绿原酸测定方法
绿原酸测定方法
检验方法：
仪器、试剂和材料
CS-930型双波长薄层扫描仪（日本岛津）；薄层板自动涂布器PBQ-Ⅰ型（四川省中药研究所）；微量定量毛细管（美国Drummond）；紫外线检测器（瑞士CAMAG uv-cabinet Ⅱ）。
中国药品保健食品绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所）；硅胶H（青岛海洋化工厂）；所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1薄层层析及扫描条件取硅胶H-0.5 % 羧甲基纤维素钠（1∶3），用自动涂布器湿法铺板，厚0.4 mm，室温干燥后，110 ℃活化1 h,置干燥器中备用；展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液；紫外光灯（365 nm）下定位；扫描条件：λS = 320 nm，λR = 370 nm，反射法锯齿扫描,狭缝1.2 mm × 1.2 mm；灵敏度：中，线性化参数SX=3。
2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成0.545 mg。
mL-1的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备精密称取本品5 g，加甲醇超声提取30 min，滤过，滤器及滤渣用甲醇15 mL分次洗涤，合并滤液与洗液，水浴蒸干，残渣加水20 mL 微热溶解，加枸橼酸调pH=3，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至2 mL 量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4线性关系的考察精密吸取绿原酸对照品溶液1，2，4，6，8 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定。
结果，绿原酸点样量（X）在0.545～4.36 μg范围内与峰面积的积分值（Y）呈良好的线性关系，回归方程为：
Y=39 745.6 X - 2 276.4r=0.998 3
2.5精密度试验精密吸取绿原酸对照品溶液2 μL，5份，分别点于同一薄层板上，依法测定峰面积积分值。
结果RSD=2.07 %（n=5）。
2.6稳定性试验取层析后的薄层板立即进行测定和室温下放置不同时间进行测定。
结果，斑点峰面积积分值在3 h内稳定，RSD=1.67%（n=5）。
2.7重复性试验取同一批号样品（批号为980714）5份，按“样品测定”项下的方法，测定样品中绿原酸的含量，结果RSD=2.16%（n=5）。
2.8干扰试验按处方量取除金银花外的其余各药味按相同工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，置紫外光灯（365 nm）下检视，阴性对照溶液在与对照品溶液相应的位置上无相应特征斑点显示。
2.9回收率试验精密称取已测知含量的样品5 g，6份，分别精密加入绿原酸对照品溶液（1.536 mg。
mL-1）各1 mL，依法提取测定，平均回收率为97.45%，RSD为2.30%（n=6）。
2.10样品测定精密吸取供试品溶液2 μL，对照品溶液1 μL和3 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定，用外标两点法计算，结果980714，981201，980728批号样品中绿原酸含量分别为0.015 8%，0.018 7%，0.028 2%，n=3。
3讨论
