[小学]南京师范大学生命科学学院2012年《细胞工程》期末重点总结
细胞工程知识点总结
细胞工程知识点总结细胞工程，是一门涉及生命科学和工程学的交叉学科，它关注的是利用细胞和分子技术来实现生物医学和生物工程的应用。
细胞工程的发展不仅对医学诊疗和疾病治疗领域有着重要的意义，也对生物工程的发展起到了推动作用。
在这篇文章中，我们将对细胞工程的一些重要知识点进行总结。
1. 细胞培养技术细胞培养技术是细胞工程的基础，它是指将细胞从体内或体外分离出来，在适当的环境条件下进行培养、增殖或分化。
细胞培养技术涉及到细胞培养基的配制、细胞传代方法、培养条件的调控等。
对于细胞工程的实验研究以及细胞药物的生产和培养，细胞培养技术都起到了至关重要的作用。
2. 细胞凋亡与细胞增殖细胞凋亡和细胞增殖是细胞工程中两个重要的生物学过程。
细胞凋亡是指受到内部或外部刺激后，细胞通过一系列的生化反应主动死亡。
细胞凋亡在细胞工程中有着广泛的应用，例如用于肿瘤治疗和组织工程的构建。
而细胞增殖则是指细胞的数量增加，通过细胞的分裂和增生来实现。
细胞增殖在组织修复和再生医学方面具有重要的意义。
3. 基因工程技术基因工程技术是一种将外源基因导入目标细胞中的方法，以实现特定功能或表达特定蛋白质的技术。
基因工程技术在细胞工程中被广泛应用，例如用于基因治疗和基因表达的研究。
基因工程技术的主要方法有转染法、电穿孔法、病毒介导转导等。
4. 细胞信号传导与细胞外基质细胞信号传导是细胞与细胞之间或细胞与环境之间进行信息传递的过程。
细胞信号传导是细胞工程领域研究的重点之一，它对细胞内信号传递路径的研究以及细胞外基质的调控具有重要意义。
细胞外基质是细胞外环境中的一种复杂的生物大分子结构，它不仅对身体组织的结构和功能有着重要的影响，同时也对细胞外基质中的信号传导起到了调控作用。
5. 组织工程与再生医学组织工程是一门将细胞、材料科学和工程学相结合的学科，它旨在通过构建人工组织和器官来替代或修复受损的组织和器官。
组织工程在细胞工程领域具有重要的地位，它涉及到细胞培养、支架材料的设计与构建、组织的生物学特性等。
细胞工程重点总结
细胞工程：按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。
一、无菌操作1、无菌操作时注意事项：1、点燃酒精灯，所有操作均在火焰近处并经过烧灼进行；2、冷却后才能使用；3、操作时，打开试管盖，进行烧灼灭菌，但是时间要短。
在火焰上烧瓶口。
保证容器倾斜。
4、进行操作时动作要准确敏捷，但是不宜太快，防止空气流动，增加污染的机会；5、超净工作台上的器具和用品要摆放合理。
6、操作时器具不能触及瓶口以防止污染；7、不要说话；8、接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中9、整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速10、防止操作带来的污染接种过程中尽可能达到悬空要求11、接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口12、瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口;13、接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生。
14、种子和分生组织培养时通常将其贴放在培养基表面，，以保证供氧充足。
15、接种植株茎段时注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中.16.污染材料应及时清除，高压灭菌。
2、无菌室 1.要求：密封、防尘、防菌，2.结构：更衣间、缓冲间、操作间，3.空气消毒：紫外灯或无臭氧紫外线消毒器， 4.操作：在超净工作台上.（超净工作台，侧流式：垂直式，气流由左侧或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧。
有挡板。
外流式：水平式，净化的空气面向操作者流动，多为开放式，没有防护挡板，易污染。
）二、动物细胞工程1.细胞贴壁率：细胞贴壁率又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力和部分底物材料的相容性。
2、细胞周期：也称细胞分裂周期，是指一个细胞经生长、分裂增殖成两个细胞所经历的全过程。
3、细胞系：由原代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群。
4、细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
细胞工程重点
细胞工程名词解释：细胞工程：是应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
植物组织培养：将植物组织在适当培养条件下诱导长成完整植株的技术。
试管植物：植物组织培养再生的植物。
器官发生：离体培养的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
