1株高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化

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一株高效微生物絮凝剂产生菌的分离、鉴定及其对富营养化水体的处理研究中期报告

一株高效微生物絮凝剂产生菌的分离、鉴定及其对富营养化水体的处理研究中期报告
本次研究旨在分离、鉴定一株高效微生物絮凝剂产生菌，并研究其
对富营养化水体的处理效果。

首先，从土样、水样中筛选出多株具有絮凝作用的微生物，并通过
形态特征、生理生化特性、分子生物学等手段对其进行鉴定，最终确定
一株产生高效微生物絮凝剂的菌株。

接着，对该菌株的菌液进行初步优化培养条件，得到最佳生长条件。

并通过单因素试验和正交试验，确定影响微生物絮凝剂产量和活性的主
要因素及其水平，最终确定了较为优化的培养条件。

在此基础上，对该微生物絮凝剂的絮凝性能进行了评估和优化，结
果显示：在最佳生长条件下培养获得的菌液中，微生物絮凝剂的相对含
量达到了最高值，且在最佳pH值和最佳初始质量浓度下，其絮凝率最高。

最后，对该微生物絮凝剂在富营养化水体处理中的应用进行了初步
探索。

结果表明：该微生物絮凝剂可有效地絮凝富营养化水体中的藻类、悬浮颗粒等污染物，并有效改善了水体水质。

综上所述，该研究提供了一种新型的高效微生物絮凝剂产生菌，为
富营养化水体治理提供了一种新思路和新方法。

后续研究需要进一步优
化和探索其在水体处理领域的应用潜力。

高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件研究

高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件研究微生物絮凝剂是利用微生物菌株产生的特殊物质，能够在水中吸附、结合悬浮的颗粒物，加速其沉降和分离。

为了开发高效的微生物絮凝剂，需要对产生菌株进行筛选并优化其培养条件。

本文将对高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件进行研究。

首先，对高效微生物絮凝剂产生菌的筛选是关键。

可以从自然环境中采集含很高浊度的水样，如污水处理厂出水口、湖泊或河流等，然后进行菌落筛选。

将水样稀释后接种在絮凝剂作用相关基质上，例如含有多糖、蛋白质等的琼脂平板上，利用菌落形态和色素等性状筛选出菌株。

筛选出的菌株需要经过初步的絮凝性能检测，可以采用旋转絮凝法或沉降实验等方法评价其絮凝效果。

选择絮凝效果较好的菌株进行进一步的研究。

接下来，需要对菌株的培养条件进行优化。

菌株的培养条件包括温度、pH值、培养基组分等方面。

首先是温度的优化。

不同菌株对温度的适应范围有所不同，需要通过调整培养温度来提高絮凝效果。

可以在不同温度下进行培养，比较其絮凝效果，找出菌株的最适生长温度。

其次是pH值的优化。

菌株在不同pH值下的生长和絮凝效果也会有所差异。

可以通过改变培养基的初始pH值来研究菌株的最适生长pH范围。

最后是培养基组分的优化。

培养基的优化包括碳源、氮源、无机盐等组分的选择和浓度调节。

可以尝试不同的碳源和氮源，比较不同组分对菌株絮凝性能的影响，并通过改变浓度来优化菌株的产量和絮凝效果。

此外，还可以通过添加激素、维生素等辅助因子来提高菌株的絮凝性能。

这些辅助因子可以在培养基中添加，比如添加微量的铜离子、锌离子等金属离子，可以有效提高菌株的絮凝效果。

总之，高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件研究需要从自然环境中筛选出具有絮凝能力的菌株，并通过优化温度、pH值、培养基组分等条件来提高菌株的絮凝效果和产量。

