血液成分病毒灭活的研究进展_谭美芳
亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响
亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响李雯瑛【摘要】目的探讨亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响.方法 2013年4月到2014年3月的一年间,每月随机抽取新鲜血浆5袋,共计60袋作为研究对象,分别对亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒前后血浆中的凝血因子、血浆纤维蛋白原(Fg)、总蛋白(TP)含量进行测定,并检测亚甲蓝残留量.结果亚甲蓝光化学法病毒灭活前后,TP、Fg以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ等各项指标无显著变化,P ＞0.05,差异无统计学意义.病毒灭活血浆中亚甲蓝的残留量仅为0.06 ±0.01 μmol/L,其滤出率可以达到94.0％.结论在单袋血浆病毒灭活的过程中,亚甲蓝光化学法对血浆质量影响相对较小,是一种有效方法,实用性强,安全性好,值得临床推广应用.【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2016(023)001【总页数】3页(P95-97)【关键词】亚甲蓝光化学法;灭活血浆病毒;血浆成分;影响【作者】李雯瑛【作者单位】朝阳市中心血站成分科,辽宁朝阳122000【正文语种】中文临床血浆输注是特殊危急情况救治患者的重要方式之一，而在输全血或者血液成分的过程中，也有一定的病毒性疾病传播风险［1］。
虽然，在血液采集时，各采、供血机构的工作者会对采供血流程中各个环节进行积极的控制，但鉴于检测方法、病毒检测种类、检测试剂以及病毒感染血液后“窗口期”的存在、新病毒出现等多种因素的影响［2］，血浆输注时仍无法完全达到“零风险”的目标，因而，选择有效的病毒灭活方法，提高血浆使用的安全性，对于降低经血传播相关疾病的风险具有十分重要的意义。
随着近年来血液成分病毒灭活技术的发展，输血安全性得到了显著的提高。
亚甲蓝光化学法是用于单袋血浆病毒灭活的一种方法，因其具有安全、有效、实用的优点，在临床输血过程中逐渐被推广应用，但其仍存在缺少灭活后血浆的各项质控指标的标准和非脂包膜病毒的灭活等技术问题。
浅谈血浆病毒灭活
浅谈血浆病毒灭活随着医疗技术的提高，输血安全日益受到人们重视，因此要从根本上控制和杜绝血源性的传染病，除加强筛查以外，还必须对冰冻血浆进行灭活病毒处理，对血浆的病毒灭活是保障输血安全的重要措施之一。
血液检测有效地遏制了经输血传播疾病的发生，但仍不能完全杜绝经输血传播的疾病。
目前全国年供血量约为1300万单位（200 mL/单位），若以中等发达国家输血后传染病发病机率为0.2%计，其中回输血浆后而感染者（乙肝、丙肝和艾滋病）估计有近百万人。
由于HIV、HBV、HCV、HTLV 等构成经血传播病毒性风险的主要病毒均是脂质包膜病毒，故亚甲蓝光化学法被认为是一种可取的血液成分灭活方法，是目前唯一获准用于临床的光化学血浆病毒灭活技术。
我站目前也使用此方法对血浆进行病毒灭活。
1 MB光化学法技术简介亚甲蓝又叫美蓝，是一种吩噻嗪类酸性染料，也是一种表面携带正电荷的光敏剂，在可见光氧化损伤的作用下，使病毒的核酸断裂，包膜破损，从而使病毒完全失去穿透、复制及感染能力[1]。
可以灭活大多脂质包膜病毒，包括HIV、HCV、HBV [2]。
亚甲蓝血浆病毒灭活机理明确、效果可靠，且不影响血浆质量。
亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活在国内外均已大量使用。
