微生物免疫学实验报告

1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。

3细菌的形态与结构的观察。

4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。

6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。

7熟悉细菌的特殊结构。

8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。

4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。

因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。

1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。

2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。

对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。

3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。

⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。

⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。

4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。

⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。

避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。

⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。

置于干燥处，以防受潮。

(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）芽胞：破伤风杆菌（芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。

2掌握革兰染色的操作法，充分认识革兰染色的临床意义。

三、实验材料：革兰染色液全套、擦镜纸、二甲苯、大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、生理盐水、玻片、接种环、酒精灯。

四、实验方法：㈠细菌标本片的制备（操作）1、涂片：点燃酒精灯；取洁净玻片一张，右手持接种环一酒精灯火焰中消毒，稍冷后取1－2环生理盐水置于玻片中央；再次消毒后，用接种环取菌落中的细菌或菌液或标本少许，在生理盐水中涂匀制成约1cm左右的薄膜，并将接种环再次消毒后，置于试管架中。

2、干燥：在室温中自然干燥；天冷时可在酒精灯火焰上方略加温，不可高温加热，否则，细菌被破坏后染色效果差。

3、固定：右手持玻片一端，标本面向上，在酒精灯火焰上方快速地来回通过三次，约2妙种。

固定的目的是杀死细菌，使细菌与玻片粘附较紧密。

㈡革兰染色法（操作）1、初染：滴加结晶紫染液于标本上，以覆盖满为度，染1分钟后水洗，洒去积水。

2、媒染：加鲁格碘液，媒染1分钟后水洗，洒去积水。

7脱色：加95％酒精脱色（边加酒精边摇晃玻片，使酒精流去再加酒精，如此反复2 －3次）约30妙钟后水洗，洒去积水。

12复染：加复红染液染30妙钟后水洗，洒去积水，待干或用吸水纸吸干后镜检。

先低倍镜观察效果，再用高倍镜看清物象，滴加镜油后用油镜观察。

结果：G＋菌呈紫色，G－菌呈红色。

一、实验内容1、培养基的制备（操作）2、细菌的人工培养法（操作）3、细菌代谢产物观察（示教）4、药敏试验（示教）二、实验目的1、熟悉细菌的培养方法，进一步掌握人工培养细菌的临床意义。

2、了解细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义。

三、实验材料牛肉膏、蛋白胨、、氯化钠、琼脂、SS琼脂、蒸馏水、1molNaOH、0.1 molNaOH、粗天平、0.02%酚红指示剂、pH比色器、无菌培养皿、无菌试管、接种环、酒精灯、各种鉴别培养基、高压消毒灭菌器、量筒、三角烧瓶、吸管、剪刀、绳索、葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、伤寒杆菌菌液、乙型副伤寒杆菌菌液等。

四、实验方法㈠培养基的制备（操作）1、培养基的制备程序称量溶化pH测定与矫正分装灭菌检定保存。

2、液体培养基的制备1）称量：称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，置于1000ml三角烧瓶中，加入蒸馏水1000ml。

2）混合溶解：加热溶化，待冷至40〜50o C时，测定并矫正pH为77.6。

3）pH测定与矫正方法：⑴准备工作：取pH7.4①、7.6③酚红标准比色管及蒸馏水管②各1支，按图示装好；取口径与比色管相同的试管3支，各加待测液体基5ml，分别编上④、⑤、⑥号，按图示装好。

⑵比色：将比色架对光目视比色，比较二排管的颜色是否相同，若基为酸性（一般呈酸性），则向⑤号管中加0.02%酚红指示剂0.25ml摇匀，取1ml吸管一支吸取0.1 molNaOH1ml，缓慢滴入⑤号管内，边加边摇匀，直至与标准管其中一侧颜色相同，准确记录NaOH的用量。

⑶计算：5ml基矫正至pH7.6用去0.1 molNaOH0.2ml，剩余的培养基则需加入1 molNaOH为Xml。

用比例公式计算。

N1：V1＝N2：V25：975＝0.2：XX＝0.2*975/5=39(ml)0.1 molNaOH需要39ml，而加1 molNaOH只需3.9ml。

4）分装：分装十适当容器内（试管），包装好，高压蒸气灭菌后备用。

㈡细菌的人工培养法（操作）1、平板划线接种法：1）点燃酒精灯，右手以握笔式持接种环，在火焰上灭菌后稍冷，挑取葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液一环。

2）用左手掌持琼脂平板，以左手拇指将平板盖启开，右手将取了菌液的接种环伸入平板，呈45O角，用分段划线法分离细菌（如图所示），盖好平板。

3）于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

2、液体培养基接种法：左手持液体培养基，按照平板划线取葡萄球菌少许，用右手小指拔开棉塞，夹于指间（示教），并将管口在火焰上灭菌，将细菌接种于液体培养基内。

再次灭菌管口，塞好棉塞。

贴上标签，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

㈢细菌代谢产物观察（示教）1、糖发酵试验：细菌分解糖后产酸产气，产酸后使批示剂显色，产气后可见到气泡。

产酸产气以“＋”表示，只产酸不产气以“＋”表示，不分解以“－”表示。

大肠杆菌和伤寒杆菌分解糖的结果如下：2、硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢气体。

硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐反应，形成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀，为阳性，无黑色沉淀为阴性。

