通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及氧化应激反应的影响
温脾通络开窍法对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马Tau蛋白磷酸化表达的影响
（ ） ｃ ｔ ｏ ｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ３ Ｖｏ【 ． １ ｌ Ｎ０ ． １ ０
区（ 前 囟后 ３ ． ６ ｍｍ， 中线旁开 ２ ． ４ ｍｍ， 颅骨 表面下 ２ ． ７ ｍｍ ） ，
的变性 、 坏 死 。其 中 ， Ｎ Ｆ Ｔ 的 数 量 和 患 者 的 痴 呆 程 度 呈 明 显 的 【 Ｆ 相关 ， 被 认 为 是 ＡＤ患 者 的神 经 元 退 化 的 病 理 基 础 ［ ２ ］ ， 是 ＡＤ 的核 心 病 理 改 变 。ＮＦ Ｔ 的 主 要 成 分 是 由 异 常 过 度 磷 酸 化 的 Ｔ ａ ｕ 蛋 白 聚集 而形 成 的 双螺 旋 （ Ｐ ＨＦ ｓ ） 。
为 注 射 靶 区 。用 特 制 二 三 棱针 手动 钻颅骨 至一定 深度 ， 再 用 微 量
进样器旋转钻 动至微有 落空 感 ， 随 后 白头 皮 表 面 垂 直 进 针 ４ ． ０ ｍｍ（ 微量进样器注射钢针外套 一次性介 入导 管并 固定 ， 针尖 留 出 ４ ． ０ ａ ｍ） ｒ ， 将溶 于 １ Ｏ ＤＭＳ ０ 的 ０Ａ １ ． ５ ｔ ＊ Ｉ （ ０ ． ４ ｍｍｏ ｌ ／ Ｉ ）
０ ． ０ １ ） 。结 论 温 脾 通 络 开 窍 法 对 ＡＤ 大 鼠 学 习记 忆 障碍 具 有 明 显 的 改 善 作 用 ， 且 可降低 Ａ Ｄ 大鼠海马 Ｔ ａ ｕ蛋 白异 常 磷 酸 化 水 平 ，
这 可 能 是 其 抗 ＡＤ 的 作 用 机 制 之 一 。
关键 词 ： 老年性痴 呆； 温脾通络开窍法 ； 学 习记 忆 ； Ｔ ａ ｕ蛋 白 中图分 类号 ： Ｒ ７ ４ ３ １ ９ ２ ８ ５ ． ５ 文献 标识码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ １ ３ ４ ９ ． ２ ０ １ ３ ． １ ０ ． ０ ４ ４ 文 章编号 ： １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ ０ —１ ２ ３ ８ — ０ ４ 阿尔茨海默病 （ Ａ Ｄ） 又称老年性痴呆 ， 是 一 种 以 进 行 性 记 忆 障 碍 和 智 能 衰 退 为 主 要 临 床 特 征 的 中 枢 神 经 系 统 退 行 性 疾 病 。ＡＤ发 病 机 制 极 其 复 杂 ， 病 因 学 尚不 清 楚 ， 其 典 型 的 病 理
通络益智散对血管性痴呆大鼠行为学、海马病理学的影响
ｐａｉ ａｔ ｎ —ｔ ｍ ｖｎｕ ａ ｅｅｉ ｔ ｎ Ｊ ．Ｅ ｒ ｕｇ ｌ ａ ｆ ｒ ｏｇ ｅ ｅｏ ｓ ｔ ｔ ｚ ｉ ［ ］ ｕ ｒ ｓ ｅｌ ｒ ｃ ｈ ｒａｏ Ｓ
Ｒ ｓ２ ０ ，２ ４ ： ３ ２ ５ ｅ ，０ ０ ３ （ ） ２ ６— ４ ．
［ ］ 卫 民 ， 惠 琴 ． 胞 因 子 研 究 方 法 学 ［ ． 京 ： 民 ５孙 王 细 Ｍ］ 北 人
中 图分 类 号 ： ７ ９ １ Ｒ ４ ． ３ 文 献 标 志 码 ： Ｂ
血 管 性 痴 呆 （ ａｃｌｒ ｅ ｅ ｔ ， Ｄ） 指 各 种 ｖｓｕａ ｍ ｎｉ Ｖ 是 ｄ ａ
ｓ ｒ ｍ ｏ ｃ ｎ ｒｔｏ ｓ ｏ ｅ ｕ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉｎ ｆＴＮＦ－ ｌｈａ，Ｌ－ ｂ ｔ Ｉ ６ ｉ ｐ ｎ・ ａｐ Ｉ １ ｅ ａ，Ｌ－ ｎ ｓ ｏ
降 低外 周血 白细胞 计 数 及 中性 粒 细 胞 比率 ， 低 脏 降
器 组织 中 Ｔ ＦＯ、Ｌ１表达水 平 以减轻 脏器 损 伤 ， Ｎ ． Ｉ． ｔ 减 轻 了肠 组织 的含 水量 ， 对脓 毒 症 大 鼠具 有 确 切 的 治 疗 作用 。此 为扶 正败 毒颗粒 防治脓 毒症 性多 器官 功 能 障碍 综合 征 提供 了参 考 。另外 ， 此对 探 讨 中西 医
文章编号 ： ０ — ９０２ １）２— ０４ ０ １ １ ６１（０２ ０ ０５ — ３ ０
ｔ ｅｕｌ ｈｐｒ ｎｉ ａｓ Ｓ Ｒ）［ ］ Ｐ ａｍａｏ Ｒ ｐ ａ ｏｓ ｙ ｅ ｅｓ ｅ ｒ （ Ｈ ｎ ｙ ｔ ｖ ｔ Ｊ ． ｈｒ ｅｌ ｅ ，
