石斛组织培养及快繁技术
铁皮石斛组织培养快繁技术
＋Ｂ Ａ２ ． ０ ｍｇ・Ｌ ＋ ＮＡＡ ０ ． １ ｍｇ・Ｌ － 。 ， 不 加 活
（ １ ） 继代培养基为 ： ① ＭＳ ＋Ｂ Ａ２ ． ０ ｍｇ・Ｌ
陈碧华 张 娟 范辉 华 李乾振
（ 福建省林业科学研 究院 福州 ３ ５ ０ ０ １ ２ ）
铁皮 石斛 Ｄ ｅ ｎ ｄ ｒ ｏ ｂ ｉ ｕ ｍｏ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｅ ， 又 叫黑 节草 、
（ ２ ）生 根 基 本 培 养 基 采 用 ： ＭＳ 、１ ／ ２ ＭＳ 、 １ ／ ４ ＭＳ ， 附力 ⅡＢ Ａ０ ． ２ ｍｇ・ Ｌ 一 、 ＮＡＡ１ ． ０ ｍｇ・ Ｌ 一 。
云南 铁皮 、 铁皮兰， 是 兰科 Ｏ ｒ ｃ ｈ ｉ ｄ ａ ｃ ｅ ａ ｅ多年 生 附 生 草本植物 ， 是 一种 珍贵 的野 生药 用 植物 。石 斛具 有 抗肿瘤 、 抗衰老、 增 强人 体 免 疫力 和扩 张 血 管 的作 用 。铁皮石斛 种子 自然 条件 下 繁殖 力低 ， 仅 靠分 株
１ ． １ 试 验材 料
将 无菌瓶 苗 生长正 常 的茎 芽 切下 ， 转 入继 代增 殖培养 基 ， 每次 培 养 ６ ０天 ， 重 复 ３次 ， 共培养 １ ８ ０
天， 观 察茎 芽增殖 生长状 况 ， 结果见 表 １ 。 表 １ 可 以看 出 ： 连续 采 用 ＭＳ为基 本 培 养 基 ， 导致 下部 叶片 轻 度 黄 化 ， 生长迟缓 ； 采 用 Ｎ６为 基
ｃ ｍ， 达 到组 培 工 厂 化 育 苗 水 平 。在 此 基 础 上 增 加 ０ ． ５ ｇ・ Ｌ 活性 炭 ， 茎 芽 增 殖倍 数 只 达 到 ２ ． ９ ， 但
铁皮石斛组培快繁技术实例分享 · 附配方
铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），属微子目，兰科多年生附生草本植物，是名贵的中药材。
本文在前人研究的基础上，以铁皮石斛的未成熟种子为外植体材料，研究了铁皮石斛的再生体系，其研究结果可为铁皮石斛的工厂化育苗提供技术支撑。
1 材料与方法1.1 外植体材料及培养条件1.1.1 外植体选择实验材料为八成熟的铁皮石斛蒴果。
1.1.2 材料预处理及消毒将铁皮石斛的蒴果先用自来水冲洗干净，再置于洗洁精溶液中摇洗3次，每次摇洗5分钟；取出蒴果用自来水洗净，沥干水后。
在超净工作台上先用75%浓度的酒精消毒3分钟，倒去酒精；再用0.15%的升汞消毒15分钟；倒去升汞消毒液，用无菌水冲洗4-5次，沥干备用。
接种时，将经过表面消毒的蒴果放在无菌的不锈钢盘上，切除头尾约0.5厘米部分并弃去，然后将蒴果中段沿纵轴切开，取出种子，均匀地接种到培养基表面。
1.1.3 培养条件培养室温度为(25±2)℃，以日光灯为光源，光照强度为2000-2500lx，照光10小时/天。
2 结果与分析2.1 初代培养：种子的萌发与无菌材料的建立将铁皮石斛的未成熟种子接种在初代培养基（配方见文末，下同）上，培养约15天后，用肉眼可观察到在培养基表面有浅绿色的小团粒(直径0.5-1.5毫米)。
这些浅绿色颗粒系原球茎体，或为少数原球茎体已萌发出子叶和第1片真叶而形成的无菌实生小苗。
再经过20-25天的培养，大部分原球茎体已萌发，形成了具1-2片真叶的幼苗，同时也产生了一些新增殖的原球茎体。
这些幼苗和原球茎体相互堆挤在一起，占满了初代培养基整个表层及表层上约1.5厘米厚的空间。
此时，铁皮石斛无菌材料的建立即告完成，应该及时将无菌实生小苗或原球茎体转接到新配制的增殖培养基或者生根壮苗培养基上进行培养。
2.2 继代增殖培养建立了铁皮石斛的无菌材料后，将原球茎转接到增殖培养基，培养90天，增殖系数非常高。
石斛组织培养与繁殖
石斛组织培养与繁殖0. 引言石斛( Dendrobium) 为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。
本实验选取铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序。
