2018届高三一轮复习：第十四单元第1讲基因工程的基本工具与操作程序
实验现象
选项 在含青霉素培 在含四环素培
养基上生长情
养
况
基上生长情况
实验推论
目的基因 插入的位置
A
能生长
能生长
a
B 不能生长
能生长
b
C
能生长
不能生长
c
D 不能生长
不能生长
c
8. (2018·重庆卷)下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述,正确的是 ( ) A. 表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞 mRNA 反转录获得 B. 表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点 C. 借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来 D. 启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用 9. (2018·南京二模)用限制酶 EcoR Ⅰ、Kpn Ⅰ和二者的混合பைடு நூலகம்分别降解一个 1000 bp(1 bp 即 1 个碱基对)的 DNA 分子,降解产物分别进行凝胶电泳,在电场的作用下,降解产物分开,凝胶电泳结果如下图所示。该 DNA 分子的酶 切图谱(单位:bp)正确的是 ( )
10. (2018·南师附中)如下页图是利用基因工程技术培育转基因植物,生产可食用疫苗的部分过程示意图,其中
PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制酶。
下列说法错误的
是()
A. 图示过程是基因工程的核心步骤
B. 构建基因表达载体时需要用到限制酶 SmaⅠ
C. 抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基
(1) 从苏云金芽孢杆菌中获取的毒蛋白基因,通过 技术可在体外大量扩增。该扩增过程需要 种引物,
所需添加的酶是 。
(2) 图中形成重组质粒 1 过程需要的限制酶是
,其作用是破坏 DNA 分子中的
。
(3) 将重组质粒 2 导入经 处理成为感受态的白僵菌。一段时间后用含有 的平板培养基进行筛选,获得
择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是 ( )
A. 设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列
B. 用 PCR 方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 C. PCR 体系中一定要添加从受体细胞中提取的 DNA 聚合酶 D. 一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞 13. (2017·广东卷)利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如下图所示,下列叙述正确的是 ( )
A. 过程①需使用逆转录酶 B. 过程②需使用解旋酶和 PCR 获取目的基因 C. 过程③使用的感受态细胞可用 NaCl 溶液制备
D. 过程④可利用 DNA 分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞 三、 非选择题 14. (2018·南京一模)白僵菌可感染农业害虫,常作为防治害虫的菌剂。由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感,且杀死 害虫的能力较弱,科研人员对其进行基因工程改造,流程如下图所示。请回答:
A. 6 种 B. 3 种 C. 2 种 D. 1 种 5. (2018·天津五校联考)为达到相应目的,必须通过分子检测的是 ( ) A. 携带链霉素抗性基因受体菌的筛选 B. 产生抗人白细胞介素-8 抗体的杂交瘤细胞的筛选 C. 转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定 D. 21 三体综合征的诊断 6. (2018·扬州一模)下列关于核酸分子杂交和抗原—抗体杂交的叙述,正确的是 ( ) A. 核酸分子杂交是指两条脱氧核苷酸链的杂交 B. 抗原—抗体杂交的原理为碱基互补配对原则 C. 核酸分子杂交可检测目的基因的存在和转录 D. 抗原—抗体杂交常以目的基因产物作为抗体 7. (2018·连云港调研)质粒是基因工程中最常用的载体,它存在于许多细菌体内。某细菌质粒上的标记基因如下 图所示,通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转移成功。外源基因插入的位置不同,细菌在培养基上 生长情况也不同,下图示外源基因在质粒中可插入的位置有 a、b、c 点。某同学根据实验现象对其插入的位点 进行分析,其中分析正确的是 ( )
第 1 讲 基因工程的基本工具与操作程序
一、单项选择题
