霍乱标本采集方法修订稿
霍乱弧菌的分离与鉴定.总结
霍乱弧菌的分离与鉴定濮阳市疾病预防控制中心一、标本的采集和送检:1.标本的采集：1)粪便标本：应争取在发病早期、服用抗菌药物之前采集；2)采便方法：可用棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭采便管由肛门插入直肠内3～5厘米处采取。
3)采样要求：☞水样便采取1～2毫升，成形便采取指甲大小的粪量。
病人呕吐物、沾染粪便的衣物、尸体的肠腔和口腔内容物亦可作为检材。
☞外环境样本可采取病人的污染衣物、剩饭菜、可疑食品、抹布、污水、坑塘水、井水、公厕粪便、苍蝇等。
☞按1:10比例置入碱性蛋白胨水增菌液中，迅速送往实验室。
4）肛拭采集的注意事项：1.棉拭子要用竹签，圆形、光滑以免采样时易断；2.棉拭子做的要稍大而紧固(避免采集时脱落)；3.采集者应穿戴一次性手套；4.采集前将棉拭子用碱性蛋白胨水(APW)蘸湿，多余的液体紧靠管壁挤出；5.采集时要求被采集者双腿分立、微屈、手扶墙或凳子趴下，劝其用单手或双手协助分开股沟(或采集者用左手分开股沟)，右手持棉拭子轻轻旋转插入肛门内约4～5cm(幼儿约2～3cm)处，转动数秒钟从紧靠肛环边的隐窝旋转擦取直肠表面黏液后退出；6.棉拭子在推进时如感觉遇到阻力，应调整角度后缓缓旋转推进，避免用力过大或推进太快造成肛壁出血而影响病原菌的检出；棉拭子进入的深度一定要够，否则采集的有效标本量会很少；7.采集的标本拭子应立即置入APW内，手接触的部分在管口折断弃去。
填写采样登记表(单)，并在采样管上填写被采集者的样品编号、姓名、性别、年龄，尽快送检。
二、快速诊断：1.直接镜检：为争取最快速度作出诊断，采取病人“米泔水样”大便或呕吐物，悬滴法镜检(最好用暗视野)，可见具有流星状动力的细菌。
2.特异性制动试验：☞取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴，置于载玻片上，再加霍乱弧菌O1多价或O139诊断血清，加盖玻片，用暗视野显微镜观察，3分钟内流行状运动细菌被抑制的即为阳性，此法优点是快速而特异，操作简便，可☞在几分钟之内做出初步诊断。
霍乱弧菌检验程序
霍乱弧菌检验程序一、检查对象一天内腹泻三次或三次以上的病人。
二、标本采集及处理1、采集时间：在未服用抗生素前采样。
2、采集方式：用棉拭子或采便管从肛门插入直肠3—5厘米取样，必须看到有粪便黏附才可：对于自然排出的水样便、呕吐物及保存液保存的标本可直接接种分离或吸取0.5ML、成形大便取黄豆左右大小。
3、标本送检：标本采集后应立即送检。
若不能立即送检，可保存于碱性蛋白胨水中尽快送检验。
24小时以上才能送检的标本，应使用文一腊二氏保存液保存。
4、标本处理：将标本直接分离接种于4号琼脂及放入8—10ML碱性蛋白胨水中增菌。
“两管三板”：送检标本马上接种一个4号琼脂平板、同时碱性蛋白胨水培养管增菌；—8小时后接种增菌管内标本于第二块4号琼脂平板，同时转种第二管碱性蛋白胨水；6—8小时后继续接种第二管碱性蛋白胨水的标本于第三块4号琼脂平板上。
三、检验程序：1、弧菌形态：弧菌生长快、菌落大、培养4—5小时，原划线处有菌苔生长，8—10小时可长出小菌落，16小时菌落直径可达2毫米。
菌落略带灰色、半透明、扁平、稍隆起、光滑湿润，培养时间延长或室温放置后，菌落略带黄色，中心厚而周围透明，培养基含亚碲酸钾使得菌落成灰色，中心形成黑色金属碲沉淀。
在平皿上挑取典型菌落做玻片凝集试验。
2、玻片凝集试验：首先要注意抗原抗体比例和保证抗原（菌株）的纯洁性，使用O1群和O139群两种诊断血清。
如未获单个菌落，可挑取可疑菌苔边缘透明部分做玻片凝集。
注意，凝集的菌落应以生理盐水作对照，检查有无自然凝集；然后用此玻片显微镜下看动力（动力活泼如流星样）；再将此玻片革兰氏染色看弧菌形态。
3、弧菌分型：稻叶型和小川型诊断血清做玻片凝集试验进一步分型。
四、报疫程序：一旦发现阳性可疑标本立即用铁罐保存，通知送检科室，确认病人资料；上报医院总值班2460或2560，派车送海珠区防疫站确证。
五、标本处理：发现Ⅱ号菌阳性可疑标本，即送标本往防疫站确认。
霍乱检测操作规程