利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。
1.材料及方法1.1实验材料铁皮石斛为采自山区野生原种。
2009 年移栽至室内。
1.2试验方法1.2.1外植体的选取及预处理取2009 年的新生枝条作为外植体。
剪取新生枝条长约3 cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。
在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，之后浸泡在0. 1% Hgcl 溶液消毒处理10 min ，取出后用无菌水冲洗干净备用。
1.2.2接种在培养基中保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留 1 cm长。
并且每一小段必须保存有一茎节(芽) ，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。
其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS + 6BA0. 5 〜1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L; (2)MS + 6BA 0. 5 〜1. 0 mg/L +2, 4 - D 0. 2 mg/L; ( 3)MS + 6BA 2 mg/L +NAA0.4mg/L。
诱导生根培养基: 1 /2MS +NAA 0. 2 〜0. 5 mg/L 。
1.2.3组织培养室的条件接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10 h ，光照强度为1200 LX温度20 ± 2 Co1.2.4诱导生根枝条经过继代培养，小苗长到约2 cm 高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝条经修剪后接种到1/2MS+NAA 0. 2〜0. 5mg/L 培养基中，生根苗28 d 左右即可移栽到混合基质( 珍珠岩、树皮、泥碳等) 中炼苗。
铁皮石斛的组织培养及快速繁殖
０ 前言
铁皮石斛 （ ｅｄ ｂ ｍ ｅ ｉ ｍ 系兰科石斛 Ｄ ｎｒ ｉ ａ ｄ ） ｏ ｕ ｄｕ 属多年生附生植物 ， 种子无胚乳需与某些真菌共
间有称其为“ 救命仙 草” 医学界称其为“ ； 药界大 熊猫 ” 由于资源 匮乏 ， ； 用途广泛 ， 价格 昂贵 曾被 植物界称为“ 植物界 的大熊猫” 。据资料报道 ， 现
在铁皮石斛的鲜株达到 ２００ ｋ 。为了保护 ０ ｇ
濒危植物 ， 迅速发展新 、 、 奇 特物种 。本试验取 材本地野生铁皮石斛 ， 运用植物组织培养快速繁
生才能萌发 ， 不能用种子进行繁殖…。而传统的
分株、 扦插等方式繁殖率很低 ， 生长速度缓慢 ， 加
上现在人为无节制 的采集和破坏 ， 自然资源 的蕴
Ｔｈ ｐ ｄ Ｐ ｏ ａ ａ ｉ ｎ ｏ ｎ ｒ ｂｕ ｃ ｎ ｉｕ ｅ Ｒａ ｉ ｒ ｐ ｇ ｔ ｆＤｅ ｄ ｏ ｉ ｍ ａ ｄｄ ｍ ｏ
Ｗ ａ１ ｅ ｎ ｌ ｎ Ｖｉ ｏ ｌ ｘ Ｌｉ ｄ ｔ ． ｉ ｒ
ＷＡ Ｇ Ｂ—ｉ， Ａ ｎｊｎ Ｎ ｉ ｎ Ｇ Ｉ － ｑ Ａ ｕ
Ａｂｔａ ｔＴ ｅｃｕｔ ｆ ｈ ｏｓ ｏｌ ｅｉｄ ｃｄｉ ｅｍ ｄｕ ｆ Ｓ＋ ｓ ｃ ：ｈ ｌｓ ｒ ｏｔ ｃｕｄｂ ｕ ｅ ｔ ｅ ｉｍ ｏ ｒ ｅｏ ｓ ｎ ｎｈ Ｍ ６一Ｂ ． ｓ Ｌ一 ｓ Ａ Ｏ ５ｍ ／ ２ｍ ／ Ｌ＋Ｎ Ａ ０ ２ ｓ Ｌ－ ． ／ Ｌ＆ ２ ４一Ｄ ０ ２ ｓ Ｌ ａ ｅｅｐａｔ ｏ ｅｄｏｉｍ ｃｎ ｉｕ Ａ ．５ ｍ ／ ０ ４ ｍｓ ． ． ５ｍ ／ ．ｓ ｈ ｘ ｌ ｓ ｆ ｎ ｒｂ ａｄｄ ｍ ｔ ｎ Ｄ ｕ
铁皮石斛 的组织培养及快速繁殖
王碧琴 盖安俊 ，
（． Ｉ江西省科学院生物资源研究所， 江西 南昌 ３０２ ；． ３０９２南昌工程学院， 江西 南昌 ３０２） ３０９