２ ０ ，８ ５ ： １ ． ０ ６５ （ ） ７ １
基 金 项 目 ： 阳 市科 技 局 科 技 计 划 项 目 （ 濮 编号 １０ ３ ） ０ ６ ７
电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆和抗氧化能力的影响
电针对 阿尔茨海 默病模 型大 鼠学 习记忆和抗 氧化能力 的影响
易显 富 ， 张泽月。 ， 肖 敏‘ ， 程 蕊。 ， 宋 洁 ， 高 翔 ， 穆敬平 ， 彭 （ １ ． 湖北 医药学院附属太和 医院， 湖北 十堰 ４ ４ ２ ０ ０ ０ ； ２ ． 湖北医药学院第一 临床 医学院， 湖北 十堰 ４ ４ ２ ０ ０ ０ ； ３ ． 房－ ｇ － Ａ． ￣ Ｌ 医院 ， 湖北 房 县 ４ ４ ２ １ ０ ０ ） 力
Ａ ｌ ｚ ｈ ｅ ｉ ｍｅ ｒ ＇ ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ｓｅ ａ ． Ｙ ／ Ｘ ｉ ａ ｎ － ｆ ｕ ， Ｚ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｚ ｅ － ｙ ｕ ｅ １ Ｘ １ Ａ Ｏ胁ｎ ， Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｇ Ｒ ｕ ｉ ２ ７ Ｓ Ｏ Ｎ Ｇ Ｊ ｉ ｅ ２ Ｇ Ａ Ｏ Ｘ ｉ ａ ｎ ｇ ＭＵ
【 摘要】 目的 观察 电针泖 淀粉样蛋白２ ５ ～ ３ ５ 片段（ Ａ ￣ ２ ５ — ３ ５ ） 所致阿尔茨海默病（ Ａ ｌ ｚ ｈ ｅ ｉ ｍ ｅ ｒ ’ ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ，
Ａ Ｄ ） 模 型大 鼠学 习记 忆 能力 和脑 组 织 自由基 代谢 的影 响 。方 法 ４ ８ 只健 康 雌性 Ｓ Ｄ大 鼠随 机分 为 Ａ Ｄ模 型
化氢 酶 （ Ｃ ａ ｔ ａ － ｌ ａ ｓ ｅ ， Ｃ Ａ Ｔ ） 、 乳酸 脱 氢酶 （ Ｌ Ｄ Ｈ ） 的 活性 。结 果
与Ａ Ｄ模型 组 相 比 ， 电针组 能 缩 短大 鼠的逃 避潜
伏期 （ Ｐ ＜ Ｏ ． ０ １ ） ， 明显增 加 大 鼠 的平 台跨 越 次数 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） ， 延 长 大 鼠在 目标 象 限的 停 留时 间并 增 高平 台象 限停 留 路 程 占总路 程 的百 分 比（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 同时 ， 电 针 组 能 明显 升 高 脑 组织 匀 浆 中 Ｓ Ｏ Ｄ、 Ｃ Ａ Ｔ 、 Ｇ Ｓ Ｈ、 Ｇ Ｓ Ｈ ． Ｐ ｘ 的含 量（ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） ， 降低 ＭＤ Ａ、 Ａ ｃ ｈ Ｅ、 ＭＡ Ｏ、 Ｌ Ｄ Ｈ、 Ｎ Ｏ的 活性 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） 。且 假 手 术 组 和正 常 对 照组 分 别 与 Ａ Ｄ模 型 组 比较 ， 除假 手 术 组平 均 速 度 差异 无 统 计 学 意义 外 ， 其 余 各 指标 差 异 有 统计 学 意 义 （ Ｐ ＜ Ｏ ． ０ ５ ） 。结 论 电 针 可改善 Ａ Ｄ模 型 大 鼠 的学 习记 忆 能 力 ， 同时还 能增 强 机体 的抗 氧化 能 力 ， 对脑 组 织 中 自由基 的代 谢 起 到积
解毒通络注射液对MCAO大鼠脑组织炎性细胞因子的影响
解毒通络注射液对MCAO大鼠脑组织炎性细胞因子的影响杨鸿;赵宜军;王永炎【期刊名称】《中国中药杂志》【年(卷),期】2008(33)23【摘要】目的:研究解毒通络注射液(JDTL)对局灶性脑缺血大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)以及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)含量的影响,探讨解毒通络注射液减轻脑缺血性损伤的作用机制。
方法:成年雄性SD大鼠,线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),随机分成假手术对照组、模型组、解毒通络注射液高、中、低剂量组(83.2,41.6,20.8 mg.kg-1)和尼莫地平组。
