对菊花中绿原酸含量的测定方法进行改进(精)

对菊花中绿原酸含量的测定方法进行改进
摘要：目的对菊花中绿原酸含量的测定方法进行改进。

方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定绿原酸含量。

结果菊花中绿原酸的含量按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验，样品提取方法复杂，含量有损失，误差较大。

结论将含量测定方法改进后，具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠、分离效果好、灵敏度高、稳定性好等优点，为标准的修订提供可行的依据。

关键词：菊花；高效液相色谱；绿原酸
菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序。

药材按产地和加工方法不同，分为“亳菊”“滁菊”“贡菊”“杭菊”。

本文分别对亳菊和杭菊进行了含量分析，改进后的方法（第2法）具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠等优特点。

1 器材
氯仿、磷酸均为分析纯；甲醇、乙腈均为色谱纯；Agilent 1100 HPLC化学工作站；Mettler AE240电子天平；样品由湖北省宜昌市众生医药公司和湖北省红安县中医医院提供，经宜昌市药品检验所鉴定为“杭菊”，湖北某企业提供的菊花经鉴定为“亳菊”；绿原酸对照品（由中检所提供，供含量测定用，批号为110753200212）。

2 方法与结果
2.1 第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。

2.1.1 色谱分析条件色谱柱为Nucleosil C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；柱温25℃；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液［取磷酸二氢钠（NaH2PO4・2H2O）15.6 g，加水至1 000 ml，制成0.1 mol/L的溶液，加入磷酸适量，使pH值为2.7］甲醇（70∶30）；检测波长328 nm；进样量20
μl；流速1.0 ml/min；AUFS=0.12s。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。

2.1.3 供试品溶液的制备取样品粉末（过1号筛）约1 g［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流2 h，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸干，残渣加氯仿5 ml，浸渍3 min，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加水适量使溶解，并转移至5 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得（应于当日测定）。

2.2 第2法（改进后的方法）
2.2.1 色谱分析条件流动相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。

2.2.3 供试品溶液的制备取样品粉末约0.5 g［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇
至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适应性实验
2.3.1 第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。

理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为4 495，符合《中国药典》规定。

重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为 5 753，5 748，5 747，5 750，5 747，RSD= 0.04% (n=5)。

2.3.2 第2法（改进后的方法）理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 5 241，符合药典规定。

重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为5 908，5 891，5 893，5 889，5 885，RSD=0.15%(n=5)。

2.4 样品测定结果
2.4.1 第1法将样品依法处理。

结果见表1。

表1 3批菊花样品的测定结果(略)
2.4.2 第2法（改进后的方法）将样品依法处理。

结果见表2。

表2 3批菊花样品的测定结果(略)
2.5 回收率实验(第2法) 精密称取众生药业提供的菊花样品约0.5 g，定量加入适量的绿原酸对照品，下同供试品项下操作，在上述色谱条件下测定，测得平均回收率为99.9%。

结果见表3。

表3 绿原酸回收率实验结果(略)
3 讨论
3.1 菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，样品溶液的提取比较复杂，含量损失大，特别是从蒸发皿中用水洗涤定容至5 ml量瓶中，误差大，测出的含量要比实际的含量低。

3.2 菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，其色谱条件不是很理想，流动相的比例要改为80∶20，效果会更好，特别对质量很差的菊花更要注意。

本实验的样品由于湖北某企业贮存时间太长，严重褪色，含量很低。

若不改动流动相的比例，则色谱图的分离效果很差。

3.3 改进后的方法中样品溶液的制备方法简便、损失量少、使得测定的结果更加准确可靠，测出的含量要比第1法高，为标准的修订提供可行的依据。

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