铁皮石斛组培技术介绍
铁皮石斛组培技术介绍铁皮石斛的组织培养技术，大都以茎段、根尖、原球茎、茎尖和种胚等为外植体。
除了固体培养外，近几年来还出现了铁皮石斛液体悬浮培养。
一、铁皮石斛组培技术（1）茎段培养1.培养条件2.取材与消毒从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。
在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgClz 水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。
3.诱导培养用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。
15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。
继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。
4.增殖培养将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中，原球茎增殖速度很快，增殖倍数可达3～4倍，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行。
5.生根培养待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。
培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90%以上。
6.出瓶苗的过渡管理当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽。
移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，移至常温下炼苗7天，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水)，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中，2 个月后，成活率达90%以上。
（2）种子培养(胚培养)取人工授粉的铁皮石斛果实，用75%的酒精表面消毒，30秒后再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗4—5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm方块，接种到培养基上，每瓶3—5块。
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
霍山石斛组培快繁技术
霍山石斛组培快繁技术汇报人：日期:•引言•霍山石斛组培快繁技术流程•霍山石斛组培快繁技术关键环节目录•霍山石斛组培快繁技术应用前景•霍山石斛组培快繁技术挑战与对策01引言又称万丈须，是兰科石斛属草本植物，是中国国家二级保护植物。
霍山石斛主要分布于安徽、浙江、福建等地，其中安徽省霍山县是核心产区。
分布范围霍山石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效，常用于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热等病症。
药用价值霍山石斛简介组培快繁技术是指通过植物组织培养技术，快速繁殖优质种苗的一种方法。
定义特点应用领域具有繁殖速度快、不受自然环境限制、遗传性状稳定等优点。
广泛应用于药用植物、观赏植物、经济作物等领域。
030201组培快繁技术概述02霍山石斛组培快繁技术流程霍山石斛组培快繁技术首先需要选择合适的外植体作为起始材料，如种子、茎尖、根尖等。
合适来源外植体在经过清洗和切割后，需要进行表面消毒，以杀死表面的微生物和细菌。
表面消毒外植体内部可能存在微生物和病毒，需要进行内部消毒，以确保无菌环境。