2 技术标准及依据根据卫生部《中国输血技术操作规程血站部分》的要求，新鲜冰冻血浆自血液采集后6 ～8 h 经分离速冻成块[3]，在30℃保存1 年内几乎含有全部凝血因子，包括不稳定的因子V 和因子Ⅷ，新鲜冰冻血浆与普通冰冻血浆的差别在于凝血因子V 和因子Ⅷ，血浆中有效成分的含量易受采集、运输、制备、保存等环节的环境温度、离体时间、制备方法、制备条件、储存温度等过程质量的影响，通过控制过程质量是提高血浆质量的有效途径。
新鲜液体血浆作为制备病毒灭活血浆的一种原料血浆，其质量将直接影响病毒灭活血浆的质量，因此，为确保病毒灭活血浆的质量，必须严格控制好从血液采集到血液成品这个过程的冷链和时间控制，确保分离的液体血浆、制备的冰冻血浆符合《全血及成分血质量要求》中的质量标准。
血液制品病毒灭活及去除工艺进展分析
血液制品病毒灭活及去除工艺进展分析摘要】在临床上血液制品能够为有需要的病患提供治疗帮助，但是在进行制作的过程中，血液制品有传播病毒的风险，因此对血液制品进行病毒灭活以及去除是对其质量的重要保证，随着人们思想水平和安全意识的提高，对血液制品的质量也越加重视，本文对血液制品病毒灭活以及去除工艺的进展进行了研究探讨。
关键词：血液制品；病毒灭活；去除工艺；进展在临床上血液制品是用于对病患进行治疗和抢救的重要作用制剂，主要是由健康人群提供血浆或者是将拥有特异免疫的人群的血浆进行分离和提纯处理，从而得到相关的血细胞组分以及血浆蛋白组分等[1]。
血液制品能够用于对病患病情的诊断治疗，具备稳定性较强以及使用方便等特点[2]。
但是在进行制作的过程中需要注意的是，制品的原材料来源于人体的血液，本身会潜在着携带病毒的风险，一旦处理不当，容易对病患造成血液污染，从而造成二次伤害。
随着人们卫生意识的不断提高，对血液制品的病毒灭活以及去除工艺提出了更高的要求。
本文对血液制品病毒灭活以及去除工艺的进展进行了研究探讨，报道如下。
1血液制品中的不安全因素分析根据目前的研究资料发现，在制作血液制品的过程中所存在的主要不安全因素主具体为病原微生物和代谢产物。
血液制品的原材料人体的血液当中会存在着病原微生物及其相关的代谢产物，这两种物质能够和同种的抗原性蛋白相互作用，导致相关临床疾病的发生[3]。
经过研究证实能够通过人体血液以及血液制品进行传播的病毒类型主要为肝炎病毒、人体T淋巴细胞N型病毒、微小病毒、免疫缺陷病毒以及雅克氏病毒等。
当这些病毒通过血液制品进入到人体当中之后会对人体的正常细胞造成伤害，导致严重疾病的发生[4]。
2.病毒灭活方法及去除工艺分析目前在临床上对血液制品进行病毒灭活以及去除的方法和工艺根据不同的处理模式和媒介，可以分为物理方法和化学方法等，具体主要有以下几点。
2.1过滤法在对血液制品进行灭菌的过程中，可以采用过滤法将血液中的有害病菌进行灭除。
血液制品病毒灭活及去除工艺进展
血液制品病毒灭活及去除工艺进展摘要：血液制品主要是通过将多人份血浆进行混合之后，使用特定的分离纯化技术制备的产品，血液制品通常被用在医疗急救以及某些特定的疾病预防和治疗中，具有其他药物不可替代的作用。
从理论上来说，经血液传播的疾病也可以经血浆传播，所以，为了能够最大限度保障血液制品的安全性，就需要严格按照原则要求，在生产血液制品的过程中，就需要使用一定的工艺方法对血液制品中的病毒进行灭活处理，去除其中的病毒，制造出健康的血液制品。
鉴于此，本文就血液制品制造过程中的病毒灭活方法和去除工艺展开如下探讨。
关键词：病毒灭活；病毒去除；血液制品1.病毒灭活方法1.1物理方法1.1.1巴氏消毒法这种方法的应用对温度和时间的要求非常高，大量临床研究证明，在溶液状态下，对白蛋白进行10h的60℃加热处理，能够灭活人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙肝病毒（HBV）和丙肝病毒（HCV），即巴氏消毒，从而提高白蛋白在病毒安全方面的可靠性。
最近这些年，经常将巴氏消毒法用在静脉注射免疫球蛋白的生产以及纤维蛋白原的处理中。