这些研究成果对于开发高效的微生物絮凝剂具有重要的指导意义。

一株微生物絮凝剂产生菌的筛选及絮凝活性研究

一株微生物絮凝剂产生菌的筛选及絮凝活性研究郭嘉昒;柴涛;王敏;李玉平【摘要】从中北大学生活污水中筛选得到一株稳定高效的微生物絮凝剂产生菌,初步鉴定该菌株为韦荣氏菌(Veillonellaceae Rogosa-W23).该菌株适宜培养温度为35℃,最适pH=8.0,最佳碳源为葡萄糖.Veillonellaceae Rogosa-W23所产微生物絮凝剂成分鉴定为还原性糖.该微生物絮凝剂对高岭土悬浮液的絮凝率可达95.1%.絮凝对比试验发现:该絮凝剂优于高分子絮凝剂PAC,其对黄土悬液、纳米级铜-碳-石墨悬液也有良好的絮凝效果.【期刊名称】《工业水处理》【年(卷),期】2010(030)011【总页数】4页(P37-40)【关键词】絮凝剂产生菌;微生物絮凝剂;絮凝活性【作者】郭嘉昒;柴涛;王敏;李玉平【作者单位】四川科技职工大学,四川成都,610101;中北大学化工与环境学院,山西太原030051;中北大学化工与环境学院,山西太原030051;中北大学化工与环境学院,山西太原030051【正文语种】中文【中图分类】X172絮凝剂广泛用于工业废水处理、工业用水处理以及食品生产和发酵工业等。

传统絮凝剂一般可分为：无机絮凝剂、有机合成高分子絮凝剂、天然有机高分子絮凝剂等3类〔1〕。

其中许多无机絮凝剂和有机合成高分子絮凝剂由于其良好的絮凝效果和较低成本，已经被广泛应用。

然而，它们在使用过程中存在着较大的风险和潜在的二次污染问题〔2〕。

微生物絮凝剂是一类由微生物产生并分泌到胞外的代谢产物，被称为第三代絮凝剂，其优点〔3〕：高效性、安全无毒性、无二次污染、用途广泛、脱色效果独特、投放量相对少、去除效率高。

近年来，生物絮凝剂受到极大关注，是一种有着良好发展前景的新型絮凝剂。

笔者从中北大学生活污水中筛选到一株高活性生物絮凝剂产生菌，并对其絮凝活性进行了研究。

恒温振荡培养箱，立式压力蒸汽灭菌箱，无菌操作台，光学显微镜，721型分光光度计，电子天平，万用电炉。

微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件的研究

维普资讯
２０年２月０８第２期（总第１）１期１
广西轻工业
ＧＡＧＩＯＲＡＦＬＨＤＳＲＵＮＸＵＮＬＯＩＴＩＵＴＹＪＧＮ食品与生物
微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件的研究
表２不同氮源对该茵生絮凝荆的影响
氮源蛋白胨牛肉青豆芽汁马铃薯汁 №ｌＮ卜０ ⅡＮ３
１材料与方法
１１菌种来源．污水沟污水和污水处理厂的活性污泥。１２培养基．蔗糖３ｇＬＮａ０．／，Ｍｇ０，Ｈ：．Ｌ，Ｋ１０／，Ｎ３３０ＬｇＳ４７０５０Ｃ０５／ｅＯ．ｇＬＫＨＰ．／，Ｈ自然。．ｇＬＦＳ４０１／，２Ｏ４１Ｌｐ００ｇ
１５培养基组分和培养条件对该茵产絮凝剂的影响．改变培养基碳源、源、氮初始ｐ培养时间、Ｈ、培养温度及摇床振荡速度等条件，测定培养液絮凝率。
二
蓉ｏ４
！Ｏ
培＃时间（ｒｈ）
图２３￣时培养时间对絮凝活性的影响０２（
絮凝取％４．）７６
５．６８．８７６
８６Ｚ
骶２
５．５３
２２３培养基初始ｐ．．Ｈ值的影响实验结果表明，Ｈ值在５ — ，菌体生长量多，ｐ．７００时，絮凝效果好。尤其是ｐＨ值在６．菌体生长最好，０时，絮凝率接近９％。０
２．．４培养时间的影响２
２结果与讨论

微生物絮凝剂产生菌的筛选_鉴定及其培养条件的优化研究

中国生物工程杂志　China B i otechnol ogy,2005,25(8):76～81微生物絮凝剂产生菌的筛选、鉴定及其培养条件的优化研究3陶　然　杨朝晖33　曾光明　邓恩建　李　晨(湖南大学环境科学与工程系　长沙　410082)摘要　采用常规细菌分离方法从土壤中筛选出一株高效絮凝剂产生菌,编号为B6。

经过形态学特征、生理生化反应及16S r DNA 序列(GenBank accessi on No .DQ115363)同源性比较鉴定该菌株为恶臭假单胞菌,命名为Pseudo m onas putida B6。