1. (2018·无锡一模)下列有关基因工程的叙述,正确的是 ( ) A. 限制性核酸内切酶只在获得目的基因时使用 B. 重组质粒的形成是在细胞内完成的 C. 目的基因必须整合到受体细胞的 DNA 中才能复制 D. 通过基因工程育种可以定向地改造生物的性状 2. 关于限制性核酸内切酶的叙述,不正确的是 ( ) A. 这类酶主要是从原核生物中分离出来的 B. 这类酶能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列 C. 大多数这类酶的识别序列由 6 个核苷酸组成 D. 这类酶在识别序列的中心轴线处切开时产生的是黏性末端 3. (2018·南通一模)限制性内切酶 HindⅢ和 XhoⅠ的识别序列及切割位点分别为 A↓AGCTT 和 C↓TCGAG,下列相 关叙述正确的是 ( ) A. 两种限制酶的识别序列在 DNA 分子中出现的概率不同 B. 两种限制酶切割形成的黏性末端都是—AGCT C. 分别用这两种酶切割目的基因和质粒后能形成重组质粒 D. 实验中可通过控制反应时间、酶的浓度等控制酶切效果 4. (2018·泰州一模)将经过扩增的 DNA 和质粒用相同的限制酶进行如下图所示的切割,电泳得到纯净的 B 片段和 D 片段,将两种片段置于适宜的缓冲液中用 DNA 连接酶处理。如果只考虑两个片段的环状连接,则能形成不同 核苷酸序列的环状 DNA 的种类是 ( )
B. 在原核生物中,限制酶的作用是切割异源 DNA,保护自身安全
C. DNA 连接酶按其来源分有两类:E·coli DNA 连接酶和 T4 DNA 连接酶
D. E·coli DNA 连接酶只能连接黏性末端
12. (2017·江苏卷)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应,为了克服这个缺陷,可选
因的细胞筛选出
来
D. 除图示组成外,基因表达载体中还应该含有
启动子和终止子
等结构
二、 多项选择题
11. (2018·东海模拟)切割 DNA 的工具是限制酶,主要是从原核生物中分离纯化而来,DNA 连接酶可将 DNA 片段
连接起来。下列有关限制酶和 DNA 连接酶的叙述,正确的是 ( )
A. 限制酶种类很多,一种限制酶可以识别不同的核苷酸序列
高考生物一轮复习讲义—基因工程的基本工具和基本操作程序(新人教版)
高考生物一轮复习讲义—基因工程的基本工具和基本操作程序（新人教版）课标要求1.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。
2.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。
3.按照实验操作步骤，进行DNA的粗提取与鉴定实验。
4.利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。
考点一重组DNA技术的基本工具1．基因工程的概念别名重组DNA技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平结果创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品2.基因工程的诞生和发展(1)肺炎链球菌转化实验不仅证明DNA是遗传物质，还证明了DNA可在同种生物不同个体之间转移。
(2)DNA双螺旋结构的提出和半保留复制的证明。
(3)中心法则的确立。
(4)遗传密码的破译。
(5)基因转移载体和限制酶、DNA连接酶和逆转录酶的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
(6)DNA体外重组的实现。
(7)重组DNA表达实验的成功。
(8)DNA测序和合成技术的发明。
(9)PCR技术的发明。
(10)基因组编辑技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。
3．重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)(2)DNA连接酶(3)载体(1)源于选择性必修3 P71“旁栏思考”：①原核生物中存在限制酶的意义是什么？提示原核生物中限制酶的作用是切割外源DNA以保证自身安全，防止外来病原物的危害。
②限制酶来源于原核生物，为什么不能切割自己的DNA分子？提示原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(2)源于选择性必修3 P72“旁栏思考”：DNA连接酶和DNA聚合酶不是(填“是”或“不是”)一回事。
原因是①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。
高三生物一轮复习基因工程的基本操作程序学案
1．2 基因工程的基本操作程序复习目标1、简述基因工程原理及基本操作程序。
2、尝试设计某一转基因生物的研制过程。
复习重点基因工程基本操作程序的四个步骤。
复习难点（1）从基因文库中获取目的基因。
（2）利用PCR技术扩增目的基因。
预学案一、目的基因的获取：1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的。
2．获取目的基因的常用方法(1)从基因文库中获取目的基因①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多，导人受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。
基因组文库：含有一种生物的基因②种类部分基因文库：含有一种生物的基因，如文库。
③建立目的：为获得大量的目的基因作准备。
④目的基因的获取根据目的基因的有关信息：基因的序列、基因的、基因在上的位置、基因的产物mRNA、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。
(2)利用PCR技术扩增目的基因。
①PCR：是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术。