应用放射免疫法(RIA)检测脑组织匀浆TNF-α和IL-1β含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织匀浆ICAM-1和MCP-1含量。
结果:脑缺血6,24 h,大鼠脑组织TNF-α,IL-1β,ICAM-1以及MCP-1含量均有不同程度的升高。
解毒通络注射液高、中剂量组可以明显阻抑缺血脑组织上述细胞因子含量的增加。
结论:解毒通络注射液对抑制脑缺血后炎症因子和黏附分子的表达具有良好的作用,能够减轻炎性损伤,阻抑脑缺血损伤级联反应,减轻缺血对神经元的损害。
【总页数】4页(P2817-2820)【关键词】解毒通络注射液;脑缺血;炎性细胞因子;黏附分子;单核细胞趋化蛋白【作者】杨鸿;赵宜军;王永炎【作者单位】中国中医科学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.化瘀解毒法对MCAO大鼠凝血酶及其受体、脑组织MCP-1、NF-κB的表达及中性粒细胞浸润的影响 [J], 邓奕辉;覃弘宇;文果;刘文华;李定祥2.糖尿病性脑病大鼠行为学与脑组织形态学的改变及益气养阴解毒通络方对其的影响 [J], 宋福印;王永炎;黄启福3.解毒通络注射液对MCAO大鼠脑组织自由基代谢的影响 [J], 邢月;武丽斐;关亚兰;刘振权4.补肾解毒通络方剂灌胃自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓及脑组织中MMP-9蛋白表达观察 [J], 赵铎;王丹;郑春欢;郑绍周5.通络救脑注射液对氧糖剥夺大鼠脑微血管内皮细胞分泌巨噬细胞炎性蛋白-1β的影响 [J], 王筠;李澎涛;侯金才;华茜;潘彦舒;陈会丛;杜欢因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
通络救脑注射液对大鼠脑微血管内皮细胞活性及其条件培养液影响的初步研究
通络救脑注射液对大鼠脑微血管内皮细胞活性及其条件培养液影响的初步研究∗青雪梅，李澎涛**，胡京红，侯金才，华茜，王冰，杜欢北京中医药大学基础医学院北京 100029摘要：目的：观察通络救脑注射液对正常及拟缺血大鼠脑微血管内皮细胞的活性影响，并初步探讨细胞条件培养液内蛋白分泌的时效特征、奠定可溶性蛋白深入分析的技术基础。
方法：通络救脑注射液作用于正常及拟缺血脑微血管内皮细胞之后，用MTS/PMS比色分析法测定细胞的活性，Bradford法测定细胞培养液总蛋白含量，比色分析法测定细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）漏出值，同步观察了5个时间点的细胞活性及条件培养液总蛋白量及LDH释放量。
结果：通络救脑注射液能够提高拟缺血细胞的活性，且抑制LDH释放量；正常组分泌总蛋白量3h达到高峰，此时细胞活性最佳，LDH释放量亦少。
拟缺血组分泌总蛋白量是6h达到高峰，此时LDH释放量最少，但细胞活性与3h比较有所下降。
结论：通络救脑注射液对拟缺血细胞损伤具有保护作用；以3h至6h的细胞条件培养液做为收集目标是研究条件培养液的最佳时间段。
关键词：通络救脑注射液; 脑微血管内皮细胞; 条件培养液; 总蛋白大量临床与实验工作证实，具有活血通络作用的中药在改善脑微血管功能及血流状态的同时，对脑缺血损伤也起了保护作用[1]，这种脑保护功能是否与启动了脑微血管内皮细胞的调控机制有关尚无研究报道。
尽管近年来加深了络病学说的研究，其病络的物质基础仍不清楚。
阐明通络方药的“解毒通络”作用机制，对于深化“毒损脑络[2]”病机的理论内涵具有重要意义。
目前尚少有研究报道以内皮细胞的条件培养液入手，去探索脑微血管内皮细胞与神经细胞间的功能关系。
本实验观察了通络救脑注射液对拟缺血脑微血管内皮细胞的效应，并初步探讨了不同时间点的细胞条件培养液的总蛋白分泌状况与细胞活性的关系，为进一步揭示内皮细胞调控的脑损伤保护机制研究做前期基础工作。
1 材料与方法1.1 动物雄性SD大鼠，体重60-80g，级别SPF/V AF，动物合格证号：SCXK京2002-2003。
电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响
注射 Ｂ淀粉 样 蛋 白多肽 片段 Ａ ３ １ ２ ５ — ３ ５制 备动 物模 型 。电针组 治 疗分 为 ３个 疗程 。 以 Ｍｏ ｒ ｒ ｉ ｓ 水迷 宫来 评价 大 鼠