细胞全能性：在多细胞生物每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，具有发育成完整个体的潜力。
细胞脱分化：已有特定结构和功能的植物组织的细胞在一定条件下被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程。
愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团。
外植体：植物体上切取下来进行培养的部分组织或器官。
体细胞胚（胚状体）：离体培养条件下，没有受精过程而形成的胚胎类似物。
胚性细胞：细胞悬浮培养中，聚集成簇、成团的体积小而胞质致密细胞，具有成胚能力。
原生质体：去除细胞壁后裸露的球形细胞。
大量元素：植物需要量或含量较大的元素。
如氮、硫、磷、钾、钙、镁。
钾对酶有活化作用；钙在植物信号传导中有重要作用；镁是叶绿素的组成成分。
微量元素：植物正常生长发育极少需要的元素。
铁、锰、铜、锌、氯、硼、钼。
这些元素对于蛋白或酶的生物活性十分重要。
肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素利用等方面具有促进作用，并能刺激细胞快速生长。
腺嘌呤是合成细胞分裂素的前体物质之一。
添加腺嘌呤能促进细胞合成分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成。
植物激素包括：生长素、细胞分裂素、赤霉素、乙烯等。
生长素：是一类含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内涵激素。
细胞分裂素：一类促进细胞分裂、诱导芽的形成，并促进其生长的植物激素。
分裂素大多为嘌呤族衍生物，其生理作用主要是引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长。
常使用的分裂素有6-苄氨基嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、玉米素。
《细胞工程》全部考点
《细胞工程》教学大纲一、课程在教学中的地位、作用细胞工程是现代生物技术的重要组成部分，同时也是现代生物学研究的重要技术工具。
要求学生通过本课程的学习掌握生物组织、器官及其细胞离体培养的原理与技术，为从事生物学领域的相关研究及其与细胞工程有关的生物技术产业奠定良好的理论和技术基础。
理论知识方面，重点掌握本学科的基本原理和基本技术。
即：细胞全能性学说在细胞工程中的指导作用；培养条件下的细胞分化和器官发生的调控；离体培养条件下的遗传与变异特点。
掌握不同组织、器官的培养特点和控制方法。
了解细胞工程的各类技术在现代生物学与生物技术领域的应用途径与发展潜力。
实践技能方面，重点掌握细胞工程的基本操作技术—无菌操作；掌握外植体选择、愈伤组织和胚状体诱导、器官发生调控等基本技术；了解细胞大批量培养方法，原生质体分离与体细胞杂交技术。
二、课程内容、基本要求第1章绪论基本要求：全面了解细胞工程与现代生物技术的关系；了解细胞工程的发展与相关学科的联系；了解细胞工程在现代世界经济中的潜力。
1.1 细胞工程定义1.2 细胞工程基本技术1.3 细胞工程发展简史1.4 细胞工程的主要应用第2章细胞工程中常用设备基本要求：掌握细胞工程中常用的部分仪器设备及常用器具，掌握常用器材的清洗方法。
2.1 实验室常用仪器设备2.2 常用器具2.3 常用器材的清洗第3章无菌技术基本要求：初步掌握细胞工程实验技术中的灭菌方法以及无菌操作的原理与操作方法。
掌握实验室常见污染原因及预防措施。
3.1 常用灭菌方法及原理3.2 无菌操作注意事项3.3 实验室生物安全第4章植物细胞工程的基本原理和技术基础基本要求：了解和掌握植物细胞培养的重要概念，并掌握植物组织培养培养基配制及所需环境条件，掌握组织培养中外植体的选择、消毒和接种培养方法。
4.1 植物细胞工程基本原理4.2 植物细胞培养的营养和环境条件4.3 外植体的选择及消毒4.4 外植体的切取和培养第5章植物离体快速繁殖和脱病毒技术基本要求：了解和掌握植物离体快速繁殖的一般技术，掌握植物离体脱毒的方法及脱病毒植株的鉴定方法。
细胞工程总复习
细胞工程—期末总复习第一章：细胞工程简介主要问题：1. 细胞工程的定义与特点2. 细胞工程的应用本章小结：1. 什么是细胞工程2. 细胞工程包含哪几个主要的研究内容？（参照细胞工程的应用）细胞工程是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新品种的一门综合性科学技术。
研究对象：动植物细胞（原生质体），也包括细胞器、染色体、细胞核、胚胎。
细胞工程特点：综合性（生物、材料、机械等多学科交叉）、应用性（更侧重于产品和技术）、前沿性（现代生物技术和生命科学技术的热点前沿）、争议性应用：1．动植物人工繁殖技术植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物2. 新品种培育通过细胞工程技术对现有生物的遗传性状进行改良和培育新型物种。
