金银花中绿原酸提取方法的研究进展
金银花中绿原酸的提取工艺
金银花中绿原酸的提取工艺
金银花是一种常见的中草药，在中药材市场上价格也相对较高。
金银花中含有许多有效成分，其中绿原酸是一种重要的生物活性成分。
绿原酸具有抗病毒、抗氧化、抗炎、降血糖等多种药理作用，因此被
广泛应用于医药、保健品等领域。
提取绿原酸的方法有很多，其中以水提取为主。
具体的提取工艺
如下：
1. 原料处理：选用鲜嫩的金银花作为原料，清洗干净并控制好
水分。
2. 水提取：将处理好的金银花加入适量的水中，进行浸泡提取，一般提取时间为1-2小时。
3. 得液处理：将提取液过滤、浓缩，过滤后可以加入一些活性
炭等杂质吸附剂进行脱色处理。
4. 结晶纯化：将浓缩后的提取液加入乙酸乙酯中，进行结晶分离，再通过烘干、粉碎等步骤得到纯化的绿原酸。
需要注意的是，在提取绿原酸的过程中，要控制好提取温度、时
间等因素，选择合适的工艺参数才能得到高品质的绿原酸。
总之，绿原酸作为金银花中的一种重要成分，具有广泛的应用前景。
通过科学合理的提取工艺，可以获得更好的提取效果和更高的产量，促进金银花及其有效成分的深度开发利用。
高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量
高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量摘要提供色谱柱为Spherigel C18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）、流动相为乙腈-1.0%醋酸水、检测波长327nm等色谱条件，建立了高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量的方法。
在该色谱条件下，绿原酸的含量在1.56~25μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.999 2，加样回收率为99.7%，RSD为2.63%（n=5），最低检出限为0.05μg/mL。
结果表明，该方法操作简单，分离度好，适用于金银花含片中绿原酸含量的测定。
关键词高效液相色谱法（HPLC）；绿原酸；金银花含片金银花（Flos lonicerae）为忍冬科（Caprifoaceae）忍冬属（Lonicera）植物[1]。
金银花的活性成分之一为绿原酸（结构式见图1）。
绿原酸为咖啡酰奎尼酸衍生物，由奎尼酸和咖啡酸缩合而成，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂，微溶于乙酸乙酯，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性溶剂，是一种重要的生理活性物质。
绿原酸为抗菌消炎的主要成分，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌有显著的抑制作用；有抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用；与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关，还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[2]。
本文采用高效液相色谱法，对金银花含片中绿原酸的含量进行测定，以期提高金银花含片质量标准可控性，为进一步完善其质量标准提供试验依据。
1仪器与试药1.1仪器DionexAT330（美国）高效液相色谱仪：由P680四元泵、UVD170U紫外检测器和AT330恒温箱组成；KQ 3200 B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司生产）。
1.2材料与试剂金银花含片（河北省某厂生产）；绿原酸标准品（购自中国药品生物制品检定所）；甲醇、丙酮、无水乙醇、磷酸均为分析纯、乙腈为色谱纯，二次蒸馏水。
从金银花中提取绿原酸的工艺研究_符史良
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金银花绿原酸的提取纯化研究的开题报告
金银花绿原酸的提取纯化研究的开题报告
一、研究背景
金银花，又名忍冬、木藤花等，为常见的中药材。
金银花中最具药效的成分是绿原酸，具有抗病毒、抗氧化、解毒、抑菌、降血糖等多种药理作用。
因此，研究金银花绿原酸的提取纯化技术对于发掘其药效具有重要意义。
二、研究目的
本研究旨在探究金银花绿原酸的提取纯化方法，比较不同提取剂、提取时间、提取温度等条件对提取效率的影响，优化提取纯化工艺，进一步提高品质和产量。
三、研究内容
3.1 金银花的提取方法
选取乙醇、水、乙醚等不同提取剂，采用水提法、热提法、超声波辅助提取法等不同提取方法，比较不同条件下的提取效率。
3.2 绿原酸的纯化方法
根据提取物的性质，采用聚合物吸附法、逆流色谱法、溶剂萃取法等不同纯化方法，研究各方法对绿原酸的纯化效果，并结合成本、操作难度等方面进行综合评估。
3.3 研究金银花绿原酸的化学性质
