分离序列经典方法
ppt：张 昆
一、直观推断 二、渐进调优 三、数学规划
一、有序直观推断规则 (按顺序使用)
规则(1) 在所有其分离方法中，优先采用能量分离剂分离方法（例如精馏）, （例如萃取）。当关键组分间的相对挥发度小于1.05~1.10时，应该采用质量分离剂分离方法
（例如萃取），此时质量分离剂应在下步立即分离。 规则(2) 精馏分离过程尽量避免真空和制冷操作。如需采用真空操作，则可考虑用萃取方案代替； 如需采用制冷操作，则可考虑采用吸收方案代替。由于真空和制冷操作能耗较大，有时即使在较高 温度和压力下操作也会有利。
Δ1 2
Δ34
Δ2 3
4F
3F
= Δ +Δ
+
2F Δ/3
=
13
F Δ
1
1
3
2
1
F1+F2 +F3 + F4 Δ2 3
+
F1 + F2 + Δ12
F3+ F4 Δ3 4
3 4
2
3
4 4
2
4F
2F
= Δ/3 + Δ
+
2F Δ
=
16
F Δ
(3)
由数字说明以上3种分离序列中，把难分离的组分放在最后处理的方案（2）的总费用最小。
5组分精馏分离序列综合问题，可能分离序列数为14，独立分离单元数为20，可以看 成是4阶段决策过程，
ห้องสมุดไป่ตู้
通过详细模拟计算可以得出所有独立分离单元的费用 。
7- 2
表
多组分子群
独立 分离单元
独立分 离单元 费用 元/年 *10-5
子分离 序列 费用 元/年 *10-5
多组分子 群最小分
离费用 元/年*10-
如果不能按塔顶和塔底产品量等摩尔分离（如分离点组分间相对挥发度太小等情况），则可 选择具有最大分离易度系数处为分离点。
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假定进料中组分1，2，3，4摩尔分率相等
流程
分离序列
1
1）
2 3
4
1 2 3 4
23 3 4
4
1
2） 2 3
4
1
1 2 3
1 2
4
3
2
1 3) 2
3
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通过经验规则可以推 断，这两个分离序列 均要劣于当前分离序 列，因此，图d所示 的分离序列可以作为 最优的或接近最优的 分离序列。
事实上，该例所处理的分离序列综合问题：组分数R为 5，分离方法数N为2，其可能分离序列数SR为224。如果计 算评价所有可能分离序列，其工作量相当可观。通过采用 适当的渐进调优方法，该例总共产生了8个相邻分离序列， 并且只计算了其中7个分离序列的费用。
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规则(6) 进料中含量最多的组分应该首先分离出去，这样可以避免含量最多的组分在后续塔中多 次气化与冷凝，降低了后续塔的负荷。
规则(7) 如果组分间的性质差异以及组分的组成变化范围不大，则倾向于塔顶和塔底产品量等摩 尔分离。精馏塔冷凝器负荷与再沸器负荷不能独立调节，塔顶和塔底产品量等摩尔分离时，精馏 段回流比与提馏段蒸发比可以得到较好的平衡。
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两种可选分离方法对应的顺序表分别为： 方法Ⅰ：ABCDEF 方法Ⅱ：ACBDEF 解：（1）首先按照有序直观推断法确定初始分离序列。
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（2）通过相邻层次切分点序列位置变换这一调优法则，产生 当前分离序列的所有可行相邻 分离序列。采用结合直观推断的广度第一策略，利用经验规则筛选较有希望的相邻分离序列， 并只对该相邻分离序列进行计算评价，从而产生下轮搜索的当前分离序列。重复上述步骤， 直到没有改进时为止。
(1) 建立初始分离序列； (2) 确定调优法则； (3) 制定调优策略。
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1. 建立初始分离序列方法 （1）在概念设计阶段，一般利用直观推断获得初始分离序列； （2）实施技术改造时，通常参考现有生产装置确定初始分离序 列。
2. 确定调优法则
调优法则就是指产生与当前分离序列相容结构的变化机制 ① 相邻层次切分点序列位置变换
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调优法则应该具有以下三条性质
