HPLC同时分析金银花中绿原酸和黄酮类成分的方法建立及其应用
测 定方法 ， Ｉ ］ 文献 ７ 已有报道 ， 黄酮类成分 的含量 但
测定分析笔者 尚未见报道 。本实验建立 了同时测定
金 银花 中绿原 酸 （ｈ ｍ ｅｉ ａｉ）和 ４种 黄 酮类 成 ｃｌ ｇｎ ｃ ｏ ｃ ｄ 分 即芦丁 （ ｔ ）木 犀 草素 ７ ＯｆＤ． 乳 糖苷 （ｕ ． ｒｉ 、 ｕｎ ． －－ 半 ｌ １ｅ ｔ ｏｎ７ＯｐＤ ｇｌ ｔ ｉ ） 忍 冬 苷 （ ｎ ｅ ｎ 、 皮 素 ｌ－． — ． ａ ｏ ｄ 、 ｉ － ａｃｓｅ １ ｉ ｒ ）槲 ｏｃ ｉ
关键 词 ： 金银 花 ； 原 酸 ； 酮 ； 绿 黄 高效液 相 色谱 法 中图分 类 号 ：２４２ Ｒ８． 文献标 识码 ： Ａ 文章 编号 ：３１ ２９（０５ １ — ７０ ０ １ — ４４２０ ）０ ０８ — ３ （ ０
Ｓｕ ｙ ｏ ｉ ｕ ｔｎ ｏ ｓａ ａｙ ｉ ｆｃ ｌｒ ｇ ｎ ｃａ ｉ ｎ ａ ｏ ｏｄ ｃ ｎ ｔ ｕ ｎｓ ｉ ｏ ｎ ｃ ｒｅ ｂ ｔ ｄ ｎ ｓ ｌａ ｅ ｕ ｎ ｌｓｓｏ ｈ ｏ ｏ ｅ ｉ ｃｄ ａ ｄ ｆ ｖ ｎ ｉ ｏ ｓ ｔ ｅ ｔ ｎ ＦｌｓＬｏ ｉｅａ ｙ ＨＰＬＣ ｍ ｌ ｉ
维普资讯
ＨＬ Ｐ Ｃ同时分 析 金 银花 中绿原 酸 和 黄酮 类成 分 的方 法 建 立及 其应 用
黄雄 ， 李萍 ， 张重 义， 李会 军（ 国 科大 代中 育 点实 中 药 学现 药教 部重 验室， 学 生药 教研室， 苏 南 １０） 江 京２ ０ ０９
３３ ８～３３ ８ｎ （ ：０ ９９９ ， ．３ ３ ． ｇ ｒ ．９ ） 平均 回收 率 （ ｎ：９ 分 别 为 ９ ．２ ，９ １ ％ ，０ ．６ ，８ ６ ％ ，０ ６ ％ 结 论 ） ９ ４ ％ ９ ． １ １ １４ ％ ９ ．ｌ １０．５ 速、 重现 性好 ， 适合 于 同时测 定各种 金 银花 中绿 原 酸和 黄 酮类成 分 的含 量 。
ｇａ ｉｎ ｌｔ ｎ １ｅｆ ｗ ａｅ ｗ ． ｒｄｅ ｔ ｕｉ ．１１ ｏ ｒｔ ａ １ ０ ｍＬ・ ｎ ．１ｅ ｄ ｔｃｉｎ ｗ ｖ ｌｎ ｔ ｓ ｔ３ ５ ｎ ｅ ｏ ｌ ｓ ｍｉ ｌ １１ ｅｅ ｔ ａ ｅｅ ｇｈ ｗａ ａ ５ ｌ ＲＥ 】 ｏ ｎ ｌ
．
Ｇ Ｏ ｉｅ ｒ ｉｓｏ ｈｏ ｅ ｉ Ｏ ｌ ａｉ ｅ ｆｃ ｉｍｇ ｎｃ ｄ ｎ ｔ
Ｈ Ａ ＧＸｏｇ Ｉ ｉｇ Ｕ Ｎ ｉｎ ，Ｌ ｎ ，Ｚ ＡＮ ｈｎ —ｉＬ ｕ— ｎ Ｋｙ［ ｒｏ Ｍ ｄ ｎ ｈ ｅ ．ｅａｄＤｐ Ｐ Ｈ Ｇ Ｚ ｏｇｙ，１Ｈ ｉｕ （ｅ ￣ｏ ｌｙｆ ｏｅ ｉ ｅ ｄｉｓ ｎ ｅ ｊ ａ ｒｏ ｒ Ｃ ｎ Ｍ ＆ｎ 懈眦 Ｐｎｎ— ＾丌ｄ
参 考 文献
ｌ ｌ Ｊ Ｄ ｖ ｏ ａｉ ｎ Ｃ， Ｂ ｎｓ Ｗ ，Ｆｉ ． Ｔｅ ａｓｒｔ ｎ ｄｓ ｉ ｔ ｎ ａｄ ｓ ａｋ ｒｚＡ ｔ ｈ ｂｏｐｉ ｉｒ ｕｉ ｎ ｏ ｔｂ ｏ
的质量控制指标 。但是化学研究 表明金银花 中除 了 含有绿 原 酸 ， 异绿 原酸 外 ， 有 黄 酮 类ｌ “ ］皂 苷 还 ２ ，
中同药学杂志 ２０ ５ ０５年 厅第
维普资讯
（ｕｒ ｔ ）的 高效 液相 色 谱 法 ， ｑｅ ｅｎ ｅｉ 并用 建 立 的分 析 方 法， 分析测定 了不 同产地 ， 不同树龄 的金银 花中这些 成分 的含量 ， 为金 银花 类 药材 的质 量标 准制 定提 供
