长寿花组培快繁实验设计
长寿花扦插繁育试验研究
长寿花扦插繁育试验研究摘要：本试验以长寿花叶片、茎段为材料，珍珠岩、蛭石为扦插基质，塑料杯和塑料盘为容器，不同配比生根剂处理，进行扦插繁育试验，以筛选最佳配合，为长寿花无性繁育提供试验依据和操作技术。
关键词：长寿花叶片扦插繁育试验长寿花（（学名：Kalanchoe blossfeldiana Poelln.）又名圣诞伽蓝菜、伽蓝花、圣诞长寿花、矮生伽蓝菜、寿星花、家乐花，是景天科伽蓝菜属常绿多年生草本多肉植物，原产非洲马达加斯加，长寿花植株矮小、株型紧凑，小巧玲珑，叶片肥大肉质、光亮终年翠绿，圆锥状顶生聚伞花序，筒状花冠，花朵密集拥簇成团，花色有绯红色、金黄色、深红色、橘黄色、粉红色、白色、杏黄色和淡紫色等，花色浓艳丰富，花色品种繁多，植株寿命长，整体观赏效果极佳。
长寿花不仅具有较高的观赏价值，长寿花还可以净化空气，吸收空气中甲醛一类的有毒有害物质。
同时，长寿花还是一味有名的中药，其味苦辛，具有清热解毒、理气、补肾、养心、安神、调经活血、明目之效，对咽喉肿痛、肺痛有较好的疗效，对抗疲劳、抗缺氧、抗微波辐射、抗毒以及对神经系统和新陈代谢均有双向调节作用。
长寿花植株低矮，花色艳丽丰富，花期长，正逢圣诞、元旦和春节，常作为礼品馈赠亲朋好友或节日装饰花卉，成为人们衬托节日气氛的节日用花，更以“长寿、永远健康”的寓意深得老年人的钟情。
小型盆栽用于布置窗台、书桌、案头，多株拼成大盆布置在公共场所的花槽、橱窗、大厅等，也可用于露地花坛布置，有很高的观赏价值。
长寿花的繁殖多采用无性繁殖方水法，有花梗扦插、茎段扦插、叶插等，本试验采用叶片和枝段作为扦插材料，可用繁殖材料较多，取材料时对原株的生长和株形影响较小，操作简单，成本低，容易推广普及。
1、试验设计A组： 1000 mg/L ABT生根液，叶片快醮扦插。
B组： 200 mg/L生根液，叶片浸泡30分钟扦插。
C组：1000 mg/L ABT生根液，枝段快醮扦插。
红花长寿花的组织培养
红花长寿花的组织培养作者：魏晓菲来源：《农业与技术》2015年第17期摘要：本试验以长寿花（Kalanchoe blossfeldiana）叶片、茎段作为外植体，进行了初代组织培养，并进行增殖、生根培养和炼苗移栽，在建立长寿花组织培养无菌体系的基础上，对比了外植体不同灭菌方法对灭菌效果的影响，以及不同激素浓度对长寿花叶片、茎段芽分化、不定芽增殖及其生根的影响。
结果表明：75%的酒精（0.5min）+0.1%升汞（8min）具有很好的消毒作用；MS +6-BA1.0mg/L +NAA0.2mg/L是不定芽分化的最佳培养基配比；MS+6-BA1.0mg/L +NAA0.2mg/L是不定芽增殖的最佳培养基配比；1/2MS+NAA0.2 mg/L是生根的最佳培养基配比。
关键词：外植体；长寿花；培养基；愈伤组织；增殖；生根中图分类号：R282.71 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.201509320431 序言长寿花（ Kalanchoe blossfeldiana ）为景天科伽蓝菜属多年生常绿肉质植物，原产非洲马达加斯加岛，别名圣诞伽蓝菜、寿星花、假川莲、圣诞伽。
长寿花植株矮小，株形紧凑，叶肉质，叶色碧绿，花小，为圆锥状聚伞花序，排列紧密拥簇成团，花期从12月下旬开始，可持续到第2年5月初，故名长寿花。
性喜温暖湿润的环境，喜阳光充足，也能耐半荫，不耐寒，属于比较好养的盆栽花卉。
长寿花品种繁多（单瓣、重瓣），色彩丰富（大红、黄色、橘黄色、粉色、玫粉色、白色等），栽培管理简单，花盛期正值圣诞、元旦、春节，可为喜庆节日增添欢乐气氛，开花时把不同花色品种组合在一起，更具观赏价值，还可以用在公共场所的花槽、橱窗、大厅等栽培，因此应用广泛，在花卉中具有广阔发展前景。
传统的繁殖方法有扦插繁殖（茎插、叶插）和播种繁殖，这些方法容易导致病毒的积累、品种退化、繁殖率低，影响长寿花的产量和品质，从而严重制约了其商品化生产。
长寿花叶片离体快繁技术研究
