Ultimate3000型高效液相色谱仪自主操作培训教材
高效液相色谱法培训课件
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第二节 高效液相色谱仪
高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置 和压力表 等组成。
1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑 料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流 动相。
2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部 件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连 续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。 由于液相色谱仪所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小， 因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过
送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法 引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压 力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料 填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数 可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可 对流
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第一节 概 述
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第二节 高效液相色谱仪
合，再输至柱系统。 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度，来调
整混合样品中各组分的k值，使所有谱带都以最佳平均k值通 过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的 程序升温，所不同的是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通 过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的，而不是借改变温 度（温度程序）来达到。
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第二节 高效液相色谱仪
色谱柱，就需要高压泵注入流动相。 对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流量恒定、无
脉动，流量精度和重复性为0.5%左右。此外，还应耐腐蚀， 密封性好。
高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。 恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流量与流动相粘度和 柱渗透无关。 恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而 变化，如果系统阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流 量。
UItiMate3000高效液相色谱仪标准操作规程
UItiMate 3000高效液相色谱仪标准操作规程起草人日期年月日审核人日期年月日日期年月日日期年月日质量部审核日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部执行日期年月日分发部门检测中心〔3〕替换的文件名及编号修订的原因、目的：1.目的建立UItiMate 3000型高效液相色谱仪操作规程，使高效液相色谱仪的操作标准化、规范化。
2.适用范围适用于本公司UItiMate 3000型高效液相色谱仪的操作。
3.责任仪器使用人员负责本文件的执行，检测中心主任负责监督和指导。
4.依据UItiMate 3000型高效液相色谱仪使用说明书。
5.内容5.1.型号及仪器组成5.1.1.型号：UItiMate 3000型5.1.2.仪器组成：UItiMate 3000四元泵+UV检测器+自动进样器+柱温箱5.2.操作程序5.2.1.使用前的准备工作5.2.1.1.接入稳压电源将稳压电源的输入端插头插在墙上的插孔上。
5.2.1.2.打开电源开关按下稳压电源前面板的“ON”键，大约一分钟后，稳压电源将正常供电。
5.2.1.3.更换泵头清洗瓶中溶液：必须采用非循环模式进行冲洗，将一只1000mL容量的清洗瓶置于U3000系统上方的托盘中，清洗液为10%左右的甲醇或异丙醇的水溶液，所使用的试剂必须为色谱纯，用超纯水或二次蒸馏水来配置。
5.2.2.打开仪器电源开关打开仪器各部份后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。
各部分自检成功后，方可正常进行以下各步操作。
（备注：各电源开关没有先后顺序；）；5.2.2.1.打开电脑:打开电脑，等待约1～2分钟，变色龙服务监视器将会自动启动。
然后双击桌面的变色图标，打开软件。
5.2.3.四元泵：5.2.3.1.确定好各通道的流动相后，先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针两圈左右）。