②条件：有一段已知目的基因的序列。
③过程：目的基因DNA受热后解旋为，与结合，然后在的作用下进行延伸形成DNA。
④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数)(3)化学合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以通DNA合成仪用化学方法直接。
例1、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是：①从基因文库中获取目的基因；②利用PCR技术扩增目的基因；③反转录法；④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③二、基因表达载体的构建1．表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因等。
2．启动子：位于基因的，它是的部位，驱动基因转录产生mRNA。
3．终止子：位于基因的，终止。
4．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以给下一代；使目的基因能够和发挥作用。
5．标记基因：作用是受体细胞是否含有目的基因。
6．由于受体细胞有植物、动物、微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。
高考生物一轮复习1.1DNA重组技术的基本工具、基因工程的基本操作程序学案新人教版选修3
【高考新动向】1、基因工程的出生2、基因工程的原理及技术【考纲全景透析】一、基因工程的工具1、基因工程的观点：依据人们的梦想，进行严格的设计，并经过体外DNA重组和转基因等技术，给予生物以新的遗传特征，进而创建出更切合人们需要的新的生物种类和生物产品。
因为基因工程在DNA分子水平长进行设计和施工的，所以又叫做DNA重组技术。
2、 DNA重组技术的基本工具（1）限制酶——分子手术刀全称：限制性核酸内切酶根源：主要从原核生物中分别纯化出来特色：辨别双链 DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
结果：产生黏性尾端或平尾端（2） DNA连结酶——分子缝合针种类：依据酶的根源不一样，可分为E· coliDNA 连结酶和T4DNA连结酶作用：连结双链DNA片段，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二脂键。
（3）载体——分子运载体种类：往常利用质粒作为载体，此外还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等质粒：化学实质：小型环状 DNA分子特色：能自我复制有一个至多个限制酶切割位点有特别的标记基因二、基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取门路（ 1）目的基因：编码蛋白质的构造基因。
（2）获取目的基因的方法：从基因文库中获取利用 PCR技术扩增目的基1（3） PCR技术扩增目的基因①原理： DNA双链复制②过程：第一步：加热至 90～ 95℃ DNA解链；第二步：冷却到55～ 60℃，引物联合到互补DNA链；第三步：加热至70～ 75℃，热稳固DNA聚合酶从引物开端互补链的合成。
2、基因表达载体的建立是实行基因工程的第二步，也是基因工程的中心。
（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳固存在，并且能够遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
（2）构成：目的基因＋启动子＋停止子＋标记基因（如抗生素基因）①启动子：是一段有特别构造的 DNA片段，位于基因的首端，是 RNA聚合酶辨别和联合的部位，能驱动基因转录出 mRNA，最后获取所需的蛋白质。
高三生物导学提纲基因工程的基本工具和基本操作程序
选修3专题一基因工程第1、2节基因工程的基本工具和基本操作程序一、基础知识1.DNA重组技术的操作工具（DDNA重组技术的基本工具是 ________________ . _______________ 、_______________ 。
限制酶的特点是___________________________ ，其含义是___________________________ 。
（2）DNA连接酶一一“分子缝合针”DNA连接酶作用于两个DNA片段，连接形成 ___________________ （化学键），其中E wli DNA 连接酶只能缝合DNA的 ____________________ , T4DNA连接酶既可缝合DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的 ___________________ o（3）基因进入受体细胞的载体一一“分子运输车”1.载体的种类a.质粒。
它是一种裸您的、结构简单、独立于细菌染色体之外，并能够自我_______________ 的双链 ___________ DNA分子。
b.入噬菌体的衍生物。
c.动植物病毒。
II.载体的特点a.能够在细胞内______________________________ ob.有一个或多个____________ 切割位点，便于供源DNA插入。
