无机磷的测定复习课程
无机磷的测定钼蓝法原理
无机磷的测定钼蓝法原理
钼蓝法是一种常用于测定无机磷含量的方法，其原理如下：
1. 总磷转化为无机磷：样品中的总磷可以通过一系列化学反应转化为无机磷。
这些化学反应通常包括酸消解、氢氧化钠沉淀、盐酸回溶等步骤。
2. 磷酸与钼酸的反应：转化后的无机磷酸溶液与酸性钼酸反应生成磷酸钼酸盐。
这个反应会导致溶液颜色由无色变为淡黄色。
3. 颜色的测定：钼酸盐与磷酸盐形成的黄色化合物可以通过测定其吸光度来间接测定样品中无机磷的含量。
具体测定方法通常是使用分光光度计测量在700 nm波长处的吸光度。
通过比较待测样品的吸光度与标准曲线上的标准品吸光度的关系，可以确定出待测样品中无机磷的含量。
需要注意的是，钼蓝法是一种相对定性的测定方法，对于磷酸盐的混合物不太适用。
在测定时，需要注意样品的处理方法和反应条件的控制，以保证准确测定无机磷的含量。
发酵过程中无机磷的测定
实验四发酵过程中无机磷的测定一、实验目的了解发酵过程中无机磷的作用，掌握定磷法的原理和操作技术。
二、实验原理酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳。
此过程与无机磷将糖磷酸化有关。
本实验利用无机磷与钼酸形成的磷钼酸配位化合物能被还原剂α-1,2,4-氨基萘酚磺酸钠还原成钼蓝来测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量，用于了解、掌握发酵过程中无机磷的消耗。
三、实验仪器、试剂和材料（1）仪器：试管(1.5cm×15cm)、刻度吸管（0.5mL、1mL、5 mL）、三角瓶（50Ml）、恒温水浴、研钵、721型分光光度计、滤纸。
（2）试剂：①蔗糖。
②5%三氯乙酸。
③3mol/硫酸-2.5%钼酸铵液（等体积混合）④磷酸盐溶液⑤磷酸盐标准溶液⑥α-1,2,4-氨基萘酚磺酸溶液（3）材料：干酵母四、实验步骤(一)、酵母菌的发酵过程取2g干酵母和1g蔗糖放入干净且干燥的研钵粉末，向里加入10mL蒸馏水，10mL磷酸盐溶液搅拌均匀，把悬液转到三角瓶中（三角瓶不能太小）并不断搅拌，迅速从中取出0.5mL加入到已经盛有3.5mL的三氯乙胺的具塞试管(提前准备)中，将盛有悬液和三氯乙胺的具塞试管混匀静置，过滤得滤液，将滤液置于1号试管中，记为1号试剂。
同时在取出0.5mL悬液后迅速将三角瓶放入37℃水浴锅中，并不断搅拌，每隔20min取样0.5mL仍放入已装有3.5mL的三氯乙酸中，混匀静置，过滤分别得不同滤液，依次放入2、3、4号试管中，记为2、3、4号试剂。
(二)、标准曲线的制作取六支具塞试管，分别编号0-5号，按下表依次加入试剂（磷酸盐标准溶液中磷含量50微克/ml）在600纳米用分光光度计测量1-5号的A值并计算1-5号试管中无机磷的的含量。
(三)、样品中无机磷的测定取五支具塞试管，编号1-5号，按下表依次加入试剂以5号试管为参比，在600nm条件下测量1-4号试管的A值。
五、实验数据（一）、制作标准曲线中每支试管中无机磷的含量及A值：绘制标准曲线：（二）、样品无机磷测定结果：六、结果分析与讨论(1)、温度对发酵过程中的影响，超过适应温度范围后，随温度的升高酶很快失活，进而影响无机磷的利用。
饲料中总磷_无机磷和有机磷的含量测定_袁东
第１５卷 第４期 四 川 轻 化 工 学 院 学 报 Ｖｏｌ．１５ Ｎｏ．４ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＩＣＨＵＡＮ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ２００２年１２月 ＬＩＧＨＴ ＩＮＤＵＳＴＲＹ ＡＮＤ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｄｅｃ．２００２ 文章编号：１００８－４３８Ｘ（２００２）０４－００４２－０５ 饲料中总磷、无机磷和有机磷的含量测定袁东，封雪松，付大友，袁基刚（四川轻化工学院材料与化学工程系，四川 自贡 ６４３０３３） 摘 要：采用磷钼钒分光光度法研究了饲料中的总磷、无机磷、有机磷的含量。
在酸性条件下，磷酸与钼酸铵［（ＮＨ４）２ＭｏＯ４］和钒酸铵（ＮＨ４ＶＯ３）混合试剂形成黄色络合物，其最大吸收波长为ε３．４３×１０３ Ｌ・ｍｏｌ－１・ｃｍ－１，回收率为９７．０％￣１０１．５％，结果令人满意。
３７４ｎｍ，摩尔吸光系数= 关键词：分光光度法；总磷；无机磷；有机磷 中图分类号：Ｏ６５ 文献标识码：Ａ 前言 在饲料的矿物质元素中，磷的含量是饲料的基本营养学指标。
磷的缺乏会引起幼龄动物患佝偻症，成年动物患软骨症，同时还会出现食欲不良，产奶量降低，全身虚弱，母畜发情异常，屡配不孕等症状，但如果用之过量，常常又会破坏畜禽生长的正常代谢过程及必要的生产过程［１］。
