动物疫病检测技术.共56页
动物检疫技术(共41张PPT)
也有些例外，如部分肠道病毒有血凝作用但无血吸附现象； 简单染色法：只用一种染料进行染色。 细菌特殊结构：鞭毛、芽孢、荚膜等。
2.由于大多数病毒对热不稳定，应该立即接种， 3、吸取上层液，做连续10倍稀释。
检材的采集与送检、病料的处理 胶体金标记技术 禽流感新城疫病毒胶体金快速诊断试纸的使用
3．右手以棉签蘸以碘酒，消毒小白鼠的右颊部皮毛 4．右手拿住注射器在小白鼠眼与耳根连线的中点略偏耳
朵的方向注入，进入颅腔，进针2—3毫米，不要插得 太深，注射量为0.02—0.03毫升。
5．注射完毕，将用过的注射器煮沸消毒，动物一般在3—4天 开始发病，食欲减退，活动迟纯、耸毛、振颤、慢慢发展 为麻痹瘫痪而死亡。
– 半固体培养法
– 液体培养法 – 平板涂布培养法
七、细菌的培养方法 – 需氧培养法
– 二氧化碳培养法（CO2孵箱法、烛缸法、化学法）
– 厌氧培养法（厌氧罐培养法、培养箱法）
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八、细菌的鉴定
（一） 细菌 的生 长现 象观 察
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细菌的一些培养特征
丝状
有小刺 念珠状 绒毛状 在琼脂穿刺培养中的生长
假根状
• 脏器组织块→放入10%福尔马林溶液或95%酒精中固 定，固定液用量应为病料的10倍。
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三、病料的记录、包装和运送方法
（一）送检单 • 填写3份，一份存根，两份寄送检验室；待
检查完毕后退回1份。 （二）病料的包装和运送
• 液体病料（如黏液、渗出液、尿及胆汁等）→装入细 玻璃管中（管口用火焰封闭）→再用废纸或棉花包 囊装入较大的试管中→再装入木盒中运送。
– 1、将氯仿加于病毒悬液中，使最终浓度达5%，充分振荡后在
动物检验检疫技术 ppt课件
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7、呼吸道
❖ 应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或气管内的分 泌物，蘸取分泌物后立即将拭子浸入保存液中， 密封低温保存。
❖ 常用的保存液有pH7.2～7.4的灭菌肉汤或磷酸盐 缓冲盐水。一般每支拭子需保存液5mL。
②组织病理学检查样品的采集 采集包括病灶及临近正常组织的组织块，立即放入10倍于 组织块的10%福尔马林溶液中固定。组织块厚度不超过 0.5cm，切成1cm2～2cm2 。组织块切忌挤压、刮摸和用 水洗。如作冷冻切片用，则将组织块放在0℃～4℃容器中， 尽快送实验室检验。
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3、液体病料
❖ 采集胆汁、脓、粘液或关节液等样品时，用烫烙法消毒采样 部位，用灭菌吸管、毛细吸管或注射器经烫烙部位插入，吸 取内部液体材料，然后将材料注入灭菌的试管中，塞好棉塞 送检。也可用接种环经消毒的部位插入，提取病料直接接种 在培养基上。
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三、细菌的鉴定
生物分类的传统指标 形态学特征 生理学特征 生态学特征
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1、微生物分类鉴定的经典方法 纯培养的病原微生物可进行系统鉴定。 系统鉴定就是通过病原菌的形态结构、生长特征、
抗原性和病原性等检测，并用已知标准血清确定 分离细菌的属、种和型。
微生物鉴定程序通常是根据其形态生长、生化特 征等定种，最后根据抗原的免疫血清检查定型
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5、肠内容物或粪便
肠道只需选择病变最明显的部分，将其中的 内容物弃去，用灭菌生理盐水轻轻冲洗；也可烧 烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取内 容物，将肠内容物放入盛有灭菌的30%甘油盐水 缓冲保存液中送检。或者，将带有粪便的肠管两 端结扎，从两端剪断送检。
最全的动物疫病实验室检测方法
最全常见疫病实验室检测方法目录常见疫病实验室检测方法 (1)目录 (1)常见ELISA操作方法 (3)亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒 (3)猪瘟抗原检测试剂盒 (6)猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验 (12)猪瘟单抗酶联免疫吸附试验 (14)口蹄疫结构蛋白检测方法（3ABC-I-ELISA） (16)口蹄疫抗体液相阻断-酶联免疫吸附试验 (18)PRRS抗体间接酶联免疫吸附试验 (22)犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (24)犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (26)常见PCR操作方法 (28)猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒 (28)猪圆环病毒PCR诊断试剂盒 (31)常见RT-PCR操作方法 (34)口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒 (34)H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(20次) (36)新城疫病毒RT-PCR 检测试剂盒 (38)猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒 (41)凝集、血凝实验操作方法 (44)弓形虫间接血凝试验(lHA)试剂使用说明书 (44)伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒 (45)猪细小病毒病乳胶凝集试验〈LAT〉诊断试剂盒使用说明书 (46)猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序 (47)猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序 (48)口蹄疫正向间接血凝试验 (51)高致病性禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验程序 (52)琼脂扩散试验 (54)鸡马立克氏病 (54)禽流感琼脂凝胶免疫扩散试验 (56)荧光抗体检测 (58)猪瘟荧光抗体试验操作程序 (58)对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光(dFA)检测 (59)血清学诊断检测常用试剂配方 (61)禽流感HA和HI试验用溶液的配制 (61)补充实验 (64)猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书 (64)猪流感病毒RT-PCR检测 (67)猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒猪繁殖与呼吸综合症（Nsp2 1594~1680变异株）RT-PCR检测实验 (69)一、布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清 (72)二、布鲁氏菌病虎红平板凝集试验 (73)动物结核病诊断操作规程 (74)常见ELISA操作方法亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒一试剂盒内含物.说明书亚洲 1 型口蹄疫阳性对照血清( 己稀释浓度为 1:8) .96 孔 ELISA 板亚洲 1 型口蹄疫阴性对照血清.液体稀释槽 3% 双氧水.U 型96孔抗原抗体反应板 25×PBST洗涤液(稀释时准确量取).封板膜豚鼠抗血清稀释液.灭活亚洲Ⅰ型口蹄疾病毒抗原 (用冰决包裹 ) 终止液.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清包被缓冲液(碳酸盐)胶囊.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒豚鼠抗血清底物 (柠檬酸 -磷酸盐)缓冲液片剂.兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物 OPD 片剂二器材准备 ( 需用户自备 )1.移液器:5-50µl移液器、0.2—10µl移液器、50—200µl移液器、50—300µl 12道移液器各一把。
动物检疫技术
流行理学检查技术
提 要
病料的采集
病原学检查技术
免疫学检查技术
第一节 流行病学调查
概念：俗称疫情调查，是对动物群体中疫病发生和 流行的情况以及有关因素进行调查了解。
可通过询问、现场查 看、实验室检查、查 验资料等多种方式， 全面掌握相关资料
主要目的：监测疫 情动态和突发疫情 诊断，科学制定防 控对策
第二节 临诊检疫技术
临诊检疫是动物检疫最基本的方法。 利用人的感官或借助简单的器械如听诊器、体温计， 对动物群体或个体进行视诊、触诊、叩诊、听诊和 体温测定。
一、群体检疫
群体检疫——是指对待检动物群体进行的现场检疫。 目的：从群体中挑出患病动物和可疑患病动物，
以便进一步做个体检疫。 (一)群体检疫的组织 1.群体划分 同场、同圈(舍)，或同一产地来源的，划为一群。 同车、同船、同机运输的划为一群。 小动物如禽、兔还可按笼、箱划群。 在畜群过大时,要适当分群,以利于检查。
➢ 率：指一定时间、范围及群体内，事件发生的 频率。如发病率、致死率、患病率等。常用百分 率来表示。
➢ 比：是表示事件发生过程中，两个变数之间的 对比。常用倍数或百分数表示，与率不同的是分 母不包括分子。注意：比和率。
常用的率、比
1.发病率：在一定时间内,某动物群体中某病的发病动物数占该 群体动物总数的百分率。
（二）暴发（应急）调查