１ ］ Ｇ ｎａ － ｒｂｅ ｓＲ Ｉ ｕ ｒ － ｏ ｌｓＲ Ｈ小一ｅ ｏ ａｃ ｌ ． ２ ｏｚ ｏ ｍ ｒ ａ ． ｚ ｉ ｄ Ｈ ｍｉ ． ｉ ｐ ｒ ｒ ｎｅ ｉ ｌｈ ｒ ｑｅｏ ｌ ｏ ｆ ｍ ｑ
ｕｄ ｃ ｒ ｍａｏｒｐ ｉ ｐｉ ｚ ｔ ｎ ｔｄ ｏ ｈ ｅ ａａｉｎ ｏ ａｕ ａ ｉ ｈｏ ｔｇａ ｈｃ ｏ ｔｍｉａｉ ｓ ｙ ｆｒ ｔｅ ｓｐ ｒｔ ｆ ｎ ｔｒｌ ｏ ｕ ｏ
Ｌｎ ｅ ｅＭＥ Ｈ Ｄ Ｔｅ ｅａ — ｏｉｒ ． Ｔ Ｏ Ｓ ｈ ｐｒ ｃａ ｓ ａ
ｔ ｎｗ ｓｐｄ ｒ ｅ ｎａＡ ｌｎ ｏｂｘ８ Ａ ｃｈ （ ． ｌ ×２０ｌ ５ｔ１ ． ｃｔ ｉｉ０５ Ｈ； ４ ａ ｓｄａ ｅｍ ｂｌ ｐａｅｗｔ ｉ ａ ｅ ＿ｒ ｄｏ ｇ ｅｔ ｒａ ０ ｏｍｍ ４ ６ｎｎ ５ ｌ ） Ａ ｅ ｎｔｌ ．％ ２＇ ｓｕｅ ｓｔ ｏ ｉ ｂｓ ｈ ｏ ０ｎ ｉ Ｚ ｌ ｌ ｍ， ｉ ｎ ｏ ｒ。 １ ｗ ： Ｏ ｈ ｅ ｉ
．
金银 花（ｏｅｓｃｌ ｆｗ ｒＦｏ Ｌｎ ｅ ｅ 为常 用 ｈｎｙｕｋ ｏ ｅ， ｌ ｉｒ ） ｅ ｌ ｓ ｏ ｃａ
性ｌ 刮。 ～
中药 ， 具有 清热解毒 ， 散风消肿 的功能＿ 。绿原酸是 】 ］ 金银 花的主要有 效成 分之 一 ， 直作 为金 银花 药材 一
金银 花 中绿 原酸 、 绿原 酸和环 烯醚萜 的含量 异
ｃｇｏｙ，Ｃ ｉ ｈｒ ｃｕｃｌ ｎ ｅｓｙ，Ｎ ｎｉ １０ ９ ｈ ） ｏｎｓ ｈ ａ Ｐ ａｍａｅｔａ ｉ ｒｔ ｎ ｉ Ｕ ｖ ｉ ａｊ ｇ ２００ ，Ｃ ｉ ｎ ａ ｎ
Ａ１Ｗｒ Ｋ ＲＡＣｒ： ＯＢＪ ＬＴＩ Ｅ － ＶＥ Ｔ ｅ ｅｏ Ｐ— Ｌ ｔｏ ｉ ｒｄｅ ｔｅｕｉｎ ｆｒｔｅ ｓｐ ｒｔ ｎ ａ ｄ ｓ ｈ ｎ ｏ ＇ ｏ ｄ ｖ ｌｐ ａ Ｒ ＨＰ ｃ ｍｅｈ ｄ ｗ ｔ ｇａ ｉｎ ｌｔ ０ ｝ ｅ ａａ ｏ ｎ ｉ ａ ｅ ｕ ｈ ｏ １ ｉ ｍｕ
ａ ｄ ｓｎｈ ｔ ａ ｏｉ ｓ ｒｉｓ Ａ ｐｉａ ｏ ｒ ｅａ ｄｐ ａｍ ｅ ｕｉ ｎ ｙ ｔｅｉ ａ ｂ ｌ ｔ ｏ ， ｐ ｌ ｔ ｎｔ ｕ ｉ ｈ ｒ ａ ｅ ｔ ｃｎ ｃ ｅ ｄ ｃ ｉ ｏ ｎ ｎ
ｃｌ ａ ｐ ￣ Ｊ ＪＣ ｒ ａ ｇ Ｂ ２０ ，４ ： ． ａ ｓ ｌ ｌ Ｊ ｈ ｍ ｔ ｒ ， ００ ７ ２ １ ｍ ｅ ｓ ｏ ｏ
Ｅｍ ｉ ｌｉ ¨ ｕｌ ｐｔ ｓｃ ． ａ ：ｐ ｇ ＠ｐｂ ｌ ｉｎ １ ｔ． ，ｎ ｊ
，
通 讯作 者 ： 李萍 ， ． 授 ， 士生 导师 女 教 博
Ｔｌ（２ ）５２２６ ｅ：０５８３２５
７０ 。 Ｃ／ ＰａｍＪ ２０ ａ ，Ｖ１ ８ ｈ ｈｒ ，０５Ｍ ｙ ｏ 钔 ．ｒ ｎ ． ， Ｊ
ｅ ｎｎ ｔ ｎ ｏ ｎ ｉａｉ ｆ ｏ
ｅｌ ｇｎ ｃ ｄｆ ｒ ａ ｎｉ ， ｕｎ ｌｅｌ一— － Ｄ ｇ ａｔ ｉ ， ｎ ｅｎ ｄ ｕｒ ｔ ｈ ｍ ｅｉａｉ ａ ） ｖ ｏ ｓ ｒｔ ，ｕ ｏｎ ０ｇ — ｅ ｓ ｅｌ ｉ ｒ ｅ ｅｎ ｎ ｏ ｃ ｄｎｉ ｆｏ ｄ ｕｌ ｉ ｔ ｉ７ － ａ ｏｄ ｏ ｅ ｉａ ｑ ｅ ｉｉ ｌ ｎ
ｒｔ ，ｒｐｄ ａ ｄ ｒｐｏ ｕ ｉｌ ｗｉ ｅ ｕ ｃ ｔ ｅｅ ｉ ｅｅ ｌｒｇ ｎｃ ａｉ ｄ ｆ ｖ ｎ ｉｓｉ ｝ ａ ｍａｅｉｌ ｆＦｏ ｏ ｉｅａ ａｅ ａ ｉ ｅ ｒｄ ｃｂｅ， ｌ ｂ ， ｌｏ ｄ ｔｍｆ ｈｏｏ ｅ ｉ ｃｄａ ａ ｏ ｏｄ ｎｔｅ ｒｗ ｔｒ ／ｓＬ ｎｃｒｅ ｎ ｌ ￣ ｎ ｎ ｌ ｌ ａｏ ＫＥ Ｗ ＯＲＤＳ： ∞ Ｌ ｎｃｒｅ；ｅ ｌｍｇ ｎｃａ ｉ ｌ ｖ ｎ ｉ ：ＨＰ Ｃ Ｙ ｏ ／ｅａ ｈｏ ｅ ｉ ｃｄ；ｆ ｏ ｏｄ ａ Ｌ