长寿花叶片离体快繁技术研究作者：刘宇麒张英宗宪春来源：《现代农业科技》2016年第07期摘要以长寿花幼嫩叶片为外植体，研究不同灭菌时间对长寿花幼嫩叶片再生能力的影响以及不同激素配比对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根诱导的影响。
结果表明：长寿花幼嫩叶片最佳的灭菌方式为75%酒精消毒30 s，无菌水冲洗4次，再用0.1%升汞消毒7 min，无菌水冲洗5次；愈伤组织诱导的最适培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L；不定芽诱导分化的最适培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；不定芽诱导生根的最适培养基配方为1/2 MS+IBA 0.2 mg/L。
关键词长寿花；嫩叶片；组织培养；快速繁殖中图分类号 S682.035.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）07-0143-02Abstract The research using explant from seeding leaf of Kalanchoe blossfeldiana，the regeneration ability of the leaf was tested under different duration of sterilization，and the effects of different hormones combination on the induction of callus、adventitious buds and roots of Kalanchoe blossfeldiana.The results showed that the best way of sterilization was sterilizing the leaf in 75% ethanol for 30 seconds，washing 4 times with disinfection water，then in 0.1% mercury bichloride for 7 minutes and washing with disfection water for 5 times；the optimum medium for the induction of leaves was MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L；the suitable culture medium for bud differentiation and proliferation was MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；the optimum rooting medium was 1/2 MS+IBA 0.2 mg/L.Key words Kalanchoe blossfeldiana；seedling leaf；tissue culture；rapid propagation长寿花（Kalanchoe blossfeldiana），又叫矮生伽蓝菜、寿星花、假川莲，是景天科（Crassulaceae）伽蓝菜属（Kalanchoe）多年生肉质草本植物[1]。
长寿花的繁殖方法
04
组织培养
选择外植体
最佳外植体
长寿花组织培养中选择最佳外植体是关 键步骤之一。通常，长寿花的外植体选 择包括茎尖、叶片、叶柄和花瓣等。其 中，茎尖和叶片是较为常用的外植体。
VS
外植体消毒
在进行组织培养前，需要对所选用的外植 体进行消毒处理，以消除表面附着的微生 物和细菌等。常用的消毒剂包括酒精、升 汞等，对外植体进行浸泡或清洗。
05
长寿花的栽培技术
光照管理
要点一
充足的光照
长寿花需要充足的光照，每天至少需要6-8小时的直射 阳光，如果光照不足，可以通过人工补光来增加光照 强度。
要点二
避免强光