（1）有效性 利用调优法则产生的分离序列应该是可行的； （2）完整性 反复应用调优法则可以产生所有可能分离序列； （3）合理性 相邻分离序列间不应存在十分显著的差异。
3.制定调优策略
是某种用来指导调优逐步朝着最优分离序列（费用减少）方向前进的方法。现 有的调优策略：
参数
CD/EFG
CDEF/G
f
28/39
8/59
△T
40
41
CES
28.7
5.6
所以，选择的方案是： CD/EFG
A
最
终
B
的
分
C
离
序
D
列
E
F
G
AB
C
C
D
D
E
E
F
F
G
G
直观推断法
C D
E
E
F
F
G
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二、 渐进调优
就是对某个初始分离序列，按照预定的调优法则和调优策略，通过进行一系列小的改进， 逐渐接近最优分离序列的方法。在调优过程中必须对每一个新的分离序列估算费用以确定其 优劣。 包括三个方面的内容：
0.5905 1.196 0.7198 3.272 0.9260+1.196=2.122 3.881 + 0.5905=4.4714 1.305 + 0.7198=2.0248 0.9041+ 1.196=2.100 0.9394 + 3.272=4.2034 3.144+ 0.7198=3.8638 0.9935+2.0248=3.0183 4.208+0.5905+0.7198=5.5183 2.122+0.9806=3.1026
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因此，选用图d 所示的分离序列 作为当前分离序 列进行下一轮搜 索。重复前面产 生相邻分离序列 的过程，得到图 e和f所示的全部 上、下相邻分离 序列。
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图d所示的分 离序列可以作 为一个较好的 分离序列，并 停止这些相邻 分离序列的搜 索，而改用局 部调优的方式
【例题7.2.3】设有丙烷、异丁烷、正丁烷、异戊烷、正戊烷5组 分轻烃混合物，其流量为907.2kmol/h，各组分的摩尔分数下：
组分 摩尔分数
A（丙烷） 0.05 B（异丁烷） 0.15 C（正丁烷） 0.25
组分 摩尔分数
D（异戊烷） 0.20 E（正戊烷） 0.35
若工艺要求采用简单塔精馏，所有产品均为单组分纯净物，试用动态规划进行分离 序列综合。
-88
E 丙烯 14
-48
F 丙烷 6
-42
G 重组分 8
-1
相邻组分 沸点差T
92 57 16 40 6 41
CES
23.0 19.6 14.6 18.1 1.1 4.0
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解：(1) 由规则（1）、（2），采用常规蒸馏，加压下冷冻
(2) 按规则（3），A、B间不要分开
5
所
有
（A,B）
A/B
C21 0.2613
流程
1
2
1 2 3 4
2
3
3
4
4
(1)
总成本 3
F1+F2 +F3 + F4 Δ1 2
+
F2 +F3 + F4 Δ2 3
+
F3 + F4 Δ3 4
4
=
4F Δ
+
3 F4 Δ/3
+
2F Δ
=
15
F Δ
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2 1
2
1
3
2
2
4
3
3
4
4
3
(2)
F1+F2 +F3 + F4 + F2 +F3 + F4 + F2+ F3
对现行序列产生相邻分离序列，而且可以对所有的相邻分离序 列产生拓展的相邻分离序列，甚至可以向前考察更多层次。通 过模拟计算得到各分离序列的费用，选择其中费用最低的作为 新的现行分离序列。
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例：设有丙烷、1-丁烯、正丁烷、反2-丁烯、顺2- 丁烯、正戊烷等6组分混合物， 温度为：37.8℃，压力为 1.03MPa，各组分的摩尔流量如下：
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规则(3) 当产品集中包括多个多元产品时，倾向于选择得到最少产品种类的分离序列。相同 的产品不要在几处分出。因为产品集合越小，相应分离序列中的分离单元就越少，所以费 用可能较低。