霍乱检测操作规程霍乱是一种由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，其症状包括剧烈腹泻、呕吐和腹痛。
霍乱具有高度传染性，因此在进行霍乱检测时需要遵循一定的操作规程，以确保实验室工作人员和社会公众的安全。
下面是一份霍乱检测的操作规程，以供参考。
1. 实验室准备：- 确保实验室设备和试剂的完好和有效性。
- 准备好所需的培养基、试剂和仪器。
- 提前准备好相关实验记录和报告模板。
2. 实验室设备清洁和消毒：- 定期对实验室设备进行清洁和消毒，特别是接触到样本的仪器和工具。
- 使用合适的消毒剂对实验台面、试剂架和实验室周边进行消毒。
3. 样本采集和处理：- 使用适当的个人防护装备，包括手套、口罩和护目镜。
- 选择合适的采样方法，如直肠拭子、粪便样本或病人的呕吐物。
- 将采样好的样本放入严密密封的容器中，避免样本泄漏和污染其他样本。
- 将样本尽快送往实验室进行处理，以确保有效的检测结果。
4. 霍乱检测方法：- 使用合适的实验方法和试剂进行霍乱的检测，如PCR、免疫学检测或培养方法。
- 按照试剂和仪器的说明书进行实验操作，确保准确和可靠的结果。
- 对实验过程中的废液和废物进行正确处理，以防止污染和传播。
5. 结果判读和报告：- 对检测结果进行仔细的观察和判断，根据标准判定结果的阴阳性。
- 将结果记录在实验记录中，并及时生成报告。
- 如有需要，将结果报告给相应的卫生部门和相关人员。
6. 实验室安全和废物处理：- 在实验室操作过程中，严格遵守实验室安全规定，确保操作人员的安全。
- 对实验室产生的废液和废物进行正确的处置和处理，以降低污染和传播的风险。
- 使用合适的方法和设备对操作台面和工具进行清洁和消毒。
7. 实验室记录和质量控制：- 对实验室操作进行详细的记录，包括样本信息、实验步骤和结果等。
- 定期进行质量控制实验，以确保实验的准确性和可靠性。
- 定期进行实验室内部和外部的质量评估，及时发现和纠正实验中的问题。
总结：霍乱检测的操作规程至关重要，它能确保实验室工作人员和社会公众的安全。
霍乱病原菌检测标本的采集方法、运输和保存
生物安全的要求
• 霍乱属于肠道传染病，对实验室操作以及 样品采集等方面的生物安全应按照肠道感 染细菌性疾病的通用生物安全要求。另外， 霍乱在我国属于传染病法规定的甲类报告 管理传染病，在卫生部《人间传染的病原 微生物名录》（ 2006 年）中，霍乱弧菌流 行株危害程度为第二类，属于高致病性微 生物级别（非流行株危害程度为第三类）， 要求在生物安全 II 级实验室（ BSL-2 ）操作 病原体。
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• 1. 病人粪便 • 粪便标本的采集应尽可能在发病早期（能 采集到的最早期）。即便病人已使用抗生 素，为尽可能获得霍乱病原学诊断，也需 在能采集的最早期采集标本。用采集粪便 标本（包括水样便）的器材采取新鲜粪便， 避免采便量过少，一般要求水样便采取 1mL～3mL，放入无菌带螺旋盖的试管中， 拧紧管盖；成形便采取指甲大小的粪量， 装入灭菌小瓶中，盖好瓶盖。
霍乱病原菌检测标本的 采集方法、运输和保存
：
重庆市南岸CDC 许磊
一、标本的采集和送检
• （一）标本采集和送检的要求 • 标本采集是否规范，能从很大程度上影响 检验工作的质量。标本采集应由受过专门 培训的人员来执行，同时注意生物安全防 护，防止样品污染、交叉污染和自身感染。 标本应有唯一编号作为唯一性标识。标本 在采集后应立即放入冷藏箱中，注意勿使 标本局部冷冻，并尽快送往实验室进行分 离培养。
• 6. 物体表面标本 • 用灭菌棉拭蘸以碱性蛋白胨水涂擦沾染粪 便的衣物表面、食物操作台、砧板等等相 关物体或怀疑污染物体表面，放入到碱性 蛋白胨水中，密封，常温下运往实验室。
• 7. 苍蝇标本 • 在每个采样点以10～15只苍蝇作为一份标 本放入自封袋或试管中，密封，置于冷藏 箱中送实验室。
• 2. 病人呕吐物 • 用无菌压舌板或棉拭子挑取少量呕吐物作 为检材，放入灭菌塑料管、自封塑料袋或 灭菌带盖瓶中，密封。立即置于冷藏箱内， 送往实验室 .