样品中绿原酸的提取实验曾比较了用甲醇超声提取和加热回流提取2种方法，结果无显著差别，以选择甲醇超声提取较方便。
另外，考虑到绿原酸为弱酸，为增加其在醋酸乙酯中的溶解度，还比较了用醋酸乙酯萃取前的水溶液加枸橼酸调不同的pH与不调pH，结果以调pH=3，绿原酸含量最高。
薄层层析条件的选择曾试用硅胶G板，醋酸乙酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液、醋酸丁酯-甲酸-水（8.5∶5.5∶2.5）的上层溶液、醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶1∶1∶1）等多种展开剂，所得色谱均不理想，或大部分斑点推至前沿，或斑点分离不好，有拖尾现象，经筛选的拟定方法并于展开前预饱和30 min，克服了上述缺点，展开斑点较圆整，易于扫描。
该制剂中几个批号样品绿原酸含量有一定差异，作者认为与金银花原料的产地、采收季节有关。
龟苓膏中绿原酸的测定方法、稳定性的研究
高 新 技 术
龟苓膏中绿原酸 的测定方法 、 稳定性 的研究
彭翠芳 莫桂 坚 谭 洁 霞 黄 永 文、 明 何 姗 李 蒋 丽
（ 中恒集 团广西梧州双钱 实业有限公 司， 西 梧 州 ５ ３ ０ ） 广 ４０ ２
合在 龟苓 膏 中 取 绿原 酸 ， 到 龟苓 膏绿原 酸含 量的 衰减 数据 。 提 得 关键 词 ： 高效 液相 色谱 法 ； 龟苓 膏 ； 原 酸 绿
中图分 类号 ：Ｍ７ Ｔ 文献 标识 码 ： Ａ
１前言 ２ ． ２力怯 度 ， 。（ 混匀 此标准储备液 在 ４ｃｔ 中 ， ｏｖ￣ ， 可保存 龟苓 膏 口感嫩滑而带有弹性 ， 味道甘甜 ， 既 ２． ．１方法 Ａ ２ ５） ｄ。 ２ ．１色谱条件 ．１ ２． 可以清热 解毒 ， 可以消 暑生津 ， 以来 ， 又 一直 深 ２． ．２ ２ ３标准 曲线制备 受 两广 、 、 港澳 东南亚 的消费者 喜爱 ， 近些年 ， 随 色谱柱 ：１（５ ｍ ｘ． ｍ 。 Ｃ ８２０ ｍ ４ ｒ ） ６ ａ 精密 称取绿原酸标准使用 液 ， 流动相稀 加 温度 ： 室温。 着人民群众生活水平的不断提高，健康理念的 释 并在 容量 瓶 中定容 的浓 度分 别 为 ２ ￣／ｔ ．ｇ ， ｏ ｍ 不断认识 ， 凉茶类产 品逐 渐在全 国范 围热 销 ， 也 流动相 ： 乙腈＿ Ｊ Ｏ 酸溶液 （３ ７ １： ） ８ ４ ￣ ／ｌ ．￣／ｌ ．￣／ｌ１ｕ ｍ 的溶 液 ， ． ｇ ，０ ｇ ，０ ｇ ，０ ￣ ｌ ０ ｍ ６ ｌ ｍ ８ｔ ｍ 即 带动 了龟苓膏市 场的不断扩大 ，产量和销量 逐 流 速 ：． Ｊ ｎ １ ｍＩｍｉ。 ０ 得标 准溶液 。 年提高 ， 创造了较好的经济效益。 场上也 涌出 市 检测波长 ：２ ｎ ３ ７ ｍ。 ２． ．２ ２ ． 品制备 ４样 了很多 的龟苓膏 生产 厂家 ，各种龟苓膏 品牌应 进样量 ：Ｏ Ｌ ｌｌ 。 取膏体适量 ， 搅拌成浆 ， 取试样 １ｇ准确 称 ５（ 运而生 ， 但品质却参差不 齐 ， 至出现 了以凉 粉 甚 ２ ．２标准液制备 ．１ ２． 至 ０ １） ０ ｇ于小烧杯 中， 甲醇 １ｍ 稀 释后转移 加 ５Ｌ 膏滥充龟苓膏 的现象 ， 为了规范龟苓膏行业 ， 统 精密称取绿原酸标准品适量置棕 色容量瓶 于 ５ ｍ 容量瓶 ， ０Ｌ 容器另用约 １ｍ ５ Ｌ甲醇分次洗 龟苓膏 的产 品质量 ，广西 壮族 自治 区质量 技 中 ， 甲醇制成 １ｕ ｍ 的溶液 ， 加 ０￣ ｌ 即得标准溶液 。 涤 并转移 入该容量瓶 中 ； 超声提取 ３ｍ ｎ放冷 ， ０ ｉ， 术监督局 、 广西梧 州市质量技术监督局联合 梧 ２ ．３标准 曲线制备 ．