在夏季和中午时分，需要采取措施遮阴，以避免强光 对长寿花造成伤害。
浇水管理
适量浇水
长寿花需要适量的水分，但过多的水分会导致根部腐 烂。建议使用排水良好的土壤，并定期检查土壤湿度 。
病虫害防治
定期检查
定期检查长寿花的生长情况，及时发现病虫害并 采取措施防治。
使用生物防治
使用生物防治方法，如放生天敌昆虫来控制病虫 害，减少对环境的污染。
化学防治
在必要时使用化学防治方法，但要注意使用量和 频率，避免对环境和植物造成伤害。
06
长寿花的养护技巧
修剪技巧
幼苗期修剪
长寿花在幼苗期需要及早修剪，以促进分枝和株型美观。
长寿花的繁殖方 法
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目录
• 扦插繁殖 • 播种繁殖 • 分株繁殖 • 组织培养 • 长寿花的栽培技术 • 长寿花的养护技巧
01
扦插繁殖
选择插条
插条选择
选择健康、粗壮、无病虫害的枝条作为插条，插条的长度应控制在8-10厘米之 间，保留2片叶子进行光合作用。
长寿花组织培养快繁技术
长寿花为景天科伽蓝菜属中一种草本植物，又名圣诞伽蓝菜等，是一种常见草本花卉，可露地栽植及盆栽，观赏价值非常好。
长寿花观赏效果、开花时节及观赏期极具特点，是园林绿化、室内美化应用中非常好的花材。
长寿花常用繁殖方法为扦插繁殖和组培繁殖。
扦插繁殖应用较早，技术比较成熟，组培繁殖技术应用较晚，还有开发空间，结合花卉生产实践介绍组织培养快繁技术。
1长寿花组培外植体的处理长寿花的茎顶、叶、茎、花芽和花均可以作为外植体，在作者实践中，以茎段做为外植体的效果最好。
采集长寿花茎段，带回组培实验室，清水洗净截小段，装进广口瓶，无菌纱布封瓶口，流水冲洗15分钟，沥干水分将截成小段嫩枝再进一步截成2~3厘米长短段，在0.1%升汞（HgCl 2）溶液中浸泡3分钟，再用无菌水冲洗4~5次，沥干水分，带入接种室中，放入已经消过毒的超净工作台上。
在接种前，外植体还需在75%的酒精溶液中浸泡30分钟，用无菌水冲4~5次后，再用无菌的药棉拭干水分，放在培养皿（垫上无菌滤纸）中。
茎段用酒精灯灼烧过的手术刀切割成0.5厘米的小段后再接种，首次接种每瓶只接1块原材料，这样可以降低它的污染率。
接种时使茎段保持横卧状态会有较好的效果，保持横卧时，茎段侧面两个切口都能够生成愈伤组织，最后会连到一起，保证产生较大面积的愈伤组织块，为形成大量不定芽做好基础。
2长寿花组培培养基配方选取长寿花整个室内组培过程分为初代培养、增殖培养和生根培养三个阶段。
前两个阶段基本培养基选取MS ，生根培养阶段基本培养基选取1/2MS ，然后往基本培养基中添加不同种类和浓度的激素。
各配方的培养基均采用固体培养基，添加琼脂量为6g/L ，蔗糖量为30g/L ，各配方pH 值均调整为5.8。
所有培养基都要用高压灭菌锅高压灭菌，条件为121℃、131kPa 、30分钟。
初代培养主要以诱导为目的，可选用MS+6-BA1.0毫克/升+NAA0.1毫克/升配方，在实践中发现该配方除了污染之外，每个组培瓶中均能够100%的形成愈伤组织，而且愈伤组织能够较好地诱导出不定芽。
重瓣长寿花的组培快繁技术研究
143实验研究长寿花（Narcissus jonquilla L.）又名寿星花、伽蓝花，为景天科伽蓝菜属多肉植物。
多年生肉质草本。
株高10-30厘米。
圆锥状聚伞花序，花序长7-10厘米。
每株有花序5-7个，花瓣4片，花朵色彩丰富。
近年来长寿花凭借植株小巧、株型紧凑、花色艳丽、花量大、花期长、易养植、耐干旱等特点脱颖而出，成为人见人爱的室内观花小盆栽。
长寿花通常采用播种、扦插和分株等繁殖，但由于市场销量大的重瓣系列多为进口品种，扦插繁殖退化严重，播种繁殖变异较大，远远满足不了市场的需要。
为保持重瓣长寿花品种的优良特性，同时提高其繁殖速率，为生产提供大量优质种苗，本试验对重瓣长寿花进行组织培养，以找到一种适合重瓣长寿花的快速繁殖方法。
1.试验材料与方法1.1试验材料试验用长寿花品种为紫缤，取自潍坊职业学院农林科技学院智能温室。
2017年11月从盆栽植株上选取幼嫩叶片和茎段作为外植体。