包括细胞水平（原生质体诱变、细胞融合）、细胞器水平上的细胞重组、染色体水平（多倍体、单倍体育种）3. 生物工程制品生产技术利用动植物细胞、组织培养或者转基因动植物反应器生产生物制品（食品、药物、化工原料、生物能源）。
包括以杂交瘤细胞培养大量制备单克隆抗体、动物细胞培养生产疫苗、转基因动植物生物反应器4. 细胞疗法与组织修复利用培养的细胞或者离体再造的组织修复受损细胞、组织或器官的技术第二章植物人工繁殖主要内容：1. 组织培养再生植物2. 人工种子本节重要问题：1. 激素在细胞分化中的调节作用2. 植物经组织培养的再生途径细胞全能性：分化细胞保留全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜力。
细胞分化；细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间和空间上的分化。
脱分化（去分化）：分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转化成胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
愈伤组织：脱分化后的植物细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散细胞团。
大学《细胞工程》期末考试复习重点、考点总结
细胞工程期末复习（必考）细胞工程：研究真核细胞的核—质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。
组织工程：研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。
染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。
细胞连接：使细胞间的联系结构。
细胞表面的特化结构或特化区域，是细胞间建立长期组织上联系的结构基础。
涉及细胞外基质蛋白、跨膜蛋白、胞质溶胶蛋白、细胞骨架蛋白等。
细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体成长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。
包括时间和空间上的分化。
脱分化：又称去分化，指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。
即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
再分化：是指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。
细胞培养：指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌适当的条件使其生长繁殖的技术。
人工种子：又称合成种子或体细胞种子，指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。
植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
试管受精：指在无菌条件下离体培养未受精子房或胚珠和花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。
细胞核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。
体外受精：指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
胚胎移植:指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵但为配种的受体母畜输卵管或子宫的技术。
人工受精：指将采集的精子注入人发情处理的母体内完成受精过程。
试管婴儿：指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子宫内发育出生的婴儿，也就是采用体外受惊联合胚胎移植技术培育的婴儿。
细胞工程知识点总结
《细胞工程》知识点总结一、细胞工程(Cell Engineering）:在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良，使其生产出人类所需要的产品。
包括：细胞培养、细胞融合、细胞器移植、核质移植、染色体移植、转基因等产品：生物的组织、器官、个体；抗体、多肽药物、蛋白质、酶；天然药物、色素、香精；等二、生物工程包括:发酵工程、酶工程、细胞工程、基因工程、蛋白质工程.三、1996年Dolly羊的克隆是通过核移植技术，最后在体内生长、分化、发育而成的。
四、植物组织培养：在人工培养基上无菌培养整株植物或植物的器官、组织、细胞或原生质体。
又称为无菌培养（aseptic culture）、离体培养(in vitro culture）。