规则(4) 首先安排除去腐蚀性组分和有毒有害组分，从而避免对后继设备苛刻要求，提高安 全操作保证，减少环境污染。
① 广度第一策略
利用各种调优法则从现行分离序列（如初始分离序列）产生全部可行的相邻分离序列。用 直观推断法选择其中最好的分离序列，作为下一步调优的候选分离序列，通过严格计算候选 分离序列的费用，选择其中费用最低的作为新的 现行分离序列。重复这一过程，直至找到最 优分离序列。
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② 深度第一策略
规则(5) 最后处理难分离或分离要求高的组分，特别是当关键组分间的相对挥发度接近1时， 应当在没有非关键组分存在的情况下进行分离，这时分离净功耗可以保持较低水平。
基因测序技术的流程和方法
基因测序技术的流程和方法首先是样本采集，样本可以是血液、组织、唾液等。
对于人类基因组测序项目，通常采集血液样本，而对于微生物基因组测序项目，通常采集组织或其他有机体的样本。
第二步是DNA或RNA提取。
DNA提取主要通过裂解细胞膜和核膜，使DNA释放出来，随后经过适当的处理和纯化步骤，得到纯净的DNA样本。
对于RNA提取，主要是通过裂解细胞膜和核膜，并加入酶进行降解DNA的同时保护RNA，接着通过反转录酶进行反转录合成cDNA，并随后用DNA聚合酶合成双链cDNA。
DNA或RNA的提取过程需要精确操作，以保证样本的质量和浓度。
第三步是文库构建。
文库是指将提取的DNA或RNA样本进行文库构建，将其切割成小片段，然后连接上适当的接头序列。
接头序列的引入是为了辅助后续测序反应的进行，并便于序列分析，还会加入各种引物和适配体用于测序反应。
文库构建过程中，还可能利用PCR技术进行扩增，以获得足够多的DNA或RNA的拷贝数目。
第四步是测序。
测序是基因测序技术中最核心的步骤。
目前主要有两种测序方法，即链终止法和串联式单分子测序法。
链终止法即Sanger测序法，是一种经典的测序方法。
其原理是利用DNA聚合酶合成互补链，并在酶合成时向链中插入特殊的二氧化氮核苷酸（ddNTPs），这些ddNTPs不能进一步合成，同时会以一定比例终止链的延伸。
通过对反应体系中形成的DNA分子进行多个PCR循环，然后将其在凝胶中进行电泳分离，即可得到DNA片段的序列信息。
串联式单分子测序法则是近年开发出的新技术，代表性的有Illumina的测序技术。
其原理是首先将DNA片段固定在流动细胞的底物上，并引入引物和酶，以序列为模板合成新的DNA链。
随后引入荧光染料及激发光源，并使用高灵敏的CCD摄像机进行荧光成像。
然后，荧光染料被化学处理，使其发光的荧光基团被移去，让新的DNA链继续合成。
这一过程不断重复，记录下每一个核苷酸在每个位点上的序列信息。
mergesort方法
mergesort方法
mergesort方法是一种经典的排序算法，它采用分治法的思想，将待排序的序列分成若干个子序列，分别进行排序，最后将已经排序好的子序列合并成一个完整的序列。
具体实现过程如下：
1. 将待排序序列不断递归地分成两个子序列，直到每个子序列只剩下一个元素为止。
2. 将每个子序列归并排序，即将两个有序的子序列合并成一个有序的序列。
合并过程需要维护两个指针，分别指向两个子序列的头部，比较两个指针所指的元素的大小，将较小的元素放入合并后的序列中，并将指针向后移动。
最终合并得到的序列也是有序的。
3. 对已经排序好的子序列不断进行合并，直到最终得到完整的有序序列。
mergesort方法的时间复杂度为O(nlogn)，稳定性好，适用于各种数据类型的排序。
在实际应用中，mergesort方法被广泛应用于排序、归并等场景中。
- 1 -。
DNA测序技术的发展
DNA测序技术的发展DNA测序技术的发展一直是生物学和医学领域的重要研究方向。
近年来，随着科学技术的快速发展，DNA测序技术呈现了令人瞩目的进步。
本文将从DNA测序技术的起源、发展历程以及应用领域等方面进行探讨。
一、DNA测序技术的起源20世纪50年代初，美国生物学家沃森和克里克提出了DNA的双螺旋结构模型，这为后来的DNA测序技术的发展奠定了基础。
当时，人们的主要目标是确定DNA的序列，以期揭示基因的组成和遗传信息的传递方式。
然而，由于技术限制，DNA测序工作进展缓慢。
二、传统的DNA测序方法在传统的DNA测序方法中，最著名的是萨里格测序法。
该方法是1967年由英国科学家弗雷德里克·萨里格发明的，奠定了DNA测序技术的基础。
