绿原酸含量测定(紫外分光光度法)
研究小儿清热利肺口服液中总绿原酸含量的测定方法
研究小儿清热利肺口服液中总绿原酸含量的测定方法【分类号】：r286【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量。
方法采用diamonsiltm c18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，乙腈体积分数0.4%h3po4水溶液（体积比10∶90）为流动相，流速为1 ml·min-1，检测波长为327 nm，柱温为30 ℃。
结果绿原酸在质量浓度为16.28～81.4 μg范围内线性关系良好（r=0.999 6，n=5），样品平均回收率为100.31%，rsd为1.45%。
结论本法简便、快速、准确，适用于小儿清热利肺口服液的质量控制。
【关键词】小儿清热利肺口服液；高效液相色谱法；绿原酸；含量测定小儿清热利肺口服液由银翘散和麻杏石甘汤2个古方合方化裁而成，处方由金银花、连翘、牛蒡子、麻黄、等11味中药组成，主治外感风热邪在肺卫或卫气同病之风热咳嗽，用于发热、咳嗽，咯痰、流涕或鼻塞、咽痛、口渴、舌红黄等证候的小儿急性支气管炎。
其中绿原酸为金银花的主要活性成分，在牛蒡子中含量亦较高。
它是一种具有广泛生理和药理活性的物质，具有利胆、抗菌、降压、增加白细胞及兴奋中枢神经系统、抗肿瘤、降脂、清除自由基等多种药理作用。
小儿清热利肺口服液现有质量标准采用紫外分光光度法测定其盐酸麻黄碱含量，并未以绿原酸为含量测定指标。
因此，本实验建立高效液相色谱法测定小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量，旨在为完善小儿清热利肺口服液的质量标准提供基础。
1 仪器与试药lc20a高效液相色谱仪（日本岛津），spd紫外检测器，二元高压梯度泵；bp211d电子分析天平（satorius）；uv2450可见紫外分光光度仪（日本岛津）； hh6恒温水浴锅（宏华新佳）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753200413）；小儿清热利肺口服液（广州潘高寿药业股份有限公司提供，批号：e06002、f03002b、f10001b、i11002b）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
返魂草胶囊中绿原酸的含量测定
返魂草胶囊中绿原酸的含量测定周世友【摘要】目的:完善返魂草胶囊的质量标准,控制药品质量.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定返魂草胶囊中绿原酸的含量.结果:绿原酸在0.040 0～0.320 2 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.01%,RSD为0.93%.结论:本方法简便、快捷、灵敏、准确、重现性好,可作为该制剂质量控制的方法.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2013(030)003【总页数】3页(P355-357)【关键词】返魂草胶囊;绿原酸;高效液相色谱法【作者】周世友【作者单位】广西右江民族医学院附属医院药剂科,百色,533000【正文语种】中文【中图分类】R927.2返魂草胶囊是由《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂）第4册所载返魂草冲剂改剂而来。
由冲剂改剂为胶囊剂，药物剂型外观整洁大方，服用方便，掩盖了药物的不良气味，服用后能迅速崩解释放药物而发挥疗效。
返魂草胶囊由返魂草单味药组成。
具有清热祛痰，镇咳平喘之功效。
用于肺内感染，慢性支气管炎，喘息性支气管炎，急性呼吸道感染等。
在返魂草冲剂的质量标准中无含量测定项，为了完善返魂草胶囊的质量标准和控制药品质量，新增以绿原酸为测定指标的含量测定项。
返魂草主要活性成分为酚酸类化合物，包括绿原酸、咖啡酸、对-羟基苯乙酸等。
而其中的绿原酸［1］（Cyclohexanecar boxylic acid，C16 H 18 O9）具有较强的抗病毒作用，是制剂发挥疗效的主活性成分，选择绿原酸作为含量测定指标，可反映和控制本制剂的质量。
本文参照《中华人民共和国药典》2010年版一部金银花下绿原酸的含量测定方法［2］和文献［3～5］，采用高效液相色谱法对本品中绿原酸的含量进行测定。
1 仪器与试药1.1 仪器：高效液相色谱仪：SPD-10 AVP紫外检测器、LC-10 AT高压泵（日本岛津）紫外可见分光光度计（UV-2550日本岛津），电子天平（BP211D赛多利斯）。