然后在软件中按此“冲洗”键，泵将以3.0 mL/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止（备注：需要依次对各通道单独进行排气，不能同时进行）5.2.3.2.排气结束后，将清洗阀拧紧，调节好各通道的流动相比例及流速，启动“马达”按钮即可；5.2.4.自动进样器的清洗：自动进样器的清洗分三个部分，一般在每天或每次使用自动进样器前需先进行如下三个步骤排除自动进样器的气泡。
高效液相色谱戴安U-3000操作技巧介绍材料
U-3000操作手册1．操作条件：电压：220V, 温度：10-40℃，湿度：10%-85%。
2．注意事项：密封圈清洗溶液为1：9甲醇/水，每次使用前更换，样品必须经过0.45μm 的滤膜过滤，流动相也必须经过0.45μm过滤（色谱纯除外）并脱气。
3．若流动相含有无机盐或酸，每天仪器使用完后，要用5%：95%的甲醇/水清洗系统至少30min后再用100%甲醇冲30min关机。
开机则用5%：95%的甲醇/水冲10min，换流动相。
先开仪器电源，再开电脑，待电脑右下角的服务器监测器由黄色变为灰色，双击面上的图标，进入工作站，如图为工作站根目录，点击快捷栏内的“default panel tabset”出现以下界面，点开“”My Computer”前加号：选择“Chromeleon Server”,“OK”，出现下面的控制界面，分别在“Pump”下设置比例和流速如果流路内有气泡，拧松泵混合器上的“Purge”阀，点上图内的“Purge off”前的按钮，快速排气泡，待气泡排完后，上图内的“Purge off”前的按钮停止，拧紧“Purge”阀，在“Col．Comp”下设置柱温，在“VWD”下开氘灯，设置波长。
系统开始平衡，点快捷栏内的兰色圆点“”采集基线，待基线稳定后，点“”停止采集基线，准备测样。
新建文件夹（第一次使用必须）点快捷栏内“”，回到根目录，右键点击根目录，，点“New Directory”，输入文件夹名称，“OK”。
建立程序文件点“File”下“New”，“OK”，“下一步”，设置温度，“下一步”，设置流速和各通道比例，“下一步”，设置取样和推样速度，“下一步”，设置采集时间，选择采集信号，“下一步”，“下一步”，“下一步”，设置波长，“下一步”，“完成”，如需要，可更改一些参数后，点右键，选“Check”，“确定”，点快捷栏内的“”，选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。
新建方法文件点“File”下“New”，点“File”下“Save As”选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。
U3000高效液相色谱仪操作规程及封面
省产品质量监督检验检验研究院仪器设备操作规程（cg———2016）设备编号（）仪器名称U3000 液相色谱仪操作规程编制审核批准2016 年月日U3000高效液相色谱仪操作规程一基本原理U3000高效液相色谱系统由：①输液泵②自动进样器、③色谱柱温箱、④检测器、⑤数据处理系统组成。
使用高效液相色谱时，液体待检测物由流动相带入色谱柱，通过压力在色谱柱中移动，由于试样中各组分在色谱柱固定相与流动相间分配或吸附特性的差异，不同的物质组分顺序离开色谱柱，经检测器检测得到不同的色谱峰信号，依据组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。
二操作前准备1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。
三操作顺序1.开机2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,可以关闭界面。
2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标（工作站主程序）。
2.6在左下方点击仪器，则在右边会自动显示该仪器控制面板。
高效液相色谱仪操作手册(戴安全自动)
液相色谱操作规程-U3000(全自动)一、操作前准备:1.1流动相的配制:1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜(0.45um)还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理:1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品,用适当的溶剂(最好采用流动相或流动相的主成分)进行充分溶解(也可借助超声波进行超声溶解),使其浓度为0.1~1mg/mL(根据检测结果再适当调节溶液的浓度)。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜(0.45um)还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择:根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机:2.1打开电源,打开仪器接线板电源开关;2.2打开电脑显示器电源,打开电脑主机电源,启动电脑;2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源;等待各个部件自检完成2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,关闭界面。
2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标(工作站主程序)。