这种方法通过在DNA链延伸的过程中使用含有放射性同位素的核苷酸，再用电泳将DNA分离并检测辐射信号，从而测定DNA 序列。
然而，传统的DNA测序方法存在着一些问题。
首先，这些方法需要大量的DNA样品，且操作复杂，效率低下。
其次，由于使用放射性同位素，有一定的辐射危险。
此外，这些方法对于复杂的DNA序列分析缺乏效果。
三、新一代测序技术的突破随着科技的发展，新一代测序技术的出现使得DNA测序工作变得更加高效、准确。
其中最重要的技术包括Sanger测序技术、454测序技术、Illumina测序技术和Ion Torrent测序技术等。
Sanger测序技术是一种经典的测序方法，由弗雷德里克·萨里格于1977年发明。
该技术通过DNA链延伸的过程中使用ddNTP，然后用电泳分离并检测不同长度的DNA片段，最终测定DNA序列。
尽管Sanger测序技术已经成为经典的DNA测序方法，但其需要大量的DNA样品和昂贵的设备，并且操作复杂。
随着技术的进步，新一代测序技术应运而生。
这些技术通过将DNA样本分离成许多片段，然后通过高通量平台进行并行测序，从而大大提高了测序速度和效率。
sanger法测序的原理
sanger法测序的原理Sanger法测序是一种经典的DNA测序技术，也被称为dideoxy链终止法。
它是由Frederick Sanger在1977年发明的，是第一种成功测序DNA的方法。
Sanger法测序的原理是基于DNA聚合酶的DNA 合成过程，通过添加dideoxynucleotide（ddNTP）来终止DNA链的延伸，从而得到一系列不同长度的DNA片段，再通过电泳分离和检测，最终确定DNA序列。
Sanger法测序的步骤如下：1. DNA模板制备：从待测序的DNA样品中提取出目标DNA片段，并进行PCR扩增，得到足够的DNA模板。
2. DNA合成反应：在PCR扩增反应中，加入四种dNTP和一种ddNTP，ddNTP与dNTP的比例通常为1:100。
ddNTP缺少3'羟基，因此一旦加入到DNA链中，就无法再延伸，从而终止DNA链的合成。
DNA聚合酶会随机选择dNTP或ddNTP进行DNA链的延伸，因此在反应中会产生一系列不同长度的DNA片段。
3. DNA片段分离：将反应产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据DNA片段的大小，可以得到一系列不同长度的DNA片段。
4. 检测DNA序列：将DNA片段转移到固相载体上，通过化学方法进行检测。
在检测过程中，从3'端开始，依次加入dNTP，通过检测每个dNTP的信号，可以确定DNA序列。
Sanger法测序的优点是准确性高，可靠性强，适用于小片段DNA 的测序。
但是，它的缺点是需要大量的PCR扩增和电泳分离，耗时耗力，且只能测序较短的DNA片段。
随着新一代测序技术的发展，Sanger法测序已经逐渐被淘汰，但它仍然是许多实验室中常用的DNA测序方法之一。
Sanger法测序是一种经典的DNA测序技术，它的原理是基于DNA 聚合酶的DNA合成过程，通过添加dideoxynucleotide来终止DNA 链的延伸，从而得到一系列不同长度的DNA片段，再通过电泳分离和检测，最终确定DNA序列。
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（三）试剂的要求 1.引物：人工合成的单链DNA。
A：长度15-30bp，最好20-24 bp。 B：内部的互补序列。 C：引物间的互补序列。 D：序列的随机。 E：识别序列的单拷贝。 F：浓度：02-1μmol/L。 G：应纯化低温保存。
11
2.DNA模板 A：量10-50ng左右。 B：纯，无污染。
16
步骤 1.PCR扩增 遗传标记特异性由特异性引物决定。 2.电泳分离PCR产物
A：凝胶：聚丙烯酰氨凝胶（polyacrylamide gel,PAG），
成分：丙烯酰氨与甲叉丙烯酰氨 凝胶浓度（T）：6-8%，与分析的片段大小有关。
交联度（C）：3%，甲叉/丙烯酰氨与甲叉 B:载样缓冲液：甘油（蔗糖）密度重力，防扩散。
2.去垢剂与蛋白酶：SDS（十二烷基磺酸钠）增加膜 通透性；促进DNA与蛋白质分解；促使核酸酶与蛋 白质变性。
蛋白酶K酶解组蛋白。
3.有机溶剂：酚：变性沉淀蛋白质，组蛋白、蛋白 酶等。
氯仿：变性沉淀蛋白质，除酚，水相分离。
异戊醇：除酚，除泡沫。