应急调查——是指动物群体突发某种疫病时所开展的调查。 这种调查时被动调查，是必须进行的工作，其目的是诊断 疫情和查明原因。 目的：了解疫病流行全过程以及与流行有关的因素，获取 相关疫病的第一手感性材料，并对材料进行统计、分析， 做出诊断性推理。 暴发调查是诊断性调查和病因调查。
一、调查的分类和内容
动物疫病监测(诊断)基础理论知识和方法原理
触片染色镜检
病理变化
临床症状
流行病学调查
初步诊断
培养特性
生化特性
确诊
血清学试验 动物回归试验
第一页，共64页。
病毒感染的诊断
标本采集与送检 病毒的分离鉴定 电镜技术 血清学试验 分子生物学技术
第二页，共64页。பைடு நூலகம்
病毒的分离
动物接种
是最原始的病毒培养方法，根据病毒种 类不同，选择敏感动物及适宜接种部位， 如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可接种 于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜 或皮内。
作用；与K细胞结合，发挥ADCC作用；与葡萄 球菌A蛋白结合。 具有抗菌、抗毒和抗病毒作用 参与II、III型超敏反应
第二十二页，共64页。
IgM
为五聚体，是分子量最大的Ig。 IgM激活补体能力比IgG强。 IgM是抗原刺激后出现最早的抗体，故检测
IgM水平可用于传染病的早期诊断。 IgM是B细胞抗原受体的主要成分。 也可参与II、III型超敏反应。
将可溶性抗原 (或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、 一定大小的不溶性颗粒 (统称为载体颗粒)的表面， 然后与相应抗体 (或抗原)作用，在有电解质存在的 适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝 集反应。
根据所用载体分： ①. 乳胶凝集试验 ②. 炭素凝集试验 ③. 间接血凝试验
根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方式分：
包括：体液免疫、细胞免疫。
第十二页，共64页。
第十三页，共64页。
第十四页，共64页。
抗原
抗原（Antigen，Ag）：是指进入动物机体后， 能刺激机体产生特异性免疫球蛋白或致敏淋巴 细胞，并能与其发生特异性反应的物质，也就 是说具有抗原性的物质称抗原。
动物疫病监测技术简介.ppt
动物疫病监测是动物健康、动物产品质量的重 要保障，由法定的机构和人员按照国家规定的动物 防疫标准，依照法定的检验程序、方法和标准，对 动物、动物产品进行定期或不定期的检查和检测， 并依据监测结果进行处理的一种措施。 对高致病性禽流感、口蹄疫、猪蓝耳病等重要 动物疫病，动物疫病预防控制机构规定为必须申报 的疫病，以切实掌握疫情动态、发展趋势和流行规 律，及时发现疫情隐患，提高重大动物疫情预警预 报能力。
2、猪的采血方法 耳静脉采血时站立保定， 助手用力在耳根捏压静脉的近心端，手指轻弹后， 用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张，沿血管 插入，见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接 入真空采血管。用棉球按压止血。 前腔静脉采血时站立保定，保定器保定让猪 头仰起，露出腋窝，从右侧向心脏方向刺入，回 抽见血，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 3、牛、羊的采血 保定，稍抬头颈于静脉 沟上1/3与中1/3交界部消毒、按压，由下向上刺 入，血液顺器壁流入容器内，消毒止血。
三、监测的程序
（一）、任务下达
为切实掌握重大动物疫病流行规律和疫 情动态，及时发现疫情隐患，提高疫情 预警预报能力，根据国家《动物防疫法 》、《重大动物疫情应急条例》的规定 ，兽医主管部门根据需要下达监测任务 。各级动物疫病预防控制中心具体负责 组织实施。
（二）、制定监测方案 1、确定监测性质 2、确定监测目的 3、确定流行病学调查主要内容 4、确定临床检测样品的采集
4、常规血液样品的制备 抗凝血常 用作细菌或病毒检验样品。采血前预先 在真空采血管按每 10mL 血液加入 0.1% 肝 素1mL，采集的血液立即与抗凝剂充分混 合，防止凝固，但要轻轻混匀以免溶血。 贴上标签立即送实验室。
非抗凝血 即不加抗凝剂，等血液凝固析出 血清，一般用作血清学检测试验。血清分离方法： 血液在室温下倾斜放置2—4h（防暴晒），待血 液凝固自然析出血清，必要时经离心机离心分离 血清。将血清移至小塑料试管中，封口贴标签， 4℃冷藏，长期保存需将血清置于-20 ℃冷冻。
重大动物疫病采样监测技术
❖ 样品：全血、骨髓、淋巴结、扁桃体、肾脏、 脾脏
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（四）、猪链球菌样品采集
❖ 致病性链球菌经呼吸道或其它途径（受损的 皮肤和粘膜）进入机体后，首先在入侵处繁 殖，很快进入淋巴管和淋巴结。继之冲破淋 巴屏障，沿淋巴系统扩散到血液中，引起菌 血症，最后导致各个实质器官严重病变。
❖ 样品：生前：抗凝全血 死后：肝脏、脾脏