通过理化性质分析，探究金银花绿原酸的结构、分子量、稳定性、pH值等化学性质。
四、研究意义
本研究对于深入了解金银花中绿原酸的提取纯化过程和工艺优化方法具有重要意义，可以提高绿原酸的提取率和纯度，进一步发挥其药理
作用，有利于促进金银花的有效利用和深入开发。
同时，本研究也对于其他类似中药提取纯化研究具有参考意义。
金银花提取物中绿原酸含量测定方法(H)
编号:FZD0166 金银花提取物中绿原酸（Chlorogenic acid）含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 150mm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈：水：0.4%磷酸水溶液（13：87，V/V）
流速：1mL/min
检测波长：327nm
柱温：25℃
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品约5mg于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶解定容。
2. 样品溶液制备精密称取金银花提取物样品适量，于50mL容量瓶中，加入50%甲醇超声振荡20min后，冷却至室温定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定，绿原酸保留时间约为12min，用外标法计算含量。
金银花中绿原酸和黄酮的同时提取分离工艺研究
将金银花原料在 2.1 节优化的工艺条件下提取，得 绿原酸和总黄酮的浓缩液。选择聚酰胺为吸附剂，选 择不同体积分数的乙醇(1 0 %、5 0 %、9 0 %)作为洗脱 剂，通过柱层析梯度连续洗脱，得到绿原酸、水溶 性黄酮和脂溶性黄酮 3 个不同类型的洗脱物。测定结 果见图 3。
mAU
350 300 250 200 150 100
1.3.1 紫外分光光度法
1.3.1.1 芦丁标准溶液的配制
收稿日期：2009-06-11 基金项目：国家自然科学基金项目(20565003)；宁夏大学科学研究基金项目(ZR200706) 作者简介：郝凤霞(1978 －)，女，讲师，硕士，主要从事天然产物开发研究。E-mail：hfx220@
１ 材料与方法
1.1 材料与试剂 金银花采自宁夏银川市合木公司。 甲醇、磷酸、9 5 % 乙醇、氢氧化钠、硝酸铝为
分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司；绿原酸、 芦丁对照品 中国药品生物制品鉴定所；实验室用水为 自制蒸馏水。 1.2 仪器与设备
Agilent 1100 高效液相色谱仪 美国 Agilent 公司； UV-2450 紫外 - 可见分光光度计 日本岛津公司；AL204 型电子天平 梅特勒 - 托力多仪器有限公司；101A-1E 型电热鼓风干燥箱 上海实验仪器厂有限公司；TDL802B 型台式离心机 上海安亭科学仪器厂；KQ-250DE 型 数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；SHBⅢ型循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司。 1.3 方法
450
500
550
600
波长(nm)
图 １ 芦丁络合物吸收光谱
Fig.1 Absorption spectrum of rutin complex
金银花中绿原酸和木犀草苷的同时提取及测定研究
金银花中绿原酸和木犀草苷的同时提取及测定研究王海侠;汪玮鑫;时维静;郜尽【摘要】Objective： To optimalize the extracting conditions of chlorogenic acid and galuteolin from Flos lonicerae, and develop one method for the content determination of chlorogenic acid and galuteohn. Methods： Through designing a L9 （34） orthogonal test to screen the best extracting parameters and extract chlorogenic acid and galuteolin in Flos lonicerae of the five different production regions under the condition. Then a HPLC method was dopted to determine the content of those samples. Results： Orthogonal experiment demonstrated that the best extracting conditions included solution of 35mL 50% ethanol and extracting time of one hour at 70~C. HPLC