对其培养基进行研究,确定其最佳的碳源和氮源,并通过正交试验确定其最佳的培养基成分配比(ρ/g L 21)为葡萄糖15、果糖3、KH 2P O 41.0、K 2HP O 43.0、MgS O 40.1、NH 4NO 30.8、(NH 4)2S O 41.5、酵母汁0.2、NaCl 0.1。

同时对其培养条件进行研究,确定最佳的培养基初始pH 值为8.0、培养温度为30℃、摇床速度为160r/m in,以及产絮凝剂的周期变化过程。

用高岭土悬浮液对其絮凝条件进行研究,确定培养液最佳的絮凝条件。

关键词　微生物絮凝剂　絮凝微生物　16S r DNA 序列　培养条件　正交试验收稿日期:2004212226 修回日期:20052072113国家自然科学基金资助项目(50478053),湖南省自然科学基金资助项目(04JJ3004),湖南大学科学基金重点资助项目33通讯作者,电子信箱:yzh@hnu .cn 微生物絮凝剂(MBF )是由絮凝微生物在生长过程中代谢产生的一类具有絮凝活性的高分子化合物,能够聚集、沉淀水中的悬浮颗粒、金属离子、色素及有机物质,具有絮凝效果好、可生物降解的特性,对环境和人类无毒无害,不会产生二次污染,是一种高效安全的絮凝剂[1],因此越来越受到研究者的关注。

目前国外的研究者已经开发出一系列微生物絮凝剂[2～6],有的已经应用到相关废水处理和工业处理中[7～10]。

一株絮凝剂高效产生菌的筛选及对炼油废水絮凝特性的研究

刘其友等一株絮凝剂高效产生菌的筛选及对炼油废水絮凝特性的研究
一
株絮凝剂高效产生菌的筛选及对炼油废水絮凝特性的研究＊
刘其友宗明月张云波宋超群赵东风
（国石油大学（东）学化工学院，东中华化山青岛２６５）６５５
Ａｂｔａｔ２３ｓｒｉｗｅｅｓａｅｆｏｍａｔｖｔｄｌｇｅｎｄｏｌｂｙｏｎｎｉｎａｓａｉｎｎｐｕｉｉａｉｓｒｃ：７ｔａｎｓｒｉｏｌｔｄｒｃｉａｅｓｕｄａｓｉｃｖｅｔｏｌｉｏｌｔｏａｄｒｆｃｔｏｎｍｅｈｏｔｄ．Ａｇｆｉｉｎｔｆｏｃａ — ｒｄｕｉｔａｎ，ｗｈｉｈｏｓｅｓｎｇｐｅｆｃｌｃｕｌｂｉｉｙａｔｂｌｔｓｓｒｅｅｈｉｈｅｆｃｅｌｃｕｌｎｔｐｏｃｎｇｓｒｉｃｐｓｓｉｒｅｔｆｏｃａｌｔｎｄｓａｉｉｙｗａｃｅｎｄ
摘要采用常规的细菌分离纯化方法从土壤和活性污泥中分离出２７３株菌株，通过考察菌株的絮凝能力及稳定性，中筛选从
出一株絮凝剂菌，名为ＨＴ１２根据其生理生化实验结果，步鉴定该菌株为芽孢杆菌属（ａｉｕ）命 —，初Ｂｃｌｓ。对ＨＴ１２的培养条件进行ｌ —
Ｑｉｏ，ＯＮＧｎｙｅＺＨＡＮＧｎｏ，ｙｕＺＭｉｇｕ，ＹｕｂＳＯＮＧａｑｎ，ＣｈｏｕＺＨＡＯｎｆｎ（ｌｅｅｏＣｈｍｉｔｙａｄＣｈｍｉａＤｏｇｅｇ．ＣｏｌｇｆｅｓｒｎｅｃｌＥｎｉｅｒｎＣｉａＵｎｖｒｉｆｔｏｅｍ（ｓｈｎ，ｎａｈｎｏｇ２６５）ｇｎｅｉｇ．ｈｎｉｅｓｔｏＰｅｒｌｕｙＥａｔｉａ）ＱｉｇｄｏＳａｄｎ６５５Ｃ

