • 3天之内的同患者同部位重复分离株可以不 用重复进行药敏试验，但除这期间外的重 复分离株必须再次测定。
细菌的形态
细菌主要有三种形态，即球形、杆形、螺形。据 此将细菌分为三大类：球菌、杆菌、螺形菌。
球菌
1、双球菌 2、链球菌 3、葡萄球菌 如脑膜炎双球菌 如乙型溶血性链球菌 如金黄色葡萄球菌
脑膜炎奈瑟菌
链球菌
葡萄球菌
杆菌
单杆菌 如大肠杆菌 链杆菌 如炭疽芽孢杆菌 棒状杆菌 如白喉棒状杆菌 分枝杆菌 如结核分枝杆菌 球杆菌
如何开展临床微生物检测？
软硬件设施建立： ★人员素质 ★仪器设备 ★标准化的操作体系
人员素质
◆应该掌握临床微生物基本知识；
◆掌握细菌鉴定及药敏试验基本操作技能； ◆掌握常用培养基的配制； ◆ 熟悉微生物检验室内质量控制规则。
需配备的设施条件、仪器设备
◆设施条件： 符合生物安全的独立实验用房，分区设置 合理（样本处理区、无菌区、转种区）。 ◆仪器设备： 超净工作台（生物安全柜）、高压灭菌器、 普通培养箱、CO2培养箱（烛缸）、冰箱、 接种环、电热灭菌器（酒精灯）、光学显 微镜等。
操作方法 ： 1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。
2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。
4.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次 转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。
需配备的设施条件、仪器设备
◆试剂： 接种标本用：哥伦比ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ血平板、麦康凯平板、巧克力
平板、真菌显色平板、淋球菌平板等；
细菌鉴定用：氧化酶、触酶、靛基质、甲基红、VP、
枸橼酸盐、氨基酸脱羧酶、胆汁七叶苷、6.5%NaCL等；
药敏实验用：各种抗生素纸片、MH平板、HTM平板
等；
观察细菌形态用：革兰染液、抗酸染液。
基层医院如何开展临床微生物检测
襄阳市中心医院临床检验部微生物室 邹玖明
• 为什么要开展临床微生物检测？----必要性 • 如何开展临床微生物检测？----软硬件设施 建立！ • 细菌鉴定基本知识及技能！ • 有关抗菌药物敏感性实验的方法学！ • 保证检验质量的准确性！----质量控制
为什么要开展临床微生物检测？
举例：
肺炎链球菌对苯唑西林的抑菌环 ≥20mm的菌株对青霉素亦敏感 (MIC≤0.06μg/ml)，并经临床证实可以认为 对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、 氨苄西林/
舒巴坦、头孢克洛、头孢地尼、头孢吡肟、 头孢他美、 头孢克肟、头孢噻肟、头孢丙烯、头孢 布烯、头孢曲松、 头孢呋辛、头孢泊肟、头孢唑肟、厄他培南、亚胺培南、 氯碳头孢和美洛培南敏感，所以不需要再测定这
• 不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。
大 中 小
炭疽芽胞杆菌 3-10 μ m
大肠埃希菌 2-3 μ m
布鲁菌 0.6-1.5 μ m
杆菌的形态多样
两端齐平 两端尖细
炭疽芽胞杆菌
白喉棒状杆菌
• 掌握细菌的镜下形态结构对于细菌鉴定很 重要！ • 某些特殊细菌的直接镜检报告对于临床疾 病具有诊断意义！如：抗酸染色、分泌物 涂片查革兰阴性双球菌。 • 血液、脑脊液的阳性培养需要即时报告细 菌的革兰染色结果，根据细菌的染色性、 排列方式、形态可以初步区分种类。
抗生素的中国式滥用！
一个鲜明的对比： 医院抗菌药物年使用率 74% 中国
•
VS
22%~25% 美英等发达国家
-----2006-2007年度卫生部全国细菌耐药监测
★世界上没有哪个国家如此大规模地使用抗生素★
＊中国的住院患者中抗生素的使用率高达70%，其中外科患者几乎人人都用抗 生素，比例高达97%。
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
原理：
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试 菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中 水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度 浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长 被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
菌落的肉眼观察