c.具有______________ 基因，供重组DNA的鉴定和选择•2.基因工程操作实质基因工程的操作水平为_____________________ ，操作环境为_______________ ,操作对象为_________________________ ，其实质是将供体生物中的目的基因转移到受体生物中并在受体生物中合成相应蛋白质，该过程产生的可遗传变异为__________________ （基因突变、基因重组、染色体变异）。
3.基因工程操作原理目的基因在另外一种生物体内表达的含义是 _____________________________ ，该过程说明了（从遗传物质结构与功能的基本单位和密码子及组成蛋白质的氨基酸种类组织答案）：目的基因与运载体拼接成功说明______________________________________________________________________ （DNA的空间结构、基本单位.碱基互补配对三个方而组织答案）：拼接成功的结构基础为（从基本单位考虑4.操作步骤操作的四个步骤为____________________ 、 ____________________ 、__________________ 、_______________________________________________________________________________ O（DPCR扩增条件及表达载体的组成PCR扩增条件： ___________________________________________________________________ （7个）。
高三一轮复习生物：基因工程的基本操作程序课件
基因工程的基本操作程序
1.目的基因的获取 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定
阅读教材第8-11页，思考以下问题： 1. 什么是目的基因？ 2. 获么？其概念、原理、结果分别是什么？ 6. PCR需要哪些条件？ 7. PCR的大致过程是？ 8. 什么情况下可以用人工合成法合成DNA？
三、将目的基因导入受体细胞
阅读教材12-13页，思考以下问题： 1. 什么是转化？ 2. 基因工程中的受体细胞有哪些？ 3. 用什么方法将目的基因导入受体细胞？ 4. 农杆菌转化法利用了农杆菌的什么特性？ 5. 农杆菌转化法的操作过程？
6. 用花粉管通道法导入受体细胞的目的基因需要和载体结 合吗？
花粉管通道法
植物花粉在柱头 上萌发后，花粉管要 穿过花柱直通胚囊。 花粉管通道法就是在 植物受粉后，花粉形 成的花粉管还未愈合 前，剪去柱头，然后， 滴加DNA（含目的基 因），使目的基因借 助花粉管通道进入受 体细胞。
转基因抗虫棉
2. 将目的基因导入动物细胞
方法：显微注射法
具有全 能性
目的基因表达载体提纯cDNA的构建某种生物某个时期的mRNA
逆转录酶
cDNA（单链DNA）
DNA聚合酶
双链DNA
与运载体连接分基因的比较类型 大小cDNA小
基因组大基因中启动子无
有
基因中内含子
无
有
基因多少
某种生物的部分基因 某种生物的全部基因
2.基因表达载体的组成：
复制原点＋启动子＋插入基因＋终止子＋标记基因
复制原点：
DNA复制从特定部位开 始，这一部位叫复制 原点。原核生物只有 一个复制原点，真核 生物有多个复制原点。
2018高考生物专题精讲课件：25.基因工程
动物基因的结构与人类 基因结构
基因的结构基本相同
细菌和酵母菌等生物基 因的结构与人类基因的 结构有较大差异
基因表达
细菌细胞内没有内质网、 合成的药物蛋白与天然
高尔基体等细胞器，产生 蛋白质相同
的药物蛋白可能没有活性
受体细胞
动物的受精卵
微生物细胞
导入目的基 因的方式
显微注射法
感受态细胞法
生产条件
需严格灭菌，严格控制工 不需严格灭菌，温度等
(5)蛋白质工程是先设计蛋白质的结构与功能，再反推其基因结 构，然后从基因的水平进行改造，从而对蛋白质进行改造或制 造出自然界没有的蛋白质，两者都是从分子水平进行操作，但 基因工程只能合成天然存在的蛋白质。 答案 (1)蛋白质工程 基因工程 胚胎移植技术(任写两种) (2)推测应有的氨基酸序列 基因表达载体 (3)DNA(核酸)分子杂交 促性腺激素 (4)改造后的基因能够遗传(且改造基因易于操作) (5)B
的蛋白质
联系
①蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的 第二代基因工程 ②基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白质 工程进行修饰、改造
2.比较乳腺生物反应器与工程菌生产药物
比较项目 乳腺生物反应器
工程菌
含义
乳腺生物反应器是指使 外源基因在哺乳动物的 乳腺中特异表达，利用 动物的乳腺组织生产药 物蛋白
工程菌是指用基因工程 的方法，使外源基因得 到高效表达的菌类细胞 株系
基因 把正常基因导入病人体内，使其表达产物发挥作用, 治疗 从而治疗疾病，分为体内基因治疗 和体外基因治疗
2.蛋白质工程 (1)概念理解 ①基础：蛋白质分子的 结构规律 及其与生物功能的关系。 ②操作： 基因修饰 或基因合成。 ③结果：改造了现有蛋白质或制造出 新的蛋白质 。 (2)操作过程：从预期的 蛋白质功能 出发→设计预期的 蛋白
高考必刷题基因工程的基本工具和操作程序 含答案
