微生物培养基质控与图解
微生物培养基制备及环境和人体表面微生物观察有图版
微生物培养基制备及环境和人体表面微生物观察摘要本次实验主要在于学习、熟悉、掌握微生物实验中的最根本的操作技术：学会并配制培养基，制作平板和斜面，学会使用高压蒸汽灭菌器，熟悉掌握对于无菌操作，棉塞制备，包扎技术等实用技能，为将来进一步的实验打下基础。
实验中，共制备10个平板，11个斜面，并在平板上接种环境与人体表面的微生物进行培养。
不仅为了练习接种、观察等技术，更是为了培养对于无菌操作重要性的认识。
平板的制备需要通过计算、称量、熔化、加琼脂、加塞、包扎、高温灭菌、倒平板等过程，斜面的制备中，额外的需要进行分装，搁置斜面的过程。
这些过程中，我们需要严格控制培养基成分的剂量，及时控制pH值，更需要做到灭菌彻底，防止杂菌污染等要求。
接种微生物时，要注意在酒精灯火焰旁进行，营造无菌环境，避免杂菌的污染。
实验中，我们也学会如何进行制作棉塞，增强实验室动手能力，为以后试验打下基础。
在观察实验结果中，菌落的生长还是比较理想的。
除空白组，其他实验组中每块平板上，都有多种菌落存在，给观察带来一定的麻烦，但这也说明实验的过程还是较成功的。
关键词培养培养基无菌操作菌落前言在做微生物实验时，我们必须做到规范操作，而这就要求在初期接触微生物实验时多通过学习、练习，去熟悉各种技能与方法。
本次实验是对微生物实验中基本技术的学习与掌握，这对以后的试验有重大影响，需要认真对待。
试验目的：1、学习、熟悉并掌握微生物实验中平板与斜面的制备过程；学习、熟悉并掌握微生物实验中的部分基础操作：棉塞的制作，牛皮纸包扎技术及高压蒸汽灭菌器的使用等；3、体会无菌操作的重要性4、观察环境及人体表面不同微生物菌落的形态特征，比较数量与类型。
试验原理：1、通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌在固体培养基上，经过生长繁殖形成了几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落（菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体）。
培养基质量控制
培养基质量控制标题：培养基质量控制引言概述：培养基是微生物学实验中不可或者缺的重要物质，其质量控制直接影响到实验结果的准确性和可靠性。
因此，对培养基的质量进行严格控制是非常重要的。
本文将从培养基的选择、制备、贮存、消毒和使用等方面进行详细介绍。
一、培养基的选择1.1 选择基础成份：根据微生物的需求选择合适的碳源、氮源、矿物盐等基础成份。
1.2 添加生长因子：根据微生物的生长特性，添加适量的生长因子，如维生素、氨基酸等。
1.3 调节pH值：保持培养基的pH值在适宜范围内，通常为7.0摆布，可通过添加缓冲液进行调节。
二、培养基的制备2.1 材料准备：准备好所需的各种原料和试剂，确保其质量符合要求。
2.2 按比例混合：按照配方比例将各种基础成份、生长因子等混合均匀。
2.3 消毒灭菌：将混合好的培养基进行高压蒸汽灭菌或者过滤灭菌，确保无菌状态。
三、培养基的贮存3.1 温度控制：将制备好的培养基保存在4℃摆布的冰箱中，避免高温或者受潮。
3.2 防光保鲜：避免暴露在阳光下，尽量保存在阴凉干燥处，避免光照导致培养基变质。
3.3 定期检查：定期检查培养基的外观温和味，确保无明显变质迹象。
四、培养基的消毒4.1 灭菌方法：选择合适的灭菌方法，如高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌等。
4.2 消毒时间：控制好消毒时间，确保灭菌效果，同时避免对培养基中的营养成份造成破坏。
4.3 消毒环境：在无菌条件下进行培养基的消毒处理，避免二次污染。
五、培养基的使用5.1 温度控制：在适宜的温度条件下使用培养基，保持微生物的生长活力。
5.2 湿度控制：避免培养基过度干燥或者受潮，影响微生物的生长。
5.3 使用时限：尽快使用制备好的培养基，避免长期贮存导致培养基质量下降。
总结：培养基的质量控制是微生物实验中至关重要的一环，通过选择合适的基础成份、严格制备、科学贮存、有效消毒和正确使用，可以确保培养基的质量稳定，为实验结果的准确性和可靠性提供保障。
第二节微生物的培养基
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2．半固体培养基： 一般用0.2%--0.7%琼脂作凝固剂
用作观察细菌的运动特征、噬菌体效价、各种厌 氧菌的培养机菌种保藏等。
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3．液体培养基： 不含任何凝固剂，它常用于大规模的工业生 产及实验室进行微生物生理代谢等研究。
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凝固剂必须具有的特点：
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2、组合培养基（合成培养基） 高纯度化学试剂配制的培养基 优点：成分精确、重现性高 缺点：价格较高、微生物生长一般 适于：生理、生化、代谢、菌种鉴定研究等
例如，培养细菌的葡萄糖铵盐培养基， 培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基（即高氏一号培养基）， 培养真菌的蔗糖硝酸盐培养基（即察氏培养基）等。
（4）马铃薯葡萄糖培养基---------酵母菌 马铃薯200g,葡萄糖 20g ,琼脂15~20g , H2O 1000ml,自然PH. 马铃薯去皮,切成小块,煮沸0.5小时,用纱布过 滤,再加糖或琼脂,融化后补水至1000ml
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（二）按培养基外观的物理状态作分类
1．固体培养基：外观呈固态的培养基