1.2培养基的配制以MS为基本培养基，添加2%-3%的白砂糖和0.65%的琼脂粉。
根据各阶段试验设计添加不同浓度的6-BA和NAA，pH值均为6.2-6.4。
按照固体培养基常规制作方法进行配制、分装、高压灭菌，灭菌完成后取出冷却备用。
1.3外植体的选择与处理从盆栽植株上，选取健壮无病虫害的最上端第一片展开叶片和幼嫩茎段（2~3cm）作为外植体。
将茎段剪去叶片，留下大约5mm长的叶柄；叶片不用修剪。
把处理好的茎段和叶片冲洗干净，再放到5%的洗洁精溶液中浸洗约5min，最后用流水冲洗干净，放到带盖的广口瓶中备用。
1.4外植体的表面灭菌与接种超净工作台按照常规进行消毒后，将洗净的外植体放到超净工作台上，先用75%酒精消毒30-60s，再用有效氯浓度1%的次氯酸钠溶液灭菌 10~20 min。
最后，用无菌水冲洗3遍后，分别接种于不同的诱导培养基上。
1.5外植体的初代培养将外植体接种于诱导培养基上，诱导分化试验所用激素浓度和配比如下:6-BA选择0.2mg/L，0.5mg/L两个浓度梯度，NAA选择0.1mg/L，0.2mg/L两个浓度梯度，以不添加任何激素的空白MS培养基为对照，共5个处理，每个处理接种20瓶。
长寿花组织培养技术研究
Á
度为 ２５ ℃±２ ℃，光照 １２ ｈ／ｄ。
基本培养基为 ＭＳ，蔗糖浓度为 ３％，琼脂成分为
０．７％，ｐＨ 值为 ５．８￣６．０。诱导愈伤组织的附加成分为
（１ ） ６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ；（２ ） ６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ；（３ ） ６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ； （ ４ ） ６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ。 增殖
4444 444 444 444
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2.4
激素对不定芽增殖 、 生根培养的影响
系，长寿花叶片较其茎尖和叶柄容易形成愈伤组织， 在进行组织培养快繁时，考虑到市场和生产成本， 应选较合适的材料作外植体，而长寿花接近根部的 茎段诱导时间长，污染率高，不适合作外植体进行 组织培养 。 长寿花组培技术使优良品种在短短数年内，可获 得更多的生根苗，这一技术的应用，可实现长寿花工 厂化生产。
激素对愈伤组织及生根培养的影响
１３
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培养基为 （５ ） ６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ； （６ ） ６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ； （ ７ ） ６－ＢＡ ４．０ ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；生根培养基为 （ ８ ） 基本培养基 ＭＳ 不加任何激素附加物； （ ９ ） ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ； （ １０ ） ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ。在 １ ５００￣２ ０００ Ｌｕｘ 的光照条件下，培养温
长寿花离体快繁技术研究
长寿花离体快繁技术研究摘要以长寿花叶片为外植体，对不定芽的诱导及试管苗的增殖进行了研究，结果表明：长寿花叶片一步成苗的适宜培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖3%+琼脂粉6.5 g/L，试管苗在MS基本培养基上增殖系数较高，试管苗生长健壮，所以MS是试管苗增殖的适宜培养基。