大肠杆菌硫化氢试验为阴性，乙型副伤寒杆菌为阳性。

㈣药敏试验（示教）1、平板划线：1）用密集划线法将细菌布满平板，方法同平板划线接种法。

2）在无菌接种箱内，用左手启开平板盖，用无菌镊子夹取抗菌素纸片，间隔5cm放置平板培养基表面，盖好平板，贴上标签，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

3）结果：观察抑菌区有无，测量抑菌区的直径。

直径<5mm为阴性(不敏感)、直径5〜10mm 为轻度敏感、直径10〜15mm为中度敏感、直径>15mm为高度敏感。

一、实验内容1、空气中细菌的检查（操作）2、皮肤消毒试验（操作）3、咽喉部细菌的检查（操作）4、常用消毒灭菌器械的使用（示教）二、实验目的1、证明在自然界和正常人体体表有许多细菌存在，以树立严格的消毒及无菌观念。

2、了解常用消毒灭菌器械的使用方法，初步掌握紫外线的灭菌方法护注意事项。

三、实验材料普通琼脂平板、SS琼脂平板、血平板、接种环、酒精灯、高压消毒灭菌器、干烤箱、紫外线、大肠杆菌培养液、1％龙胆紫、2.5％碘酒，75％乙醇、无菌棉签、镊子等。

四、实验方法㈠空气中细菌的检查（操作）1、取普通琼脂平板4个，启开皿盖，培养基面向上，分别放在实验室、寝室、室外及无菌操作台等处，暴露10〜20min后加盖。

2、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

3、结果：如实填写。

㈡皮肤消毒试验（操作）1、取普通琼脂平板1个，在底部用玻璃蜡笔划线分区并标号，启开皿盖，用右手食指轻轻涂抹培养基表面。

2、用2.5％碘酒消毒右手食指后，再用消毒后的手食指轻轻涂抹培养基表面，加盖。

3、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

4、结果：如实填写。

㈢咽喉部细菌的检查（操作）1、取血平板1个，启开皿盖，口对培养基表面（距离约10cm），深咳嗽三次（不可吹痰），加盖。

2、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

3、结果：如实填写。

㈣常用消毒灭菌器械的使用（示教、介绍）1、紫外线杀菌试验⑴点燃酒精灯，取普通琼脂平板1个，在底部用玻璃蜡笔划线分出二个区并标号，启开皿盖，右手持接种环在火焰上灭菌后，稍冷，取大肠杆菌培养液一环，密集划线，加盖。

⑵将培养基置于无菌接种箱内，启开皿盖，将盖子盖于培养基上的一半，打开紫外线灯开头，照射30min后，加盖。

⑶于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

⑷结果：如实填写。

2、手提式高压蒸气灭菌器（介绍）⑴构造：略⑵用法：加水至规定的水平面、放入灭菌物品，加盖、旋紧，打开排气阀；通电加热、温度逐渐上升时，器内冷空气由排气阀排出，待有大量蒸气逸出时，关闭排气阀，继续加热，直到压力表的指针指在所需的位置后，调节电源，控制温度，维持20〜30min后，打开排气阀排气，待压力表指针指向“0”时，再开盖取物。

⑶注意事项：①灭菌开始时必须排尽冷空气；②灭菌完毕，切不可突然打开盖子排气减压，以免瓶内液体等冲出外溢；③放置物品不应太挤。

⑷用途：用于耐高温和不怕潮湿的物品灭菌。

病原性球菌的检查实验目的：1掌握病原性球菌的形态、染色特性。

2了解脓汁标本的病原性球菌的分离鉴定的程序。

3了解抗“O”试验的原理、方法及临床意义。

实验内容：1、病原性球菌标本的观察。

2、脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序。

3、抗“O”试验实验材料：显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、2.5%碘酒、棉签、生理盐水、血平板、兔血浆、抗“O”试剂、血平板。

实验方法：(2)病原性球菌标本的观察1、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的形态观察（操作）。

2、葡萄球菌、链球菌溶血现象观察（示教）。

(4)脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序直接涂片革兰染色镜检脓汁标本观察菌特征及溶液血情况接种血平板24h培养后观察取菌落涂片革兰染色镜检取菌落作生化反应、致病力试验(5)抗“O”试验原理：乙型溶血性链球菌能产生溶血素“O”，能溶液解人和兔红细胞并有很强的抗原性，能刺激机体产生抗溶血素“O”（抗体）。