基因工程的基本工具及操作程序1某重点实验室课题研究组欲将一株野生杂草的抗病基因转给一双子叶农作物．该农作物含有高茎基因，植株过高容易倒伏，科学家欲通过基因工程操作抑制高茎基因的表达．基于上述目的科学家进行了基因工程的相关操作，结合所学知识分析下列问题：（1）课题研究组已经获得了抗性基因，欲体外大量扩增该目的基因需采用__ _技术，该技术的基本反应过程：目的基因受热变性后解链为单链，_ __与单链相应互补序列结合，然后在__ _的作用下进行延伸．（2）基因工程操作的核心是_ __，该过程用到的工具酶有__ _．本研究中，欲将目的基因转入受体细胞，常采用__ _法．答案：（1）PCR引物Taq酶（热稳定性DNA聚合酶）（2）基因表达载体的构建DNA连接酶和限制酶农杆菌转化3 RT-PCR是将RNA逆转录（过程Ⅰ）和cDNA的聚合酶链式扩增反应（过程Ⅱ）相结合的技术，具体过程如图1所示，图2为某兴趣小组设计的引物。
请分析回答下列问题：（1）过程Ⅰ主要涉及的酶是______。
进行过程Ⅱ的反应体系中常用的酶是______，二者都能催化______键的形成。
（2）过程Ⅰ和过程Ⅱ利用的原料______（填“相同”或“不同”或“不完全相同”）。
一般情况下，引物A和B的长度越长，G和C比例越高，则过程Ⅱ内循环步骤中的______（填“变性”或“退火”或“延伸”）温度设定就越高。
（3）该兴趣小组实验后发现几乎不能得到扩增产物，据图2分析其原因是__ ____。
改正后，过程Ⅱ中拟对m个单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要____ __个引物B。
（4）利用RT-PCR技术获取真核生物的目的基因通过转基因技术______（选填“可以”或“不可以”）在原核细胞中正确表达。
2答案：（1）逆转录酶Taq酶（耐高温的DNA聚合酶）磷酸二酯（2）相同退火（3）引物B自身会出现局部碱基互补配对（自身折叠）而失效m×（2n-1）（4）可以5 将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图．请据图回答：（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在______酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在______作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的______序列，推测出响应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的______序列，再通过化学方法合成所需基因．（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有______、______、4种脱氧核糖核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成．（3）由A和载体B拼接形成的C通常称为______．（4）在基因工程中，常用Ca2+处理D，其目的是___ ___．答案：（1）逆转录；DNA聚合酶；氨基酸；脱氧核苷酸；（2）引物；模板（A基因）；（3）基因表达载体；（4）使其成为感受态细胞，有利于吸收重组DNA分子；6 酵母菌的维生素、蛋白质含量高，可生产食品和药品等．科学家将大麦细胞的LTP1基因植入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌种可产生LTP1蛋白，并酿出泡沫丰富的啤酒．基本的操作过程如下：（1）该技术定向改变了酵母菌的性状，这在可遗传变异的来源中属于_ __．（2）获取LTP1基因需要用到限制酶，此酶可以断开两个脱氧核苷酸间的___ （化学键）；然后用__ _技术扩增LTP1基因；为了将LTP1基因导入酵母菌细胞内，所用的运载体是质粒，除此之外，还有__ _和动植物病毒也可作为基因工程中的运载体．（3）此操作中可以用分别含有青霉素、四环素的两种选择培养基进行筛选，则有C进入的酵母菌在选择培养基上的生长情况是：在含有青霉素的培养基上_ __（能，不能）存活，在含有四环素的培养基上__ _（能，不能）存活．（4）C的组成部分中有一个叫做_ __，它是RNA聚合酶识别和结合部位．（5）除了看啤酒泡沫丰富与否外，还可以用__ _来检测LTP1基因在啤酒酵母菌中是否表达LTP1蛋白．答案：（1）基因重组（2）磷酸二酯键PCRλ噬菌体的衍生物（3）能不能（4）启动子（5）抗原-抗体杂交7 如图甲为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度．请据图回答：（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是_ __、__ _．（2）如果是两两重组，可能有___种长度的重组结果．（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤．现运用_ __酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和__ _kb，或者_ __kb和_ __kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）．（4）将筛选含有目的基因的重组质粒导入大肠杆菌的载体可以是__ _（多选）．A．质粒B．动物病毒C．噬菌体D．植物病毒（5）PvuⅠ能识别的序列和切点是-G↓GATCC-请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图．答案：（1）缺少标记基因复制原点被限制酶切割（2）3（3）EcoRⅠ5.6 3.1 3.6（4）A C（5）。
高考高考生物一轮复习专题一基因工程基因工程的基本工具、基因工程的基本操作程序课件新人教选修3