关键词长寿花；不定芽；诱导；增殖长寿花（Kalanchod blossfeldiana CV. Tomthumb），别名寿星花，为景天科长寿花属多年生常绿多浆植物。
叶片翠绿，花朵密集，花色丰富，有红、橙、紫、粉、白等色，花期12月至翌年4月底，由于其花期长，正逢冬、春少花季节，又有着吉祥、长寿之寓意，是元旦和春节期间馈赠亲友和长辈的理想盆花。
长寿花在一定程度上可以有效吸收甲醛，对房屋装修后的甲醛气体有一定净化能力[1]。
此外，还可以从长寿花中提取红色素，研究表明[2]，长寿花的红色素水溶性好，在一定范围内对光和热有一定的耐受性，稳定性好，有一定的开发利用价值。
总体来看，出于市场不断成熟、消费渐趋日常化等原因，种苗商预测近几年长寿花种苗周年供应更加均衡，销量也会保持平稳上升态势[3]。
但长寿花的常规繁殖方式为初夏或初秋枝条扦插[4]，易受季节限制，繁殖速度较慢，通过组织培养可以大大加快其繁殖速度，实现周年生产。
目前，已有通过组织培养对长寿花进行快繁的相关研究[5-11]。
从已有报道来看，在对长寿花进行快速繁殖时，可以选择花序、茎尖和带腋芽茎段作为外植体，也可采集叶片作为外植体，但在以叶片为外植体时，主要是先进行愈伤组织的诱导，再进行分化和试管苗的增殖，而直接从叶片上诱导出不定芽的报道较少。
该文以长寿花的叶片为外植体，直接从叶片上诱导出不定芽和根系，实现一步成苗，并进行试管苗的增殖培养。
1 材料与方法1.1 试验材料以市售盆栽长寿花作为供试材料。
1.2 试验方法1.2.1 外植体的采集、清洗和消毒。
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潍坊市职业学院项目课程实验设计项目名称：植物的组培快繁实训地点：学院组培中心实验设计者：王珏（0903199）09级园林工程系生物技术及应用专业设计时间：2010年12月26日—2011年7月9日指导教师：丁雪珍一实验名称：长寿花的组培快繁二实验目的：1、通过对长寿花进行组培快繁从而进一步了解植物组培快繁的原理；2、熟悉并掌握植物组配快繁的工艺流程；3、更熟练的掌握组培快繁的多项技术；4、对植物的组织培养的方法及有关知识拥有更深的了解；三实验原理植物的组织培养是指在无菌条件下，将植物的离体器官、组织、细胞以及原生质体，应用人工培养基，创造适宜的培养条件，使其长成完整小植株的过程。
植物的组织培养也就是根据植物细胞的全能性（每个具有完整细胞核的细胞都具有该植物的全部遗传信息和产生完整植物体的能力）利用外植体（从植物体上切取下的根、茎、叶、花、果实、种子、器官以及各种组织和细胞）进行了转接、继代培养以及驯化的过程，虽然此过程投资少、成本低而且历时短但是植物组织培养拥有很多优点。
如：1、研究材料单一，无性系遗传信息相同；进而保证了遗传性状的一致性，避免了误差，实验材料的纯度高，可以减少实验的重复而不影响实验的精度。
2、经济方便，效率高；进行实验时投资少、成本低但是利润高从而节约了人力和物力。
3、培养条件了可控，可周年实验或生产；避免了由于节气带来的影响。
4、生长快，周期短，重复性强；5、管理方便，利于自动化控制；通过仪器来提供试管苗的培养环境，大大节省了人力、物力及土地，也有利于工厂化生产。
本次实训以植物花月为对象用其幼叶作外植体进行组织培养（无菌短枝型），来领悟植物组织培养的原理。
四实验仪器及其他用具1、玻璃器具玻璃棒；烧杯；量筒；三角瓶；试剂瓶；胶头滴管；果酱瓶；酒精灯；漏斗；2、所需的实验仪器酒精灯；电子天平；磁力搅拌器；冰箱；超净工作台；接种器具消毒器；立式高压蒸汽灭菌锅；电炉；培养架；空调；3、实验药剂蒸馏水；葡萄糖；琼脂粉；MS母液（大量元素、微量元素、铁盐、维生素）；6-BA；2,4-D；IBA；IAAF；活性炭；95%酒精；氯化汞溶液；洗洁精；高锰酸钾；4、其他用具纱布；喷壶；搁置架；打火机；弯刀剪；麻线；牛皮纸；封口膜；剪刀；试管刷；洗耳球；引流器；PH试纸；周转箱；胶皮手套；秒表；废空箱子；马铃薯；刀；案板；铁架台；铝锅；麦麸；穴盘等五设计方案1、实验研究对象植物长寿花拉丁名：winter pot kalanchoe科属：景天科，蔷薇属别名：寿星花原产地：东非马达加斯加岛长寿花（Kalanchoe blossfeldiana cv tom Thumb）别名寿星花、假川莲、圣诞伽1.1植物简介长寿花是一种多肉植物，由肥大、光亮的叶片形成的低矮株丛终年翠绿。