了科学依据 。 １ 仪器 与试 药
表 １ 系统适 应 性实 验
Ｔａ Ｒｅｕｔ ｏ ｙｔｍ ｕｔｂｌｙ ｔｓ ｂ１ ｓｌ ｆ ｓ ｓ ｓ ｅ ｓｉ ｉｔ ｅｔ ａ ｉ
（ 稿 日 ：０４０—１ 收 期 ２０—７ ） ２
基金 项 目 ： 重大 科技 专项 （０１ ＡＯ Ａ １ ； 家高技 术研 究பைடு நூலகம்展 计划 （０３ 国家 ２ｏＢ ７ １ ４）国 ２０￣
作者 简介 ： 黄雄 ， ， 男 硕士
。
００ ； １）国家 杰 出青 年科 学基 金 （【２ｏ６ ３３５４） ）
类， 环烯醚萜 类成分 。现代 药理研究表 明 ， 金银花 的
正 丁醇提取部分 和黄酮类成分显示 出较强的抗炎活
的最 低 定 量 限 从 高 效 液 相 的 １ ｇ ｍ 提 高 到 ０ｎ ・ Ｌ ０ １ ｇｍ ～。同时本 实验采 用梯 度洗脱 的方 法使 ．１ ・ Ｌ ｎ 血浆 中其他 干扰物 的 出峰 提前 ， 而缩 短 了样 品 的 从 分 析时 间。因此 ， 方法具 有灵 敏 度高 、 属性 强 ， 本 专 较高 的精 密度 和准 确度 的优 点 ， 用 于低浓 度 的达 适 那唑血药浓度测 定 ， 用于 达那 唑 药动 学及 生物 利 可
ａｉ， ｕ ｎ ｕｅｌ －— Ｄ—ａ ｅ ｓ ｅ ｏｉ ｒ ｄｑ ｅｅｔ ｅｅｏ ｔｎｄｏｅ ｅｒｎｅ ｆ ．７ ｃ ｒｔ ，ｌｔ ｉ ７ ０ ｄ ｉ ｏｎ ｇ ａｔ ｉ ，ｌ ｅ ｉ ａ ｕ ｒ ｉ ｗ ｒ ｂａ ｅ ｖｒ ａｇｓｏ ０ ２５～２ 上 ｒ ．９ ， ．２ ～ ｌ ｏｄ ｎ ｅ ｎｎ ｅｎ ｉ ｈ ｔ ２｝ ｇ（ ＝０９ ９８）７ ７ ５ ７２ ５ｒ ｒ ．９ ， ．２ ７ ． ｉ ＝０ ９９７） ８０ ５～８ ２５ｎ （ ：０ ９９９）７ ７ ５ ７ ． ｎ ｒ ．９ ）ａｄ３ ３８～３ ３ ８ｎ （ ＝０ ９９９ ． ｈ ｖ ｇ（ ０ ． ｇ ｒ ．９ ， ．２ ～７ ２５ ｇ（ ＝０ ９９９ ｎ ．３ ３ ． ｇ ｒ ．９ ） Ｔ ｅａ．
ｅ ｇ ｃｖｒ ｓ ｎ＝９ ｅ ９ ４ ％ ，９ １％ ，０ ．６ ，８６ ％ ａｄ ｌ０ ６ ％ ．ｒｓｅｔ ｅ ． ＮＣＬ ＳｏＮ Ｔ ｉ ｍ ｔ ｅｕ ｒ ｅｒ ｏｅｉ （ ａ ｅ ｅ ）ｗ ｒ ９ ．２ ９ ． １ ｌ １４ ％ ９ ．ｌ ｎ ０ ．５ ｅ ｅ ｐｃｉ ｌ Ｃｏ ｖｙ Ｕ Ｉ ｈ ｅ ｏ ｉ ａｅ ． ｓ ｈ ｄ ｓ
用度研究 。
ｍ ｔ ｏ ｃ ａ ｆ ａａ ｌｎｒｓＩ ｎｅｓ ｎ ｍ ｎｖｌ ｔ ｒ Ｊ ． ｅ ｂ ｌ ｔ ｏ ｄｎｚ ｔ Ｔ ｋ ｖ ａｄｈ ａ ｕ ｅ ｓ ］ ａ ｉ ｆ ｅ ｏ ｉ ａ Ｉ ｏ ｕ ｏ ｎｅ ［
Ａ ｃ Ｉ ｈ ｒ ｃ ｄ ｎ， ９ ６ ２ ： ９ ． ｒ ｒ Ｐ ａｍａ ｏ ｙ １７ ，２ １ ２ ４ ｈ ａ
高效液相色谱法测定金银花中4种有机酸含量
高效液相色谱法测定金银花中4种有机酸含量王建寰;张霞【摘要】目的建立高效液相色谱法(RP- HPLC)同时测定金银花中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸含量的方法.方法采用高效液相色谱法,Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),0.1%磷酸溶液和乙腈采用梯度洗脱,检测波长280 nm,流速1.0 mL·min-1.