method： the mobile phase was 0.5% acetic acid and methanol, gradient elution separation,and detect at wave- length 350nm. A good linearity of chlorogenic acid and galuteolin was within the range of 0.2 - 1.6 ug and 0.2 -2.2 ug respectively, and the linear equations was y = 1 x 106x - 806 7 and y = 4 x 106x - 119 017, with regression coefficient 0. 999 9 and 0. 999 7. The precision, reproducibility, recovery of the method were all proved perfect. The four content of the chlorogenic acid and galuteolin of the five different production regions are higher than the required standard of Chinese Pharmacopoeia.%目的：优化金银花样品中绿原酸和木犀草苷提取工艺，并建立两者含量同时测定的方法。
金银花中绿原酸含量测定
金银花中绿原酸含量测定摘要】目的：通过测定金银花中主要特征成分绿原酸含量评价金银花品质。
方法：高效液相色谱法。
采用C185柱（250mm×4.6mm），流动相为乙腈-1.0%冰醋酸溶液，0.45μm滤膜抽滤，流速为1.0ml/min，检测波长为242nm。
结果：绿原酸进样量在0.2～1.0μg范围内与峰面积线性关系良好，精密度RSD为1.13%，平均回收率为101.2%。
结论：高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量操作简便，结果准确，可用于对金银花品质的评价。
【关键词】高效液相色谱法；金银花；绿原酸；含量；测定【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）06-0374-02金银花具有清热解毒之功效，绿原酸是其中的主要特征成分，而且也是目前所发现的金银花中药理活性最强的物质。
绿原酸是植物进行有氧呼吸过程中产生的苯丙素类化合物，经现代药理研究证实，这种化合物不仅能够抗病毒，而且可以止血、利肝利胆、抗氧化。
因此，绿原酸含量是金银花品质评定的重要依据。
通过提取绿原酸，并测定绿原酸含量，将为金银花药物开发与利用提供支持。
本文将探讨采用高效液相色谱法测定金银花中的绿原酸含量。
1．材料与方法1.1 材料与仪器材料：将采摘的金银花放置阴凉处，直至质量稳定。
使用粉碎机将金银花粉碎，过40目筛，以备试验使用。
试剂：绿原酸对照品（批号110753-200413）由中国药品生物制品检定所提供；水为纯化水；乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
仪器：采用美国安捷伦公司生产的全自动液相色谱仪系统Aligent1100（四元梯度洗脱泵、二极管检测器、温柱箱等）；昆山市超声波仪器有限公司生产的超声波清洗器；梅特勒-托利多仪器上海有限公司生产的电子分析天平。
1.2 试验方法1.2.1试样制备将金银花粉末精确称取1.0g，放置在100ml量瓶中，加入50%甲醇10ml，放入超声清洗器中震荡，进行减压过滤，然后将滤液放置在25ml量瓶中定容。
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ｒｅ—
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｏｒｏｕｇｈ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ． ＦＬＯＳ ＬＯＮＩＣＥＲＡＥ ＪＡＰＯＮＩＣＡＥ：Ｃｈｌｏｒｏｇｃｎｉｃ ａｃｉｄ：Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ
ｒｅｆｅｌ℃ｎｃｅ
金银花（ＦＬＯＳ
ＬＯＮＩＣＥＲＡＥ
ＪＡＰＯＮＩＣＡＥ）为忍冬属植物
安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＡｎｈｕｉ
Ａ西．Ｓｃｉ．２０１４，４２（１６）：４９６９－４９７０，４９７３
责任编辑石金友责任校对李岩
金银花中绿原酸提取方法的研究进展
李杰，王学廷，吴银萍，王利辉
（河南科技大学医学院，河南洛阳４７１００３）
摘要金银花为忍冬属植物忍冬干燥花蕾，包含挥发油、黄酮类、绿原酸类等多种有效成分，其中绿原酸具有抗茵消炎、降血脂、升高白 细胞等作用，目前常以绿原酸的含量评价金银花的质量。该文综述了金银花中绿原酸的提取方法，为今后深入的研究提供参考。 关键词金银花（ＦＬＯＳ ＬＯＮＩＣＥＲＡＥ ＪＡＰＯＮＩＣＡＥ）；绿原酸；提取方法