春、夏、秋三季栽植于露地作镶边材料，12月至翌年4月开出鲜艳夺目的花朵。
每一花枝上可多达数十朵花，花期长达4个多月，长寿花之名由此而来。
长寿花是元旦和春节期间馈赠亲友和长辈的理想盆花。
长寿花为多肉植物，性喜较暖和气温，生长适宜温度以白天不超过30度，晚间温度不低于18度为宜。
温度太高，太低会影响其正常生长。
长寿花以扦插繁殖为主，温度在20~25度最适合其发根。
长寿花适合排水好的土壤，以泥炭为主加上蛭石、珍珠岩的人工培养土最佳。
培养土的ph值最好为5.8~6.2。
长寿花对于水的需求量较低，中午前浇水完毕，入夜之前叶片一定要保持干燥。
短日照植物，处理后至少6周后才会开花。
短日照处理时最少每天要有14小时黑夜。
一般而言，每年10月1日至第二年3月1日为自然短日期。
种在较大花盆中的，生长初期要给予长日照处理，让植物达到一定大小后能给予短日照处理，使其开花。
要不然，植株可能会偏小。
1.2生长习性长寿花原产非洲。
喜温暖稍湿润和阳光充足环境。
不耐寒，生长适温度为15～25℃，夏季高温超过30℃，则生长受阻，冬季室内温度需12～15℃。
低于5℃，叶片发红，花期推迟。
冬春开花期如室温超过24℃，会抑制开花，如温度在15℃左右，长寿花开花不断。
长寿花耐干旱，对土壤要求不严，以肥沃的砂壤土为好。
长寿花为短日照植物，对光周期反应比较敏感。
生长发育好的植株，给予短日照（每天光照8～9小时）处理3～4周即可出现花蕾开花。
1.3繁殖方法在5～6月或9～10月进行效果最好。
选择稍成熟的肉质茎，剪取5～6厘米长，插于沙床中，浇水后用薄膜盖上，室温在15～20℃，插后15～18天生根，30天能盆栽。
常用10厘米盆。
如种苗不多时，可用叶片扦插。
将健壮充实的叶片从叶柄处剪下，待切口稍干燥后斜插或平放沙床上，保持湿度，约10～15天，可从叶片基部生根，并长出新植株。
1.4光照与温度长寿花为短日照植物，对光照要求不严，全日照、半日照和散射光照条件下均能生长良好。
适宜生长温度15-25℃。
夏季炎热时要注意通风、遮荫，避免强阳光直射。
冬季入温室或放室内向阳处，温度保持10℃以上，最低温度不能低于5℃，温度低时叶片容易发红。
生长发育良好的植株经过短日照处理（每天光照8—9小时，其余时间遮光处理，20 - 30天即可形成花蕾）。
浇水与施肥长寿花为肉质植物，体内含水分多，比较耐干旱。
生长期不可浇水过多，每2-3天浇1次水，盆土以湿润偏于为好。
如果盆土过温，易引起根腐烂。
浇水掌握“见干见湿、浇则浇透”的原则。
冬季应减少浇水，停止施肥。
生长期每月施1、2次富含磷的稀薄液肥，施肥在春、秋生长旺季和开花后进行。
2、外植体的选择与处理1）选择长势、大小、颜色相近，饱满的6片嫩叶和6个带有芽体或顶芽的茎段。
2）在进行外植体消毒灭菌的过程中所需的试剂有：两个果酱瓶两的无菌水；0.1%氯化汞溶液100mL；75%的酒精；3）所需的玻璃仪器为：两个果酱瓶；两个三角瓶（盛装试剂）；三个空三角瓶（盛装外植体）；一个空瓶子（用以盛废液）；3、外植体的启动培养分别利用0.5mg/L、1mg/L、2mg/L的 MS+IBA和1mg/L、2mg/L、3mg/L的MS+6-BA固体培养基进行启动培养。
所需的用品为：三角瓶12个；MS母液500ml；;4、继代增值培养分别利用0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L的 MS+IBA和1mg/L、2mg/L、3mg/L的MS+6-BA固体培养基进行启动培养。