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8.摆斜面
灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其 凝固成为一个斜面，约占试管长度的1／2。
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9.贮存
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。 一般用牛皮纸包裹好存放于4℃冰箱中备用。
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附2：培养基的灭菌
高压蒸气灭菌 一般培养基: 1.05 Kg/cm2, 121.3℃, 15-30 min 含糖培养基: 0.56 Kg/cm2, 112.6 ℃, 15-30 min
中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制PPT课件
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
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灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
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微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
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菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
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二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
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所有配制好的培养基均应进行验证，验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
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一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
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用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
微生物培养基质控与图解——培养基的制备
微生物培养基质控与图解——培养基的制备微生物培养基质控与图解——培养基的制备来源：青岛海博第三章培养基的制备目前培养基的配制主要分为干粉培养基和新鲜培养基两类。
干粉培养基是将培养基原材料浓缩，喷雾干燥，然后根据要求将干粉原料按一定配比制成各种不同的培养基。
干粉培养基在使用时，只需按说明书称重，加入蒸馏水、分装、高压灭菌后即可使用。
南于它具有使用方便、易于保存、质量稳定等优点，所以深受各微生物实验室的欢迎。
第一节培养基的制备方法一、新鲜培养基的制备不同类型培养基制备的程序不尽相同。
但配制一般培养基的主要程序为：调配、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、高压灭菌及检定等步骤。
1．调配按培养基处方准确称取各种成分，混悬于蒸馏水或去离子水中。
2．溶化将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，特别是含有琼脂成分的更应注意防止烧焦和外溢。
溶化完毕，应注意补足失去的水分。
制备大量培养基时，除中性硬质玻璃容器外，还可以用不锈钢锅、搪瓷桶等容器加热溶解，但不可用铜或铁锅，以免金属离子进入培养基中，影响培养基酸碱度，最终影响细菌的生长。
3．矫正pHpH比色计应准确可靠，一般培养基需矫正pH至7.4~7.6，此外亦有需要酸性或碱性的培养基。
培养基在高压灭菌后会有所变化，一般来说，用氢氧化钠调节时，灭菌后会下降0.1~0.2；用碳酸氢钠调节时，灭菌后会上升0.1左右。
故矫正应掌握这种变化规律。
4．分装根据需要将培养基分装于不同的三角烧瓶、试管等。
分装的量不宜超过容器的2／3以免灭菌时外溢。
(1)基础培养基。
应常贮有无菌的基础培养基，以便临时分装或配制鉴别培养基等。
分装的量根据使用目的和要求决定，但必须定量分装，便于应用。
一般分装于三角烧瓶或盐水瓶内，高压灭菌后备用。
(2)琼脂斜面。
分装量为试管容量的1/5，灭菌后需趁热放置成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3。
(3)半固体培养基。
分装量约为试管的1/3，高压灭菌后直立凝固备用。
微生物培养技术_图文_图文
• 二、培养基对微生物的选择作用
【案例】分解纤维素的微生物的分离 （一）、基础知识
1、纤维素与纤维素酶
纤维素是一种多糖 纤维素酶是一种复合酶
纤维素
C1酶、Cx酶 纤维二糖
葡萄糖苷酶
葡萄糖
（二）、筛选
1、方法： 刚果红染色法
原理：刚果红（CR）可以与纤维素形成红 色复合物，当纤维素被纤维素酶分 解后，红色复合物无法形成，出现 以纤维素分解菌为中心的透明圈， 我们可以通过是否产生透明圈来筛 选纤维素分解菌。
不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