的学 习和 记忆 能力 ， 并 且使 用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法来 检测 大 鼠海马 区 Ｔ ａ ｕ蛋 白和其 丝 氨酸 １ ９ ８位点 、 ４ ０ ４位点 磷 酸化 水平 ， 利 用 软件 分析测 定 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 图像 条 带 的光 密度 （ Ｏ Ｄ） 值 。 结果 模型 组 Ｍｏ ｒ ｒ ｉ ｓ 水 迷宫试 验 逃 避潜 伏期 比正 常组 长 （ 均 Ｐ＜０ ． ０ ５ ） ， 电针组 与模 型组 差异 有统 计学 意 义 。 ３个组 之 间海马 区 ｔ ａ ｕ蛋 白总量 的差 异无 统计学 意义 ， 与模 型组 比较 ， 电针 组 丝氨 酸 的 １ ９ ８和 ４ ０ ４位点 的 ｔ ａ ｕ蛋 白磷 酸化 ｔ ａ ｕ蛋 白水 平具 有 降低 （ 均 Ｐ＜０ ． ０ ５ ） 的
ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ａ ｎ ｄ ａ ｎ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ａ ｃ ｕ ｐ ｕ ｎ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ， １ ０ ｒ ａ ｔ ｓ ｉ ｎ ｅ ａ ｃ ｈ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ． Ｔ ｈ ｅ Ａ Ｄ ｒ ａ ｔ ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｗａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｂ ｙ ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ
ｅａＳｅ
Ｈ Ｕ Ａ ＮＧ Ｊ ｉ ａ ｎ ｌ Ｌ Ｉ ＵＺ ｈ ｏ ｎ ￣ｉ ｎ ２ Ｌ Ｉ Ｕ Ｄ ｏ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ ＃ Ｚ ＨＡ ＮＧ Ｈ ａ ｉ ｙ ａ ｎ ‘
１ ． Ｑ ｉ ｑ ｉ ｈ ａ ｒ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｈ ｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ， Ｑ ｉ ｑ ｉ ｈ ａ ｒ １ ６ １ ０ ０ ６ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ａ ｉｌ ｆ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｑ ｉ ｈ ａ ｒ
通络救脑注射液对脑微血管内皮细胞活性影响的特征
通络救脑注射液对脑微血管内皮细胞活性影响的特征1青雪梅，李卫红，侯金才，胡京红，李澎涛★（北京中医药大学基础医学院 北京 100029）摘要：目的：观察通络救脑注射液对培养的正常及缺血脑微血管内皮细胞的活性影响，揭示其通络作用的效应靶点与特征。
方法：原代培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞，传至第三代，分为正常及拟缺血组，采用培养基氧糖剥夺（OGD）法建立拟缺血模型。
通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色分析法测定不同浓度的通络救脑注射液对正常及OGD内皮细胞的活性影响。
结果：通络救脑注射液作用于正常脑微血管内皮细胞，与未加药组比较，小剂量药物抑制细胞活性，大剂量促进细胞活性，剂量总趋势呈反抛物线形；通络救脑注射液作用于OGD组脑微血管内皮细胞，小剂量范围促进内皮细胞的增殖活性，呈显著和极显著差异，而大剂量组则抑制细胞活性，剂量总趋势呈抛物线形。
结论：通络救脑注射液对正常及缺血脑微血管内皮细胞具有双向调节作用，药物剂量与细胞增殖活性呈非线性关系。
大剂量与小剂量可能是不同的作用机制，反映了中药复方药效的多维性。
关键词：通络救脑注射液脑微血管内皮细胞氧糖剥夺 MTT通络救脑注射液由栀子苷和三七总皂甙制成，是治疗缺血性脑病的中药新药。