五、植物组织培养的类型:1、植株培养(Plant Culture）：在容器(玻璃瓶、透明塑料瓶等）中无菌培养完整的植株。
植株来源：由种子无菌萌发而来；通过植物器官、组织、细胞再生而来。
在快速繁殖中，后期的成苗和壮苗阶段属于植株培养。
（一般时间较短）2、胚培养（Embryo Culture）：无菌培养植物的成熟胚或未成熟胚，使其形成正常的植株.目的:错误!促进胚的提早萌发，缩短育苗时间；错误!克服远源杂种胚的夭折，以获得新的育种材料；错误!在科学研究中,用胚培养所得到的幼苗作为其它试验的材料。
3、器官培养（Organ Culture）：无菌培养植物的根、茎、叶、芽、花、果等器官,使其增殖或形成其它的组织或器官等。
4、组织培养(Tissue Culture):指无菌培养植物各种组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、皮层、薄壁组织、胚乳等），或由外植体分化形成的愈伤组织（callus）,使其增殖或者分化。
注:Callus（愈伤组织）:具有旺盛分裂能力,但没有组织和器官分化的细胞群。
5、花药与花粉培养：无菌培养植物的花药（带花粉）或花粉,形成单倍体植株。
补充：有效的育种辅助手段：单倍体植株获得以后，通过染色体加倍，即得到可以稳定遗传的纯和二倍体，缩短植物育种年限。
细胞工程重点归纳
细胞工程重点归纳植物部分归纳一、细胞全能性1.定义：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长，发育成所需要的全部信息，细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。
2.分类：根据动物细胞全能性大小，可分为全能性细胞（如动物早期胚胎细胞），多能性（如原肠胚细胞），专能性（如造血干细胞）；根据植物细胞表达全能性大小排列是：受精卵、生殖细胞、体细胞；全能性的物质基础是细胞内含有本物种全套遗传物质。
一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。
这是植物组织培养的理论基础。
二、.培养基：成分、大量、微量、铁、Vc等的作用1.植物组织培养是指在含有营养物质及植物生长物质的培养液中，培养离体植物组织（器官、组织、原生质体或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术。
2.成分：无机盐：大量元素（蛋白质、氨基酸、核酸及酶重要组成）：N、S、P、K（酶活化）、Ca（细胞壁组成）、Mg（叶绿素组成）；微量元素：Fe、Mn、Cu、Zn、cl、B、Mo.（参与生物调节）有机物：糖(碳源；维持渗透压)、氨基酸、维生素（参与酶合成及蛋白质和脂肪代谢）、肌醇（刺激细胞生长；促进糖转换、维生素利用）、腺嘌呤（促进合成分裂素）等调节物质：生长激素：刺激细胞分裂和诱导根的分化；细胞分裂素：引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长；赤霉素：能促进细胞生长，与生长素一起诱导细胞分化其他添加物：活性炭（吸附有害物质）、琼脂（固定）、抗生素（抑制污染）、酵母抽提液或麦芽抽提液（生长调节剂）、柠檬酸等3.Fe是植物制造叶绿素不可缺少的催化剂。
4.Vc是维生素类化合物在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多项代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。
5.培养基的配置程序母液的配制和保存为了减少工作量，一般将常用的药品配成所需浓度的10～100倍，在配制大量元素母液时一定要注意在混合各种盐时产生沉淀。
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[ 小学] 南京师范大学生命科学学院2012 年《细胞工程》期末重点总结南京师范大学生命科学学院细胞工程期末重点一( 名词解释发育阻滞:体外受精的早期胚胎在体外发育过程中，往往会停滞在某一阶段不再发育，此现象称为发育阻滞。
胚胎移植:也称受精卵移植、借腹怀胎，是指将良种母畜配种后，从其生殖道内取出受精卵后早期胚胎，移植到同种的、生理状态相同的母畜体内，使之继续发育称为新个体的技术。
组织工程:指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。
人- 鼠嵌合抗体:就是用人源性抗体的一部分代替鼠源性抗体的一部分，使之保留对抗原的特异性，又具备与补体和细胞结合的功能，并减少异源性蛋白的抗原性。
细胞融合:在离体条件下，用人工方法将不同基因型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程。
ES细胞：即胚胎干细胞，将细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增值传代，同时还保留其全能性的细胞。
乳腺生物反应器：利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子元件构建转基因动物，指导外源基因在乳腺中表达，并从转基因动物的乳液中获得重组蛋白。