１ ２－ 补加 甲醇至刻度并摇匀 ， 静置后 分取 上清液作 州龟 苓 膏主要 生产 厂家 梧 州双 钱实 业有 限 公 吸 取 上 述 标 准 溶 液 ０ ｍ ，８ ｌ１ｍ ， 为检测液 。 ． ｌ ． ，２ ｌ ４ ０ｍ 司 、梧卅致 中和保健食 品有限公司先后 推 出了 １ ｍ ，０ ｌ 甲醇定容至 １ｍ 容量瓶 中， ｌ ． ｌ． ， ６ ２ｍ 加 ０ｌ 摇匀 ２２ ２ ５结果计算 Ｄ ５ ９－０７地 理标志产 品 梧州 龟苓膏》 即得。注入高效液相色谱仪， Ｂ４￣ １２０ （ 、 测定其峰面积， 以 ｘ： ！ ： Ｑ Ｄ ５１８－ ０９Ｆ ：膏质量安全要求》 Ｂ４， ０ ２０ （Ｅ ｚ ｒ ＂ ５ （ ￣ 标准， 峰 面积为纵坐标 ， 浓度为横坐标绘制标 准曲线 ， 式中： １ｏ ０Ｏ ｏ ０ １０ 对龟苓膏 的原辅 材料要求 、 技术要求 、 生产过 程 求 回归方程 。 要求 、 试验方 法 、 规则等作 出 了规定 ， 中 检验 其 ２． ２１ 品制备 ４样 ｘ 试样 中的含量 ， 位为克每 千克或克 一 单 最 主要 的是规 定了龟苓膏 的几项 营养 指标 和检 取膏体试样适量 ， 搅拌成浆 ， 精密称取 ２ ｇ 每升（／ 或 Ｌ ５ ｇｓ ｋ ） 验方法 ， 确保龟苓 膏应有的营养成分 ， 龟苓 （ 至 ｏ １ 于 １０ ｌ 确保 准确 ． 置 ０ ０ｍ 容量瓶 中 ， 加无水 乙 Ｃ 由标 准 曲线 求得 进样 液 中绿原 酸 的 一 膏 的品质 。标 准 中规定 了通过 高效液 相色谱法 醇 定容至 １０ ｌ ０ｍ ， ， 称量 超声提取处 理 ２ｍｎ放 浓度 ， 为微克每毫升 （咖 １ ０ ｉ， 单位 ） 对龟苓膏绿原酸 的检测 。 冷 ， 水乙醇至处理前质量 ， 匀 ， 置 ， 补无 摇 放 分取 Ｖ 试样定容体积 ， 一 单位为毫升（ １ ｍ） 近年来的研究表 明，绿原酸是一种 重要的 上清 液用 Ｇ 砂芯漏斗过滤 ， ４ 备用。取所制得 的 ｍ 试样质量或 体积 ， —— 单位为克或毫升 （ ｇ 生物活性 物质 ， 有抗菌 、 具 抗病毒 、 增高 白血球 、 上清液 ２ｍ ， ５ｌ 水浴挥 干 ， 加适量 甲醇溶解 ， 移置 或 ｍ ） ｒ 。 保肝利 胆 、 肿瘤 、 抗 降血压 、 降血脂 、 除 自由基 于 １ｍ 容 量瓶 中 ， 甲醇 至刻度 ， 即得试 清 ０ｌ 加 摇匀 ． ３含量 测定 ２． ２ 和兴奋 中枢神经 系统等 作用 。 样 溶液。 在相同色谱条件下根据标准品 、样品 的峰 绿原酸不稳定 ， 自 衰减。陈芳萍等在 会 然 ． １ ２． ２． ５结果计算 面积与标准品的含量， 计算样品绿原酸的含量。 《一 Ｂ 环糊精对绿原酸稳定作用的研究》一文中， 由标 准曲线 计算 出被 测 溶液 中绿 原 酸含 ３结果与分析 得 出结论 ： 绿原酸经 Ｂ 环糊精 包合后， 一 稳定性增 量 ， 出试样 中绿原酸含量 ： 计算 ３ 分 别依据 Ｄ ５ ９－０ ７《 理标 志 ． １ Ｂ４／ １２０ 地 ３ ＿ ｌ ｘ０ ｌ ０ 加 。Ｂ 环糊精可 以作为绿原酸及其 制剂中的稳 一 产品 梧卅龟 苓膏》方法 Ａ 、 Ｂ４／５０２０ Ｉ （ ） ５＇ －０９ Ｄ １８ 定剂 。 刚等在 （ 银花提取物 中绿原酸的稳定 李 淦 式中： 孟 ０ ０ ０ 膏质量安全要求》方法 Ｂ 的方法 ， 出两 （ ） 得 性 研究》 文中 ， 出结论 ： 原酸 在碱性 条件 一 得 绿 ｘ 试样 中绿原 酸含量 ， 一 单位为 毫克每百 组样品数据 （ 方法 Ａ数据 、 方法 Ｂ 据 ） 数 ， 高 通过 下， 极不稳 定 ， 易水解 。