没有经过巴氏消毒法灭活处理的产品，其输血传播病毒率高达50%~75%，而经巴氏消毒灭活处理之后，产品阳性检出率为0[1]。
1.1.2干热法（冻干制品）干热法也就是对冻干后的制剂使用干热处理和加热处理来杀活病毒的一种方法，常见的干热法主要有10~72h，60~80℃加热法及72h，80℃加热法。
早在20世纪80年代初期，对于FⅧ冻干浓制剂和凝血酶原复合物的处理，就有人用到了10~72h，60~80℃加热处理方法，但是，现在这种方法的使用已经无法满足彻底灭火HCV、HBV、HIV病毒的目的。
1.1.3γ射线辐照法γ射线主要由光子组成，来自于核转变，在放射性衰变过程中形成的子核处于不稳定状态和激发状态，在从高激发态跃迁到低激发态的过程中，就会将γ射线释放出来。
钴－60和铯－137是常用的两种γ射线放射源。
大量实验研究表明，对于大多数微生物，比如无包膜病毒、有包膜病毒以及所有的基因型物质，经过γ射线的辐照都有杀灭作用。
病毒灭活血浆若干问题探讨
未普遍推行 ， 以血浆输注带来 的安全隐患不容忽视。 所 在发达国家 ， 从全血分出的血浆的 １％ ～２％直接用于临床输注 ， ０ ０ 其余
可取 的血液成分灭活方法 ， 我国和德国 、 士等欧洲 国家 已分别 瑞 对亚 甲蓝血浆病毒灭活 的方法 、效果及安全性进行 了深入的研
究 并 已成 功 的用 于 单 袋 血 浆 病 毒 灭 活 目 是 目前 唯一 获 准 用 于 临 ，
《 中华人 民共 和国献血法》 实施 十多年来 ， 经过各方 的共 同 努力 ， 输血的安全性 已得 到显著 的提高 ， 留的输血危险 已大 幅 残 度降低 ； 但是 ， 输血安全问题 ， 特别是输血传播 Ｈ Ｖ等相关病毒 Ｉ 的问题仍受 到广泛的关注和重视 。因为输血传播病毒一旦发生 ，
我站于 ２０ ０ ７年开始推广使用 亚甲蓝（ ） ＭＢ 光照法进 行血浆 病毒灭活 ， 目前已有 １０ 万 ｍＬ的病毒灭活血浆用Ｔ ｒ床 ， １０ － ｌ 收到 ￣
良好 的 临床 效 果 。
脂素加光照血浆 已经在欧洲应用 ， 核黄素加光 照对血浆 、 红细胞
和血小板 ３种成分 中的病毒可能均有灭活作用 ，但仍处 于研 发
对 非 脂 质 包 膜 病 毒 如 Ｈ Ｖ、 Ｉ 。
限制 ； 、 ３ 人为差错 ； 、 ４ 有些 已知的可经输血传播 的病毒 尚未进 行 常规筛选检测 ；、 目前还有我们 尚不知道 的可经血液传播 的病 ５ 毒 。 目前我 国规 定的 采供血 机 构检 测病 毒 的种类 仅 为 ＨＢ Ｖ、
评估病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果
评估病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果【摘要】目的：分析病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果。
方法：选取中心血站无偿献血的血液标本60份，时间为2020年4月-2022年4月，随机分为A组和B组，各30份。
分离新鲜血浆后制备病毒灭活血浆，A组采用亚甲蓝光化学法制备，B组采用巴斯德液态湿热法制备。
比较两组血浆病毒灭活后的各项指标水平。
结果：在指标水平上，A组总蛋白（59.75±3.47）g/L、纤维蛋白原（2.57±0.46）g/L、凝血因子Ⅷ（0.86±0.33）IU/ml，分别高于B组的（50.16±2.84）g/L、（1.93±0.32）g/L、（0.68±0.16）IU/ml，P＜0.05。
结论：在病毒灭活血浆的制备过程中，采用亚甲蓝光化学法制备，对血浆成分影响更小，应用效果更为理想。
【关键词】病毒灭活血浆；制备方法；应用效果在临床抢救及治疗当中，经常需要应用输血的方法，并且对于血液需求量也比较高。
为了保证输血的安全性，减少交叉感染的可能，应重点加强血液管理措施，提升血液筛查技术，降低感染性输血风险。