结果金银花40%甲醇提取物中的杂质对4种成分的测定无干扰,4组分在各自的线性范围内:原儿茶酸0.252～6.30 μg·mL-1、绿原酸4.51～112.8 μg·mL-1、咖啡酸0.133～3.32 μg·mL-1、阿魏酸0.112～2.80 μg·mL-1内均呈良好的线性关系(r＞0.999),平均加样回收率、精密度、重现性和稳定性均符合有关规定.结论高效液相色谱法测定金银花操作简便,结果准确,为该类药材的入药及资源利用提供了依据.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2013(035)003【总页数】3页(P350-352)【关键词】金银花;高效液相色谱法;有机酸【作者】王建寰;张霞【作者单位】宁夏医科大学药学院、宁夏回药现代化工程技术研究中心,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R931金银花(Flos Lonicerae)又名银花、双花、忍冬，性味甘寒，有清热解毒、凉散风热等功效，在临床上主要用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热［1］。
常以干燥花蕾或初花入药［2］，是临床常用中药。
金银花含黄酮类、有机酸、肌醇、皂甙及鞣质等［3］，有机酸及挥发油是金银花的主要有效成分。
绿原酸常常作为金银花质量控制的指标成分，但还不能全面反映金银花的内在质量，天然产物的功效通常不是靠单一成分的作用，而是多类型的组分结合，同时起作用才有诸多功效。
为了较全面反映金银花的质量，本研究建立了用微波提取、高效液相色谱法同时测定金银花中4种有机酸:原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和阿魏酸含量的方法。
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量【摘要】目的建立金银花提取物中绿原酸含量的HPLC测定方法。
方法国产C18柱（4.6 mm×250 mm，7 μm）;流动相为乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；检测波长为327 nm；流速1 ml・min-1；进样量10 μl；柱温25℃。
结果绿原酸在0.071 6～0.644 4 μg范围内线性关系良好，r=0.999 6；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。
结论该方法简便、快速、准确，可用于金银花提取物的含量测定及质量控制。
【关键词】金银花提取物；绿原酸；高效液相色谱法AbstractObjectiveTo establish a method for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.MethodsThe chromatographic conditions were as follows: C18 chromatographic column (4.6 mm×250 mm，7 μm)，a mobile phase of acetonitrile and 0.4%H3PO4(12:88)，the detection wavelength at 327 nm and the flow rate being 1 ml・min-1. ResultsA linearity of Chlorogenic acid in the extract