气管暴露注射法制备大鼠矽肺模型

［３］ 周秉文．腰背痛［ Ｍ］ ．北京：人民卫生出版社，１９９１ ［４］ 李春梅，宦 怡，赵 海 涛， 等．正 常 腰 骶 部 脊 神 经 根 的 解 剖 及 ＭＲ
ＰＲＯＳＥＴ 成像表现［ Ｊ］ ．实用放射学杂志，２００７，２３（１２） ：１６８８ ［５］ 陈伯华，夏 玉 军，周 秉 文，等．腰 骶 神 经 节 的 应 用 解 剖 及 临 床 意 义
大鼠气管软骨间隙，并使针头向上挑起，缓慢注射二氧化硅悬浊 液。 注射完成后则需将颈部肌肉马上复位，可进行缝合，也可不
⑤肌肉复位及缝合。 将大鼠颈部肌肉复位，并进行缝合。 缝合 必缝合，并摇晃大鼠、捏鼻，已达到使二氧化硅悬浊液进入肺部
后放入笼内待麻醉苏醒。
的目的。
≤ｑ蝌～晶嘲牡驴号善惭２．３ 普通饲养 苏醒后的大鼠只需饮用自来水，普通饲料饲 养。 ２．４ 取肺观察 ２１ 天后，将各组大鼠颈部脱臼处死， 然后分离 气管于喉头下 １．５ｃｍ 切断主支气管，向下剥离，取出全肺，用生 理盐水冲洗 ２ 遍，取出，在干净托盘内迅速将肺分为两部分，一 部分马上进行冷冻处理保存，另一部分马上进行切片 ＨＥ 染色 观察，观察大鼠肺部的纤维化程度。 ３ 结果 肉眼观察到注射 ＳｉＯ２ 组大鼠双肺体积增大，可见小片状凹 凸不平的苍白 灶， 肺 部 有 明 显 的 纤 维 化 现 象， 与 对 照 组 相 比 随 ＳｉＯ２ 注射浓度和剂量变化有明显差别。 ＨＥ 染色显微镜下观察 不同浓度、注射剂量 ＳｉＯ２ 大鼠肺部纤维化的程度，同对照组相 比，在注射 ５０ｍｇ ／ｍＬ ＳｉＯ２ 悬浊液 １ｍＬ 时，大鼠肺部纤维化最明 显，其余浓度和注射剂量下大鼠均发生了死亡或是矽肺模型纤 维化不明显。 ＨＥ 染色可见各组大鼠肺组织水肿，肺泡隔增宽， 炎性细胞浸润，以巨噬细胞为主，部分肺泡断裂、融合、闭塞，肺 泡结构破坏明显，肺组织局部可见大片的团块状炎症浸润和纤 维化灶，成纤维细胞大量增生，间质胶原纤维增生呈带状，细支 气管腔内可见分泌物，以 Ｂ２ 组最明显。 而对照组大鼠肺呈粉红 色，表面光滑，ＨＥ 染色也无任何异常，见图 １，图 ２。 最终各组的 制模效果见表 １。
河北联合大学学报（ 医学版） ２０１３ 年 ９ 月第 １５ 卷第 ５ 期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｉｂｅｉ Ｕｎｉｔｅｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）２０１３ Ｓｅｐｔ，１５（５）
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央管型占 ２．５％；腰 ２ 神经节位置属于椎间孔型的占 ８７．５％，侧 隐窝型占 ８．３％，中央管型占 ４．２％；腰 ３ 神经节位置属于椎间 孔型的占 １００％；腰 ４ 神经节位置属于椎间孔型的占 ９２％，侧隐 窝型占 ８．３％；腰 ５ 神经节位置属于椎间孔型的占 ６６．７％，侧隐 窝型占 ３３．３％。 总体上来说椎间孔型占大部分，从 Ｌ３ ～Ｌ５ 椎间 孔型逐渐减少，侧隐窝型逐渐增加。 左侧与右侧基本上没有差 异。 ３ 讨论 ３．１ 神经节的形态 脊神经硬膜外隙段近椎间孔处有膨大为 腰骶脊神经节。 本研究对 １２ 例 ２４ 侧的神经节形态进行观察， 其中中央直径由 Ｌ１ 的（４．６１ ±０．９４） ｍｍ （ 左）、（４．