杜仲叶中绿原酸的测定方法比较_张凤云
杜仲叶中绿原酸的测定方法比较张凤云1) 毛富春2) 张康健3) 张院民1)(1)西北林学院中心实验室,712100,陕西杨陵;2)基础课部;3)园林系;第一作者:女,39岁,助理研究员)摘 要 通过不同的提取方法和分离方法,对杜仲叶中绿原酸含量的测定结果进行了比较。
认为在常规实验室中,用乙醇提取—纸层析分离—紫外分光光度法测定杜仲叶、杜仲皮或杜仲产品中绿原酸含量的方法简便易行,结果可靠。
关键词 杜仲叶;绿原酸;提取;分离分类号 O 657.32,S 713杜仲皮在我国作为名贵滋补药材已有悠久的历史,但发现杜仲叶与皮具有基本相同的化学成分与药理作用并在国内外取得共识,只不过是近20年内的事。
绿原酸是杜仲有效药用成分之一,具有较广泛的抗菌、利胆、止血及增高白血球数量的作用。
因此,杜仲叶中绿原酸的提取、分离与测定问题,已不单为化学分析与药检工作者所关心,也为杜仲生产厂家和杜仲优树选育工作者所关注。
目前分析杜仲叶中绿原酸含量时的提取方法主要有甲醇提取法,氯仿—乙醇提取法,乙醇提取法,水提取法等〔1〕。
绿原酸的分析测定方法有毛细管电泳、高效液相色谱、可见分光光度法和紫外分光光度法等〔2～6〕。
对于一般常规性实验室,由于不具备大型精密仪器,用分光光度法测定绿原酸含量时还需对提取液进行必要的层析分离。
本文用紫外分光光度法的测定结果对两种提取方法和两种分离方法的效果进行了比较,为基层实验室提供了简易省时,结果可靠的绿原酸研究方法。
1 材料与方法1.1 材料来源杜仲树叶 采自西北林学院校园内。
杜仲优树为5年生,有略41号,湘11号,灌3号和黔8号。
其它优树为2年生,5年生和20年生。
杜仲茶叶 采自校内,2年生幼树的嫩叶,经杀青等处理。
杜仲产品 有杜仲粉、杜仲茶、杜仲咖啡、杜仲口服液等,均购自市场。
1.2 仪器和试剂751G 型分光光度计,UV —1型三用紫外分析仪,超声波发生器。
绿原酸(光谱纯,德国产),硅胶G (薄层层析用,青岛产),层析纸(上海产),其它试剂均为分析纯。
绿原酸含量测定
绿原酸提取与测定绿原酸（chlorogeni c acid）是一种从双子叶植物（如忍冬叶、咖啡豆、向日葵）的叶和果实分离得到的酚类,也是许多中草药（如杜仲、金银花、茵陈等）及中药复方制剂抗菌消炎、清热解毒的主要活性成分，目前已成为中草药制剂质量控制的主要指标之一。
绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
它是一种由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quini c acid,即1-羟基六氢没食子酸)缩合而成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caffeoylquinic acid),分子式为C16H18O9,分子量:345.30，半水合物为针状晶体，110℃时变为无水化合物，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，常温下呈淡黄色固体。
绿原酸在植物中分布广泛,从高等双子叶植物到蕨类植物均有报道，但含量较高的植物不多，主要存在于忍冬科忍冬属(Lonicera)、菊科蒿属(Artemisia)植物中，其中包括杜仲、金银花、向日葵、咖啡、可可树。
植物的不同品种、发育阶段、同一植株的不同部位、存放时间、生长环境等均能影响植物中绿原酸的含量。
以杜仲为例：叶中绿原酸的含量高于皮中含量数倍之多；用不同干燥方法对绿原酸含量的影响研究中,用阴干、晒干、直接烘干所测绿原酸含量分别是2.21%、2.17%和2.24%;鲜叶绿色含绿原酸3.52%,放臵1年后,叶色棕绿,绿原酸含量为2.47%。
由于绿原酸是极性较强的有机酸，易溶于醇、水，难溶于氯仿、乙醚,因此绿原酸的提取方法较多，有醇（甲醇、乙醇）溶法、水提醇沉、醇提铅沉、石灰乳沉淀法及聚酰胺柱层析法等。
下面介绍几种提取方法。
醇溶法：先用氯仿进行连续提取至流出液呈无色;再改用95%工业乙醇提取,提尽绿原酸;将所得乙醇提取液减压浓缩成浸膏,与干净细沙拌合后,用热水提取数次,使绿原酸转溶于水中,弃去残渣;所得水溶液用乙醚萃取,进一步除去脂溶性杂质;向脱脂后的水溶液中加入饱和无机盐溶液,至沉淀完全,并稍有过量为止。
实验报告---绿原酸标准曲线的绘制