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（五）、新城疫样品采集
❖ 新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分 泌物和排泄物，以脑、脾和肺含毒量最高， 骨髓含毒时间最长。
❖ 样品：眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管 粘膜、脑等。
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汇报结束
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❖ （3）、在无法采集水泡皮和水泡液时，可采 集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品3～5克装 入洁净小瓶内，加盖密封尽快冷冻保存。样 品的包装瓶上均要贴上标签，写明采样地点， 动物种类，编号，时间等。
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2、牛、羊 (O—P液)样品采集
❖ （1）、样品采集：被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时， 以免胃内容物反流污染O—P液。采样探杯在使用前经0．2 ％柠檬酸或2％氢氧化钠浸泡5分钟，再用洁净水冲洗。每采 完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物 站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10～15cm处， 轻轻来回移动2～3次，然后将探杯拉出。
最全的动物疫病实验室检测方法
最全常见疫病实验室检测方法目录常见疫病实验室检测方法 (1)目录 (1)常见ELISA操作方法 (3)亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒 (3)猪瘟抗原检测试剂盒 (6)猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验 (12)猪瘟单抗酶联免疫吸附试验 (14)口蹄疫结构蛋白检测方法( 3ABC—I-ELISA） (16)口蹄疫抗体液相阻断—酶联免疫吸附试验 (18)PRRS抗体间接酶联免疫吸附试验 (22)犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (24)犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (26)常见PCR操作方法 (28)猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒 (28)猪圆环病毒PCR诊断试剂盒 (31)常见RT—PCR操作方法 (34)口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒 (34)H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书（20次） (36)新城疫病毒RT-PCR 检测试剂盒 (38)猪瘟病毒RT—PCR诊断试剂盒 (41)凝集、血凝实验操作方法 (44)弓形虫间接血凝试验（lHA）试剂使用说明书 (44)伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒 (45)猪细小病毒病乳胶凝集试验〈LAT>诊断试剂盒使用说明书 (46)猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序 (47)猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序 (48)口蹄疫正向间接血凝试验 (51)高致病性禽流感血凝（HA)和血凝抑制（HI）试验程序 (52)琼脂扩散试验 (54)鸡马立克氏病 (54)禽流感琼脂凝胶免疫扩散试验 (56)荧光抗体检测 (58)猪瘟荧光抗体试验操作程序 (58)对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光(dFA）检测 (59)血清学诊断检测常用试剂配方 (61)禽流感HA和HI试验用溶液的配制 (61)补充实验 (64)猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书 (64)猪流感病毒RT—PCR检测 (67)猪瘟病毒RT—PCR诊断试剂盒猪繁殖与呼吸综合症（Nsp2 1594～1680变异株）RT-PCR检测实验 (69)一、布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清 (72)二、布鲁氏菌病虎红平板凝集试验 (73)动物结核病诊断操作规程 (74)常见ELISA操作方法亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒一试剂盒内含物。