不过，为了进一步提高用血安全，减少输血参与分线，需要将血浆制品进行血液筛查之后，再利用灭菌工艺将参与病原体彻底杀灭，形成合格的病毒灭活血浆，满足安全输血的要求[1]。
目前常用的病毒灭活血浆制备方法，主要由于亚甲蓝光化学法、巴斯德液态湿热法等方法，对于血浆成分可能产生不同影响。
基于此，本文选取中心血站无偿献血的血液标本60份，时间为2020年4月-2022年4月，分析了病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果。
1资料与方法1.1一般资料选取中心血站无偿献血的血液标本60份，时间为2020年4月-2022年4月，随机分为A组和B组，各30份。
所有血液标本均经初步检查合格，用于分离新鲜血浆后制备病毒灭活血浆。
1.2方法1.2.1仪器设备材料所用仪器设备和材料主要包括：凝血因子Ⅷ促凝活性检测试剂盒、总蛋白试剂盒、纤维蛋白原检测试剂盒、亚甲蓝、一次性使用病毒灭活输血器材、一次性使用血液病毒灭活剂吸附过滤器、CA-500血凝仪、PUZS-300全自动生化分析仪、ZBK-YBM-01医用血浆病毒灭活柜等。
输血护理新技术病原体灭活
输血护理新技术病原体灭活发表时间：2012-11-09T10:55:05.390Z 来源：《中外健康文摘》2012年第26期供稿作者：李霄楠王宇航姜婷董艳杰秦志晖[导读] 在血液制品的制备过程中增加病原体灭活或去除步骤，在血液及其成分保存前或输注前采取病原体灭活措施是非常必要的。
李霄楠王宇航姜婷董艳杰秦志晖（黑龙江省血液中心供血科 150000）【中图分类号】R457.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）26-0096-03【摘要】目的讨论输血护理新技术病原体灭活。
方法查阅文献资料并结合个人经验进行归纳总结。
结论输血后感染和经输血传播疾病是对输血安全的巨大威胁。
在血液制品的制备过程中增加病原体灭活或去除步骤，在血液及其成分保存前或输注前采取病原体灭活措施是非常必要的。
【关键词】输血护理新技术病原体灭活一、血液及其制品中的病原体灭活与去除的意义输血后感染和经输血传播疾病是对输血安全的巨大威胁。
自WHO推行血液安全战略以来，血液的安全性有了大幅度提高。
美国输血传播HBV、HCV、HIV的风险性已经分别降至为1/63000，1/103000，1/493000。
尤其是1999年开始实施血液的核酸扩增检测技术(nucleic acid amplification testing，NAT)，使输血的残余风险度进一步降低。
NAT检测后的残余风险度在美国为HCV约1：200000，HBV约1：350000，HIV约1：2000000，国内HIV为0/7.5万，HCV为1/7.5万。
尽管如此，血液及其制品并不是绝对安全的，国内外仍有因输用血液及其制品而传播疾病的报道。
如美国每年发生输血感染HBV 22例、HCV 136例、HIV28例左右；全球大约有5%～10%的HIV感染是由不安全的血液和血液制品引起的。
究其原因，主要有以下几个方面。
1.漏检主要由“窗口期”造成，即从病原体感染至复制、繁殖到能检测到的域值之间或从病原体入侵到机体产生可以检测出的足够量的免疫应答抗体之间的空白期。
血液制品病毒灭活及去除工艺进展_宋清爽