绿原酸标准曲线的绘制一、实验目的1.1 熟练掌握用高效液相色谱仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；1.2 熟练掌握用紫外分光光度仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；二、原理2.1 绿原酸简介绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
2.2 高效液相色谱仪的工作原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
三、试剂与仪器3.1 材料与试剂：绿原酸标准品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；3.2 主要仪器：高效液相色谱仪，分析天平，25ml、50ml棕色容量瓶，滴定管，10ml,25ml,50ml,100ml容量瓶各7个，1ml、2ml、5ml的移液管，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器。
四、实验步骤4.1 用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线紫外分光光度法：精密称取绿原酸标准品0.0055g，用80%的乙醇溶解，转移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，制得标准母液。
精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。
紫外光谱法测定未知样液的绿原酸浓度
紫外光谱法测定未知样液中绿原酸浓度专业班级：制药一班姓名：黄春宇课程名称：仪器分析摘要：目的建立紫外光谱法测定绿原酸含量的方法。
该方法操作简单、准确，可用于测定绿原酸浓度。
关键词：绿原酸样液；绿原酸；紫外光谱法三叶草中富含绿原酸及其异构体（异绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸等），它们的理化性质与药理作用相似。
本品工艺提取方法能够将该类有机酸有效地提取出来，因此对绿原酸进行质量控制研究是非常必要的。
除了绿原酸外，其余成分在３５２ｎｍ以上紫外吸收几乎没有。
，采用紫外分光光度法可不经分离直接测定绿原酸的浓度。
１仪器与试药紫外可见分光光度计。
电子天平；标准绿原酸对照品，蒸馏水。
1CM比色皿；乙酸乙酯；乙醇；２方法与结果２．１紫外扫描光谱及波长的选择称取标准绿原酸对照品，用蒸馏水溶解，稀释成适宜浓度，记样液A、取蒸馏水稀释至刻度记样液B，放入1CM比色皿中，在２００～４００ｎｍ范围内扫描。
通过紫外分光光度法测定绿原酸的谱图２．２标准曲线的绘制精密称取于１０５℃干燥至恒重的绿原酸对照品２３．３５ｍｇ于１００ｍｌ容量瓶中，加入蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，使之成为绿原酸标准储备液。
分别精密吸取该储备液２．０，４．０，６．０，８．０，１０．０ｍｌ分别置于１００ｍｌ容量瓶中，加入蒸馏水定容，制成浓度（C ）为４．６７～２３．３５／ｍｌ的系列工作液，以蒸馏水为空白，分别在３５７．９ｎｍ波长处测定其紫外光谱的吸光度与浓度C 关系。
呈良好线性关系。
得到线性相关方程。
2.3 未知样液的配制用浓度70％乙醇和水做预试验确定提取溶剂，然后通过正交试验考察三叶草中绿原酸提取工艺的最佳条件。
在纯化试验中选用乙酸乙酯萃取法和聚酰胺层析法，；吸附有绿原酸的聚酰胺以浓度30％的乙醇得到的绿原酸纯度为33．2％。
记未知绿原酸样液C，2.4 未知样液中绿原酸浓度的测定用1cm吸收池取未知样液C，以蒸馏水为空白对照，测定其吸光度，带入相关的线性方程测得未知样液中绿原酸的浓度结论紫外分光光度法选择性高、反应灵敏，准确度和精密度良好，试剂稳定且无毒性，操作简便，易于推广应用，是测定未知样液浓度的一个较有实用价值的分光光度法。
紫外光度法测定金银黄中绿原酸含量的改进
紫外光度法测定金银黄中绿原酸含量的改进
何报作
【期刊名称】《广西中医药》
【年(卷),期】1992(015)005
【总页数】3页(P45-47)
【作者】何报作
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R282.710.3
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分光光度法测定6种忍冬藤中绿原酸的含量
摘要 ： 目的 以绿原酸的含量为指标， 测定评价川渝所产忍冬藤的质量。方法 采用分光光度法测定。结果 测定了川渝