观察要点：菌落大小、颜色、溶血性、形态、表面光泽、 湿润或干燥等。 菌落大小：肠球菌、链球菌菌落小、肠杆菌科细菌菌落大 （与培养时间、营养状态亦有关系）； 颜色：PAE产绿色素、粘质沙雷菌菌落红色、SAU菌落金黄 色； 溶血性：α、β、γ 溶血； 形态：圆形、凸起、扁平、不规则锯齿形； 表面光泽：PAE具有特殊的金属光泽； 湿润/干燥：BCA菌落干燥易破碎、革兰阴性杆菌菌落湿润。
7.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面， 一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中 心距离应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
8.经过35℃16～24h孵育。
9.取抑菌环直径，根据CLSI标准，报告细菌对该 抗生素敏感(S)、耐药(R)、中介(I)。
E-TEST
原理：
E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体，一面固定有一系 列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数 和判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度 的宽度范围。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过 夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻 度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，对照CLSI标准判 断其敏感、耐药、中介。
6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条 的相交处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低 抑菌浓度(MIC) 。
如何来确定常规报告的抗菌药物种类？
• 根据采用的方法学不同：K-B法、MIC法；
★不是所有种类细菌都能采用K-B法报告药敏结果； ★不是所有细菌都有明确的折点判断标准。
• 根据自己医院内使用的抗菌药物种类； • 由医院医务处、药学部、检验科微生物室共同 商讨制定。
• • • • • •
• 菌落形态大小与培养时间长短、培养基种 类有关系； • 不同平板上相同的细菌具有不同的形态特 征； • 不同的细菌在相同的平板上也可以菌落形 态相似。
细菌 鉴定
• • • • • 涂片镜检 趋向性反应实验 根据不同种属细菌选择生化反应 根据主要的生化反应结果判定细菌种类 商品化的鉴定试剂条、细菌鉴定仪
最重要的两个原因： 不断增加的细菌耐药性！ 促进抗生素的合理使用！
政策性文件
• 卫医发〔2004〕285号:卫生部关于施行<抗菌药物 临床应用指导原则>的通知 • 卫办医发〔2006〕133号：卫生部办公厅关于进一 步做好抗菌药物临床应用和细菌耐药监测工作的 通知 • 卫办医发〔2008〕48号: 卫生部办公厅关于进一 步加强抗菌药物临床应用管理的通知 • 卫办医发〔2008〕130号:卫生部办公厅关于加强 多重耐药菌医院感染控制工作的通知 • 卫办医政发〔2009〕38号：卫生部办公厅关于抗 菌药物临床应用管理有关问题的通知
◆葡萄球菌属：头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉素、环
丙沙星、庆大霉素；
◆肠球菌属：青霉素 、万古霉素 、四环素 、高浓度庆大 霉素、环丙沙星、氨苄西林； ◆不动杆菌属：头孢他啶 、亚胺培南、阿米卡星、头孢吡 肟 、米诺环素； ◆洋葱伯克霍德菌：头孢他啶 、米诺环素、甲氧苄啶/磺胺 异噁唑 ；
◆嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙星、 米诺环素。
◆质控菌株：
ATCC来源、室间质评来源。
药敏质控必备的三个菌株：
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
ATCC25922
ATCC27853
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
标准化操作体系
应该建立一套微生物检测的标准化操作体系，其 参考资料可以来源于：《全国临床检验操作规程》、 《试剂盒说明书》、定期更新的CLSI文件等。
已经培养阳性的患者为何还要定期做重复的培养
体系内应该包含但不限于以下内容： • 各级检验人员的职责和权限 • 实验室安全措施 • 各类标本采集和处理方法 • 细菌检验项目 • 培养基和试剂的配制方法 • 室内和室间质量控制