was obtained in the range of 0.071 6～0.644 4 μg r=0.999 6(n=6).The average recovery was 99.99% and RSD=1.61%(n=6). ConclusionThis method is easy，sensitive and accurate for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.Key wordsChlorogenic acid; HPLC; Determination金银花Flos Lonicerae又名忍冬、双花，为临床常用中药，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等［1］。
HPLC法检测金银花中的绿原酸和黄酮类物质的研究
3.4、 3.4、样品的测定
表3
木犀草素 66.76 绿原酸 1345.91
样品的含量测定（ g/g 样品的含量测定（µg/g )
芦丁 17.65 阿魏酸 33.65 新绿源酸 59.85
四、结论
本实验研究建立了用高效液相色谱法同时测定金银花中 的五种物质， 的五种物质，采用乙醇提取法和超声波萃取对金银花粗粉进 行了预处理。实验结果表明，采用80%乙醇浸泡和超声波萃取 行了预处理。实验结果表明，采用80%乙醇浸泡和超声波萃取 80% 能够有效的提取金银花中的五种有效成分，样品中的绿原酸 能够有效的提取金银花中的五种有效成分， 含量最高，五种组分的加标回收率为93.3%-98.9%， 含量最高，五种组分的加标回收率为93.3%-98.9%，相对标准 93.3% 偏差RSD≤3.02%。该方法提取率高，操作简单，重复性好， 偏差RSD≤3.02%。该方法提取率高，操作简单，重复性好， RSD≤3.02% 可同时分析金银花中的有机酸和黄酮类成分等有效成分， 可同时分析金银花中的有机酸和黄酮类成分等有效成分，改 变了把有机酸和黄酮类等分开的传统方法， 变了把有机酸和黄酮类等分开的传统方法，同时也提高了金 银花中的有效成分的提取率。
2.2、 2.2、样品的预处理
准确称取金银花粗粉5.064g， 准确称取金银花粗粉5.064g，置具塞锥形 5.064g 瓶中，准确加入80%乙醇50ml，浸泡24h， 瓶中，准确加入80%乙醇50ml，浸泡24h，转移 80%乙醇50ml 24h 至容量瓶中，然后在通风橱中超声波萃取 至容量瓶中， 30min，抽滤，合并滤液，再在60° 30min，抽滤，合并滤液，再在60°C下旋转蒸 60 发浓缩，并用石油醚脱脂， 0.45 m微孔滤膜。 发浓缩，并用石油醚脱脂，过0.45µm微孔滤膜。
金银花中绿原酸和黄酮的同时提取分离工艺研究
将金银花原料在 2.1 节优化的工艺条件下提取，得 绿原酸和总黄酮的浓缩液。选择聚酰胺为吸附剂，选 择不同体积分数的乙醇(1 0 %、5 0 %、9 0 %)作为洗脱 剂，通过柱层析梯度连续洗脱，得到绿原酸、水溶 性黄酮和脂溶性黄酮 3 个不同类型的洗脱物。测定结 果见图 3。
mAU
350 300 250 200 150 100
1.3.1 紫外分光光度法
1.3.1.1 芦丁标准溶液的配制
收稿日期：2009-06-11 基金项目：国家自然科学基金项目(20565003)；宁夏大学科学研究基金项目(ZR200706) 作者简介：郝凤霞(1978 －)，女，讲师，硕士，主要从事天然产物开发研究。E-mail：hfx220@
１ 材料与方法