2.6在左下方点击仪器,则在右边会自动显示该仪器控制面板2.7 旋开泵上的排液阀(两圈以上);设置A通道为100%,点击“冲洗”,然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”;(默认冲洗5分钟);然后用同样的方法分别“冲洗”流路中其他通道气泡;排完气泡后关闭排液阀;2.8设置流动相的比例及流速后,点击“马达”。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
2.9在控制面板“自动进样器”控制框中,分别执行“灌注注射器”,“清洗缓冲环”,“清洗针外壁”,执行“到进样位置”;(操作过程中注意注射器有没有气泡。
如有先机器排气,如果不行手动拆除排气泡。
)3.0 在控制面板“柱温箱”控制框中,设置准备分析样品所使用的柱温箱温度。
高效液相色谱仪LC3000培训教程
高效液相色谱仪LC3000培训教程LC3000现场培训教程——基础部分一、培训目的A、了解LC3000高效液相色谱仪结构和基本操作。
B、掌握CXTH-3000色谱工作站的打开、设备连接、数据采集、数据处理，打印报告。
C、常见故障排除二、培训设备CXTH LC3000色谱仪P3000高压输液泵UV3000紫外检测器7725i手动进样阀T2000柱温箱(可选)C18色谱柱250×4.6 5u (可选)其它色谱基本条件(流动相准备、电脑和实验台等)三、溶剂准备1、条件:色谱级纯或者优级纯甲醇或者乙腈(ACN)、二次蒸馏水、流动相的过滤和超声 23、样品的前处理和过滤四、 LC3000色谱仪组成1、 P3000泵和UV3000检测器一元(等度)系统两元(梯度)系统1P3000泵界面和基本操作高压输液泵泵头压力传感器+排空泵壳体结构图2泵头以及传动结构图单向阀单向阀内部结构基本操作:泵的基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者泵仪器面板控制。
工作站的控制在下面色谱工作站基本控制内容中讲到，以下是泵面板的基本控制按钮:3PUMP/STOP 键:按一下该按键可以运行泵，再按一下停止泵运行。
START/HOLD键:按一下该键运行预先设定的程序链(PROGRAM)。
再按一下保持此时的程序运行。
PURGE键:冲洗键。
按一次泵按照(SYSTEM SETING)系统设定中设定冲洗流量运行冲洗。
再按一次泵停止冲洗。
作用:冲洗泵头气泡和快速更换流动相。
DEL键:退出键或者删除键。
进入子菜单下通过此键退回上一菜单。
ENTER键:进入键或者确认键。
按该键进入子菜单。
方向键:光标的上下左右移动。
2、UV3000检测器UV3000紫外检测器流通池基本操作:检测器基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者检测器仪器面板控制。
波长的设定:按下λ 按键进入波长设定界面，通过数字键设定预设波长TIME CONSTANT(时间常数):在MAIN MENU主菜单下，按ENTER键进入第一项DETECTOR PARAMETERS，将光标移动到TIME CONTANT下修改合适的TC值。
UltiMate3000高效液相色谱仪
UltiMate3000高效液相色谱仪配置说明南京途威仪器设备有限公司免费热线：4008-585-600优谱佳UHPLC+高效液相色谱系统• UHPLC+设计理念贯穿纳升液相、常规液相和快速液相整个范围• 基础型和标准分析型系统的最大压力创立了高效液相的新标准—620bar • 双三元液相系统—为常规分析设计，增加产率并拓展色谱分析技术应用范围• 变色龙色谱软件—智能化、专业化、人性化• Viper和nanoViper接头系统—可手动安装拆卸，适应超快速液相范围并保证零死体积。
RSLCnano系统• 提供20 nL/min到50 μL/min的纳升/毛细管/微升流速范围• 柱最高耐压可达800bar• 连续直流输送• 上样泵可提供从10 μL/min到2.5 mL/min的流速RSLC系统• 二元或四元系统都可用于超快速液相和常规液相的应用• 更广的压力—流速范围兼容超快速、超高分离度的分析应用• 系统最高耐压1000bar• 可提供高效双三元RSLC系统标准分析型系统• 为常规液相应用提供最佳性能和可靠性• 620bar耐压和100Hz的数据采集频率均兼容超快速液相应用• 可根据不同应用灵活配置• 最高流速可达10mL/min，满足全方位应用需求基础型系统• 满足常规应用需求且更加耐用• 分析结果一致可靠• 提供620bar耐压和高达100Hz数据采集频率，全面兼容UHPLC应用• 自动进样器与柱温箱整合，可提供样品和色谱柱温控功能检测器选项• 提供多种光学检测器选择－紫外/可见，荧光和示差折光检测器• 创新型Corona通用电喷雾式检测器• 高灵敏度库仑电化学检测器• 支持AB、布鲁克和赛默飞质谱检测器软件与备件• 变色龙软件—直观的仪器控制，先进的数据处理• D-Library数据库提供应用搜索支持• Viper与nanoViper手旋接头系统，真正零死体积，简化安装拆卸过程• 色谱柱加工制造—包括整体柱技术和先进的多基质键合技术UltiMate® 3000 RSLCnano 系统目前，RSLCnano系统研发的重点是提高样品通量。
高效液相色谱仪LC3000培训教程
高效液相色谱仪LC3000培训教程LC3000现场培训教程——基础部分一、培训目的A、了解LC3000高效液相色谱仪结构和基本操作。
B、掌握CXTH-3000色谱工作站的打开、设备连接、数据采集、数据处理，打印报告。
C、常见故障排除二、培训设备CXTH LC3000色谱仪P3000高压输液泵UV3000紫外检测器7725i手动进样阀T2000柱温箱(可选)C18色谱柱250×4.6 5u (可选)其它色谱基本条件(流动相准备、电脑和实验台等)三、溶剂准备1、条件:色谱级纯或者优级纯甲醇或者乙腈(ACN)、二次蒸馏水、流动相的过滤和超声 23、样品的前处理和过滤四、 LC3000色谱仪组成1、 P3000泵和UV3000检测器一元(等度)系统两元(梯度)系统1P3000泵界面和基本操作高压输液泵泵头压力传感器+排空泵壳体结构图2泵头以及传动结构图单向阀单向阀内部结构基本操作:泵的基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者泵仪器面板控制。