已完成验收的“十五”国家攻关课题“通络救脑注射液临床前研究”在保护大鼠脑缺血组织损伤中获得了优良效果，并在“863”项目支持下的临床试验进一步肯定了其抗缺血损伤的效应。
本实验进一步从细胞学角度深入研究其解毒通络作用的效应，对于阐明“解毒通络”治疗脑缺血损伤的优势和深化“毒损脑络”病机理论具有重要意义。
1. 材料与方法1.1 动物雄性SD大鼠，体重60-80g，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所动物中心。
1. 2 主要试剂配制：完全培养液成分：高糖DMEM基础培养基(GIBCO公司)，胎牛血清20%；ECGS(SIGMA 公司) 75mg·L-1、肝素钠4*104U·L-1、青霉素1*105U·L-1、链霉素1*105U·L-1、胰岛素200U·L-1、L-谷氨酰胺 2mmol·L-1。
参附注射液对β淀粉样蛋白所致阿尔茨海默病大鼠认知行为和脑组织氧化应激的影响
只／ ） 组 。正 常 对 照 组 ： 脑 室注 入 蒸 馏 水 （ ｉ ｉｅ 侧 ｄｓ ｌ ｄｗａｅ ， Ｗ ） 模 型对 照组 ： 脑 室注 入 Ａ Ｌ； ３ ｓ ｔｌ ｔｒ Ｄ ５ Ｌ； 侧 Ｄ５ ＡＩ Ｆ组 ： 脑 室注 入 Ａ？ ＋ 侧 ｔ
５ Ｌ， 腔 注射 Ｓ （０ ／ ｇ 每 日 １次 ） 腹 Ｆ １ ｍＬ ｋ ， 。正 常 对 照 组 和 模 型 对 照 组 腹 腔 注射 等 量 生理 盐 水 （ ） 连 续 １ｄ 每 日 １次 。２周后 观 ＮＳ ， ４，
４ ０ １） ０ ０ ０
摘 要 ： 目的 观 察 参 附注 射 液 （ Ｆ 对 ｐ淀粉 样 蛋 白 （ｍｙｏｄｂ ｔ， ） 致 阿 尔 茨海 默 病 大 鼠 认 知 行 为 和 脑 组 织 氧 化 应 激 Ｓ） ａ ｌ ｅａＡ口 所 ｉ
的影 响 ， 讨 Ｓ 探 Ｆ对 阿 尔茨 海 默 病 的 可 能 治 疗 作 用及 其机 制 。方 法 ３ Ｏ只 健 康 Ｓ 大 鼠 ， Ｄ 经过 水 迷 宫 训 练 后 随 机 分 为 ３个 组 （ ０ １ 海 马 、 质 区超 氧 化 物 歧 化 酶 （ ＯＤ） 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ Ｓ — Ｘ） 活 力 以及 丙二 醛 （ Ａ） 皮 Ｓ 、 Ｇ ＨＰ 的 ＭＤ
的表 达 水 平 。结 果 Ａ ＋ｓ 口 Ｆ组 大 鼠 水 迷 宫 潜 伏 期 明 显 缩 短 ， 与模 型 对 照 组 比 较 海 马 及 皮 质 Ｓ Ｄ、 Ｓ — ｘ 活 力 明 显 升 高 （ ＜ Ｏ Ｏ Ｇ ＨＰ Ｐ ．
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*基金项目：北京中医药大学自主课题(编号:2011－JYBZZ －XS077)通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及氧化应激反应的影响*Effects of Tongluo Jiunao Injection on learning and memory and oxidative stress response for Alzheimer's Disease Rat Models刘洋Liu Yang 1，李澎涛Li Pengtao 2，刘希伟Liu Xiwei 1，南一楠Nan Yinan 1，都文渊Du Wenyuan 11．北京中医药大学基础医学院中西医结合基础(病理)，北京110029Integration of Traditional Chinese Medicine and Western Medicine Subject (Pathology )in Basic Medical College of BeijingUniversity of Traditional Chinese Medicine ，Beijing ，China 1100292．北京中医药大学东直门医院，北京100700Dongzhimen Hospital of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ，Beijing ，China 100700摘要：目的:探讨通络救脑注射液(Tong Luo Jiu Nao injection ，TLJN )对阿尔茨海默病(Alzheimer ’s Disease ，AD )模型大鼠的防治作用及其抗氧化机制。
