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生化检验——载脂蛋白测定及脂蛋白电泳

生化检验——载脂蛋白测定及脂蛋白电泳

高β脂蛋白血症 宽β脂蛋白血症
Ⅱa

Ⅱb

Ⅲ无
高前β脂蛋白血症 Ⅳ 无
高前β脂蛋白血症 Ⅴ ↑↑ 伴高乳糜微粒
βLP
preβLP
正常或↓ 正常或↓
↑↑
正常或↓
↑↑

宽β带(由β至前β)
正常或稍↓
↑↑
正常或稍↓
↑↑
αLP 正常或↓
正常 正常 正常 正常或↓ 正常
拓展资料一
拓展资料二
血浆脂蛋白的组成特点
2、 修饰并影响脂蛋白代谢途径的酶
Apo
AⅠ AⅡ B100 B48 CⅡ CⅢ E a
生理功能
LCAT辅因子,激活LCAT的活性 激活HTGL,抑制LCAT 转运TG、胆固醇、识别LDL受体 转运TG LPL辅因子、激活LPL活性 抑制CⅡ与LPL活性 促进CM残粒和IDL摄取,运输TG,识别LDL受体 抑制纤维溶酶活性
三、LP(α)
LP(a)是利用免疫方法发现的一种独立的脂蛋白, 不能转化为其它脂蛋白。含特异的载脂蛋白Apo(a) LP(a)被认为是ASCVD的独立的危险因素。 主要与遗传有关,基本不受年龄、性别、体重和 用药的影响。 呈偏态分布。个别人高达1000mg/L,80%的正 常人在200mg/L以下。 若高于300mg/L,患冠心病的风险明显增加。
第十七章 血脂及血浆脂蛋白检验
生化检验
第三节 血清载脂蛋白测定
目录
1.ApoAⅠ测定 2.ApoB测定 3.Lp(a)测定
载脂蛋白的生理功能
1.构成并稳定脂 蛋白的结构
Apo
AⅠ AⅡ B100 B48 CⅡ CⅢ E a
构成的脂蛋白
HDL,CM HDL,CM VLDL,IDL,LDL CM CM,HDL,VLDL CM,HDL,VLDL CM,VLDL Lp(a)

载脂蛋白PPT课件

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④免疫印迹分析
取出转移后的NC膜在洗涤液中洗3次后,置封 闭液中室温封闭3h(或37℃1h
在洗涤液中洗3次
加入1:100稀释的第一抗体并充分混匀,37℃ 温浴6h(或过夜)
用洗涤液洗5次(10min×5)甩干
加入1:500稀释的第二抗体,混匀,37℃作用 2h
洗涤同上
加入新配制的底物溶液于室温下摇动直至出现 紫色(或紫褐色)并看到背景(1~5min)时 用蒸馏水冲洗终止反应,空气干燥封于塑料袋
Marcovina等
应用SDS-1.5%agarose凝胶电泳结合 免疫印迹技术,首次报道人类至少 有35种Apo(a)异构体,此法是在 Kamboh等法基础上发展起来的一种 高分辨的分析方法。
上述两类方法有许多共同点,即首先 采用电泳技术将Apo(a)与其他载 脂蛋白分离,然后Western blotting,灵敏而特异地显示Apo (a)多态区带的位置,最后根据其 与ApoB100电泳速率比较或根据其分 子量大小而确定Apo(a)表型。
免疫印迹反应中也可选用鼠抗人Apo(a) 单克隆抗体作为一抗,用酶标兔抗鼠IgG 作为二抗。
应用酶标抗体反应作为二抗时,底物以 脂溶性4-氯-1-萘酚或联茴香胺较水溶性 DAB溶液为好
金标、I125标抗体作为二抗,通过银染或 放射自显影技术显示Apo(a)蛋白区带
将生物素标记的抗体作为二抗,通过生 物素-亲和素系统放大信号,可大大提高 检测敏感性
③电转移
取此凝胶,切下分子量蛋白带放入SDS洗脱 液中过夜,以固定凝胶大小并洗脱掉未与蛋 白结合的SDS,0.01%考马斯亮蓝G-250染色 室温1h,7%乙酸脱去背景颜色。
剩余凝胶铺在已浸过转移电泳缓冲液的NC膜 上,搭建滤纸/凝胶/NC膜/滤纸一同放在电 泳转移支架上,按层次相夹置于装满转移电 泳缓冲液的电泳槽中。120V电泳6h(30℃以 下)或4℃30V转移过夜