2．外源基因在受体内表达的理论基础 (1)________ 基因 是控制生物性状的独立遗传单位。
中心法则 (2)遗传信息的传递都遵循______________ 。
(3)生物界共用一套____________ 遗传密码 。 3．基因工程的基本工具 (1) 限 制 性 核 酸 内 切 酶 ： 切 割 DNA 的 工 具 是
复制 ，有一个 条件：能在宿主细胞中保存下来并大量_______
限制性核酸内切酶 切 割 点 ， 有 特 殊 的 遗 传 至 多 个 ___________________
_____________ 标记基因 ，便于筛选。
质粒 种 类 ： __________( 常用)、λ 噬菌体的衍生物、
______________ 动植物病毒 。
【典例精析】 【例 1】下列有关基因工程叙述错误的是( A ) A． 基本原理是 DNA 具有双螺旋结构以及遗传信 息传递和表达方式相同 B．最常用的载体是质粒 C． 工具酶主要有限制性核酸内切酶和 DNA 连接 酶 D．该技术人为地增加了生物变异的范围，实现 种间遗传物质的交换
【解析】基本原理是 DNA 具有双螺旋结构以及 生物共用一套遗传密码子，A 错误；基因工程中最常 用的载体是质粒，B 正确；基因工程所用工具酶主要 有限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶，C 正确；基因 工程技术能人为地增了生物变异的范围 ，实现种间遗 传物质的交换，D 正确。
2.DNA 连接酶与 DNA 聚合酶的比较 DNA 连接酶 DNA 聚合酶 都是催化两个 作用实质 核苷酸之间形 成磷酸二酯键 是否需模板 不需要 需要 连接 DNA 链 单链 单链 将单个核苷酸加到 在两个 DNA 片 已存在的核酸片段 作用过程 段之间形成磷 的 3′端的羟基上， 形 酸二酯键 成磷酸二酯键 将存在的 DNA 作用结果 片段连接成重 合成新的 DNA 分子 组 DNA 分子
高考生物一轮复习 1.2基因工程的基本操作程序
三、将目的基因导入受体细胞
• 转化:目的基因进入受体细胞内， 并且在受体细胞内维持稳定和 表达的过程。
1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍： （基因枪法和花粉管通道法）
⑥结果：
短时间内大量扩增目的基因
PCR技术与体内DNA复制的区别： 1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要； 2. PCR需要热稳定DNA聚合酶（Taq酶）， 而生物体内的聚合酶在高温时会变性；
3.PCR不需要ATP,体内DNA复制需要。
（3）人工合成法：
如果基因较小，核苷酸序列又 已知，可以通过DNA合成仪用化学 方法直接人工合成
终止子： 位于基因的尾端的一段特殊的 DNA片断，使转录在所需要的地 方停止下来。
标记基因：
鉴别受体细胞中是否含有目的基因， 从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
基因表达载体的 构建步骤：
1.用一定的_限__制__酶____切割 质粒，使其出现一个切 口，露出__黏__性__末__端____。
2.用_同__一__种__限__制__酶__切断目 的基因，使其产生_相__同__ 的_黏__性__末__端_____。
成DNA单链 b、系统温度降低，引物与DNA单链相应互
补序列结合。 c、合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸，
合成与模板互补的DNA，重复循环。
④条件：一段已知目的基因的核苷酸序列 、 四种脱氧核苷酸 、 一对引物 、热稳定DNA聚合、酶
⑤方式：以_指__数__方式扩增，即_2_n__（n为扩增循
环的次数）
高考生物一轮复习：第讲基因工程的基本工具与操作程序教学课件
高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt
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栏 目 导 航
过基础 ·自我排查 抓核心 ·解疑释惑 验效果 ·随堂演练
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高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt 高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt
抓核心 ·解疑释 惑
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第1讲 基因工程的基本工具与操作程序
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析考情·明确考向
考查内容 等级要求 五年考情
素养体现
基因工程的
诞生
A
生命观念：熟练说出DNA 重组技术的基本工具及其
作用、特点；
科学思维：简述基因工程
2018年T32； 基本操作程序，以及各步 2017年T33； 骤的一般方法、原理，构
二、 基因工程的基本工具
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三、 基因工程的操作程序 1. 基本操作程序
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