工作站的控制在下面色谱工作站基本控制内容中讲到，以下是泵面板的基本控制按钮:3PUMP/STOP 键:按一下该按键可以运行泵，再按一下停止泵运行。
START/HOLD键:按一下该键运行预先设定的程序链(PROGRAM)。
再按一下保持此时的程序运行。
PURGE键:冲洗键。
按一次泵按照(SYSTEM SETING)系统设定中设定冲洗流量运行冲洗。
再按一次泵停止冲洗。
作用:冲洗泵头气泡和快速更换流动相。
DEL键:退出键或者删除键。
进入子菜单下通过此键退回上一菜单。
ENTER键:进入键或者确认键。
按该键进入子菜单。
方向键:光标的上下左右移动。
2、UV3000检测器UV3000紫外检测器流通池基本操作:检测器基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者检测器仪器面板控制。
波长的设定:按下λ 按键进入波长设定界面，通过数字键设定预设波长TIME CONSTANT(时间常数):在MAIN MENU主菜单下，按ENTER键进入第一项DETECTOR PARAMETERS，将光标移动到TIME CONTANT下修改合适的TC值。
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Ultimate 3000型高效液相色谱仪自主操作培训教材福州大学测试中心2018年9月第一部分Ultimate 3000型高效液相色谱原理和仪器配置一、液相色谱原理简介1、色谱法起源色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
2、液相色谱法的分离原理溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相(stationary phase)时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
英文为High Performance Liquid Chromatography，简称为HPLC。
3、HPLC分离模式包括反相模式 (RP-LC)；正相模式 (NP-LC)；离子对色谱 (IPC)；离子交换色谱 (IEC)；体积排阻色谱 (GPC/GFC)；亲和色谱（AC）等。
其中，反相和正相模式又属于液液分配色谱。
•流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。
正相与反相的出峰顺序相反；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。
C-18柱（常用反相柱）。
4、HPLC与经典液相色谱方法以及气相色谱（GC）方法的比较4.1 HPLC与经典液相色谱方法比较高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。
可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。
4.2 HPLC与GC比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，占有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。
流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。
它除了起运载作用外，还可与组分作用，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
5、HPLC应用由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于非挥发性和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。
可应用于氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析。
二、HPLC基本术语和色谱图色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)--基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。
前者少见。
拖尾因子(tailing factor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T 应为0.95-1.05。
T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。
峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W＝4σ半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。
死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积(dead volume，V0)--由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。
它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。
为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
V0＝F×t0（F为流速）保留时间(retention time，tR)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