本文要研究 的就是绿 克（ ｇ Ｏ ｇ 容 ｍ／ Ｏ） ｌ 效液相色谱法对 同一批号龟苓膏绿原酸进行 检 原 酸在 龟苓膏 中的检测方法 和绿原酸在龟苓膏 ｍ一 由标 准 曲线计 算 出的被测液 仲绿原 测 ， 得出表 １ 据： 数 中的直链淀粉 、 ｐ 低 Ｈ等条件综 合影 响下 ， 绿原 酸质量 ， 单位为微克 （ｇ ） 表１ 酸 的衰减情况 。 检 验项 目 数 据 １ 数 据 ２ 数 据 ３ 数据 ４ 数 据 ５ Ｄ ５ ９－０ ７地理 标志产品 梧州龟苓 Ｂ４／ １２０ （ ３ （ 方 法 Ａ （ ５ ９ —０ ７ 《 理 标 ４ ＤＢ ４ ／ １２ ０ 地 ３ 膏》Ｄ ５１８－０９《 、Ｂ４／５０２０ 龟苓膏 质量安全要求 》 ＂ 志 产品 梧州龟 苓膏》 ） ８ ４６ ． ５３ － ４４ ． ４２ ． 的绿原酸检测方 法不 同 ， 文拟在对 比的过程 本 绿 原 酸 中探讨方法 、 在分析 的过程 中比较优劣 ， 客观 的 方 法 Ｂ （ ５Ｔ ８ －０９ 《 苓 膏 ８ ＤＢ４ ／ ５ ０２ ０ 龟 质 量安全要求》 ） ２ ８ ． ０ ８１ ． ８ ． Ｏ ７９ ． 选 出较 好的检 测方法 。 ２材料与方法 ２ ． １试材 、 药品和仪器 ｍ 一试样的质量 ， 为克 （） ｒ— 单位 ｇ 由表 １ 出， 比之下 ，Ｄ ５＇ ０２０ 看 相 Ｂ４／５ －０ ９ １８ － 龟苓 膏按 包装型式不同主要分为易拉罐装 ２ ．方 法 Ｂ ．２ ２ 《 龟苓膏质量安全要求》的检测方法有以下优 和塑料碗装两种 型式 ， 由于包装材料不 同， 透光 ２ ．１ ．２ 色谱条件 ２． 点： 检测数据稳定 、 能充分检测绿 原酸含量 。 率、 陛都不同， 透气． 造成了对绿原酸稳定性影响 色谱柱 ： １（５ ｍ ｘ ． ｍ） Ｃ ８２ ０ ｍ ４ ｍ 。 ６ ３ 依照 Ｄ ５Ｆ８－０９￣， 膏质 量安 ２ Ｂ４，５０２０（＿ ｒ ． 苓 也不同。因此 ， 易拉罐装龟苓膏、 塑料碗装龟苓 温度 ： 室温。 全 要求 》 的检测方法 ， 同一 批次 、 同时 ��
反相高效液相色谱法测定化妆品中绿原酸的含量
反相高效液相色谱法测定化妆品中绿原酸的含量方继辉;朱新州;吴震【摘要】To establish a method for the determination of chlorogenic acid in cosmetics with the component of honeysuckle. The HPLC method was used with Athena C18-wp column (250 mm × 4. 6 mm, 5 μm) and acetonitrile-0. 1% phosphoric acid (13/87) as the mobile phase, the detection wavelength was 327 nm, the flow rate was 1. 0 mL/min. The linear range was 0. 0020-0. 1503 μg, a good correlation coefficient was obtained, r>0. 9995. The average recovery rates for cream, lotion and e-mulsion samples were 91. 3%, 95.6% and 102.3%, respectively, and RSD were 2. 84% , 0.66% and 4. 53% (n = 6). The method is accurate, credible and repeatable, which can be used to detect chlorogenic acid in cosmetics containing honeysuckle.%建立了含金银花成分化妆品中绿原酸含量的测定方法.