细胞全能性：指细胞分裂分化后，仍具有形成完整有机体的潜能或特性。
Ips（诱导性多能干细胞）:利用病毒载体将四个转录因子（Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。
胚胎分割:将一枚胚胎用显微手术的方法分割为二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。
核移植:利用显微操作技术，将某一特定细胞的核转移和嵌入另一细胞中的过程。
细胞系、细胞株:细胞系是由原代培养经初步纯化。
获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞株。
二、问答题1. 如何鉴定转基因动物,1. 分子杂交Southern 印迹杂交技术是通过探针和已结合于硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上的经酶切、电泳分离的变性DNA链杂交，检测样品中是否存在目的DNA序列的方法。
该法不仅灵敏而且准确, 因而广泛用于转基因阳性鼠的筛选和鉴定。
当转入基因与内源基因组DNA有较高同源性时，仍可用此法。
，此法对样品的质量和纯度要求较高，操作烦琐, 费用也较高。
2. 斑点杂交通过直接将变性的待测DNA样品点在尼龙膜(或硝酸纤维素膜)等固体支持物上, 然后和探针杂交，从而检测样品中是否存在目的DNA序列。
根据点样方式一和样品点的形状不同可分为斑点杂交、狭缝杂交( slot blot hybridization) 、打点杂交(spot blothybridization) 。
当目的基因与内源基因组DNA无同源性时可用它,为避免假阴性, 可同时用质粒DNA (1,IOpg)作阳性对照。
该方法在分析基因组DNA时，对样品纯度要求低、快速、简便、经济、灵敏度高(能从2卩g,5卩g的基因组DNA中检出单拷贝基因),尤其对大批子代动物的粗筛颇具优越性,应作为首选方法。
但该方法易出现假阳性。
3. PCRPCR技术是DNA体外扩增技术,基本原理同体内DNA的复制一样,均需经过DNA 模板解链、引物、结合及模板指导下的链延伸三个过程，在PCR反应中是靠温度的调整和聚合酶的共同作用完成的。
若PCR体系中有一对方向相对的引物，通过反复重复变性、复性、延伸过程，则在短时内可将两引物间模板扩增至百万倍。
由于PCR所需样品少, 灵敏度高而且操作简便因而逐渐用于转基因动物外源基因整合、表达的检测。
可极大提减少人力物力的浪费。
但该尤其在大型转基因动物研究中, 用PCR 先对高转基因效率,着床前的胚胎筛选, 再将已证实携带外源基因的胚胎植入母体, 方法要求待分析的基因组DNA样品应尽可能纯化，否则会干扰本反应，降低检测的灵敏度和重复性；此外用于大批量检测时, 费用较昂贵。
4. 原位杂交染色体原位杂交是确定转基因在染色体上确切位置的重要手段,其原理是利用碱基互补的原则，以放射性同位素或非放射性同位素标记的DNA片段作探针，与染色体标本上的基因组DNA在“原位”进行杂交，经放射自显影或非放射性检测体系在显微镜下直接观察出目的DNA片段在染色体上的位置。
最早同位素标记多采用放射性较低的3H 、35S、及1251 ,它们具有定位精确的优点，但放射自显影时间长而且操作较麻烦, 随着荧光显微镜技术的发展, 尤其是计算机图像处理系统的应用, 增强了对荧光信号的分辨率, 促进了非同位素在染色体原位杂交中的应用。
2. 细胞同步化培养有哪些方法,基本作用原理分别是什么1. 选择细胞同步化1) M期细胞震碎摇落法处在有丝分裂期的细胞形状变圆，单层贴壁生长的细胞的附着性降低，摇动或拍打培养瓶很容易使这些细胞脱落。
2) 离心洗脱法细胞在进行分裂时，细胞体积呈线性增加，利用洗脱离心机可以将体积大小不同的处于不同时期的分离开来。
3) 梯度沉降法利用含血清或蔗糖的梯度溶液可以将体积不同、处于不同分裂时期的细胞分离开来2. 诱导细胞同步化1) 血清饥饿法将血清浓度降到一定限度，使细胞仅能存活而不能分裂，可以获得大量处于期G1 的细胞。
2) 异亮氨酸营养缺乏法培养基中缺乏异亮氨酸，细胞将被阻止到G1 期3) DNA合成抑制阻断法DNA合成抑制剂均能将细胞阻止在S期4)秋水仙素阻断法利用秋水仙素抑制纺锤丝的形成，可以使细胞分裂停止在有丝分裂中期3. 简述ES细胞建系的主要操作步骤1. ES 细胞的分离从着床前(孕3~5天)的胚泡中分离内细胞群(ICM) 细胞。
分离方法主要有:1) 免疫学方法2) 免疫外科学方法3) 组织培养法) 显微外科学方法42. ES 细胞的分离培养a. 饲养层的制备及分化抑制物的选择小鼠成纤维细胞无限系(STO) 小鼠原始胚胎成纤维细胞(PMEF)(常用的饲养层是由小鼠成纤维细胞无限系(STO)或小鼠原始胚胎成纤维细胞(PMEF)制备而成。
STO和PMEf细胞可以分泌成纤维细胞生长因子FGF、分化抑制因子LIF，这些因子有助于ES细胞增殖，而且能抑制细胞的凋亡和分化。