4.乙醇与盐类：DNA不溶于乙醇与盐类。
2
（四）基本步骤 1.样品处理：分离细胞，低渗盐水（0.2%）或细胞悬浮液。
3.DNA聚合酶 A：根据具体实验要求选择。60-
150/S,Taq DNA酶5ˊ-3ˊ外切酶活性。 1/300-18000错配。
B：注意外切酶活性，5ˊ-3ˊ或3ˊ-5ˊ。 C：活性最适温度70-75℃，半衰期一般 95℃40 min ；92℃130 min D：镁离子依赖。 E：低温保存。
12
（四）常见问题与处理
泳速指示剂：溴酚蓝（5%，65bp） 二甲苯青（5%，260bp）
C：电压：100-200V
传染性法氏囊病病毒的分离及其VP2高变区序列的比较
传染性法氏囊病病毒的分离及其VP2高变区序列的比较张华智;杨霖;熊忠贤;何秀苗;韦平【摘要】[目的]从病鸡中分离传染性法氏囊病病毒(IBDV),并对其VP2基因高变区序列进行比较.[方法]采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种SPF鸡胚的方法分离到2株IBDV.对分离株(vVP2)进行扩增和序列测定,分析分离株的关键氨基酸位点特征,并与参考毒株相应序列进行同源性比较.[结果]2株分离株特征性位点的氨基酸为222A、249Q、254G、256I、279D、284A、294I和299S,属于wIB-DV的特征,与wIBDV参考株具有较高的同源性,其核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0％～97.0％和98.7％～ 99.4％.从遗传进化树来看,2个分离株与参考的wIBDV也在一个分支.此外,2个分离株表现出与该鸡场常用的疫苗株MB有较高的同源性,其核苷酸和氨基酸同源性分别为96.8％和98.1％,并在遗传进化树中同属于一个大分支,但其特征性位点的氨基酸明显不同.在其他氨基酸位点上,2个分离株均发生了D212N 的特有变化.[结论]该鸡群感染的IBDV具有vvIBDV的分子特征,并发生了与疫苗株和参考株不同的分子变化.%[Objective] The research aimed to isolate infectious bursal disease virus(IBDV)from diseased chicken and compare the sequences of its hypervariable region of VP2 gene . [Method] Two strains (WM12061and WM12062) of IBDV were isolated by inoculating SPF chicken embryo with chorio -allantoic membrane (CAM). vVP2 of the two isolates were amplified and sequenced.the characteristics of key amino acid loci were analyzed and the sequence homology of reference strain was compared. [Result] The amino acids of the characteristic locus of the two isolates were 222A,249Q,254G,256I,279D.284A,294I and 299S,which belonged to the features of wIBDV. The two isolates and wIBDV referencestrain had higher homology with the nucleotide and amino acid homology of 96.0% -97.0% and 98.7% -99.4% respectively. In the phyloge-netic tree,the two isolates and wIBDV reference strain belonged to the same branch. And the two isolates and common vaccine strain MB in this chicken farm had higher homology with the nucleotide and amino acid homology of 96.8% and 98. 