鉴别培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某 种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同 种类的微生物。
例如：在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来 鉴别大肠杆菌。 如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝 结合，使菌落呈蓝紫色，并带有金属光泽。 (课本15页)
（3）按成分分：合成培养基和天然培养基
微生物培养技术_图文_图文.ppt
非细胞生物：病毒
微生物
原核生物：细菌、放线菌、支原体、 立克次氏体
真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）
菌落：
• 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁 殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有 一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落 。
• 菌落是鉴定菌种的重要依据。
细菌的营养类型
或 80 ℃下煮15min C、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒;
氯气消毒水源 D、射线消毒法
2、灭菌
（1）定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的
微生物，包括芽孢和孢子 。
（2）灭菌的方法：
A、灼烧灭菌
B、干热灭菌：
160-170 ℃下加热1-2h。
培养基质量保证与质量控制.ppt
适用菌种
病毒 支原体 各类细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌 蓝藻 动物细胞
液体石蜡覆盖保存法
传代保存的变相方法 能够适当地延长保存时间 优质石蜡121℃高压灭菌2小时，160℃
干燥箱中灭菌1—2小时，放冷备用 液体石蜡的深度以1cm左右 保存期通常6个月至一年
适用菌种
霉菌、酵母菌、放线菌、部分细菌。如： 大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌 等需氧性细菌
目标菌的生长指标G大于6时，培养基可
接受
定性测试方法
用3mm接种环取测试菌培养物，在测试 培养基表面划平行直线。可同时在一个 平板上接种多个菌株，但划线不能交叉
按标准中规定的培养时间和温度对接种 后的平板进行培养
结果解释
培养后按以下方法计分：
0表示无生长 1表示微弱生长 2表示生长良好
不能用于低温冷冻保存的微生物（如孢 子形成能力极差的丝状菌）
不适于用菌种：固氮菌、乳酸杆菌、明 串珠菌、分枝杆菌、沙门法：菌种悬浮在10％(体积分数)甘油蒸 馏水中。置于低温(-70)保藏。
注意事项：所要保藏的菌种，最好先培养至对 数期；使用液体培养基时，可直接加到已灭过 菌的甘油中，并使甘油的终浓度在l0％～30％ 左右。为避免反复冻溶，可分装于小离心管中， 置低温保藏。
性能评价 所用测试菌株
实验室验收：
产品标签：
名称和批号 有效期
接收日期 包装及其完整性
SN/T1538.1-2005中4.1;对应 CNAS/CL01 4.6.2内容,通常要 记录(采购服务和供给)
储存要求
例行常规检查内容:
容器密闭性复查 首次开封日期 内容物的感官检查
使用前检查(即用型培养基):
方法和螺旋平板涂布法效果较好。
微生物检验质控 ppt课件
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（二）操作手册
①各级人员的职责和权限； ②实验室安全措施； ③标本采集和处理指南； ④本室开展的检验项目及最低鉴定要求； ⑤培养基和试剂的配制方法； ⑥质量控制方案； ⑦常用参考数据； ⑧其他制度。
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（三）培养基的质量控制
培养基是分离培养微生物的必需品。培养基质量的好 坏，直接关系到分离培养的成败。目前大多数实验室都使 用干粉培养基配制或使用成品培养基。对来自著名的微生 物培养基生产公司的培养基，质量比较稳定。只要按照说 明书的要求贮存，在有效期内使用可获得满意效果。
标本鉴定正确数－平均实验室正确数 /实验室平均正确数 的标准差，高于平均值得正分，低于平均值得负分。如果 得分低于－1．96，则表示水平差，需进行学习和帮助。
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谢谢！
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（二）一般性检查项目
包括有否制定各种制度及其执行情况。 ①培养基和试剂的配制记录、培养基的保存方法、灭菌 质量、有效期。 ②室内全面质量控制的建立，室内工作人员的熟练程度 的考核和盲点试验的进行情况，细菌检验的操作手册及操 作的规范性。 ③设备的操作卡，操作人员的操作水平，设备的使用保 养、维修记录。
微生物检验 的质量控制
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微生物检验的质量控制，包括室内 质量控制和室间质量控制评价。
室内质量控制是由实验室内部 制定并实施的，是质量保证的 核心和基础。
室间质量控制评价是由实验室 外部的组织或机构对实验室进 行的质量评价。
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室内质量控制
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（一）人员与组织管理