脂蛋白脂肪酶

脂蛋白脂肪酶

固醇)的代谢过程。
LDLR途径依赖于LDLR介导的细胞膜吞饮作用完成
LDL与有被小泡与溶 酶体融合后,LDL经溶酶 第2步 体酶作用: CE→Ch+FFA TG→FFA ApoB→AA LDL被溶酶体水解形 成的游离胆固醇再进入 胞质的代谢库,供细胞 膜等膜结构利用。 第l步
第4步 第5步 第3步
Lp(a) 临床意义
1、Lp(a)是冠心病的一个独立危险因素。不受饮食、运动、 吸烟、酗酒及年龄等因素所影响,主要由遗传因素决定。 2、血浆Lp(a)的危险性临界水平一般在0.2-0.3g/L,如超过 >0.30 g/L则AS的危险性上升2倍,如同时伴有LDL-C上 升,CHD的相对危险性上升5倍。且LP(a)水平越高,发 生CHD则越早。 3、Lp(a)具有多基因遗传特性,有CHD家族史者,Lp(a)阳 性率明显高于无家族史者。 4、高Lp(a)与颈动脉粥样硬化和脑动脉梗塞也有明显关系。
第四章
血浆脂蛋白及其代谢紊乱
(Plasma Lipoproteins and Its Metabolic Disorder)
长沙医学院
李子博
主要内容
一、血浆脂蛋白及其代谢
二、脂蛋白代谢紊乱
三、脂蛋白代谢紊乱与AS 四、高脂蛋白血症的预防和治疗 五、脂蛋白和脂质测定
第一节
血浆脂蛋白
一、血浆脂蛋白定义
2. 参与Ch的逆向转运和组织中过量Ch的清除。
四、羟甲基戊二酸单酰CoA (HMG CoA)还原酶
分布与特性
凡能合成胆固醇的组织细胞均有该酶存在。含量 较多的场所是:肝、皮肤、肾上腺、性腺等。
功能
该酶为胆固醇合成的限速酶。
五、胆固醇酯转移蛋白(CETP)
来源与性质:

脂蛋白-(讲)

脂蛋白-(讲)

血脂异常的危害





发生在心脏,就引起冠心病; 发生在脑,就会出现脑中风; 如果堵塞眼底血管,将导致视力下降、失明; 如果发生在肾脏,就会引起肾动脉硬化,肾功 能衰竭; 发生在下肢,会出现肢体坏死、溃烂等。 高血脂可引发高血压、诱发胆结石、胰腺炎, 加重肝炎、导致男性性功能障碍、老年痴呆等 疾病。 最新研究提示高血脂可能与癌症的发病有关。
遗传性缺陷
迄今已发现 脂蛋白代谢关键酶 如LPL及LCAT, 载脂蛋白 如apoCⅡ、B、E、AⅠ、CⅢ, 脂蛋白受体 如LDL受体等的遗传缺陷,并阐 明了其与某些高脂蛋白血症的关系及上述疾病发 病的分子机制。
脂蛋白肾小球病


脂蛋白肾小球病的发病机制尚未完全阐明,多数认为与脂 质代谢异常有关。 本病与家族性Ⅲ型高脂血症有许多相似之处:血浆总胆固 醇、三酰甘油以及apo E水平均升高,电泳显示前β脂蛋 白带增宽,有肾病综合征的表现等。 本病的apo E基因表现型杂合子apoE2/2为主,故认为这 种异构体也存在着与脂蛋白受体结合能力缺陷而致血浆脂 蛋白水平升高。有学者从apo E异构体氨基酸分析发现这 些异构体的一级结构不同,其145位精氨酸被脯氨酸所取 代,从而推测是否由于氨基酸的更换,影响到载脂蛋白结 构以至影响到脂蛋白的结构,从而容易在肾小球内沉积, 直接造成肾小球的损伤。
Components (% dry weight) 15 20 40–55 31 10 8
free cholesterol
cholesteryl esters phospholipids
【高脂血症临床表现】
脂质在真皮内沉积所引起的黄色瘤
脂质在血管内皮沉积所引起的AS, 产生CHD和周围血管病等 家族性高胆固醇血症所引起的角膜弓 TG的大颗粒脂蛋白沉积在眼底小动脉上引起脂血症眼底改变 纯合子家族性高胆固醇血症所引起游走性多发性关节炎 高甘油三酯血症所引起急性胰腺炎