６５ ±０．５４） ｍｍ （右）增加到 Ｌ５ 的（６．２７ ±１．３９） ｍｍ （ 左）、（６．３０ ±０．９８） ｍｍ （右）；长度由 Ｌ１ 的（７．５６ ±０．９１） ｍｍ （ 左）、（８．０３ ±１．１３） ｍｍ （右）增加至 Ｌ５ 的（１３．３２ ±２．９２）ｍｍ （ 左）、（１３．３０ ±２．６１） ｍｍ （右），其长度、直径自上而下逐渐增大，左右侧基本情况一 致，与夏玉军［１］ 等的结果相似。 本实验显示，神经节的形状、大 小与腰椎水平有关，神经节近端到硬脊膜“ 腋部” 的距离由 Ｌ１ ～ Ｌ５ 逐渐增大，与 Ｍａｉｋｓ Ｃｏｈｅｎ ［２］ 等人的结果相近。 腰神经节在神经根走行中是最粗大的部分，因而也是最容 易受到压迫的 部 位， 从 其 所 在 位 置 来 看， 侧 隐 窝 型 最 容 易 受 压 迫，由于侧隐窝型的神经节在 Ｌ５ 最多，而且 Ｌ５ 的神经节又是最 粗大者，所以是最容易受到压迫的部位，这与临床病例的症状表 现一致［３］ 。 另外，由于下腰部神经节较大，容易受到压迫，在椎 管内手术时应该注意确定准确受压部位，同时鉴别神经节和肿 瘤，如神经鞘瘤、神经纤维瘤、神经节细胞瘤及脊膜瘤等，切勿把 神经节当做肿瘤活检或切除。 ３．２ 神经节的位置 由于自 Ｌ１ ～Ｌ５ 神经根与硬膜囊之间的夹 角越来越小，尽管自神经根的发出点至相应神经节近端的距离 逐渐增加，但膨大的神经节仍有逐渐向椎管内移动的趋势。 因 此，以椎弓根内缘上、下端的连线为标志，根据膨大的神经节近
端位置，将其分为 ３ 型：①椎间孔型：神经节完全位于椎弓根内 缘下端连线以外；②侧隐窝型：神经节膨大的近端位于椎弓根内 缘下端的连线以内、上端的连线以外；③中央管型：神经节膨大 的近端位于椎弓根内缘上端的连线以内，突向中央椎管。 本组 标本中，Ｌ３ 及部分的 Ｌ１ 、Ｌ２ 、Ｌ４ 、Ｌ５ 属于椎间孔型，占绝大多数， 在临床上不易产生相关症状；而侧隐窝型神经节，在老年人因骨 质增生及黄韧带肥厚发生退变时，腰骶神经后根神经节更易受 到压迫而产生症状［４］ ，本组标本中部分 Ｌ２ 、Ｌ４ 、Ｌ５ 属于此型；中 央管型的神经节，其膨大的中央部恰好位于侧隐窝内，前为向后 凸出的椎体上缘及上位节段的椎间盘，后为上关节突及黄韧带 的起始部，前后间隙小，易受压迫而产生相应的临床症状［１］ ，本 组标本中部分 Ｌ１ 、Ｌ２ 属于此型。 由于神经节所处的位置不同，在某些病变情况下容易受到 压迫，如关节突增生肥大、过度骑跨、关节囊增厚骨化、黄韧带肥 厚、钙化等退行性改变以及椎体后外侧缘骨赘伴椎间盘突出，可 发生腰神经节受压迫而引起腰腿痛，在临床上容易误诊为“ 坐骨 神经痛”、“神经根炎”、“ 椎管内椎间盘突出” 及“ 腰椎管狭窄 症” ［５］ 。 因此，对于医学生来说了解腰神经节的形态、结构、位置 及毗邻等，对指导临床实践具有重要意义。 参考文献
矽肺是一种严重危害人类身体健康的职业病，国内外许多 研究者都致力于矽肺纤维化机理的研究［１ ～４］ 。 其研究方法大多 利用动物模型 来 模 拟 人 肺 纤 维 化 的 进 程， 以 探 究 其 发 生 机 理。 动物模型的成 功 建 立 是 探 讨 肺 纤 维 化 发 生 发 展 机 理 的 关 键 步 骤。 目前利用大鼠进行矽肺模型建立的方法有很多，如伯莱霉 素气 管 注 射 法［５，６］ 、 伯 莱 霉 素 雾 化 吸 入 法［７］ 、 二 氧 化 硅 气 雾 法［８］ 、非暴露法［９］ 等。 笔者在本次实验中采用气管暴露法，旨在 探究此方法在实行时的合理操作。 经过对不同二氧化硅浓度，