霍乱弧菌的微生物学诊断检查方法
霍乱弧菌的微生物学诊断检查方法微生物学诊断由于霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期迅速和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。
直接镜检采取病人“米泔水样”大便或呕吐物。
镜检（涂片染色及悬滴法检查）观察细菌形态，动力特征。
细菌分离培养可将材料接种至碱性蛋白胨水37℃培养6～8小时后，取生长物作形态观察，并转种于碱性平板作分离培养，取可疑菌落作玻片凝集，阳性者再作生化反应及生物型别鉴定试验。
特异性制动试验取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴，置于载玻片上，再加霍乱弧菌多价诊断血清，加盖玻片，用暗视野镜观察，3分钟内运动被抑制的即为阳性，此法优点是快速而特异操作简便，但必须有数量较多的弧菌才检出。
免疫荧光试验除一般免疫荧光法外，还可用荧光菌球法检查。
1.标本采集和运送:霍乱是烈性传染病,凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速准确作出病原学诊断.在发病早期,尽量在使用抗菌药物之前采集标本.可取患者”米泔水”样便,也可采取呕吐物或尸体肠内容物,或采取肛门试子.标本应避免接触消毒液,采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌,不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门试子直接插入卡-布运送培养基中.送检标本装在密封,不易破碎的容器中,置室温由专人输送.甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送.2．标本直接检查:荚膜肿胀试验：特异性抗血清与相应细菌的荚膜抗原特异性结合形成复合物时，可使细菌荚膜显著增大出现肿胀的试验常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等的检测革兰染色：革兰染色过程所用四种不同溶液和作用：1、碱性染料这在简单染色中已讨论过，此处用结晶紫。
2、媒染剂其作用是增强染料与细菌的亲和力，更好地加强染料与细胞的结合。
常用的媒染剂是碘液。
3、脱色剂帮助染料从被染色的细胞中脱色。
利用细菌对染料脱色的难易程度不同，而将细菌加以区分。
革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰阴性细菌则易被脱色。
常用的脱色剂是丙酮或乙醇，这里所用的是95%的乙醇。
霍乱弧菌检测的方法与结果探究
霍乱弧菌检测的方法与结果探究摘要目的：探究分离培养法和胶体金免疫层析法，两种霍乱弧菌检测方法和结果差异。
方法：从2015年至2016年，选取608例霍乱弧菌样本，同时使用分离培养法和胶体金免疫层析法进程检测，并就两种方法的结果符合率进行比较。
致性为优，符合率定位100%。
结果：608例霍乱弧菌样本中，培养法阳性20例，胶体金免疫层析法检测结果与培养法一致为阳性；培养法阴性588例，胶体金免疫层析法检测585例为阴性，3例为阳性，经培养法复核，确定3例为阴性。
结论：胶体金免疫层析法作为一种新兴的霍乱弧菌检测方法，可以快速完成霍乱弧菌的检测，且具有较高的准确性，将其应用于霍乱弧菌检测，可有效提高疫情防控质量。
关键词霍乱弧菌；检测的方法；结果霍乱弧菌（V.cholera）是霍乱的病原体，属于弧菌科，是革兰氏阴性菌的一种。
霍乱弧菌主要分为埃尔托生物型（EL-Tor bio-type）和古典生物型（Classical biotype）两种。
培养法是卫生部规定的霍乱弧菌标准方法，适用于各种霍乱弧菌标本，检测结果准确、可靠，但整体检测时间相对较长。
近几年，胶体金免疫层析法被提出用于霍乱弧菌标本检测，与培养法相比，胶体金免疫层析法检测更加快速。
本文针对两种检测方法进行对比，实验结果如下。
1材料与方法1.1材料pH8.6碱性蛋白胨水（杭州微生物试剂厂）；TCBS（硫代硫酸盐枸橼酸盐胆盐琼脂）；霍乱弧菌O1群多价血清和小川稻叶O139分型血清（浙江省疾病预防控制中心）；霍乱弧菌胶体金免疫快速检测卡（郑州博赛生物技术有限公司）。
所有试剂均在有效期以内。
1.2样本来源本组试验中608例霍乱弧菌样本，均收集于疑似霍乱感染者粪便以及霍乱疫情采集标本。