方法:采用脑内定位注射β淀粉样蛋白(βamyloid1-42)建立AD 大鼠模型，在模型建立成功的同时给予TLJN 治疗。
采用Morris 水迷宫进行AD 大鼠的行为学检测，用化学比色法检测大脑皮质丙二醛(MDA )的含量。
结果:与正常组比较，AD 模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P ＜0．01)，目标象限停留时间明显缩短(P ＜0．01);TLJN 治疗组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P ＜0．05)，目标象限停留时间明显增加(P ＜0．05)。
AD 模型组大鼠脑皮质中MDA 含量增加(P ＜0.01);TLJN 治疗组，脑皮质MDA 含量显著减少(P ＜0．01)。
结论:TLJN 具有改善学习记忆能力，对抗大鼠神经系统的退行性病变有一定的作用，可能通过抑制AD 模型大鼠脑皮质MDA 产生发挥其保护作用。
Abstract :Objective :To explore the preventive and therapeutic effect and anti-oxidation mechanism of Tong Luo Jiu Nao injection(TLJN )in Alzheimer's Disease (AD )rat models．Methods :The AD rat model was established by injecting β-amyloid1-42into the ratbrain ，and successful model rats were given TLJN injection treatment at the same time．The behavioral changes of the AD rats were test-ed with Morris water maze．Chemical colorimetry was used to measure malondialdehyde (MDA )content in the cerebral cortex．Results :Compared with the control group ，the escape latent period of AD rats was significantly longer (P ＜0．01)，retention time of the target quadrant significantly obviously reduced (P ＜0．01);After TLJN treatment ，the escape latent period of AD rats was significantly shorter (P ＜0．05)，and retention time of the target quadrant was significantly increased (P ＜0．05)．In AD model group ，the MDA content in cerebral cortex was increased significantly (P ＜0．01);while after TLJN treatment ，the MDA content in cerebral cortex was decreased obviously (P ＜0．01)．Conclusions :TLJN treatment has certain effects on improving learning and memory ability of AD rats and resisting retrogression of rats nervous system ，and plays protective role in AD rats possibly via inhibiting the production of MDA．关键词：阿尔茨海默病;通络救脑注射液;Morris 水迷宫;学习记忆;氧化应激反应;大鼠Key words :Alzheimer's Disease (AD );Tongluo Jiunao injection ;Morris water maze ;learning-memory ;oxidative stress response ;rat 中图分类号CLC number ：R285．5文献标识码Document code ：A文章编号Article ID ：1674－8999（2012）12－1614－03阿尔茨海默病（Alzheimer ’s Disease ，AD ）是一种继心血管病、癌症、脑卒中后严重威胁人类健康的高发性神经退变性疾病。