［ Ｊ］ ．中华骨科杂志，１９９４，１４（２） ：２１３ （２０１３ －０４ －０８ 收稿） （ 王一伊 编辑）
气管暴露注射法制备大鼠矽肺模型
程 燚 方烨红 邓博文 陈 静倡
（ 河北联合大学生命科学学院 河北唐山 ０６３０００ ）
［ 关键词］ 矽肺 矽肺模型 暴露式 二氧化硅 ［ 中图分类号］ Ｒ ５６ ［ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号］ ２０９５ －２６９４ （２０１３）０５ －６５７ －０２
１ ．５
处
揣
处
２．２ 手术处理 ①称重。 将大鼠放在电子天平上称重，以便确 注：“ ＋” 表示 矽 肺 模 型 的 效 果，“ ＋” 越 多 表 示 矽 肺 模 型 效 果 越 好
定麻醉用量。 ②麻醉。 一人双手带橡胶手套，抓住大鼠，另一人 （ 综合大鼠病死率与肺组织纤维化程度）
用注射器吸取 ０．４ ％的戊巴比妥钠 ２．５ ～３．０ ｍＬ 腹腔注射，观 ４ 注意事项
待到 ２１ 天后，处死大鼠取肺组织，先用肉眼观察，再进行肺组织
ＳｉＯ２
ＳｉＯ２ 浓度（ ｍｇ ／ｍＬ）
的 ＨＥ 染色显微镜观察大鼠矽肺模型制作的成功与否。
注射剂量（ ｍＬ）
４０
５０
６０
２ 操作步骤
０ ．５
触
处
触
２．１ 药品的配制 用研钵研磨二氧化硅晶体，直至二氧化硅成
１
揣
＋＋＋＋＋＋
处
为 ５μｍ 左右的颗粒，制备成不同浓度梯度的二氧化硅悬浊液。
手术剪，先用解剖剪在大鼠喉头与胸骨之间沿着颈腹中线切约 太多容易造成大鼠直接休克死亡，太少则达不到麻醉要求。
１ｃｍ 长的切口，然后慢慢地剪开上层肌肉，用镊子将肌肉拨开， ４．２ 注射时注意事项 在暴露大鼠气管后，要迅速用针管插入
暴露出气管。 ④注射 ＳｉＯ２ 悬浊液。 暴露气管后，用另一注射器 吸取二氧化硅悬浊液从大鼠气管软骨间隙缓慢注射进入气管。
［１］ 夏玉军，徐 朋，郭云良，等．腰骶神经节的形态观测及其临床意义 ［ Ｊ］ ．中国临床解剖学杂志，１９９４，１２（３） ：１７７
［２］ Ｃｏｈｅｎ ＭＳ，Ｗａｌｌ ＥＪ，Ｂｒｏｗｎ ＲＡ， ｅｔ ａｌ．Ｃａｕｄａ ｅｑｕｉｎｅ ａｎａｔｏｍｙ Ⅱ： Ｅｘ－ ｔｒａｔｈｅｃａｌ ｎｅｒｖｅ ｒｏｏｔｓ ａｎｄ ｄｏｒｓａｌ ｒｏｏｔ ｇａｎｇｌｉａ［ Ｊ］ ．Ｓｐｉｎｅ，１９９０，１５
图 １ 各组大鼠肺组织纤维化程度比较
４．３ 饲养要求 手术后的大鼠要先单独饲养，普饲，待大鼠伤 口愈合后再合笼放在一起养，以免带伤口的大鼠自相残杀。 ５ 讨论 利用二氧化硅悬浊液气管注射制备大鼠矽肺模型可以说是 一种比较方便，造价较低的实验方法。 国内外都有人采用这种 方法制作大鼠矽肺模型，当然也有利用其它各种方法成功造模 的，各式各样的造模方法都各有优缺点［１０］ 。 笔者根据实验室的 条件，利用后续实验要用到的大鼠进行了对造模合理条件的探 究。 结果显示，利用二氧化硅悬浊液进行暴露气管注射造模的 确是一种有效的方法，并初步探究了二氧化硅注射剂量和注射 浓度对大鼠矽肺模型建立的影响。 总体来说，注射剂量越高，大 鼠病死率越高；注射剂量越小，大鼠病死率越低。 综合大鼠病死 率与造模效果，确定注射 ５０ｍｇ ／ｍＬ 的二氧化硅 １ｍＬ 是最佳的实 验选择方案，其合理性及具体操作细节还需进一步的推敲。 参考文献