1% respectively. They were classified to the same big branch, but the characteristic amino acids in vVP2 were significantly different. Furthermore, the 2 isolates showed unique amino acid mutation in D212N. [Conclusion] The infectious IBDV in this flock had the molecular characteristics of wIBDV and showed different mutation from MB strain and reference strains.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)005【总页数】3页(P1961-1963)【关键词】传染性法氏囊病病毒;超强毒株;vVP2;分子特征;RT-PCR【作者】张华智;杨霖;熊忠贤;何秀苗;韦平【作者单位】广西大学,广西南宁530005【正文语种】中文【中图分类】S852.64+7传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)是引起鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)的主要病原体。
生物信息学中的基因序列分析技术解析
生物信息学中的基因序列分析技术解析生物信息学是一门综合学科，将生物学、计算机科学和统计学等领域的知识相结合，致力于从大规模的生物学数据中提取有用的信息和知识。
基因序列分析是生物信息学中的重要研究内容之一，通过对基因组中的DNA序列进行分析，可以揭示基因的结构、功能和调控机制。
本文将对生物信息学中的基因序列分析技术进行深入解析。
一、基因序列获取在进行基因序列分析之前，首先需要获得待分析的基因序列。
目前，基因序列获取的主要方法是基于高通量测序技术的方法，如Sanger测序、二代测序和三代测序。
1. Sanger测序Sanger测序是一种经典的测序方法，基于链终止法原理。
该方法通过引入低浓度的二进制链终止剂，使DNA合成过程中的链终止在不同的碱基位置。
然后，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同长度的DNA片段分离出来，并根据电泳结果确定序列。
尽管Sanger测序方法准确可靠，但速度较慢，无法满足高通量测序的需求。
2. 二代测序二代测序技术是目前广泛应用的高通量测序技术，包括 Illumina的测序技术、Ion Torrent的测序技术等。
这些技术采用了片段拼接和PCR扩增的方法，将DNA样本分割成小片段，并使用高度并行的测序反应同步测序。
这种高通量测序技术具有快速、成本低廉和数据量大等优点，为后续的基因序列分析提供了强大的数据支持。
3. 三代测序三代测序技术相比于二代测序技术具有更高的读长，能够直接测序较长的DNA分子。
代表性的三代测序技术有Pacific Biosciences （PacBio）和Oxford Nanopore Technologies（ONT）的测序技术。
这些技术主要基于单分子测序原理，通过测量单个DNA分子的链延伸或通过测量基于纳米孔的离子电流来进行测序。
三代测序技术的发展为更好地解析复杂的基因组结构和重复序列提供了可能。
二、基因序列比对基因序列比对是生物信息学中的重要任务，它主要通过将待分析的基因序列与已知参考序列进行比较，从而确定相似性和差异性。
rflp方法
rflp方法
在分子生物学领域中，RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 方法是一种经典的分析DNA序列差异的技术。
此方法
通过利用限制性内切酶（Restriction Enzyme）切割DNA分子，将特
定的区域分为多个不同的片段，再利用电泳分离这些不同长度的DNA
分子，就能够得到每个样品独特的DNA“指纹”。
RFLP 不仅广泛应用于痕迹检测、亲属鉴定、植物、动物和微生
物的分类和进化研究，还有重要的生物医学应用，如基因诊断和基因
治疗。
在基因诊断上，RFLP 可以用来检测基因突变与正常基因间的差异，从而诊断多种遗传病；在基因治疗上，RFLP 可以通过检测融合基