内部消毒外植体选择与消毒培养基配制与接种培养基成分霍山石斛组培快繁技术的培养基需要包含适合植物生长的成分，如碳源、氮源、维生素、矿物质等。
培养基灭菌培养基在配制完成后需要进行灭菌处理，以杀死其中的微生物和细菌。
接种过程在无菌环境下，将外植体接种到培养基中，确保接种的质量和效率。
霍山石斛组培快繁技术的温度需要控制在适宜的范围内，以促进植物的生长和发育。
温度控制霍山石斛组培快繁技术的光周期需要控制在适宜的范围内，以促进植物的光合作用和生长。
光周期控制霍山石斛组培快繁技术的湿度需要控制在适宜的范围内，以防止干燥和湿度过大带来的问题。
湿度控制霍山石斛组培快繁技术的通气需要控制在适宜的范围内，以防止缺氧和过度通气带来的问题。
通气控制培养条件控制03霍山石斛组培快繁技术关键环节操作环境无菌操作需要在严格的无菌环境中进行，如无菌实验室或超净工作台。
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石斛组织培养及快繁技术
石斛兰是近几年在我国插花市场上流行的花卉，种类繁多，花形花姿优美，色彩艳丽，花期较长，具有较高的观赏价值。
由于其分株能力弱，繁殖系数低，繁殖速度慢，远远不能满足商品化生产的要求。
因此，组织培养和快繁技术是石斛商品化生产中重要的一个环节。
石斛属于兰科植物，通过不同的途径都可以形成完整的组培苗，以实现。
野生石斛的茎尖、茎段、叶片、种胚、鳞叶期原球茎、幼根以及根段等均可作为外植体，在适当条件和适当培养基中，就可诱导产生全能性的再生小植株。
但以嫩枝的茎尖、腋芽或茎节、花梗诱导成功的可能性较大，而正在生长的芽是最理想的外植体。
休眠芽也可用作外植体，但由于体积比较小，剥离较困难，生长也较慢。
一、无菌播种
石斛兰的种子极为细小，胚胎发育不完全，所谓的胚实际上就是一团未分化的胚细胞，且无胚乳组织，在自然状态下发芽率极低，只有与兰菌共生才能少量发芽，成苗更难，因此不能像其他植物一样在大田或苗床上播种，只有在无菌的补充营养的人工培养基上，促进其萌发成苗。
1、种子的采收与播种
应用于无菌播种的石斛兰的种子的果实以刚成熟但尚未开裂时效果较好，未成熟时能发芽，但发芽率略低，而如果果实成熟开裂，种子难以收集与消毒，且种子发芽力降低。
2、培养基的选择
石斛兰的播种培养基多种多样，不同的品种的最适培养基不同，比较常用的基本培养基有MS、改良MS、Nistch、N6、RE等。
3、培养基的消毒
由于培养基内有丰富营养物质，极适合细菌和真菌的繁殖，造成污染，影响组培的成功，因此培养基消毒是必不可少的一个环节。
消毒的方法一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。
二、组织培养
1、外植体的采集与灭菌
采用花梗为外植体时，由于花梗较光滑，消毒相对容易，污染率较低。
采用花芽作外植体时，在花梗再长出、花朵未长成时效果最好。
2、培养基的选择和培养
以石斛的播种培养为基本培养基再加入适量激素进行茎尖、节、花梗的组织培养均有成功的报道。
3、试管苗的移植
一般来说，当石斛兰试管苗长出3～4片叶，与3～4条根，高约5cm～10cm后，才可移
植于温室，由于在移栽过程中，要适应从无菌状态进入有菌自然状态，从光、温、湿稳定环境中进入不稳定的自然环境，从异养过渡到自养的过程。
因此，必须要有一个好的栽培环境，才能保证它们的成活率。
三、石斛组培技术存在的一些问题
1、要求较高，操作严格，价格不菲，只有具备了一定的经济和设备条件，才能实现规模化生产，这需要政府和大型企业的参与支持。
2、石斛试管苗出瓶后的成活率低，生长缓慢，苗期的管理十分困难，这是目前限制其生产的关键问题。
对此，国内许多单位正在开展相关研究，研究内容主要集中在以下三个方面：一是石斛特殊生理需求的机理研究；二是各类养分供应对于苗期石斛生长的作用；三是幼年石斛根系与菌根真菌的共生现象。
3、由组培苗长成的石斛与野生石斛相比，药用成分的含量和品质是否发生变化，还须要深入研究；同时，组培阶段各类前体物质的添加与后期药用成分的关系也值得继续探讨。