［Abstract］ With the development of medical science and improvement of living conditions for human, the safety of plasma derivatives have been receiving much more attention. In order to ensure the safety of plasma deriva⁃ tives, the State Food and Drug Administration issued some guidelines, demanding manufacturing process should has the ability to inactivate and remove virus. Moreover, manufacturing process must include some specific viral in⁃ activation and removal procedures. In this article we reviewed several viral inactivation and removal procedures for plasma derivatives, expecting to provide some reference for production and research. ［Key words］ virus inactivation; virus removal; blood products
1.1.1 巴氏消毒法 此方法的理论依据是通过选择 适 宜 的 温 度 及 作 用 时 间 ，使 病 毒 结 构 的 破 坏 速 率 远 大 于 蛋 白 质 结 构 的 破 坏 速 率 。 近 50 年 的 临 床 使 用 结 果 及 近 来 的 动 物 实 验 均 证 实 ，白 蛋 白 在 溶 液 状 态 下 经 60℃ 、10 h 加 热 处 理 [2]，即 巴 氏 消 毒 后 ，不 仅 能 灭 活 乙 肝 病 毒（HBV），也 能 灭 活 丙 肝 病 毒（HCV）和 人 免 疫 缺 陷 病 毒（HIV），使 白 蛋 白 成 为 在 病 毒 安 全 方 面 最 可 靠 的 一 种 血 液 制 品 。 近 来 ，巴 氏 消 毒 法 被 扩 大 应 用 于 生 产 静 脉 注 射 免 疫 球 蛋 白（intravenous immunoglobulin，IVIG）、因 子 Ⅷ（FⅧ）、因 子 Ⅸ（FⅨ）、 纤 维 蛋 白 原 等 产 品 的 处 理 。 Bridonnccu[3]等 在 低 温 乙 醇法生产 IVIG 的工艺中加入此病毒灭活工艺，即在 无 稳 定 剂 、低 盐 、酸 性 条 件 下 实 施 巴 氏 消 毒 法 ，病 毒 滴 度 下 降 5Log（lg LD50/mL）。 Simmonds[4] 等 在 对 英 国临床应用的 FⅧ、FⅨ浓缩制剂进行的输血传播病 毒（transfusion transimitted virus，TTV）检 测 中 发 现 ， 未经巴氏消毒法灭活的产品，其 TTV 检出率为 50%~ 75% ，经 巴 氏 消 毒 法 灭 活 后 的 产 品 阳 性 检 出 率 为 零 。 1.1.2 干 热 法（冻 干 制 品） 干 热 灭 活 法 ，即 冻 干 后 的 制 剂 经 加 热 处 理 、干 热 杀 灭 病 毒 的 方 法 。 常 用 的 干 热 法 有 60~80℃、10~72 h 加 热 法 及 80℃、72 h 加
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１．１ 加 热 法 １．１．１ 湿热法 巴 斯 德 液 态 湿 热 法 最 早 用 于 白 蛋 白 的生产过程中。将液态白蛋白经６０ ℃恒温处理１０ ｈ， ＨＢＶ、ＨＣＶ 和 ＨＩＶ 均可被 灭 活［１］。 巴 斯 德 法 也 应 用 于生产静脉注 射 用 的 丙 种 球 蛋 白 （ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｍｍｕ－ ｎｅｇｌｏｂｕｌｉｎ，ＩＶＩＧ），凝 血 因 子 ＦⅧ、ＦⅨ，纤 维 蛋 白 原 （ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ，ＦＩＢ）等 产 品 的 处 理。 目 前 巴 斯 德 法 主 要 应用于白蛋白和ＩＶＩＧ 的病 毒 灭 活。 该 方 法 能 灭 活 所 有脂包膜病毒和大部分非脂包膜病毒。 １．１．２ 干热法 热 灭 活 法 是 将 冻 干 后 的 制 剂 经 加 热 处理、干 热 杀 灭 病 毒 的 方 法。 Ｍａｎｎｕｃｃｉ等［２］研 究 以