TBA、LPa、CYC、hsCRP的临床应用

TBA、LPa、CYC、hsCRP的临床应用
31
在高血压病中的应用
32
40%以上的高血压病患者在中、晚期可并发 高血压肾病,高血压致肾损害分三个阶段: 第一阶段:肾小球滤过率基本正常,而肾 内压增加; 第二阶段:肾小管高压性损伤,出现α 微 球蛋白及肾小球早期损伤,血CysC升高;
第三阶段:肾小球硬化,肾小管萎缩,血
CysC明显升高。
且血清胱抑素C的浓度随病情的严重程 度而升高。
41
小结
综上所述,血胱抑素C是反映GFR早期变化
的敏感指标,对于儿童、老人和肌肉损伤
等特殊患者,胱抑素C的测定有更重要的价 值。胱抑素C已在临床肾脏损害、心脏疾病、 脑血管疾病等多个领域得以应用,显示了 很好的应用前景。
42
四、超敏C反应蛋白(hsCRP)
21
在风湿病、类风
湿关节炎和其他
炎症性疾病LP(a)
也升高。
22
小结
LP(a)与许多疾病的关系已得到肯
定,2003年血脂专家委员会建议把LP
(a)列为血脂常规检测项目之一,同 年卫生部的血脂质评项目也增加了LP (a)。
23
三、胱抑素C (CysC)
一种评价早期肾功能损害的新指标。
1983年Anastasi等首次在鸡蛋清中分离出
37
7、在化疗中的应用 化疗药物对肾小管有一定的损伤,很可
能会导致肾功能的损害。因此在进行化疗
时,应关注其肾脏功能的状况。 有研究表明:化疗的肿瘤病人,CysC与 GFR的相关性(r = 0.84)比Scr好(r = 0.74)。
38
8、 CysC与肝纤维化 Takeuchi等发现血清CysC浓度与肝组织纤 维化程度密切相关,同时还观察到CysC浓 度和透明质酸、Ⅳ型胶原浓度、血清总胆 红素、白蛋白、血小板水平高度相关。说 明血清CysC浓度的增高与慢性肝病的进展 有关,可作为肝脏纤维化的指标之一。

LPA培训资料

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*3rd Party Containment *Premium Freight *Administrative costs *Warranty Costs *Reputation *Lost market share *Lost business
5
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CHRYSLER GROUP
1. Layered Process Audit Plan 逐层过程审核计划
LPA Definitions and Requirements 逐层过程审核定义和要求
ISO/ TS 16949 ➢ DaimlerChrysler Customer Specific Requirements 戴姆勒-克莱斯勒用户特殊要求
▪ New section under Internal Audits 正对新章节进行内部审核 ▪ Effective 7/01/04 for Powertrain & Component Plants suppliers; 动力总成及其零部件的供应商于7/01/04日开始执行; 1/1/05 for all remaining suppliers 对所有其余的供应商于1/1/05年开始执行 ➢ Posted on AIAG, IAOB, and QMS web sites 在AIAG, IAOB, 和QMS网站上发布 ➢ Letter mailed to all suppliers 信函已经发给了所有的供应商

脂蛋白a医学PPT课件

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谢谢大家
26
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病理机理

血 浆 中 高 水 平 LP(a) 与 动 脉 粥 样 硬 化 关 系 密 切 。 LP(a) 可以抑制血栓溶解和增加细胞分裂,促进动 脉粥样硬化的形成。 LP(a) 可刺激人的平滑肌细胞 生长: LP(a) 可结合到内皮细胞、巨噬细胞等表面, 竞争性抑制纤溶酶的活性,从而抑制血栓溶解; LP(a) 可影响转化生长因子 β(TGF-β ) 的活性 (TGF-β 是平滑肌细胞增生的抑制剂,纤溶酶可激活TGF-β), 当竞争性的抑制与细胞表面有关的纤维蛋白溶酶活 性时,也间接造成TGF-β 活性下降,从而促使平滑 肌细胞增殖,导致动脉硬化。