1.1 材料与试剂 金银花采自宁夏银川市合木公司。 甲醇、磷酸、9 5 % 乙醇、氢氧化钠、硝酸铝为
分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司；绿原酸、 芦丁对照品 中国药品生物制品鉴定所；实验室用水为 自制蒸馏水。 1.2 仪器与设备
Agilent 1100 高效液相色谱仪 美国 Agilent 公司； UV-2450 紫外 - 可见分光光度计 日本岛津公司；AL204 型电子天平 梅特勒 - 托力多仪器有限公司；101A-1E 型电热鼓风干燥箱 上海实验仪器厂有限公司；TDL802B 型台式离心机 上海安亭科学仪器厂；KQ-250DE 型 数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；SHBⅢ型循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司。 1.3 方法
450
500
550
600
波长(nm)
图 １ 芦丁络合物吸收光谱
Fig.1 Absorption spectrum of rutin complex
HPLC测定银黄颗粒剂中绿原酸和黄芩苷的含量
D-!ED’"!OE!.#F’"PIC*J的 对 照 品 溶 液!按 上 述
色 谱条件进样测 定 峰 面 积!以 峰 面 积 积 分 值 为 纵 坐
标 !绿 原 酸 量 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 !计 算 得 回 归 方
程 QRS )E).FTU .E"D)VWS #’GGGG% 表 明 绿 原 酸
1=B21>61:>=
超 声 时 间 C*+, 绿 原 酸 含 量 C$ 黄 芩 苷 含 量 C$
.# #’-" #’GF
)# #’DE .’##
-# #’DF .’##
H 对照品溶液的制备
H’/ 绿 原 酸 对 照 品 精 密 称 取 对 照 品 绿 原 酸 D’-
*I!置 .#*J棕 色 量 瓶 中!加 "#$甲 醇 .#*J!超
万方数据
收 稿 日 期 !"##$%#&%#’
供 含 量测 定用3-黄芩 苷 对 照 品 .中 国 药 品 生 物 制 品 检 定所-批 号 ,,#’,1%"##","-供 含 量 测 定 用 32银 黄 颗 粒 剂.安 徽省亳 州市 辉 发 药 业 有 限 公 司32醋 酸 为 分 纯 -甲 醇 ;乙 腈 为 色 谱 纯 -水 为 重 蒸 水 4 ’ 色谱条件
表 ( 绿原酸回收率试验结果KfSNM
012’( g5<9:7<84;568h5;i5jk5;>?5=748;6@:8;8A5=>616>BKfSNM
取样量 CLI
).’F" ))’D" ))’) ))’E" )-’-
加入量 CLI
高效液相色谱法同时测定会银花中6种成分
高效液相色谱法同时测定会银花中6种成分
高效液相色谱法同时测定会银花中6种成分
建立了高效液相色谱法同时测定金银花中3种有机酸(绿原酸、咖啡酸、阿魏酸)和3种黄酮(芦丁、木犀草苷、槲皮素)的方法.样品中6个组分用50%甲醇在80℃水浴浸泡提取1 h,采用Agilent TC-C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,用紫外二极管阵列检测器检测,方法的加标回收率为93.3%-98.6%.实验结果表明该方法的精密度和重现性良好,操作简单、准确,可同时测定金银花中的有机酸类和黄酮类成分.