因此，快速而准确地测定饲料中的磷含量具有重要意义。
动物体内的磷主要来自饲料，但植物性饲料中的磷相当一部分是以有机磷的形式存在，不能被动物充分利用。
因此，在配合饲料中必须补充足够的无机磷。
在加工饲料中，如添加多磷酸化合物，则无机磷的含量增加［２］。
因此，作为评价饲料品质的分析技术，不仅要求测定总磷含量，而且要求对不同化学形态或存在形态的磷分别进行定量。
但目前通用的常规化验指标都是测总磷，并不能确定其中有机磷的含量，对于饲料中有机磷的测定还未见报道。
磷的测定方法已有许多研究，如气相色谱法、导数极谱法、ｘ－荧光光谱法［３～５］、原子吸收法［６］、液相色谱分离电感耦合等离子体质谱法［７］、电位滴定法、速差动力学比例方程分光光度法［８］等，但这些方法多数需要特定的仪器设备，测定方法较繁琐，应用还不广泛［９］。
土壤无机磷的分级测定
土壤有机磷测定方法土壤全磷含量约10～1000 g/kg，与土层、质地、发育、利用方式与强度等有关。
土壤磷分为无机磷和有机磷两大部分，根据我国土壤普查资料，一般耕作土壤中，有机磷含量约占全磷量的25%～56%。
土壤有机磷测定，是指土壤有机磷是土壤全磷的重要组成部分，主要是植素、核酸等含磷有机物中的磷。
通常采用间接测定法，主要有烧灼法和浸提法。
烧灼法是用高温（550°C）或低温（250°C）烧灼，使有机磷矿化，然后用酸溶解，酸液中的磷来自有机磷和无机磷两部分；未经灼烧的土壤用同浓度酸浸提，酸液中的磷只来源于无机部分；两者相减即为土壤有机磷的含量。
浸提法先用硫酸再用氢氧化钠浸提出酸溶及碱溶有机和无机磷，减去其中无机磷从而得到有机磷含量。
两种方法均使用钼锑抗比色法测定溶液中的磷。
烧灼法的主要缺点是在烧灼过程中可能改变矿物态磷的溶解度，尤其是在高度风化的土壤中测定结果偏高；而且有机磷含量高时，高温可使部分磷挥发从而引入误差。
浸提法克服了烧灼法不适用于高度风化的热带土壤的缺点，其优点是将总有机磷进一步区分为酸溶性有机磷和碱溶性有机磷，二者的和即为土壤有机磷总量；缺点是浸提不易完全而且有机磷可能水解。
一、方法原理土壤经550℃灼烧，使有机磷化合物转化为无机态磷，然后与未经灼烧的同一土样，分别用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液浸提后测定磷量，所得结果的差值即为有机磷。
二、主要仪器高温电炉、烘箱、分光光度计。
三、试剂0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液。
取浓H2SO46ml溶解于1000ml水中，标定。
四、操作步骤称取通过60目的风干土样品1.000g置于15ml瓷坩埚中，在550℃高温电炉内灼烧1h，取出冷却，用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液100ml将土样洗入200ml容量瓶中。
另外称取 1.000g同一土壤样品，放置在另一个200ml容量瓶中，加入0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液100ml。
土壤有效磷的测定ppt课件
五、操作步骤
注1:
如果吸取滤液10mL于50mL容量瓶中， 加水和钼锑抗试剂后，会产生大量的 CO2气体，由于容量瓶瓶口小， CO2气 体不易逸出，在摇匀过程中，常造成试 液外溢，导致测定误差。为了克服这个 缺点，可以准确加入提取液、水和钼锑 抗试剂于三角瓶中，混匀，显色。 34
五、操作步骤
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三、主要仪器设备
2、分光光度计
波长为880nm或700nm
波长不能达到880nm时可用
700nm，浸出液有颜色时可用
活性炭脱色。
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物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
吸
颜
色
收 波
光 长(nm)
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
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2、指标体系
测定方法
评价标准 低 中 高
单位：mg/kg
0.03mol/L NH4F- 0.5 mol/L 0.025mol/LHCl 法 NaHCO3法
﹤15 15-30 ﹥30
﹤6 6-10 ﹥10