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Apo(a) 分子大小的不均一性对不同测量程序的测定结果影 响程度不同,即抗体对不同分子大小的 Apo(a)反应性和亲 和性间的差别,可导致不同程序测定结果间的不可比性。 因此不同测量程序、商品试剂盒的测定结果存在着差异
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LP(a)测定结果除受Apo(a)大小影响之外,抗体性能的差异、 分析方法的准确性和敏感性、样品的处理和贮存条件、贮 存时间等因素均存在影响,导致不同方法间缺乏可比性。 因此即使建立了参考系统也难以消除 Apo(a) 大小差异带来 的LP(a)测定值的偏差。
5
LP(a)与AS

AS是与脂质代谢异常有关系的慢性非特异性炎症反应。有 研究发现,血清LP(a)水平>300mg/L时,AS发生的危险性 上升 2 倍,如果低密度脂蛋白和 LP(a) 的浓度均较高时,其 相对危险性可增加5倍。
6
LP(a)可能主要通过以下途径致AS作用:(1)

1)促进泡沫细胞的形成。 血管内皮细胞是AS的主要靶细胞,LP(a)能破坏受 体介导的内皮舒张功能,导致内皮功能失调;LP(a) 通过一些途径穿过血管内皮而积聚在动脉内膜处, 参与泡沫细胞的形成; LP(a)可能通过受体途径及非受体途径被巨噬细胞 摄取,致使细胞内胆固醇堆积变成泡沫细胞; LP(a)可以使血小板蛋白激酶-e底物即47kd蛋白磷 酸化,提高血小板蛋白激酶-e活性,使血小板活化, 促进AS斑块的形成; LP(a) 抑制转换生长因子 -β1 ,刺激平滑肌细胞的 增殖。