Ｋ ｅ ｒ ｓ Ｃ ｕｉ ｏ ｉｅａ ； Ｃ ｌｒｇ ｎｃａ ｉ； Ｓ ｅ ￡ ｈ ｔｍｅｒ ｙ ｗｏ ｄ ： ａ ｌ Ｌ ｎｃ ｒｅ ｈｏｏ ｅ ｉ ｃｄ ｓ ｐ ｃｍｐ ｏｏ ｔ ｙ
忍冬藤 Ｃ ￣ｉＬ ｎ ｅａ 为常用 中药 ， ａ ｓ ｏ ｉ ｒｅ ｃ 具有清热 解毒 ， 风通 收度 （ ） 疏 Ａ 对进 样 浓 度 （ ） 行 回归 ， 绿 原 酸线 性 回 归方 程 为 Ａ 进 得 络的功效 。２０ ０５年版《 中国药典》 规定忍 冬藤 为忍冬科 Ｃ ｐｉ ｌ ００ ９７ Ｍ 一 ．０ ， ＝ ．９ ， 性 范 围 为 １ １４～２ ．８ ａ ｒｏｉ ｆ— ．３ ６ ００ ２７ ｒ ０ ９９９ 线 ．７ ３ ４０ ｍ１ 。 ａｅｅ植物忍冬 Ｌ ｎ ｅ ｐ ｎ ａＴ ｕ ｂ 的干燥茎 枝 。但在实 ｃａ ｏｉ ｒ ｊ ｏｉ ｈｎ ． ｃａａ ｃ 际使用 中， 多种金银 花原植 物的藤茎 （ 即茎 枝 ） 在不 同的 区域以 ２４ 供试 品溶液 的制备 精密称取药材细粉 约 ０５ ｇ加 甲醇定 ． ． ， 中药忍冬藤人药 。《 中华本草》 记载忍冬藤 的来 源有忍冬科 植物 容于 ２ 】 ５ ｍ 容量瓶 中 ， 超声 ３ ｉ， 置至室 温 ， 加 甲醇至 ２ ０ｒ ｎ 放 ａ 滴 ５ 精密吸取 １ｍ 上清液用 甲醇定溶于 ２ １ ｌ ５ｍ 容量瓶 中， 稀 忍冬 Ｌ ｊｐａｃ ｈ ｎ ． 山银 花 Ｌ ｃｎ２ Ｃ 、 ． ａｏｌ Ｔ ｕｂ 、 ａ ｏｆ３ Ｄ ． 红腺忍冬 ￡ ｙ ｍ ， １ａ ． － １摇匀 ， ｐｇａ ｃ ｑ 、 褐 毛 忍 冬 Ｌ ｆｌ ｔ ｅｔ ａＨｓ ｔ ．Ｇ Ｃ ｅｇ 释倍数为 １ ５ ， 为药材供试 品溶液。 ｏｌｕａＭｉ 黄 ． ｕｖ ｏ ｎ ｓ ｕｅ Ｓ ． ｈｎ ｏｍ ｏ ０作 ２ 等的茎枝 。据作者调研 ，Ｉ 川 渝忍 冬藤 品种 也很 复杂 。本 实验 ２５ 精 密度实验 将 １ ． 号样 品制成 的供试品溶液 ， 按标准 曲线项 对川渝主要 的 ６种金银 花原 植物的藤茎用 分光光度 法进行 了有 下操作重复测定 ６次 ，Ｓ Ｒ Ｄ为 ０ ３ ％（ ＝６ ， 明精密度 良好 。 ．１ ｎ ）说 效成分绿原酸的含量测定 ， 以期对 川渝产忍冬藤 的质量控制和开 ２ ６ 重现性实验 精密称取 ６份同一样 品（ 号 ） 各约 ０５ｇ按 ． １ ， ． ， 发提供参考 。 供试 品溶液制备项 下进 行制备 ， 按标准 曲线项下操作 测定 ，Ｓ ＲＤ
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绿原酸测定(紫外分光光度法) 绿原酸的含量测定方法有许多种。
由于许多物质同绿原酸分子结构相似,同存于一种药材或制剂中。
因此在进行含量测定时常难以分离。
常用分析方法有紫外分光光度法(UV)、高效液相色谱(HPLC)法等。
这些方法要么难以完全分离待测物质，要么易受干扰，或者分析时间长、效率低。
现在在中药成分分析中开始采用一种新技术即高效毛细管电泳(HPCE) 技术。
它具有高分离效率、分析时间短、进样量少、低检测限和重现性好等特点。
但由于在中药材的成分分析中才刚应用，效果如何还有待评价。
1.标准曲线的绘制:精密称取绿原酸标准样品?mg（0.25mmol），用95%乙醇溶解，转移到250ml容量瓶中，加95%乙醇到刻度，混匀。
此溶液浓度为1μmol/mL。
精密吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL 到25ml容量瓶中，加95%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。
在330nm处测定吸光度，以绿原酸标准品的浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标绘制标准曲线，并求出相应的回归方程。
2.样品中绿原酸含量的测定
（1）提取液的制备:准确称取干物质1g左右，置于250ml锥形瓶中，量取约50ml95%的乙醇溶解样品，并置于85℃的恒温水浴箱中，4h。
放置、冷却至室温，过滤，然后加95%的乙醇将提取液定容至250ml 容量瓶，待用。
（2）含量测定:准确吸取样品提取液5ml于25ml容量瓶中，加95%的乙醇稀释到刻度，得到待测样品液。
以95%的乙醇作空白，在
绿原酸标准液（mL）0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
绿原酸浓度（μmol/L）0.4 0.8 1.6 2.4 3.2 4.0
吸光值
3.绿原酸含量计算：
绿原酸含量＝C×5×M/干物质重
C:由标准曲线查得的浓度。