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2、指标体系 因此，在报告有效磷结果时必
须同时说明所用的测定方法。
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3、Olsen法的影响因素
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四、试剂
2、无磷活性炭 活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有 无磷存在。如含磷较多，须先用HCl（1+1） 浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤，用蒸 馏水冲冼多次至无 Cl-为止；再用0.5 mol/L NaHCO3浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过 滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查 到无磷为止，烘干备用。 如含磷较少，则直接用NaHCO3 处理即可。
石灰性土壤无机磷分级的测定方法
石灰性土壤无机磷分级的测定河北省地矿中心实验室 有机有机分析分析分析室室 （参考参考蒋柏藩蒋柏藩蒋柏藩等的等的等的资料资料资料整理整理整理））1范围本方法适用于石灰性土壤中Ca2-P、Ca8-P、Al-P、Fe-P、O-P、Ca10-P 无机磷的6级分级测定。
2原理土壤中不同形态的磷被适当的提取剂震荡提取，采用钼锑抗比色法测定提取液，吸光度与磷的含量成正比，与标准系列比较定量。
3试剂3.1 NaHCO 3溶液（pH=7.5）:称取21.0g NaHCO 3溶于990mL 水中，用1：1HCl 调节pH=7.5，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存（不宜久放）。
3.2 HN 4AC 溶液（pH=4.2）:量取29.5mL 冰醋酸于800mL 水中，用氨水调节pH=4.2，用水稀释至1L 保存。
3.4 HN 4F 溶液（pH=8.2）: 称取18.5g HN 4F 溶于990mL 水中，用4mol/L HN 4OH 调节pH=8.2，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.5 NaOH-Na 2CO 3溶液: 称取5.3g 无水Na 2CO 3和4.0gNaOH 溶于800mL 水中，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.6 柠檬酸钠溶液：称取88.2g 柠檬酸三钠（Na 3C 6H 5O 7•2H 2O ）溶于900mL 热水中，用水稀释至1L 。
3.7 NaOH 溶液: 称取20g NaOH 溶于800mL 水中，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.8 H2SO4溶液: 15mL浓H2SO4、溶于约800mL水中，稀释至1升。
3.9饱和NaCl溶液：400gNaCl溶于1升水中，待溶液呈饱和后使用。
3.10 H3B03溶液：49g硼酸溶于900mL热水中，冷却后稀释至1升。
3.11三酸混合液：H2SO4:HCIO4:HNO3以1:2:7的体积比混合。
3.12连二亚硫酸钠(保险粉Na2S2O4) 密封避光、防潮保存。
无机磷检测作业指导书
无机磷检测作业指导书1.试剂及其配制1.1硫酸溶液：c（H2SO4）=6.0mol/L在搅拌下将300mL硫酸（H2SO4,ρ=1.84g/mL）缓缓加到600mL水。
1.2钼酸铵溶液溶解28g钼酸铵【（NH4）6Mo7O24·4H2O】于200mL 水中。
溶液变混浊时，应重配。
1.3酒石酸锑钾溶液溶解6g酒石酸锑钾（C4H4KO7Sb·1/2H2O）于200mL水中，贮于聚乙烯瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
1.4混合溶液搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸溶液中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，混匀。
贮于棕色玻璃瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
1.5抗坏血酸溶液溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定1个月。