但目前临床上对于AD 的病因和发病机制尚不完全清楚，对于其治疗仍旧是一个世界性的难题。
近些年来，对于AD 的发病机制研究方面取得了很多进展，主要集中在遗传因素、环境因素、免疫-炎性机制、氧化应激和细胞凋亡等方面，而氧化应激在AD 中的作用越来越受到研究者的重视。
结合本研究团队多年体内外实验研究，发现AD 的中医病机关键为“毒损脑络”［1-2］。
因此，本实验采用大鼠双侧海马注射A β1-42这一致毒片段以模拟“毒损脑络”病证，观察“毒损脑络”病证下AD 大鼠学习记忆变化情况及氧化应激反应的改变，采用针对该中医病机关键具有解毒通络作用的中药复方通络救脑注射液进行干预，通过Morris 水迷宫行为学检测方法观察药物干预后大鼠学习记忆的改善情况及通络救脑注射液的作用机制，为通络救脑注射液的临床应用提供体外实验依据。
1材料与方法1．1动物分组清洁级雄性SD 大鼠32只，体质量（250ʃ20）g ，购自北京维通利华实验动物中心。
随机分成正常对照组（正常组）、A β海马注射组（模型组）、A β海马注射+通络救脑注·4161·射液组（TLJN组）、Aβ海马注射+多奈哌齐组（阳性药物组），每组8只。
所有动物均在北京中医药大学屏障环境动物实验室（SYXK京2011－0024）饲养，自由饮食，明暗各12 h。
1．2药物与试剂Aβ1-42（sigma公司）；通络救脑注射液（天津红日药业股份有限公司，生产批号：20090630）；水合氯醛（北京化学试剂公司）；硫酸庆大霉素注射液（石药集团欧意制药有限公司）；盐酸多奈哌齐片（法国PFIZER PGM公司）。
1．3AD模型的制备［3-4］将Aβ1-42干粉剂溶于无菌生理盐水（2g·L－1），在37ħ保温箱中孵育1周，使其变为凝聚态Aβ。
大鼠经腹腔注射体积分数10%的水合氯醛（4mL·kg－1）麻醉后，固定于江湾Ⅰ型C大鼠立体定位仪上，常规备皮消毒，切开皮肤，暴露前，参照包新民等的《大鼠脑立体定位图谱》在右侧海马区（前囟后3．0cm，中线右侧2．0cm）用牙科钻钻开颅骨，切开硬脑膜，用微量注射器自脑表面垂直进针2．5cm，缓慢注入凝聚态Aβ1-425μL，留针5min，以使Aβ充分弥散，然后缓慢撤针，缝合切口。
1．4给药方法［5］造模后2d开始给药，根据本实验室前期动物实验结果，选择通络救脑注射液组按4．5mL·（kg·d）－1的剂量灌胃给药；阳性药治疗组将安理申片磨碎，加入蒸馏水制成溶液，0.92mg·（kg·d）－1，按0．700mL·（g·d）－1灌胃；模型组及正常组给予等体积的双蒸水，均每日1次，共3周。
1．5Morris水迷宫行为学测试［4］Morris迷宫为一个不锈钢的圆柱形水池，水池底部及内壁均涂成黑色，直径为120cm，高50cm，水池壁标明4个入水点，由此将水池等分为4个象限（按逆时针方向定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ），盛水后水深约30cm，水温控制在（22ʃ1）ħ。
将一直径11cm、高29cm的平台固定于其中任一象限，平台在水平面下1cm。
迷宫上方安装有摄像头并与计算机相连接，自动录入大鼠游泳轨迹进行分析。
定位航行实验检测方法：各组动物均于造模后2d给予药物干预，在给药21d后开始Morris水迷宫测试。
所有实验动物适应性游泳90s，连续4d进行大鼠逃避潜伏期实验，具体方法如下：每只大鼠每次测试时间为90s。
测试前先将动物放置在平台上适应10 s，令其进行空间定位。
然后将动物从未放置平台的象限轻放入水中，计时开始，持续90s。
将大鼠入水至找到平台所需时间定义为逃避潜伏期。
若大鼠在规定90s时间内能够找到平台，并在平台停留超过2s者视为寻台成功，其潜伏期则为实际寻台所用时间；若寻台失败，其潜伏期90s。
如果大鼠90s内不能找到平台则由实验者用手牵引其到平台上停留10s，再放回到笼中。
每天每只动物测试4次。
每只动物测试完一个象限后休息3h再进行下1次测试。
每天动物测试顺序、入水象限、测试时段保持一致。
空间探索实验检测方法：实验第5天，撤除平台，将大鼠从平台所对象限放入水中，记录60s内大鼠在原平台所在象限的游泳时间（即：目标象限停留时间）。