【基 金 项 目 】 广 州 市 科 技 计 划 项 目 （１０Ｃ３６０９１６７１） 【作者单位】 ５１００１０ 广东广州，广州军区广 州 总 医 院 输 血 科 ［谭 美 芳 （广 州 中 医 药 大 学 在 读 硕 士 研 究 生 ）、单 桂 秋 ） 【通讯作者】 单桂秋，Ｅ－ｍａｉｌ：ｒａｂｂｉｔ＿２００７＠１２６．ｃｏｍ；Ｔｅｌ：０２０－３６６５３４４５
２ 血 液 成 分 的 病 毒 灭 活 方 法
常用 的 血 液 成 分 制 剂 包 括 血 浆、红 细 胞、血 小 板、 冷 沉 淀 等 ，及 从 人 血 浆 蛋 白 成 分 中 分 离 出 来 的 制 剂 ，包 括白蛋白、免疫球蛋白、凝 血 因 子 制 剂 （纤 维 蛋 白 原 浓 缩 剂 、冷 沉 淀 、Ⅷ 因 子 浓 缩 剂 、凝 血 酶 原 复 合 物 、纤 维 蛋 白 胶 ）。 ２．１ 血 浆 的 病 毒 灭 活 方 法
核黄素光化学法可以高效灭活血浆病原体。原理 是它以芳香平面结构插入核酸后，在紫外线 Ａ 或 可 见 光的照射下，通过电 子 转 移 使 核 苷 酸 中 鸟 嘌 呤 碱 基 形 成 共 价 加 成 化 合 物 ，介 导 核 酸 骨 架 链 的 断 裂 ，从 而 灭 活 病毒。目前该方法主要用于血小板制品的细菌和病毒 灭 活 ，美 国 将 其 应 用 于 红 细 胞 悬 液 及 血 浆 的 病 毒 灭 活 。 核黄素在发生光化学反应后的降解产物与外源性核黄 素在人体内正常代谢的产物相同，无残留生物 毒 性 。 ［５］ 核黄素即维生素 Ｂ２ 来源广泛，价格相对便宜，对人 体 无 毒 副 作 用 ，吸 收 光 谱 广 泛 ，可 以 选 择 多 种 光 源 用 于 多 种血液成分的病毒灭活等优势。 １．４ 膜 过 滤 法
光 化 学 灭 活 法 （ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ＰＣＴ） 是目前研究比较热门的病原体灭活方法之一。其灭活 病毒的原理主要是依靠光敏剂在光照下产生自由基或 单线态氧（ｓｉｎｇｌｅｔ ｏｘｙｇｅｎ，１Ｑ２）氧 化 损 伤 病 毒 的 分 子 结构，使病毒的核酸 断 裂、包 膜 破 损，从 而 使 病 毒 完 全 失去穿透、复制及 感 染 能 力。 各 种 光 敏 剂 的 作 用 特 点 不 尽 相 同 ，如 补 骨 脂 内 酯 衍 生 物 主 要 产 生 自 由 基 ，酞 菁 类光敏剂主要产生单 线 态 氧，而 酚 噻 嗪 类 光 敏 剂 亚 甲 蓝（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｕｅ，ＭＢ）可 能 同 时 涉 及 两 类 机 制。 目 前 研 究 较 多 的 光 敏 剂 有 ＭＢ、补 骨 脂 素 （ｐｓｏｒａｌｅｎ， ＰＳＯ）及 其 衍 生 物 、核 黄 素 等 。
ＰＳＯ 是一种光敏性化合物，在长波紫外线（ＵＶＡ） 照射时和病毒核酸的 胞 嘧 啶 作 用 形 成 环 状 加 合 物，阻 止核 酸 复 制、转 录，达 到 病 毒 灭 活 的 效 果。ＰＳＯ 加 ＵＶＡ 光 照 法 已 成 功 应 用 于 血 小 板 和 血 浆 的 病 毒 灭 活 ，未 发 现 对 其 功 能 和 生 物 活 性 有 明 显 不 良 影 响 。
免疫球蛋白生产工艺 中 的 低 ｐＨ（ｐＨ＝４）处 理 能
灭活脂 包 膜 病 毒。 该 法 是 ＩＶＩＧ 特 有 的 病 毒 灭 活 方 法 ，该 方 法 可 以 减 少 制 品 抗 补 体 活 性 、避 免 免 疫 球 蛋 白 （ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ，ＩｇＧ）聚 合，保 证 蛋 白 制 品 的 安 全 性。