样品经甲醇提取后用反相高效液相色谱法进行测定.色谱柱为Athena C18-wp(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(13∶87),检测波长327 nm,流速1.0)mL/min.绿原酸进样量在0.00 20～0.1503 μg范围内与峰面积线性关系良好,相关系数r＞0.9995,膏霜剂、水剂和乳液剂样品的平均回收率分别为91.3％、95.6％和102.3％,RSD分别为2.84％、0.66％和4.53％(n=6).方法准确可靠、重复性好,可用于含金银花化妆品中绿原酸含量的检测.【期刊名称】《香料香精化妆品》【年(卷),期】2013(000)001【总页数】3页(P25-27)【关键词】高效液相色谱法;化妆品;金银花;绿原酸【作者】方继辉;朱新州;吴震【作者单位】广东省食品药品检验所,广东广州 510180;广东药学院化工学院,广东广州 510006;广东省食品药品检验所,广东广州 510180【正文语种】中文金银花又名双花、二花、忍冬花等，为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或初开的花，是一种传统中药材，具有清热解毒、疏散风热的功能［1］。
HPLC(液相色谱)-绿原酸检测方法
HPLC-绿原酸检测方法2020版本药典有效成分测定参考2020版《中国药典》金银花项下绿原酸和木犀草苷测定的方法，采用高效液相色谱法测定其含量。
2.3.4.1 供试品溶液制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4ml，置5ml离心管中，摇匀，即得。
2.3.4.2 绿原酸的高效液相色谱检测方法(1) 标准品溶液的配制取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50µg的溶液，即得对照品溶液10℃以下保存。
(2) 检测条件色谱条件：色谱柱为安捷伦SB-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（13:87）；检测器为安捷伦G1314B可变波长紫外检测器；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；检测波长为327nm；进样量为10µl。
用外标法进行定量。
(3) 标准曲线的绘制分别吸取绿原酸对照品溶液2、4、6、8、10、20µl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标X，色谱峰峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程Y = 830.69X -16.516(R2=1)。
(4) 精密度实验取同一浓度的对照品溶液每次进样10µl，连续进样6次，按上述色谱条件测定绿原酸含量，根据检测结果计算相对标准偏差（RSD）。
(5) 稳定性考察分别取同一浓度的对照品溶液10µl，每隔两小时进样一次，连续进样检测６次，根据结果计算相应的相对标准偏差（RSD），检测10小时之内绿原酸的稳定性。
(6) 重现性实验取同一批次的提取样品，在设定的HPLC条件下连续进样6次，测定绿原酸含量，计算标准偏差（RSD）。
金银花提取物中绿原酸含量测定方法(H)
编号:FZD0166 金银花提取物中绿原酸（Chlorogenic acid）含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 150mm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈：水：0.4%磷酸水溶液（13：87，V/V）
