流式细胞仪操作规范流程-SOP
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式日常操作SOP
流式日常操作SOP标本处理1（kappa/lambda ckappa/clambda cIgM）育：加入2mlPBS，37°孵育5min，离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。
重复两次。
标本处理2（CD61 CD41a CD42b CD9 CD36）洗：加入2mlPBS，离心1050rpm （1300-1500）5min，弃上清，混匀细胞，重复两次。
细胞计数1 取2%冰醋酸190ul冰醋酸和10ul血在塑料管中混匀。
取10ul在计数板上。
2 计数时数上不数下，数左不数右。
3 加血量=1000*5/细胞计数（平时最大加160ul血）。
胞膜表面标记操作1 加样本2 加入3-5ul不同散射光谱荧光素标记的抗体，加PBS 0.5ml,充分混匀，置室温避光15min。
3 充分混匀细胞。
每管细胞中加入溶血素（1溶血素：9注射用水）2ml，（适量加，若加入后比较红则多加点，若液体比较清凉则少加点）置室温，避光10min。
4 离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。
5 加入PBS 2ml ，离心1050rpm （1300-1500）5min ，弃上清，加0.5ml PBS后混匀，上机检测。
（如不太干净则过滤一下后再加3-5滴PBS以后上机）。
胞浆标记操作：BD破膜剂（AB液）（适用：KI-67 CyclinD1 TdT MPO c CD3 bcl-2 ZAP-70 c CD68 c IgM）1 按上述方法加膜标记抗体，孵育15min。
2 加100ul破膜剂A，室温避光孵育5min。
3充分混匀细胞，每管细胞中加入1*溶血素2ml，置室温，避光10min，离心1050（1300-1500）rpm，弃上清。
混匀细胞。
4 加入50ul破膜剂B，胞浆抗体，室温避光孵育15min。
5 充分混匀细胞，加2ml PBS 混匀，离心1050rpm（1300-1500）5min，弃上清，加0.5mlPBS 后混匀，待上机。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑 , 等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7.分析样品时，先用 FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测， EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪操作规范流程-SOP
流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数2：活化淋巴细胞亚群、记忆T 及纯真T 的检测3：HLA-B27 测定4：CD55／CD59 测定5：干细胞检测和绝对计数6：白血病免疫分型测定7：淋巴细胞T 细胞亚群细胞内因子IFN- γ /IL-4 测定8：细胞周期分析9：活化血小板检测10：血小板抗体测定11：红细胞抗体测定12：粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定（流式细胞仪）医院检验科操作规程文件号：200 年月日起实施第1 版（共3 页）本规程每2 年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定试剂品牌剂型 规格 贮存贝克曼库尔特成分1：单克隆抗体液体2—8℃(CD45/4/8/3 No.6607013 CD45/56/19/3No.6607073CD4/8/3 No.IM1650同型对照IgG1/IgG1/IgG1 No.IM1672CD3/19 No.IM1293CD3/16+56 No.IM2076 CD19-PC5No.IM2643Flow-Count 荧光微球No.7547053)2：全血溶血试剂 (Q-Prep) 液体 (No.7546946)A ：甲酸液体 70ML 室温B ：碳酸钠等液体 32ML 室温C ：多聚甲醛液体14ML室温(Optilyse C No.IM1401) 液体室温3：鞘液 (No.8546859) 液体 20L室温4：清洗液 (No.8546930)液体5L室温5：荧光微球 (No.6605359) 液体10ML2-8 ℃(Flow-Check)仪器BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra样本制备 ：参考值(百分数(绝对值) )CD3+ 60.8-75.4%(1141-1880) CD4+ 29.4-45.8%(478-1072) CD8+ 18.2-32.8%(393-742) NK 9.5-23.5% (175-567)Th/Ts 1.05-2.03周血 NK 细胞增加。
流式细胞仪SOP
一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)两个厂家生产。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER 公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL,BD公司最新产品为FACS Vantage 和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪使用规程
流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。
2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。
3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。
如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。
4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。
5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。
5.1.1.2 打开流式细胞仪。
5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
5.1.1.4 打开电脑。
5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。
5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。
5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。
5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。
5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。
5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。
5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。
5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。
流式细胞仪操作规程
流式仪操作规程
1. 首次操作时务必在负责人的指导下进行。
2. 操作前需检查所有瓶中的液体，鞘液桶补满超纯水（2L），废液桶倒空，清洗液和消毒液不是空的。
3. 清洗液和消毒液配置方法：清洗液为1% BD FACS Cleaning solution(原液为10%，即稀释十倍使用)，消毒液为BD detergent solution concentrate。
4. 开机前，确保样品支架上放置的EP管内至少装500uL ddH2O。
5. 仪器启动期间，软件界面上仪器当前状态会显示黄色的灯，该过程中仪器会用鞘液冲洗液流管路，持续大约13分钟，直到显示绿灯表示仪器和软件连接完成。
6. 根据实验设计选择软件选项，进行上样。
7. 上样完毕后，用SIP程序清洗进样针，根据提示先上2ml 1% FACS Clean，再上2ml ddH2O。
8. 保证清洗液和消毒液的量，在进样针上放2ml ddH2O，轻触（不能超过3秒）仪器上电源键，仪器自动运行13min cleaning the fluidics程序后自动关机。
9. 清理桌面，写好仪器使用记录。
10.将房间卫生整顿好，垃圾带出实验室，负责人检查后方可离开。
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流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
4色
3色
点击
（命名，点击save）2.画图
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count的浓度
选中cell/ul即可
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
点击
点击
键入文件名，点击Save 2.画图
结果
1.positive (+)
X-Mean=17.1 2.negative(-)
X-Mean=1.2 X-Mean=5.8
CD55/CD59测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双色直接免疫荧光法。
近年的研究表明，红细胞和白细胞膜上CD55和CD59分子的表达量和缺乏表达细胞的数量对PNH诊断和鉴别有重要意义。
血细胞(红细胞和白细胞)通过膜上的抗原分子与荧光素标记的CD55或CD59的多克隆抗体结合。
用流式细胞仪检测CD55或CD59表达阳性细胞百分数。
临床意义
用于AA和PNH的诊断和分型诊断。
PNH时CD55和CD59明显减低和缺如。
方案（Protocol）(同HLA-B27)
结果
1.RBC: normal
2.RBC: abnormal
3.WBC
干细胞检测和绝对计数
方案（Protocol）
同淋巴细胞亚群检测结果（Result）
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测。