保留体积(retention volume，VR)--从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。
又称洗脱体积。
VR＝F×tR调整保留时间(adjusted retention time，t'R)--扣除死时间后的保留时间。
在实验条件（温度、固定相等）一定时，t'R只决定于组分的性质，因此，t'R（或tR）可用于定性。
t'R＝tR－t0调整保留体积(adjusted retention volume，V'R)--扣除死体积后的保留体积。
一张色谱图至少能提供以下信息：1 、样品中所含组分的最少个数；2、保留值---定性分析；3、色谱峰面积（或峰高）---定量分析；4、色谱峰的保留值和区域宽度---评价色谱柱的分离效能；5、根据相邻色谱峰之间的距离来选择合适的色谱分离条件。
三、HPLC仪器基本配置高效液相色谱仪通常由五大部分组成：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据输出系统。
其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。
第二部分Ultimate 3000型高效液相色谱基本操作二基本操作2.1 使用前的准备工作2.1.1 接入稳压电源将稳压电源的输入端插头插在墙上的插孔上。
2.1.2 流动相的更换和过滤1．检查流动相是否太少或放置太久。
超纯水或缓冲盐溶液建议每天必需更换且过滤，以防止长细菌。
超纯水必须为新制，这一点尤其重要。
（市售小瓶装质量好的纯净饮用水也是好的选择）2.梯度洗脱则有机相用一个通道（如A通道），超纯水或缓冲盐用另一个通道（如B通道），使用一段时间建议A和B通道进行更换。
3. 混合流动相的过滤原则：纯有机相或含一定比例有机相的就要用有机系0.45μm的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系0.45μm滤膜。
这一点需特别注意,因有机溶剂可以溶解水系滤膜,被溶解的水系滤膜更易损坏密封圈和柱塞杆。
4. 配好的流动相真空过滤时，当抽滤完后可继续抽滤几分钟，起到抽滤脱气的作用。
2.1.3 流动相的超声脱气1. 过滤后的流动相需要超声脱气约20分钟。
2. 建议超声波中的水位尽量高于流动相瓶中的水位，超声脱气效果会更佳。
3. 超声的时间不易过长，超声波工作会发热，超声时间过久时，超声波中的水会发热，随之流动相也发热升温，导致改变流动相的组成比例。
2.2 打开仪器电源开关打开仪器各部份后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。
各部分自检成功后，方可正常进行以下各步操作。
2.3. 打开软件2.3.1 打开电脑打开电脑，等待约1～2分钟，变色龙服务监视器将会自动启动。
或者双击电脑右下角的变色龙软件的服务管理器，如下图：将跳出如下图所示界面：方能进行以后的各项操作(包括以后用软件控制仪器也需要先激活服务管理器)。
2.3.2 打开变色龙软件双击电脑桌面的“Chromeleon 7”图标，进入变色龙软件。
将出现如下界面：类似电脑操作系统中的资源管理器，左方为根目录，右方为对应目录下的文件夹或文件。
左下方有三大模块：仪器：控制仪器和运行的相关操作界面。
数据：查看和处理仪器分析数据。
eWorkflows：固定工作流程。
单击某一模块，则进入相应的版块。
2.3.3.泵模块连接/断开：软件与泵的连接或断开。
一旦使用软件与泵进行了连接，泵的前面板上的控制键将不起作用。
暂停：仪器暂停时，计时器也暂停但不回到零点，按“继续”键后计时器和泵继续工作。
停泵：泵停止工作，计时器也回到零点。
继续：与“暂停”“停泵”配套使用。
流速/压力：设定泵的流速，压力会自动在线监测。
淋洗液：设定A/B/C/D各通道的比例，通过比例阀调节。
马达：泵和比例阀的开关。
快速清洗功能键。
每天或每次使用仪器分析样品前，需先清洗泵头或管路中残留的气泡或溶剂。
在使用此键前需先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针两圈左右）。
然后在软件中按此“冲洗”键，泵将以3.0 ml/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止。
若想手动停止，只要再按“冲洗”键，将停止清洗。
注意：若长时间未使用仪器，或该通道更换了另外的流动相，清洗时间不易太短，一般以5分钟为宜。
否则，有残留气泡或溶剂留在真空脱气机内，易造成流速不稳定，所分析成分的保留时间不稳定而影响正常的分析。
要使用的每个通道（A/B/C/D）都需要设100%A,B,C,D单独快速清洗来排气泡。
如果通过分别设定每个通道的比例让多通道进行同时快速清洗，泵流速建议控制在3ml/min以下，否则容易损坏比例阀。
清洗有缓冲盐的那个通道前后，一定要用去离子水清洗管路和泵头。
以防止缓冲盐直接与纯有机相（甲醇、乙腈等）混合而产生结晶堵塞比例阀。
清洗完毕，先停泵，再拧紧快速清洗阀。
切记：不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。
如下图，为按“冲洗”键前的警告信息。
2.3.4 进样器在U3000仪器控制界面上方的“WPS-3000SL”，将显示下图：位置：三个扇形区分别为；R、G、B。
以分析型自动进器为例，每个区可放置一个标准的分析型孔板和一个大号的孔板。
标准的分析型孔板(2ml)如下图所示：以R区为例，使用该孔板时，样品瓶的位置可定义为RA1-RA8、RB1-RB8、RC1-RC8、RD1-RD8、RE1-RE8，共40个样品瓶位置。
大进样量用大号孔板（10ml）如下图所示：以R区为例，使用该孔板时，样品瓶的位置可定义为R1、R2、R3、R4、R5，共5个样品瓶位置。
体积：RS/SD型的进样器标准注射器为100μl，最大进样量不能超过100μl。