也可用绵羊、山羊的输卵管或子宫上皮、牛的颗粒细胞、子宫成纤维细胞等作为分化抑制培养基)b..早期胚胎及PGC勺培养和ES细胞的分离传代(将分离得到的早期胚胎或PGC S于饲养层或条件培养基上，在5%CO237~39?C 条件下进行培养。
传代时一般用胰酶EDTA消化，用吸管将其打散成单个细胞，然后移入新的饲养层上，培养几天后可出现新的克隆点，在其分化之前可再进行传代。
)4. 单克隆抗体和多克隆抗体的区别是什么, 应用上有何不同, 区别:单克隆抗体是由一个抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体。
多克隆抗体是由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体。
应用: 单抗特异性高，而且一旦制备成功就可以永续生产完全一致的抗体，能广泛那地用于多种应用( 比如用作诊断试剂、纯化抗，肿瘤的治疗等) ，并且完全保证抗原的一致性。
多抗在特异性上无法与单抗相比拟。
但多抗的灵敏度比较高。
5. 细胞培养过程中，支原体污染的危害及鉴定危害: 支原体污染细胞后，能抑制细胞代谢和生长，改变核酸合成，影响细胞的抗原性，引起细胞染色体改变，具有类病毒作用。
在细胞培养初期，由于支原体对细胞的繁殖影响较小而往往被忽略。
鉴定:1) 荧光技术检测支原体含有DNA能与一种荧光染料Hoechest 33258特异性结合，可根据细胞表面的荧光，来显示细胞是否被支原体污染。
2) 支原体培养法3) DNA分子杂交( 危害: 支原体污染后，因它们往往无致死细胞病毒而可与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上往往给人以“正常”的感觉，实则细胞能受到多方面的潜在影响，如引起细胞变形、影响DNA合成、抑制细胞生长等。
鉴定：相差显微镜检测法、DNA荧光处理法、电镜检测法、低张处理地衣红染色观察、免疫学方法、3H-胸腺嘧啶掺入、支原体培养法及PCF法等。
）6.克隆羊“多利”成功的意义1. 证明一个已经完全分化的动物体细胞仍然保持着胚胎细胞的全部遗传信息2. 可以按照人的意志趣改造、生产物种3. 利用克隆技术复制哺乳动物的技术障碍已经被突破，在理论上已经成为可能（解决了使核供体细胞与核受体细胞同步的方法，解决了用体细胞做核供体与转基因的问题）7. 简述Cre2/loxP 系统作用原理及应用原理:Cre重组酶能识别34bp的特异序列IoxP，介导两个loxP之间的序列发生重组，从而将两个loxP 位点之间的序列删除。
（此过程不需要任何其他辅助因子的帮助。
loxP 的位置和方向不同，Cre 重组酶介导重组形成的产物亦不同，可以导致染色体的倒位、删除和易位，实现染色体的定点操作，克服了用放射线诱导产生的突变不能定位的缺点）应用: 建立疾病动物模型来模拟人类的某些疾病，可以用来研究肿瘤抑制基因的识别和疾病的治疗诊断8. HAT选择原理正常及普通癌细胞不但具有利用培养液中的谷氨酰胺和尿核苷单磷酸合成DNA 的能力，而且当这条主要途径被氨基喋呤(A) 阻断时，还具有利用培养液中现成的次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶脱氧核苷(T)在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT的作用下，借此应急通路来合成DNA勺能力。
9. 简述脐带血移植的优缺点优点:1. 纯净: 较少受到放射线、病毒、药物污染2. 再生力强: 干细胞生命力、分化能力强3. 及时性: 许多疾病治疗时效相当重要，解冻马上可用4. 来源容易: 脐带血容易取得，不伤婴儿及母体5. 低排斥性: 移植物抗宿主疾病程度较轻6. 组织相容性大:HLA相容之要求比骨髓、外周血干细胞低缺点:1. 一单位脐血所含勺干细胞数目不足，对一位成人体重而言，有些人是不够用勺2. 植入后恢复时间长，感染风险高，隔离住院期间长3. HLA相容性要求虽不高，但慢性移植物抗宿主疾病仍会发生。
虽急性病减少很多，但是免疫耐受性仍要克服。
4. 一般移植以非亲属间勺移植为主流，然而受限于脐带血库勺成立相当昂贵，HLA相容性也要求到DNA水平。
手足间的移植靠机运，而自体移植的几率更小，目前世界上尚无足够勺脐带血自体移植之资料或经验可供参考。
10. 细胞培养过程中，常用的消化液有哪些, 培养所需的动物血清作用是什么, 细胞消化液:1）胰蛋白酶溶液2） EDTA-Na 溶液）胶原酶溶液34）其他:链霉蛋白酶，骨胶原酶，透明质酸酶动物血清作用:1）提供基本营养物质2）提供贴壁和扩展因子3）提供激素和各种生长因子4）提供结合蛋白5）对培养基中的细胞提供某些保护作用11. 简述单克隆抗体的制备过程及其主要原理制备过程:1. 致敏淋巴细胞的准备2. 骨髓瘤细胞的准备3. 饲养层细胞的准备4. 细胞融合5. 选择性培养6. 特异性抗体的检测7. 杂交瘤细胞的克隆化8. 杂交瘤细胞的冻存和复苏9. 单克隆抗体的大量制备10. 单克隆抗体的纯化主要原理: 要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆胞，但这B淋巴细种B淋巴细胞不能在体外生长。