流速：1mL/min
检测波长：327nm
柱温：25℃
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品约5mg于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶解定容。
2. 样品溶液制备精密称取金银花提取物样品适量，于50mL容量瓶中，加入50%甲醇超声振荡20min后，冷却至室温定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定，绿原酸保留时间约为12min，用外标法计算含量。
HPLC法测定鼻渊丸中绿原酸的含量
Ａｇｌｎ 色 谱 工 作 站 、 ｉ ｔ ｅ 自动 进 样 器 ； ａｔｒ ｓＣ ２ ４ Ｓｒ ｉ —Ｐ２Ｓ ｏｕ
电子 天 平 、 ａｔｒｕ－ ２ ５ Ｓ ｒ ｉｓＭＥ １ Ｓ电 子 天 平 ； Ｈ３ ０ ｏ Ｂ ２ ０型 超声 波发 生器 （ 山禾 创超 声仪 器有 限公 司） 昆 。 Ｉ ２ 试 药 绿原 酸 （ 国药 品生 物制 品检定 所 ， 号 ． 中 批
西北药学杂志
２１ ０ ０年 ６月 第 ２ ５卷
第 ３期
１９ ６
２ ７ 精 密度 实验 ．
取 制备 好 的 同一 份 供试 品溶 液 ，
按拟定 的色谱条 件测 定 ， 复 进 样 ５次 ， 录龙 胆 苦 重 记
苷峰 面积 ， 果 Ｒ Ｄ为 １ ３ 。 结 Ｓ ．１ ２ ８ 稳 定性 实验 ．
和 ２ ４ｈ进样 ， 结果 ＲＳ Ｄ为 ０ ５ 。 ．４ 批样 品 ， 分别 制备 ５份供 试 品溶 液 ， 龙 胆苦 苷 的含 测 量 ， 果 ＲＳ 结 Ｄ为 ０ ９ 。 ．６ ２ １ 回收率 实验 ．Ｏ 取已知含量 的样品（．２ｍ ｇ １６ ｇ・ ）
建 立 鼻 渊 丸 中绿 原 酸 的 含 量 测 定 方 法 。 方 法
浊、 嗅觉不 灵 、 痛 、 棱 骨病 。该 药 收载 于 《 生 部 头 眉 卫
Ｏ５１ ．Ｏ ８
２ １ 样 品的 测定 ．１
取 １ ０批 样 品 ， 上 述 方 法 测 定 按
药 品标 准 》 中药成 方制 剂第六 册［ ， １ 仅作 定性检 查 ， ］ 曾 有 文献 报道 辛夷 中木 兰 脂 素［ 茜草 ●
采用 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 测 定鼻 渊 丸 中绿 原 酸 的含 量 ， 色谱 柱 Ｃ。 （５ １ ２０ 柱
ｒ ｎ ． ｎ ×４ ６ｍｍ， ｍ） 流 动相 ： Ｉ ５ ； 乙腈一． 磷 酸 溶 液 （２； ８ ； Ｏ４ １ ８）
RP—HPLC测定桑叶中绿原酸的含量
RP—HPLC测定桑叶中绿原酸的含量目的建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定桑叶中活性成分绿原酸的方法。
方法采用Kromasil-C18（4.6 mm×250 mm，5 ？滋m）色谱柱；流动相为乙腈-1.0%醋酸水溶液，采用梯度洗脱，检测波长为325 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃，进样体积10 μl。
结果绿原酸的线性范围为0.3890～7.771 ？滋g （r=0.9994），平均回收率为98.91%。
结论RP-HPLC检测效率高，专属性强，重复性好，可用于桑叶中绿原酸的定量测定，可作为该药材的质量控制方法之一。
标签：桑叶；绿原酸；质量控制；反相高效液相色谱法桑叶为桑科植物桑（Morus alba L.）的叶，初露后采收，除去杂质，晒干，具有疏散风热，清肺润燥，清肝明目之功效。