所需的用品为：三角瓶12个；MS母液500ml；5、生根诱导分别配置200ml的1/2MS+IBA、1/2MS+0.1%-0.2%的活性炭和1/2MS+0.1%-0.2%的活性炭+IBA0.2mg/L固体培养基，在此过程中要用到葡萄糖12g；琼脂4.5g；三角瓶12个；1/2MS母液600ml；注：以上三个步骤总需三角瓶44个；果酱瓶3个；封口膜88张；麻线44条；其他实验用具看具体实训状况。
在外植体启动培养、继代转接和生根诱导时每一个外植体对应一个固体培养基。
6、幼苗的驯化移栽当试管苗长到3-4cm时，洗去幼苗根部的培养基后转移到基质中培养。
我将选择麦麸为基质，以16X8规格的穴盘为栽培场所；在插入幼苗前用0.5%的高锰酸钾进行基质的灭菌。
注：在外植体启动培养时继代转接以及生根诱导时将瓶苗置于温度为25度左右、湿度在70%-80%之间的环境下培养，并定时观察瓶苗的污染率以及成活率。
在移栽瓶苗后定时观察幼苗的长势、基质中水分含量及幼苗的成活率。
六、具体实施步骤组培快繁实施方案内容提要本方案是长寿花组培快繁设计的具体化，具体描述了外置体的预处理/表面灭菌/启动及增殖/生根/驯化的过程；此外了解到了组培快繁的操作流程/前景以及外界环境对植物生长的必要性。
关键词长寿花；组培快繁；外植体1材料与方法1.1实验材料1.1.1玻璃器皿烧杯；三角瓶；量筒；玻璃棒；移液管；酒精灯；废液缸；罐头瓶；试剂瓶；胶头滴管1.1.2实验仪器超净工作台；电子天平；卧室高压蒸汽灭菌器；接种器具消毒器1.1.3实验试剂大量元素；微量元素；铁盐；肌醇；维生素；蒸馏水；IBA；6-BA；活性炭等1.1.4其他器材镊子；纱布；吸耳球；封口膜；剪刀；麻线；pH试纸；牛皮纸；麻线；喷壶等1.1.4实验材料长寿花的叶片及茎段1.2方法与步骤1.2.1外植体的选择及预处理用剪刀从长势健壮的植物长寿花幼茎上剪取15片大小、颜色大致相同的幼叶及五个带有芽体或顶芽的茎段。
然后将外置体放入一大烧杯中用洗洁精清洗干净，等待无菌操作。
1.2.2外植体的表面灭菌及转接1.2.2.1灭菌前的准备1、无菌水准备：让两个洁净空的果酱瓶称装上自来水，盖好瓶盖后等待灭菌（121℃，30min）。
2、三角瓶的洗涤与烘干：挑选出完好无损的三角瓶15个进行洗涤，晾干后备用。
3、启动培养基的制备：配置500mlMS固体培养基→每40mL分装到小三角瓶内→往培养基内加放事先计算好的6-BA及IBA的用量→用封口膜、麻线给三角瓶封口包扎→灭菌（121℃，30min）4、灭菌器材的包扎：用牛皮纸将纱布、搁置架、三个空三角瓶包扎后以备灭菌（121℃，30min）。
5、灭菌剂的配制：配制0.1%的氯化汞和75%的酒精溶液各100mL，然后用试剂瓶盛装。
1.2.2.2灭菌将包扎好的培养基和灭菌器材利用立式高压蒸汽灭菌器进行灭菌（121℃，30min）。
1.2.2.3超净工作台的准备：接通超净工作台的电源后打开紫外灯→30min后关掉紫外灯再打开风机约20min→随后用肥皂洗手→打开日光灯进行无菌操作，1.2.2.4无菌操作（即：外植体的表面灭菌）：把灭好菌的纱布、搁置架、镊子、培养基、空三角瓶及装有70%酒精的喷壶、配好的灭菌剂、酒精灯、打火机、记号笔、秒表、外植体放入一空的周转箱内，然后将周转箱摆放到超净工作台的一侧，另一侧放一空箱子用于盛放灭菌后的牛皮纸。
准备就绪后开始操作：1、拆下纱布并用70%的酒精浸透，拆下的牛皮纸放于空箱子内然后用浸有酒精的纱布擦拭手和超净工作台的台面对其进行消毒。
2、点燃酒精并将灯帽扣于酒精灯一旁（为一旦有火灾发生时便于及时盖死酒精灯）或者在台面的一侧放一块干抹布；然后在酒精灯火焰旁拆开灭过菌的镊子、搁置架等并把拆下的牛皮纸放到空箱内并用浸有酒精的纱布擦拭盛有灭菌剂的果酱瓶及培养基瓶、空三角瓶的瓶壁；最后有次序的摆放好台面上的物品进而进行无菌操作。
3、用灭完菌的镊子将选好的外植体放于空三角瓶内，且每空三角瓶内装入的外植体数目为4-5个。
4、先往三角瓶内倒入适量的0.1%氯化汞溶液，灭菌3min；倒掉灭菌剂后再用75%的酒精进行灭菌，计时60s;最后用无菌水洗涤三次，每次历时1min。
清洗干净后等待转接。
注：（每次灭菌时要一边振荡，为的是赶走气泡；一只手拿住外植体的三角瓶进行灭菌两一只手给镊子灭菌，即：在酒精灯火焰的外焰上进行灼烧。