LpPLA(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A)定量检测试剂盒文稿演示

LpPLA(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A)定量检测试剂盒文稿演示

小型坏死脂质池
厚纤维帽
薄纤维帽
大型坏死脂质池
血管腔
血管腔
血栓
Lp-PLA2 稳定斑块
• Lp-PLA2 含量较低(深色染色) • 纤维帽厚,胶原含量高 • 小型坏死脂质池 • 炎症程度较轻
Lp-PLA2
易损斑块 • Lp-PLA2 含量较高(深色染色) • 纤维帽薄,胶原含量低 • 大型坏死脂质池 • 炎症程度较重
摘自《动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展》
中国工程院院士,美国心脏病 学院院士,著名心血管专家 张运教授
临床一线期待已久
“我国一年心外科手术量已达到18.5万例,但还远不能满足我国 患者需要,原因就在于我国心血管疾病发病率太高,每年新增冠心病 患者300万。因此预防的作用比治疗更重要,并且其社会效益要远高 于手术。而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为心血管疾病预防提供了一 个有力武器。” ——中国医师协会心脏外科医师分会副会长 孙立忠
国内专家一致认可
中华医学会心血管病学分会 主任委员,著名心血管专家
胡大一教授
——“脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是 血管内皮炎症的独立危险因子,也是目前 检测血管内皮炎症的新指标。对心脑血管 栓塞性疾病的预测、治疗和预后的判断具 有重要意义。”
摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告
——“脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)已 成为AS抗炎治疗的新靶点,初步研究发现 通过抑制磷脂酶A2,可以减少血管壁脂质 的沉积和巨噬细胞的浸润。”
的炎性反应标志物
内容
• 心脑血管疾病现状及研发背景 • Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系 • 临床研究 • 临床意义 • 康尔克Lp-PLA2定量检测试剂盒简
介 • 产品详解与注意事项
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最近一项研究结果表明,经常吃鱼者较素食者的平 均血浆Lp(a)浓度可降低48%,这可能是由于鱼肉中 含有大量的多不饱和脂肪酸的缘故.有报道饮食中 被补充维生素C,维生素E,胡萝卜素等维生素或适当 摄取抗氧化剂类药物,可降低Lp(a)在体内的氧化修 饰,从而达到预防及辅助治疗动脉粥样硬化等心,脑 血管栓塞性疾病的目的.
LP(a)的简单介绍
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一.LP(a)的结构及代谢
1963年Berg在血浆脂蛋白电泳时发现β-脂蛋白部分有一种新的抗原成分 ,并与LDL结合,将此抗原成分命名为脂蛋白(a)。其后证实,LP(a)核 心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇脂等脂质和载脂蛋白B100组成, 结构类似LDL,但还含有一独特的Apo(a),后者在其它任何脂蛋白中都不 存在。 研究表明,肝脏是合成Apo(a)的主要场所。LP(a)与LDL不一样, 并不是由VLDL转化而来,也不能转化为其它脂蛋白,系一类独立的脂蛋白。 人类LP(a)代谢的突出特征是,个体间LP(a)水平可相差100倍, 但同一个体血浆LP(a)水平的变化则相对较小。个体间LDL受体缺陷可影响 LP(a)浓度,可费标准和组合套餐
LP(a)单项收费标准为20元。 小血脂:TG、CHOL、HDL、LDL、APOA、APOB 48元 大血脂:TG、CHOL、HDL、LDL、APOA、APOB、LP(a)68元 小血脂全套=小血脂+血糖 52元 大血脂全套=大血脂+血糖 72元
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谢谢您们耐心的倾听!
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五.相关链接
鱼类:鱼类所含的饱和脂肪极低,尤其是来自深海的冷水鱼类,含有 大量的W-3脂肪酸,据美国科学家的研究证明,服用W-3脂肪酸(EPA 和DHA补充剂)的人,胆固醇和三酸甘油脂的含量、血液粘稠度均有 降低。 大蒜:大蒜具有明显的降血脂和预防动脉硬化的作用,并能有效防止 血栓形成。经常食用大蒜,能够对心血管产生显著的保护作用。美国 研究人员发现,每天吃半颗蒜头,可帮助某些人降低10%的胆固醇。 洋葱:洋葱是极少数含有前列腺素A的蔬菜,前列腺素A是一种较强的 血管扩张剂,能够软化血管,降低血液黏稠度,增加冠状动脉血流量 ,促进引起血压升高的钠盐等物质的排泄,因此既能调节血脂。洋葱 中含有一种洋葱精油,不仅可降低胆固醇,改善动脉粥样硬化,还能 升高“好胆固醇”———高密度脂蛋白的含量。
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三.临床意义
1.LP(a)是冠心病的一个独立危险因素,而与吸烟、高血 压、LDL-C和HDL-C以及ApoA-1与ApoB等均无关。与其它脂蛋白或 载脂蛋白相比,LP(a)与男性冠心病的关系尤为密切。 2.血浆LP(a)的危险性临界水平一般在0.2~0.3g/L,如超 过>0.30 g/L则AS的危险性上升2倍,如同时伴有LDL-C上升,CHD 的相对危险性上升5倍。且LP(a)水平越高,发生CHD则越早。 3.LP(a)具有多基因遗传特性,有CHD家族史者,LP(a) 阳性率明显高于无家族史者。 4.高LP(a)与颈动脉粥样硬化和脑动脉梗塞也有明显关系. 。
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二.LP(a)的生理功能与致病作用
迄今,有关LP(a)的生理功能仍不明确。许多个 体的血浆LP(a)水平为零或很低,但并没有引起任何 缺乏症或疾病。 许多研究提示,血浆LP(a)水平升高与动脉粥样 硬化的发生密切相关,但有人认为LP(a)可能不直接 引起动脉粥样硬化,而可能是经过某种形式的修饰以 后才具有致动脉粥样硬化的作用。
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四、降低血浆Lp(a)措施:
目前研究提示, 能降低血浆 Lp( a) 浓度的药物有烟酸、 新霉素和 部分甾体类激素。Gerakar等观察到,单用新霉素(2克, 连用3个月)可 使血浆Lp(a)降低24%; 若与烟酸合用, 则可使Lp(a)降低45%。,但副 作用大。目前对高Lp(a)的治疗已进行了大量的工作,但由于Lp(a)不 受饮食,运动等的影响,故尚无确切的药物来降低Lp(a)浓度.关于降低 Lp(a)的药物也有许多报道,如W-3脂肪酸,鱼油等降脂药物用于降低 Lp(a),但其疗效还需进一步证实;用促肾上腺皮质激素短期治疗可降 低血浆Lp(a)浓度.合成类因醇羟甲雄吡唑和绝经后雌激素替代疗法可 以降低Lp(a)水平,预防Lp(a)水平的升高;
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