作者：胡海山余燕影万春花鄢兵龙洲雄Hu Haishan Yu Yanying Wan Chunhua Yan Bing Long Zhouxiong 作者单位：胡海山,Hu Haishan(南昌大学化学系,南昌,330031;江西省分析测试研究所,南昌,330029)
余燕影,Yu Yanying(南昌大学化学系,南昌,330031)
万春花,鄢兵,龙洲雄,Wan Chunhua,Yan Bing,Long Zhouxiong(江西省分析测试研究所,南昌,330029)
刊名：现代科学仪器ISTIC英文刊名：MODERN SCIENTIFIC INSTRUMENTS 年，卷(期)：2008 ""(5) 分类号：P65 关键词：高效液相色谱金银花绿原酸咖啡酸阿魏酸芦丁木犀草苷槲皮素。
HPLC法测定不同产地金银花中绿原酸和木犀草苷的含量
过处理，再精密吸取置于量瓶内，经流动相稀释后摇匀作为供 乙酸和金属离子螯合，会形成稳定水溶性的螯合物，由于乙二
试液。再取泮托拉唑钠作为对照品，增加流动相将溶液制成 胺四乙酸铜络合物稳定性高，紫外区也可以吸收，所以，厂家
50滋g/mL 为对照品溶液。对回收率进行检测，结果表明回收率达 对注射用泮托拉唑钠规格各不相同，而乙二胺甲乙中酸二钠
准偏差仅为 0.1%，试验重复性较好。
物成分，保证临床用药的安全性。注射用泮托拉唑钠与氯化钠
稳定性试验结果发现，经精密称取，增加流动相溶解制成 注射液溶解后，一定要放在室内保证药物的稳定性，而且要避免
50滋g/mL 溶液，经过摇匀处理用于供试品溶液，试验从开始，每 户外日光的直射。
隔 1h，连续 10h 吸取 20滋L 在液相色谱仪中品溶液。经过精密量取，取 20滋L 注入 高的灵敏度。以厂家药品发现其中含有乙二胺四乙酸二钠，根
液相色谱仪，对色谱图进行记录，根据外标法对峰面积含量进行 据此法对药物辅料中是否存在乙二胺四乙酸二钠进行检测判
计算，对含量标准偏差进行计算，结果表明，不同条件下含量标 断，可以避免厂家生产药物中投料虚假，甚至规范厂家说明书药
记录，结果表明各峰面积标准偏差仅为 0.2%，溶液 8h 内即可保 [1]李强，张羽强，颜耀东.HPLC 法测定注射用泮托拉唑钠有关物
持较好的稳定性。
质[J].解放军药学学报，2013，29（6）：529-532.
3结论
[2]赵莉莉.HPLC 梯度洗脱法测定泮托拉唑钠肠溶胶囊中的有关
泮托拉唑为第三代长效质子泵抑制剂，在临床上可以有 物质含量[J].中国现代药物应用，2016，10（5）：287-288.
成溶液，连续选择样本试验 6 次，结果表明，标准偏差仅为 可以彻底络合。
RP—HPLC法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量
RP—HPLC法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量目的：建立高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量的方法。
方法：采用Agilent C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇-水-冰醋酸（20：80：1）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为324nm。
结果：绿原酸在77.28μg～772.8μg的范围内呈良好的相关性，相关系数为0.9998，平均回收率分别为99.10%，RSD为0.39%。
结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于复方金银花颗粒的质量控制。
标签：RP-HPLC法复方金银花颗粒绿原酸含量测定复方金银花颗粒是由金银花、连翘和黄芩3味中药制成的复方制剂，具有清热解毒、凉血消肿之功效，主要用于风热感冒、喉痹、乳蛾、目痛、牙痛及痈肿疮疖等症的治疗[1]。
本品已收载于5卫生部药品标准6中药成方制剂第十册，其质量标准只有性状、鉴别、常规检查及含量测定，含量测定项分别对黄芩苷和连翘苷进行考察并将其作为评价指标，通过大量文献及相关资料表明金银花中的绿原酸也是有效成分之一，具有广泛的抗菌作用[2-3]。
所以本研究将对复方金银花中绿原酸的含量进行测定，以确保本品的内在质量[4]。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 仪器和设备高效液相色谱仪：美国安捷伦（1）1200紫外检测器；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计UV-2401（日本岛津）。
1.1.2 试剂与试药绿原酸对照品（批号：110753-200413 规格：约20mg，供含量测定用），购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯，水为重蒸水。