因的存在来判断患者是否适合接受某种基因治疗。
虽然现在有更快、更精准的分子生物学技术代替了 RFLP 方法，
但它仍被广泛用于一些传统和研究性的实验中，在基因诊断和基因治
疗等领域还有着一定的应用价值。
RFLP 技术历经多年发展，以其简单、稳定、可靠等特点，在分子生物学领域取得了重大突破和进展。
dna鉴定原理
dna鉴定原理DNA鉴定原理DNA鉴定是一种基于DNA序列分析的技术，可以用于确定个体或物品的身份，以及确定亲子关系等。
DNA分子是生命体系中的遗传物质，它由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成。
这些碱基按照一定的顺序排列形成了DNA序列。
不同个体之间的DNA序列有着不同的差异，这就为DNA鉴定提供了依据。
1. DNA提取DNA提取是进行DNA鉴定的第一步，其目的是从样本中分离出纯净的DNA。
常用的样本包括血液、口腔拭子、头发、精液等。
提取方法主要包括化学法和机械法两种。
2. PCR扩增PCR（聚合酶链式反应）是一种能够在体外扩增特定DNA片段的技术。
PCR扩增可以使得极微小数量的特定DNA片段被扩增至足够检测水平，并且可以通过PCR产物进行进一步分析和检测。
3. STR分型STR（short tandem repeat）是指短串联重复序列，即在DNA序列中由2-6个碱基组成的重复序列。
STR分型是一种常用的DNA鉴定方法，它通过PCR扩增样本中的STR位点，然后通过电泳等技术将扩增产物进行分离和检测，从而确定不同样本之间的STR位点差异。
4. DNA测序DNA测序是一种能够确定DNA序列的技术。
在DNA鉴定中，常用的测序方法包括Sanger测序和高通量测序。
Sanger测序是一种经典的DNA测序方法，它通过使用特殊标记的核苷酸和聚合酶来逐个合成DNA链，并且可以根据标记来确定每个核苷酸的位置。
高通量测序则是一种新兴的DNA测序技术，它可以同时对大量样本进行快速、准确、高通量地测定其DNA序列。
5. 数据分析数据分析是进行DNA鉴定的最后一步，其目的是根据实验结果判断不同样本之间是否存在亲缘关系。
数据分析主要包括比对和计算遗传学概率两个步骤。
比对是将被检样本与参考样本进行比较，以确定二者之间是否存在差异。
计算遗传学概率则是通过统计学方法计算不同样本之间的亲缘关系概率。
总结DNA鉴定是一种基于DNA序列分析的技术，其原理包括DNA提取、PCR扩增、STR分型、DNA测序和数据分析等多个步骤。
DNA序列分析
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பைடு நூலகம்
5.1 Maxam-Gilbert 化学降解法
1977年， A.M. Maxam 和 W. Gilbert 首先建立了 DNA 片段序列的测定方法，其原理为：将一个 DNA 片段的 5’端磷酸基作放射性标记，再分别采 用不同的化学方法修饰特定碱基，然后用哌啶进行 特异裂解，从而产生一系列长度不一而 5' 端被标 记的 DNA 片段，这些以特定碱基结尾的片段群通 过凝胶电泳分离，再经放射线自显影，确定各片段 末端碱基，从而得出目的 DNA 的碱基序列。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离；放射自显影
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15
ACGT
A
C
C
A
A
A
A: dNTP + ddATP
G
A
C
C: dNTP + ddCTP
C
C A
G: dNTP + ddGTP
G
G A
T: dNTP + ddTTP
T
C
G
C
C
A
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序列分析的工作模式
手动测序
➢ 按照上述经典的测序方法进行，在PCR技术广泛应用之前是 DNA测序的主导方法。
哌啶甲酸可以使 DNA 链上的嘌呤在酸的作用下发生糖 苷水解，导致 DNA 链在脱嘌呤位点（G和A）发生断 裂。
肼C如和，果胸又加腺称入嘧联高啶氨 浓度TNH的的2盐.CN4H（和21，.C2在M6 位碱N置a性O，环H导）境致，中糖肼作苷则用键主于断要胞裂作嘧。用啶 于胞嘧啶 C ，使之断裂。
模板制备
➢ 单链、双链DNA均可，但必须保证足够的浓度和纯度。