主要用于风热感冒，肺热燥咳，头昏头痛，目赤昏花[1]。
现代药理研究表明桑叶具有降血糖、降血压、降血脂、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等功效[2-4]。
对桑叶的质量控制研究大部分围绕中桑叶中的活性成分芦丁来进行相应的含量测定[5-6]，也有的围绕黄酮类成分进行相应质量控制研究[7]。
目前，国内外市场对桑叶的需求愈来愈大，且本课题组在前期指纹图谱研究中发现绿原酸也是桑叶中的主要活性成分之一[8]，因此为了进一步控制桑叶质量，本研究采用反相高效液相色谱法（reverse phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC）对从全国收集的桑叶药材进行绿原酸含量测定研究，现报道如下。
1 仪器与试剂1.1 仪器KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；BPZ11D型电子分析天平（Sartorius公司）；Waters2695-2996高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器（Waters 公司）。
1.2 试剂甲醇（色谱纯，TEDIA公司），乙腈（色谱纯，TEDIA公司），水为哇哈哈纯净水，冰乙酸（色谱纯，北京化工厂）。
HPLC法测定金板青颗粒中绿原酸的含量
3
，
一
．
一
，
．
。
结果见 表
1
。
溶液 ( 8
：
92
) 为流 动相 待测 物与杂质完全 分离 并 可 取 得
， ， ， 。
好的峰形 和较 高的分离度 结果 满意
表
1
回 收率试 验 结 果
●
I
方 法 学 研 究 表 明 该测 定 方 法操 作 简单 结 果 准 确 重
， ，
，
3 ％ ∞ 蚰 ∞ ∞ 好 空 白无 干 扰 可 作 为 金 板 青 颗 粒 中 质 量 标 准 含 量 测 9 4 O O 陛虬
、
弋 0
～
含量
0036
一
02
的绿 原 酸 对 照 品适 量 用
，
向棕 色 容 量 瓶 中 摇 匀 配
，
，
取贮备液
。
．
l
m
L
m
。
用
50％
配成 0 050
0
g ／m L
的
锥形瓶 中 精密加
， ：
( 功 率 2 50 w
，
频率
％
甲醇补足减失的
不 含 金 银 花 药材 的阴性 对
项 下 方 法 制 备 阴性 对 照 品
，
、
、
分 别精 密称取 已 知含 量 的样 品
6
5 g
(批号
2006060 1
0
)各
O O O O
1
l
a r
in O
所 得含 量 的差 异
。
提取
10
in
后 绿原 酸的含量将不
。
份 (绿原酸含量 为
实验报告---绿原酸标准曲线的绘制
绿原酸标准曲线的绘制一、实验目的1.1 熟练掌握用高效液相色谱仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；1.2 熟练掌握用紫外分光光度仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；二、原理2.1 绿原酸简介绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
2.2 高效液相色谱仪的工作原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
三、试剂与仪器3.1 材料与试剂：绿原酸标准品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；3.2 主要仪器：高效液相色谱仪，分析天平，25ml、50ml棕色容量瓶，滴定管，10ml,25ml,50ml,100ml容量瓶各7个，1ml、2ml、5ml的移液管，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器。