（）（）1.2 实验方法1.2.1 系统适用性试验及色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（20：80：1）為流动相；检测波长为324nm。
HPLC法测定银黄颗粒中绿原酸含量
HPLC法测定银黄颗粒中绿原酸含量银黄颗粒具有清热、解毒、消炎的功能。
临床上用于急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、上呼吸道感染等。
被收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第六册,是由金银花和黄芩的提取物制成的复方制剂,含有绿原酸[1]。
标准中未收载含量测定方法。
本文采用HPLC法测定绿原酸含量,方法简便、结果稳定,能够有效控制银黄颗粒的质量。
1 仪器与试剂8810型高效液相色谱仪(美国SP公司);SP100型紫外检测器;HW色谱工作站(HW-2000);AE240型电子天平(瑞士梅特勒);绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110753-200413);甲醇为色谱纯;水为纯化水;其余试剂均为分析纯;银黄颗粒(市售样品,批号见表2)。
2 方法与结果2.1 色谱条件。
色谱柱:Thermo Hypersil-Keystone C18(4.6×250mm,5μm);流动相:甲醇—0.2mol•L-1磷酸二氢钠溶液(磷酸调PH至2.7±0.1)(40 60);检测波长:320nm;流速:1.0ml•min-1;柱温:30℃;进样量:10μl;绿原酸的理论板数4213。
2.2 对照品溶液的制备。
精密称取绿原酸对照品10mg,置于100ml容量瓶中加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。
2.3 供试品溶液的制备。
取本品10袋内容物,混匀,研细,精密称取0.5g置于50ml量瓶中,加入50%甲醇30ml,超声处理30分钟,放置至室温,再加50%甲醇至刻度摇匀,滤过。
2.4 干扰性试验。
按银黄颗粒的制法,制成不含金银花的阴性样品,并按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液测定。
阴性对照液对测定无干扰。
2.5 线形关系测定。
精密量取对照品储备液1μl、5μl、10μl、15μl、20μl分别进样,按上述色谱条件进行测定,以峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为A=1.4×105C+7.6×104,r=0.9995,在0.1～2μg范围内呈良好的线性关系。
HPLC法同步测定金银花中绿原酸和咖啡酸含量
首都医药ＣＡＰＩＴＡＬＭＥＤＩＣＩＮＥ２００７．１２ＨＰＬＣ法同步测定金银花中绿原酸和咖啡酸含量北京市延庆县中医院（１０２１００）穆桂荣遗失声明我单位不慎将《卫生许可证》（证号：京药卫食证字［２００６］第１１０１０３ＪＸ００９５号）遗失，特此声明作废。
北京丽家宝贝科贸有限公司第十一婴幼用品便利店２００７年１２月１５日摘要目的同步测定河南产金银花中绿原酸和咖啡酸的含量。
方法采用ＲＰ－ＨＰＬＣ方法测定，采用Ｋｒｏｍａｓｉｌ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱进行分离，流动采用甲醇－水（含０．２％醋酸）系统梯度洗脱，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为２８０ｎｍ，柱温为３０℃，进样体积１０μＬ。
结果绿原酸、咖啡酸分别在下列范围内有良好的线性和回收率：０．９８０～９．８００μｇ（ｒ＝０．９９９９），９９．８５％（ｎ＝６，ＲＳＤ＝２．０％）；０．００４３２～０．４３２μｇ（ｒ＝０．９９９２），９８．７％（ｎ＝６，ＲＳＤ＝１．８％）。
结论同步测定金银花中有机酸含量更加有利于金银花药材的质量控制。
关键词ＲＰ－ＨＰＬＣ法同步测定金银花１．仪器、试剂与药材Ｗａｔｅｒｓ２６９５－２９９６高校液相色谱系统，Ｅｍｐｏｗｅｒ工作站，含四元梯度泵、自动进样器，ＢＰＺ１１Ｄ型电子分析天平。
对照品为绿原酸，水为重蒸水，醋酸、农盐酸为分析纯。
２．方法与结果２．１色谱条件Ｋｒｏｍａｓｉｌ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为２８０ｎｍ，柱温为３０℃，进样体积１０μｌ，流动相采用甲醇－水（含０．２％醋酸）系统梯度洗脱：０～２０ｍｉｎ，１０％～３０％；２０～６０ｍｉｎ，３０％～５０％；６０～６５ｍｉｎ，５０％～６０％。
理论塔板数以绿原酸计不低于１０００，以咖啡酸计不低于３０００。
２．２溶液制备供试品溶液的制备称金银花粉末（过７号筛）约１ｇ，精密称定，加５０ｍｌ甲醇，称重，超声３０ｍｉｎ，放凉后称重，补足重量，取上清液，０．２２μｍ微孔滤膜滤过，作为金银花试品溶液。