1.6磷酸盐标准贮备液称取1.011g硝酸钾（预先在110℃烘1h，置于干燥器中冷却至室温）用少量蒸馏水溶解后，转移至1000ml容量瓶中，稀释至标线，加1.0ml三氯甲烷，混匀，浓度为140.0mg/L，有效期半年。
1.7磷酸盐标准使用液吸取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中，稀释至标线，混匀，浓度1.40mg/L。
2.绘制工作曲线2.1量取磷酸盐标准使用溶液0，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00mL于50mL具塞量筒中，加水至50mL标线，混匀。
各浓度依次为0，0.030，0.060，0.120，0.180，0.240mg/L。
2.2各加1.0mL混合溶液，1.0mL抗坏血酸溶液，混匀。
显色5min后，注入5cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882nm波长处测定其吸光值Ai。
其中零浓度为标准空白吸光值Ao。
2.3以吸光值（Ai—Ao）为纵坐标，相应的磷酸盐浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线。
3.水样测定量取50mL经0.45um微孔滤膜过滤的水样至具塞量筒中，按绘制工作曲线步骤测定吸光值Aw。
钙、磷、镁的测定及临床意义PPT课件
总结果：升高血钙、降低血 磷。（升钙降磷）
（2）降钙素：由甲 状腺旁细胞合成分泌。 • 总结果：降低血钙、 降低血磷。（降钙降 磷） • 血钙升高刺激降钙素 分泌，二者呈正比关 系。
钙、磷、镁测定的临床意义
• （1）测定方法：
• • • • • • 1）离子钙测定：钙离子选择性电极。 2）总钙测定：原子吸收分光光度法、染料结合法和滴定法（普遍应用）等。 （2）参考值：血清总钙：2.25～2.75mmol/L 离子钙：0.94～1.26mmol/L （3）临床意义： 1）血清钙升高：高血钙症比较少见
磷主要由肾排泄，其排出量约占总排出量的 70%。
（3）镁：吸收部位主要在回肠,是主动运转过程。
消化液中也有多量镁，长期丢失消化液（如 消化道造瘘）是缺镁的主要原因。 排泄：主要是肾。
2.钙磷代谢的调节：甲状旁 腺激素、降钙素、活性维 生素D。 （1）甲状旁腺激素： 维持血钙正常水平最重要 调节因素。
• （3）临床意义： ①血清铁增高：溶血性贫血、再生障碍性贫 血、巨幼红细胞性贫血等。 ②血清铁降低：常见于缺铁性贫血、急性或 慢性感染、恶性肿瘤等。 ③血清总铁结合力增高：缺铁性贫血、急性 肝炎等。 ④血清总铁结合力降低：见于肝硬化、肾病、 尿毒症等。
• 2.锌：锌是体内含量仅次于铁的微量元素，在正 常成人体内含量为2～2.5g。锌在小肠上皮细胞 内吸收，从粪便、尿、汗、头发及乳汁排泄。可 以测定血锌判断体内含锌情况。 ①可作为多种酶的功能成分或激活剂。 ②促进生长发育，促进核酸及蛋白质的生物 合成。 ③增强免疫及吞噬细胞的功能。 ④抗氧化、抗衰老、抗癌；
A.氟
B.硒
C.锌
D.钙
E.碘
1.地方性呆小病和甲状腺肿与那种元 素缺乏有关 2.克山病和大骨节病与哪种元素缺 乏有关 3.佝偻病年与那种元素缺乏有关：
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■ 水样测定 按以下步骤测定样品： ① 量取50 ml经0.45 μm微孔滤膜过滤的水样至带刻度具
塞比色管中，按上一步骤②测定吸光值Aw。 ②同时量取50 ml水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。
■ 记录与计算 据(Aw-Ab)值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度(mg/L)，
或用标准曲线性回归方程计算。将所得数据记入《海洋监测规 范》的附录A中表A3及表A16中。
用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
□ 活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7PO43- + 21NH4+ + 12Mo7O246- + 72H+ =7(NH4)3[PMo12O40 ]↓（淡黄色）+ 36H2O
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼
蓝，即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸
由于观察到磷为玻璃所吸收，长期贮存不应采用玻璃瓶。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
磷钼蓝分光光度法
■ 适用范围和应用领域 □ 本法适用于海水中活性磷酸盐的测定 □ 本方法为仲裁方法
■ 方法原理 在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，
■ 磷含量增加，导致红色浮游生物爆发性繁殖而引发的 近海海水出现的“赤潮”和城市水系（湖泊、水库）中出 现水生植物疯长的“水华”现象。
采样和样品贮存
■ 含磷酸盐的水样，在贮存时由于生物、酶和吸附作用， 使磷酸盐的浓度在采样后1小时内就会发生变化。所以样品 采集后应尽快分析，最好在半小时之内进行，不要超过两小 时。若不能立即分析，采取措施固定。
4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。
② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。
③以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横 坐标，绘制标准曲线。
■ 一般情况下,活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)， 通常指能被植物直接吸收的。
无机磷污染的来源
■ 生活污水 洗涤废水（含磷洗衣粉、洗涤剂） 食物废渣 人体排泄
■ 工厂和畜牧业废水 化工行业（造纸业、磷肥工业） 生化制药（生物制药企业） 金属表面处理 食品工业 ……
■ 降雪降雨
影响
■ 水体的富营养化 缓慢流动的湖泊、水库、内海等水域的生物营养成分（如 氮、磷等），因长期不断补给而过多积累，导致水草、藻 类等大量繁殖，引起水质恶化、鱼群死亡的现象。
中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫做“钼蓝
”的物质（磷钼黄被还原为磷钼蓝）
(NH4)3[PMo12O40 ]
H3PO4•2Mo2O5 H3PO4•10MoO3•2Mo2O5
所需试剂
■ 硫酸溶液 ■ 钼酸铵溶液 ■ 酒石酸锑钾溶液 ■ 混合溶液 ■ 抗坏血酸溶液 ■ 硫酸盐标准储备溶液 ■ 磷酸盐标准使用溶液
谢谢观看
仪器
■ 分光光度计：配5cm测定池 ■ 量筒：容量10，50，100，250，500 ml ■ 量瓶：容量100，1000 ml ■ 带刻度具塞比色管：容量50 ml ■ 刻度吸管：容量1，5，10 ml ■ 自动加液器：容量1 ml ■ 一般实验室常备仪器和设备Fra bibliotek分析步骤
■ 绘制标准曲线 按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml,
■ 关于样品的贮存和固定问题，目前无定论，主要有快速冷冻 法和化学保存法两种。若只放几个小时，可冷藏。
□ 冷冻法：水样采集后迅速冷冻到-20C以下，（测溶解无机 磷则要过滤）。这种方法目前大多数人认为可保存几个月，基本 用此法。
□ 化学法：加入HgCl2—100ml水样中加入约3滴HgCl2饱和溶液。 □ 样品贮存：样品采集后可存于玻璃瓶中，待分样及过滤结 束后，一般用塑料瓶贮存样品（聚丙烯或聚四氟乙烯，不可用聚 乙烯-原因：吸附有机物质、磷酸盐、油类）。
注意事项
■ 除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为二 次水或等效纯水。 ■ 水样采集后应马上过滤，立即测定。若不能立即测定， 应置于冰箱中保存，但也应在48 h内测定完毕。 ■ 过滤水样的微孔滤膜，需用0.5 mol/L盐酸浸泡，临 用时用水洗净。 ■ 硫化物含量高于2 mg/L-S时干扰测定。此时，水样用 硫酸酸化，通氮气15 min，将硫化氢驱去，可消除干扰。 ■ 磷钼蓝颜色在4 h内稳定。
无机磷的测定
磷钼蓝分光光度法测定海水 中的活性磷酸盐
09海环1班 张姣 2011-11-6
无机磷&活性磷酸盐
■ 天然水和废水中含有的磷绝大多数以各种形式的磷酸盐存
在，也有有机磷的化合物。从化学形式上看，水中的磷化合物
可分以下几类。
(1)正磷酸盐，即PO43-、HPO42-、H2PO4-。
无机磷形态
(2)缩合磷酸盐，包括焦磷酸盐、偏磷酸盐、
聚合磷酸盐等，如P2O74-、P3O105-、HP3O92-、（PO3)63-等。 (3)有机磷化合物。
■ 海水中磷以两种化学形式存在，即有机磷和无机磷。每一 种化学形式又分为溶解和颗粒的两种形态。
■ 在各种无机磷形态中，仅正磷酸盐可通过标准的磷钼蓝方 法定量地测定，而焦磷酸盐和无机磷聚合物均需要首先将其水 解为活性磷酸盐后才能测定。