①经过广泛的基础训练教育，包括微生物学、基础医学临 床医学知识的学习，专业化的实验技能培训。 ②参加医务人员的继续教育。 ③配有一名经严格训练并长期从事于微生物检验的技术人 员，全面负责实验室的工作。
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微生物培养基质控与图解——培养基的高压灭菌及效果验证第三节培养基的高压灭菌及效果验证消毒灭菌在医学实践上有着重要意义。
它可切断传播途径、控制感染扩散造成的危害；也可杀灭物品或器皿上的细菌，防止医院感染；在医学微生物检验的领域中，消毒灭菌是保正感染的病原学检验不受外来微生物污染的前提。
（一）术语消毒( disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和无菌( asepsis)是常用术语。
下面就术语概念加以叙述。
1)灭菌。
是用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。
本法适用于制剂、原料、辅料及医疗器械等物品的灭菌。
（如外科器械、注射器、基础培养基灭菌等。
）(2)消毒。
是破坏物体上活的病原微生物的方法，但不包括细菌芽胞和非病原微生物。
如用酒精溶液浸泡体温计、新洁尔灭液擦拭检查台等。
用于消毒的化学物品称消毒剂( dis-infectant)。
一般而言，消毒对象是指物体而不是机体。
(3)防腐。
直接使用防腐剂(antiseptics)破坏或抑制活的病原微牛物的方法。
如外科手术前碘液擦洗皮肤、双氧水清创伤口或杀菌肥皂清冼双手等。
(4)无菌。
防止感染病原体进入灭菌组织或物品的操作技术称无菌操作。
无菌即为不存在活的微生物。
用于消毒灭菌的物理方法有热力、电离辐射、超声波、过滤等。
这里介绍热力消毒灭菌法。
高热破坏微生物蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜，从而导致微生物死亡。
受高热作用后，蛋白质分子运动加快，肽链连接键断裂，蛋白变性凝固；细胞膜功能受损使胞内物质漏出，细菌内外环境平衡失调。
不同种类微生物对热的耐受力不同，多数无芽胞细菌经55-60℃作用30-60分钟后死亡，100℃时迅速死亡。
有芽胞细菌则对高温有强的抵抗力，如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小时才死亡。
热力灭菌分干热灭菌法和湿热灭菌法两大类，相同温度下后者较前告效力大，其原因是：①湿热环境中菌体蛋白易凝固；②湿热穿透力比干热大；③湿热蒸气变为液态时可释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度。
1．干热（dry heat）灭菌法(1)焚烧。
直接点燃或在焚烧炉内进行，仅适用于废弃物品或动物尸体。
(2)烧灼。
直接以火焰灭菌，适用于微生物学实验室接种环、针和试管口等灭菌。
(3)干烤。
在干烤箱内进行，加热至150-180℃ 2-4小时达到灭菌效果，适用于高温下不变质、不被破坏和不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器，不能用于塑料、棉、纸制品。
2．湿热( moist heat)消毒灭菌法(1)巴氏消毒法。
巴氏消毒法(pasteurization)是用较低温度杀灭液体中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐热成分的方法。
此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。
目前用于牛乳消毒。
方法有两种：一种为71.6℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。
大多采用第一种方法。
(2)煮沸法。
在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般细菌繁殖体。
如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。
(3)流通蒸气消毒法。
又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气灭菌器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后细菌繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。
(4)间歇灭菌法（fractional sterilization）。
采用间歇方式达到灭菌目的。
将灭菌物品置于阿诺流通蒸气灭菌器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。
每次灭菌后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气灭菌器加热而被杀灭。
如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。
若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的灭菌属此方法。
(5)高压蒸气火菌法。
利用密闭的耐高压蒸气灭菌器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。
通常在103.4kPa压力下蒸气温度达到121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭所有的繁殖体和芽胞。
本法适用于耐高温、耐湿物品的灭菌，如普通培养基、生理盐水、手术敷料等。
（二）下向主要介绍高压蒸气灭菌器灭菌效果的验证方法高压蒸气灭菌器使物品灭菌后达到无菌要求，这是药品实验中的基本保证。