四、实验步骤4.1 用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线紫外分光光度法：精密称取绿原酸标准品0.0055g，用80%的乙醇溶解，转移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，制得标准母液。
精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。
HPLC法测定双黄连颗粒中绿原酸的含量
结 论 本 方 法 操 作 简 便 、 准 确 、 重 复 性 好 ，可 用 于 双 黄 连 颗 粒 中绿 原 酸 的 含 量 测 定 。 关键 词 ： 双 黄 连 颗 粒 ； 绿 原 酸 ； ＨＰ Ｉ Ｃ；含 量 测 定
中图分 类号 ：Ｒ２ ４ ８ ；Ｒ ２ ． ９ ７２
文献 标识码 ：Ａ
Ｇｒ ｎｕ ｅ ＰＩＣ． Ｍ ｅ ｈ ｄｓ Ｔｈｅ ｕａ ｉａ ｉ ｅ ａ ｌ ｓｓ ｗａ ｐ ｒ ｏ ｍ ｅ ｎ ａ ＺＯＲＢＡＸ Ｂ — ８ ｏｌ ｍ ｎ ａ ｌ ｓ ｂｙ Ｈ ｔｏ ｑ ｎｔｔ ｔｖ ｎａ ｙ ｉ ｓ ｅ ｆ ｒ ｄ ｏ Ｓ Ｃ１ ｃ ｕ ． Ｔｈ ｂｉｅ ｐ ｓ ｓ ａ ｅ ｏ ｔ ｉｅ ０． ｅ ｍｏ ｌ ｈａ ｅ ｗａ ｃ ｔ ｎｉｒｌ一 ４ ｐｈ ｐｈ ｉ １ ：８７）ｗｉｈ ｔ ｌ ｗ ａ ｅ ｏ １ ０ Ｌ ・ｒ ｉ － Ｔｈｅ ｏｓ ｏｒｃ（ ３ ｔ ｈｅ ｆｏ ｒ ｔ ｆ ． ｍ ａ ｎ ．
处 理 Ａｇｌｎ ｅ ｔ ｔｏ ） ａｔ ｒｕ ２ ５ 电 ｉ ｔ Ｃｈ ｍｓａ ｉｎ ，Ｓ ｒ ｏ ｉｓ ＣＰ ２ Ｄ ｅ
子天 平 。绿 原 酸 对 照 品 （ 国 药 品 生 物 制 品 检 定 中 所 ，批 号 ：１ ０ ５ —０ ２ ２ 。双黄 连颗 粒 （ 龙 江 １ ７ ３２ ０ １ ） 黑 省哈 药集 团 中药 二厂 ，批 号 ：０ ０ ０ ；黑龙 江 省儿 ７２ ３ 童 制 药 厂 有 限 公 司 ，批 号 ：０ ０ ０ 、 ０ ０ ０ 、 ９ ６ １ ９ ９ ３
（ 一 ９ 。 ）
柱 ，流动相 为 乙腈一． ６ 酸 （ ３：８ ） ０ ４／磷 ９ １ ７ ，检 测 波 长 为 ３ ０ ｍ，流 速 为 １ ０ ・ｒｉ 。 结 果 绿 原 酸 在 ３ｎ ． ｍＩ ａ ｎ
HPLC法测定江西栀子中绿原酸的含量
【 ｙ ｒ ｓ ＧａｄｎａＣ ｌｒｇｎｃａｉ； Ｌ Ｋｅｗｏ ｄ 】 ｒ ｅｉ； ｈｏｏ ｅ ｉ ｃ ＨＰ Ｃ ｄ
栀 ａｄｎａ ａ ｎ ｉｅ ｌｓ的干燥 ｓ ｉ 成熟果 实。为临床常用 中药，其性味苦 ，寒 ，无 毒。入心、肝 、 肺 、三焦经 。具有泻 火除烦 ，清热利尿 ，凉血解毒之 功效 。栀
乙腈一 １１ ．％冰 乙酸 （ ～１ｍｉ：７： ３ ２ ０ ｎ ０： ０） ０ ２ ｎ ９ ；１ ￣２ ｍｉ：１ ９ ，流速 为 １ ｍＹ ｎ ． ｍｉ，柱温 ２ ℃，检测 波长 为 ３６ ｍ。结果：测得 ５ Ｏ ５ ２ｎ
个产地栀 子 中绿原酸含量 最 高为 ０１４ ．１％，最低才 ００ ３ ．０ ％。结论 ：本研 究建立的栀子 中绿原 酸含量 测定方法 简便 易行 ，结 果准确 、 可 靠，便 于对栀子 药材进行质 量控制 。江 西不同产 地栀 子 中绿原 酸含 量由于土壤 等各种 因素影 响，差异明显。
【 关键 词 】 栀子 ；绿原 酸；高效液相 色谱
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