试验中检测为阳性的霍乱弧菌样本，均送至相关疾病预防控制中心进一步确认（其中呕吐物2份，肛拭18份）。
其余腹泻患者肛拭988分，均通过培养法检测验证为阳性。
1.3方法根据《霍乱防治手册》（第五版）规定进行病原菌分离培养和血清鉴定；胶体金免疫层析法操作方法如下：一，采取适量以增菌的碱性蛋白胨水滴入检测卡中，均匀摇晃，观察5min内的试验结果。
霍乱弧菌采样及快速检测操作注意事项
霍乱弧菌采样注意事项
一．尽早采样，最好在用药前。
二．采样量要足够，固体粪便1-2g，液体粪便1-2ml放入10ml 碱性胨水中。
三．采样时要填写送检单，内容包括患者姓名、性别、年龄、采样日期、送样单位、送样人。
四．采样后专人及时送检，防治污染。
霍乱弧菌快速检测操作及注意事项
一、操作步骤：
1、待检试纸条置于洁净干燥的工作台上
2、用干净的吸管或加样器吸取样品或增菌样品2-3滴，滴加到检测条样品加入端（白色端），开始计时。
3、2-15分钟内观查结果。
15分钟后结果不计。
二、结果判断：
阴性：一条红线出现，即质控线
阳性：两条红线出现，即检测线（中间）和质控线
无效：无红线出现
三、样品处理
1、直接检测：水样便
2、增菌检测：1-2ml接种至10ml碱性胨水中。
37℃6-8
小时或过夜。
3、水样、食品标本略。
四、注意事项
1、检测试纸条4-30℃阴凉避光干燥处保存，注意防潮，有效期一年。
2、用新鲜标本，不得使用陈旧标本。
3、加样时用干净吸管或干净加样器加样，若将检测条直接浸入样品中不得超过0.5cm。
4、实验后彻底消毒污染区及具有传染可能的污染物。
霍乱细菌标本采集、转运、消毒隔离制度
霍乱细菌标本采集、转运、消毒隔离制度
1. 采集标本
- 霍乱细菌标本的采集应由经过相关培训的医疗人员进行。
- 确保采集前医务人员彻底洗手并佩戴一次性手套。
- 使用无菌试剂盒采集标本，并按照操作说明进行操作。
- 标本采集完毕后，应将其放置在冷藏条件下，避免细菌的滋长。
2. 转运标本
- 将采集好的标本立即进行转运是非常重要的。
- 使用无菌将标本妥善封存，以防止泄漏和污染。
- 标注标本的相关信息，如采集日期、时间、患者姓名等。
- 使用恰当的包装材料将标本包装好，并避免摇晃和碰撞。
- 在传输过程中，要确保标本保持在合适的温度条件下，以防止细菌的滋长。
3. 消毒隔离措施
- 在采集和转运期间，医务人员应严格遵守消毒隔离制度。
- 使用含氯消毒剂对采集工具进行有效消毒，并确保消毒剂的浓度符合要求。
- 在转运标本的过程中，保持标本和人员之间的有效隔离，避免交叉感染。
- 处理完标本后，医务人员应彻底清洁和消毒使用的工具、设备和工作台面。
以上是针对霍乱细菌标本采集、转运、消毒隔离制度的基本要求。
请医务人员严格按照相关规定和流程进行操作，以确保细菌标本的有效采集和传输，并保护自身和他人的健康安全。
请注意，此文档提供的信息是基于一般性的指导原则。
具体的操作规范和要求可能因医疗机构和相关法规的要求而有所不同。
因此，在实际操作中，请参考医疗机构的内部规章制度，并咨询专业人士的意见。
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霍乱标本采集方法 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-
霍乱标本采集方法
标本采集
霍乱是烈性肠道传染病，检验标本主要以病人的大便为主，必要时呕吐物和被呕吐物污染的衣裤亦可作为标本。
一般采取新鲜粪便，或用棉拭子插入直肠内4～5cm采取。
病人标本最好床边接种，预计能在3h内进行培养者，可将肛拭子置于灭菌的含碱性蛋白胨水的试管中，或将10～15ml大便放在带盖的广口瓶中，送往实验室。
不能在3h内进行接种或需送至较远实验室的，应将标本转至卡-布半固体运送培养基中送检，避免使用甘油盐水缓冲运送培养基。
送检标本应密封并派专人送达。
咽拭子标本
采集病人发病3 日内的咽拭子标本，用于病原检测。
用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部;迅速将棉签放入装有 3-5ml 保存液(含 5%牛血清维持液或生理盐水，推荐使用维持液)15ml 外螺旋盖采样管中，的在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。
4 暂存并在 12 小时内送达实验室，-20 以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70 冰箱。