血浆中含有丰富 的 血 浆 蛋 白、纤 维 蛋 白 原 和 全 部 的凝血因子。血浆的主要用途有用于单纯凝血因子的 补 充 、因 大 量 输 血 伴 有 出 血 倾 向 者 、肝 衰 竭 伴 获 得 性 凝 血障碍者等。在各种 血 液 成 分 中，由 于 一 些 病 毒 颗 粒 可能存在于血浆中，使 血 浆 成 为 病 毒 感 染 危 险 性 较 高 的 一 种 血 液 制 品 。 因 此 ，对 血 浆 进 行 病 毒 灭 活 处 理 ，是 进一步降低输注血浆传播病毒危险性的必要措施。
华南国防医学杂志 ２０１２年１２月２８日 第２６卷 第６期 Ｍｉｌ Ｍｅｄ Ｊ Ｓ Ｃｈｉｎ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．６，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２８，２０１２
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ＭＢ 是一种临床用于亚硝酸盐及氰化物 中 毒 后 解 毒的静脉注射用药。其光化学法病毒灭活技术原理是 与可见光协同作用产 生 单 线 态 氧，作 用 于 核 酸 链 上 的 鸟嘌呤，引起脱嘌呤和核 酸 链 的 断 裂，使 ＤＮＡ 复 制 受 阻。ＭＢ 光化学法是目前临床常用的血浆病毒 灭 活 方 法。该 方 法 可 以 灭 活 大 多 数 脂 质 包 膜 病 毒，包 括 ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ 病毒，但对 非 脂 质 包 膜 病 毒 如 Ｂ１９、 ＨＡＶ 杀灭效果不理想。
８０ ℃ 处理７２ ｈ的凝血因子冻干制剂，经３５例临床使 用没有发生 ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ 感染。 １．２ 有 机 溶 剂／去 污 剂 法
有机溶剂／去 污 剂 （Ｓ／Ｄ）法 通 过 破 坏 脂 包 膜 病 毒 的脂膜来达到去除病毒的效果。其常用的病毒灭活条 件：１ ％ 磷 酸 三 丁 酯 （ｔｒｉｂｕｔｙｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＴＮＢＰ）和 １％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００在２４ ℃ 处理４ ｈ，或用１％Ｔｗｅｅｎ－８０ 处理≥６ ｈ。 国内外的研究均证明了 Ｓ／Ｄ 法对脂包膜 病毒的灭活效果最好，但 对 非 脂 包 膜 病 毒 如 甲 肝 病 毒 （ｈａｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ，ＨＡＶ ）、细 小 病 毒Ｂ１９ 无 灭 活 作 用。Ｈｏｒｏｗｉｔｚ等 报 ［３］ 道用加热、Ｓ／Ｄ 法 对 血 浆 及 其 衍 生物进行病 毒 灭 活，其 中 Ｓ／Ｄ 法 处 理 血 浆 已 在 美 国、 西欧临床常规应用。Ｂｕｒｎｏｕｆ等 研 ［４］ 究经 Ｓ／Ｄ 法 处 理 后的血浆蛋白质量 合 格，回 收 率 高，制 备 技 术 简 单，有 利于大规模生产和临床应用。但是混合血浆处理和单 袋血浆病毒灭活比较也有不利的一面。当混合多袋血 浆 处 理 时 ，其 中 只 要 有 一 袋 病 毒 污 染 的 阳 性 血 浆 时 ，会 导致混合 血 浆 的 病 毒 污 染，严 重 威 胁 到 患 者 的 安 全。 因此 Ｓ／Ｄ 法病毒灭活血浆尚未在国内大规模应用。 １．３ 光 化 学 法
DOI:10.13730/j.1009-2595.2012.06.035