高压灭菌器灭菌效果是否合格足实验成败的最基础最关键的首要步骤。
除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。
尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到对药品的无菌试验结果。
因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。
为此我们提供了进行灭菌效果验证的一个简易可行的方法。
1．试验材料(1)嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。
嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5 CFU/片。
(2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。
(3)溴甲酚紫胨水培养基116℃高压灭菌20分钟后备用。
(4)O—150℃留点温度计。
2．方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。
化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。
以上两种试管各准备5-10份。
分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。
如灭菌器为二层，则需放10处。
留点温度计标化合格后方可用于验证试验。
检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。
每次监测后留点温度计的温差应存l℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。
灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。
如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。
如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。
同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。
化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。
随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。
化学指示卡应在干燥处保存。
遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。
高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。
要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。
二种验证各重复三次，共做六次。
5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。
高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。
所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。
一些单位常常忽略了这个重要的问题。
国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。
导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。
培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。
因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。
（三）灭菌时的注意事项使用高压蒸气灭菌器时，首先应注意在开放蒸气的同时，排除灭菌器内的冷空气。
必须将器内冷空气全部排除后，才可关闭排气孔。
假如灭菌器内仍存留有部分空气时，刚压力表上虽已达到了某一压力值，但器内之温度仍未达到相应之度数。
存留的空气越多，刚二者相差也越大。
差也越大，器内温度不足，灭菌则不彻底。
表蒸汽压力与温度的关系表高压蒸汽灭菌器中温度与冷空气排出量的关系微生物培养基质控与图解——培养基制备中的注意事项第四节培养基制备中的注意事项1．原材料的处理制造培养基用的化学药品，均需化学纯。
用于制造干燥培养基的所有原料，都应脱水干燥。
培养基生物原材料必须使用检定合格的产品。
有些颗粒较大的成分，如磷酸盐、氯化钠等需研磨成细粉。
化学试剂，特别是含有结晶水的试剂，必须干烤除水后再用。
2．小量试验在干粉培养基批量生产之前，按照各类培养基要求做好小量试验。
理化检定：如液体的澄明度，固体的凝胶强度是否符合规定。
培养基的酸碱度须于冷却后测定。
因培养基所含的成分不同，对热和冷时测定酸碱度相差很大，如不含缓冲剂的培养基，蛋白胨的成分含量很低，培养基热时pH为7.2，但冷却pH后可达7.8。
故需在冷却后测定为宜。
培养基不可过度加热，否则将影响培养基的酸碱度。
鉴别及生化培养基反应特性必须正确。
无菌试验培养基细菌灵敏度应达到《中华人民共和国药典》规定。
预试验合格后，方可投料大量生产。
3．详细记录培养基内各种成分应称量精确。
培养基的酸碱度，必须准确测定，特别对含有指示剂的培养基，更要注意，否则每批培养基颜色不一致，可能影响培养基反应的观察和细菌的生长。
在培养基制造中的每一过程，必须详细填写制造记录。
计算、称料、投料必须有人复核。
4．分装干燥培养基的配制，分装需在专门的干燥工作间进行。
需配有去湿设备，相对湿度应控制在40%-50%，最好控制在40%以下。
雨季应停止生产，以免产品受潮结块，影响质量。