李荣¨叫以总浸膏率和绿原酸含量为指标，采用水煎煮 工艺提取绿原酸，认为金银花粉末过５０目筛，料液比为１：３０
（∥ｒｎｌ），煎煮３次，每次３０ ｖａｉｎ时，提取效果最佳，金银花总 浸膏得率为６０．７％，绿原酸的含量为６．７８％。程明川¨刘认 为水煎煮法可以最大限度的保留金银花药材中的化学成分，
有利于建立金银花药材的ＨＰＬＣ特征图谱。杨蓓蓓¨剐采用
绿原酸的提取，碱性条件下绿原酸的得率和质量分数都随着 ｐＨ值的增大而降低，在ｐＨ值约为４时，绿原酸的纯度和得 率最高，分别达到４５．２０％和３６．５９％。何德贵ｍ’、高春 荣‘冽、梁玉敏㈣、范远景㈨的研究结果也表明乙醇溶液的
ｐＨ值约为４时，回流提取的绿原酸收率最高。与水提法相
水提法是中药提取中常见的提取方法。以水为提取剂， 通过浸渍、煎煮、回流等方式提取中药中的活性成分。王盈 峰等¨纠采用了水浸渍的方法提取金银花中的绿原酸。当料 液比为１：４０（ｇ／ｍ１），温度为８０℃，时间为１５ ｍｉｎ时，绿原酸
和物料比进行了研究，认为溶剂类型是影响超声提取的主要因
素。采用微波预处理金银花，一方面可以提高绿原酸的提取
率，另一方面可以缩短超声提取的时间。最终确定了超声提取 的最佳工艺，即６０％乙醇为溶剂，微波处理１ ｍｉｎ，物料比ｌ：３０，
提取时间４５ ｍｉｎ。樊铭聪旧１研究了超声处理温度对绿原酸提
６其他提取方法
冯文字旧。采用石硫醇法、异戊醇法和改良的醋酸乙酯法
提取金银花中的绿原酸，改良的醋酸乙酯法优于其他２种方
取率的影响，随着超声温度的升高绿原酸的提取率先增加后减 小，温度为６０℃时绿原酸的提取率最高。此外，还有许多研究 学者四。“以甲醇溶液为提取剂来超声提取金银花中的绿原 酸，也取得了良好的结果。 ４微波提取法
是提取次数、溶剂酸碱度和提取时间。 韦藤幼Ｈｕ采用微波预处理法提取金银花中的绿原酸， 即将样品用乙醇溶液湿润，然后微波预处理破坏细胞组织， 再水提。结果表明金银花经过微波预处理后，绿原酸的提取 率比传统醇提法提高了１％。何培惮１运用正交试验对微波
预处理法进行了优化，发现在微波预处理过程中，乙醇用量
科技，２０１２，３３（１３）：１９７—２００．
７小结与展望
节能环保等优点，而受到了广大科技工作者的青睐。 郭振库＂驯认为乙醇浓度为３５％，料液比为ｌ：３０（ｇ／ｍ１），
压力为０．１ ＭＰａ，加热时间为１ ｍｉｎ，７０％微波功率（最大功率
８５０
金银花在中国作为药物使用已有很长的历史了，目前作 为经济植物在我国广大地区都有大规模的人工种植。从金
银花中提取的绿原酸除了可以应用在医药工业外，还广泛的
杨茉Ⅲ１以酶用量、酶解时间、酶解时溶液的酸碱度及酶
解温度为因素，进行正交试验。发现对绿原酸提取率的影响 程度依次为：酶解时间、酶用量、酶解温度、酶解时溶液的酸 碱度，认为酶解水提的最佳工艺为酶用量０．５％，酶解时ｐＨ
值６．０，酶解时间１．５ ｈ，酶解温度４０℃，水提温度为７０℃， 水提２次，１次１
ｈ。
４．５４％，其中影响绿原酸的主要因素为微波功率，然后依次
具有重大的现实意义。
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展［Ｊ］．中国药学杂志，１９９９，３４（１１）：７２４—７２７． ［２］王燕，王智民，林丽美，等．金银花及其同属植物化学成分研究进展 ［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，３３（８）：９６８－９７２． ［３］杜洪飞，张毅，翁代群，等．新鲜金银花挥发油不同提取方法的Ｃ，Ｃ・ＭＳ 研究［ｊ］．重庆中草药研究，２００９（２）：１３—１７． ［４］马勤川，贾凯，卢杰，等亚临界Ｒ１３４ａ萃取金银花挥发油［Ｊ］．食品工业
取的最佳工艺：浓度４３％的甲醇溶液为提取剂，料液比为
１：４０（ｇ／ｍ１），微波功率４００ Ｗ下提取８ ｍｉｎ，绿原酸的提取率
金银花中绿原酸的提取分离工艺具有十分广阔的应用前景
和巨大的社会、经济效益，同时对我国植物资源开发利用也
可以达到７．６２％。舒孝顺。加。把微波功率、料液比、提取次 数、提取时间和溶剂的提取剂的酸碱度作为影响因素，来进 行正交试验，发现在料液比为１：１２（∥ｒｎｌ），ｐＨ为３的水溶液 中进行微波提取２次，每次５ ｍｉｎ，绿原酸的提取率可以达到
约有２００种，我国有９８种，其中可供药用的品种４７种¨。ｏ。
金银花中含多种有效成分，如挥发油卜。４１、黄酮类¨“１及绿原
酸类‘７“］、三萜类‘¨”１和微量元素…１等。近年来化学和药 理研究证实，绿原酸是金银花中药理活性最强的成分之一，
是金银花的主要特征成分和药用成分，通常以绿原酸的含量
的主要因素，其次是回流时间，乙醇量影响最小。景晓
ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｖｉｅｗｅｄ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ
ａ
ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｏｓ Ｌｏｎｉｃｅｒａｅ ｉｎ ｐｒｅｓｅｎｔ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｃｎｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｆｌｏｓ Ｌｏｎｉｃｅｒａｅ Ｗａｓ
１水提法
有差异。林丹∞１对比了水提法、水提醇沉法、醇提法和酶解 法４种方法提取金银花中的绿原酸的收率，认为５０％的醇提 法绿原酸收率最高，可达１５．２８％。 绿原酸是由咖啡酸和奎尼酸形成的缩酚酸，在中性条件
下容易水解，造成绿原酸损失。因此，阎巧娟等Ⅲ１研究了乙 醇溶液酸碱度对绿原酸提取率的影响，在酸性条件下有利于
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ｗ）时，绿原酸的提取率最高，为５．８９％；并与超声波提
应用在食品、保健和日用化工等领域。虽然我国有着丰富的 富含绿原酸的植物资源如金银花，但对绿原酸的提取、纯化
和开发利用技术等方面的研究仍远落后发达国家，因此研究
取法进行了对比，认为微波法的绿原酸提取率和重复性均高
于超声波法。张霞㈣－采用响应曲面法优选出了微波辅助提
微波法具有操作简单、提取时间短、安全可靠、无污染、
法，该法可节约大量的乙醇原料，降低运行成本，认为实际生产 应以改良的乙酸乙酯法为先。王秀玲∽。采用索氏提取法提取 金银花中绿原酸，结果表明，乙醇浓度为’７０％，ｐＨ值为４，虹吸 次数为５时，绿原酸的提取率最高。乙醇的浓度是影响绿原酸 提取率的主要因素，ｐＨ值次之，虹吸次数影响最小。
中图分类号￥５６７
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ＬＩ
文献标识码Ａ
文章编号０５１７—６６１１（２０１４）１６—０４９６９—０２
ｏｎ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＣＭｏｒｏｇｃｎｉｃ Ａｃｉｄ ｉｎ Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｊｉｅ ｅｔ ａｌ（Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｏＨｅｇｅ，Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｙａｎｇ，Ｈｅｎａｎ ４７１００３） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｗａ ｉＳ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｄｒｙ ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｌｏｎｉｃｅｒａ．Ｔｈｅｒｅ ａｌ＇ｅ ｍａｎｙ ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ｉｎ ｉｔ．ｓｕｃｈ ａｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ．ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｇｃｎｉｃ ａｃｉｄ．‘ｎｌｅ ｃｈｌｏｒｏｇｃｎｉｃ ａｃｉｄ ｈａｓ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｍｉｒＩｉｓｈ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．１０ｗｅｒ ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ。ｈｏｉｓｔ ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ａｎｄ ｓ０ Ｏｎ．ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｔｈｅ ｋｅｙ
［５］高玉敏，王名洲，王建平，等．金银花化学成分的研究［Ｊ］．中草药，１９９５， ２６（１１）：５６８—５６９，６１５，６１７．
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２乙醇回流法 乙醇回流法是提取金银花中绿原酸常用的方法。刘祥 兰四。通过改变乙醇的浓度、回流时间以及料液比，发现乙醇 浓度为７５％，回流提取０．５ ｈ，料液比为１：１０（ｇ／ｍ１）的情况 下，提取绿原酸的效果最好，其中乙醇浓度是影响提取效果
忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．）的干燥花蕾。全世界忍冬属
比较多，提取液易发霉，并且过滤、浓缩、纯化等后续工作较 困难‘１
９｜。
了对比，认为超声波法的绿原酸提取率要高于水提法和乙醇回
流法，６０％的乙醇，用超声波加载提取３０ ｍｉｎ的提取效果最佳， 绿原酸的提取率可达４．１８％。周军啪］，曹渊ｂｕ的试验也证实 了超声波法要优于水提法和乙醇回流法这一结论。此外，周