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华南国防医学杂志 ２０１２年１２月２８日 第２６卷 第６期 Ｍｉｌ Ｍｅｄ Ｊ Ｓ Ｃｈｉｎ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．６，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２８，２０１２
血液成分病毒灭活的研究进展
谭 美 芳 ，单 桂 秋
【关 键 词 】 血 液 成 分 ；光 化 学 法 ；病 毒 灭 活
Ｎａｋａｇａｍｉ等 研 ［６］ 究 发 现，２５ ℃ 时 用 ４００ＭＰａ 高 压处理血浆中的 ＨＩＶ－１病毒１０ ｍｉｎ，病毒滴度可降低 ５个数量级，而 对 一 些 血 浆 蛋 白 质 的 生 物 活 性 没 有 影 响，如 凝 血 因 子 Ⅸ 和 γ－球 蛋 白 的 回 收 率 为 １００％。 Ｂｒａｄｌｅｙ等 发 ［７］ 现超 高 压 技 术 可 以 灭 活 血 浆 和 蛋 白 制 品中的病毒。 １．６ 低 ｐＨ 孵放法
美国 食 品 药 品 监 督 管 理 局 （Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄ－ ｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＦＤＡ）已批 准 将 Ｓ／Ｄ 法 灭 活 病 毒 的 血 浆 应用于临床。Ｓ／Ｄ 法处理血浆是 将 少 于 ２５００（人）份， ＡＢＯ 血型同型的血浆混合冰冻，以保存凝血因子的活 性，再融化后与１％ＴＮＢＰ 和１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００混合，在 ３７ ℃ 孵 育 ４ ｈ 灭 活 脂 包 膜 病 毒。 经 植 物 油 萃 取 和 Ｃ１８层析柱去除血浆中的 Ｓ／Ｄ 因子，再用滤膜无菌过 滤分装冰冻保存。Ｓ／Ｄ 法灭活病毒血浆含有的凝血因 子与新鲜 冰 冻 血 浆 （ｆｒｅｓｈ ｆｒｏｚｅｎ ｐｌａｓｍａ，ＦＦＰ）相 似， 其中凝 血 因 子 Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅺ 不 低 于０．７ ＩＵ／ｍｌ。 王 剑 峰等 研 ［８］ 究 表 明，Ｓ／Ｄ 法 对 两 种 核 酸 类 型 的 脂 包 膜 病 毒水疱性口炎 病 毒 （ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＶＳＶ） 和伪狂犬病 毒 （ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）有 良 好 的 灭 活效果。莫琴等 研 ［９］ 究巴斯德法用于原料血浆病 毒 灭 活 的 可 行 性 和 灭 活 效 果 ，结 果 表 明 ，血 浆 在 加 有 保 护 剂 的条件下，６０ ℃恒温３ ｈ即可灭活 Ｓｉｎｄｂｉｓ和 ＶＳＶ 病 毒，６０ ℃恒温１０ ｈ可有效灭活血浆中的病毒。
纳米膜过滤可以有效地去除一些表面直径较小的 病毒如 ＨＡＶ 和细小病毒 Ｂ１９等。它利用蛋白质和病 毒的大小差异及滤膜 对 病 毒 的 吸 附 来 分 离 病 毒，可 以 有效去除血液中的朊 病 毒，进 行 高 浓 度 的 蛋 白 病 毒 分 离，适用于所有的 血 浆 制 品。 研 究 发 现 纳 米 膜 过 滤 并 不能完 全 清 除 免 疫 球 蛋 白 中 的 ＨＣＶ 病 毒，纳 米 膜 有 良 好 的 病 毒 去 除 能 力 ，但 不 能 作 为 单 独 的 病 毒 灭 活／去 除步骤使用。为了确 保 血 液 制 品 的 安 全 性，生 产 工 艺 中通常采用多种不同机制的方法联用，如结合 Ｓ／Ｄ、低 ｐＨ 法、巴氏法等技术使用。 １．５ 超 高 压 技 术