高效微生物工程菌株的筛选及优化

高效微生物工程菌株的筛选及优化随着生物技术的不断发展，微生物在各行各业中的应用越来越广泛。

微生物工程菌株的筛选与优化是微生物工程领域中的重要环节，其目标是寻找到具有优异代谢能力、高度稳定性以及生长速度迅猛的微生物菌株。

此外，对于某些需要大量生产的生物工程产物而言，更是需要选出高效稳定的微生物菌株。

一、微生物工程菌株的筛选微生物工程菌株的筛选是一个关键的环节，它涉及到许多因素，如微生物菌株种类，抗菌素敏感性，特定基因的表达等等。

在筛选过程中，需要通过相应的技术手段，比如PCR、酶切和基因突变等分析手段，以确定微生物细胞中目标基因是否存在。

1. 过筛条件的选择在微生物工程菌株的筛选过程中，过筛条件的选择是至关重要的。

过筛条件的选择需要结合微生物菌株的基本特性以及生长环境的影响因素，比如温度、pH值、气体压力等等。

此外，也需要考虑筛选目标，如酶活性、代谢产物、结构蛋白等等。

因此，筛选条件的选择需要在实验室条件下进行优化，以取得尽可能高的筛选效果。

2. 筛选方法的选择在进行微生物工程菌株的筛选过程中，需要结合不同的筛选方法，如自然选择法、突变体筛选法、抗性筛选法等等。

自然选择法是指通过自然变异选择具有目标性状的微生物菌株，此方法适用于产物代谢能力的增强和酶的改变。

突变体筛选法适用于产物增加和酶的改进。

抗性筛选法是指利用抗生素、毒素等化合物筛选微生物菌株，此法用于筛选高抗菌素的微生物菌株。

3. 微生物菌株的生长条件在微生物工程菌株筛选过程中，对于微生物菌株的生长条件的控制也是至关重要的。

微生物菌株需要维持一系列合适的环境条件，包括适宜的pH值、维生素和氮源和细胞透明质酸等条件保证细胞的快速生长。

二、微生物工程菌株的优化在微生物菌株筛选过程中，一旦有了具备筛选条件的微生物菌株，接下来就是进行微生物菌株的优化。

针对微生物菌株的优化，主要是优化内部代谢道路的设计，以及优化生长环境的条件，以达到更好的菌株效率和产量。

高效生物絮凝剂产生菌的筛选及培养优化

高效生物絮凝剂产生菌的筛选及培养优化陈成;刘人荣;夏祥;邱成书;谢翼飞;陈存【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)006【摘要】[目的]筛选和优化高效生物絮凝剂产生菌.[方法]从活性污泥中分离筛选得到1株高活性的生物絮凝剂产生菌株B17,从生理生化特征、形态特征等方面对该菌进行初步鉴定,采用单因素试验优化培养时间、碳源、氮源、碳氮比、初始pH、接种量等培养条件.[结果] B17为克雷伯氏菌属(Klebsiella SP.).优化后发酵培养基的碳源为乳糖,氮源为乙酸铵,碳氮比为20∶1,发酵初始pH为6.0～7.0,接种量为3％,在该最优组合的发酵条件下以30℃、160 r/min培养24h,絮凝活性可提高25.0％～ 38.3％.[结论]该研究可为筛选高效的絮凝剂产生菌、优化菌株的培养条件、提高絮凝剂的活性提供借鉴.【总页数】4页(P52-54,61)【作者】陈成;刘人荣;夏祥;邱成书;谢翼飞;陈存【作者单位】成都师范学院化学与生命科学学院,四川成都611130;成都师范学院化学与生命科学学院,四川成都611130;中国科学院成都生物研究所,四川成都610041;成都师范学院化学与生命科学学院,四川成都611130;中国科学院成都生物研究所,四川成都610041;成都师范学院化学与生命科学学院,四川成都611130【正文语种】中文【中图分类】S181【相关文献】1.2种微生物絮凝剂高效产生菌的筛选和培养条件的优化 [J], 邓冬梅;彭晓春;陈志良;董家华;刘旺;杨兵2.1株高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化 [J], 欧红香;闫永胜;毛艳丽;朱红力;依成武3.高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化 [J], 林瞻;刘旭;陈亚飞;董新姣4.高效微生物絮凝剂产生菌XNJ1的筛选与絮凝条件优化 [J], 王融;刘云鹏;霍远涛;郭元飞;李顺鹏;蒋建东5.一种高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养基优化 [J], 周礼;张永奎;陈晓;李万全;徐绍霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一株高活性产絮微生物的筛选及其培养条件优化

技研究开发计划课题（ＮＯ：０００１Ｅ２１Ｚ０一）国家自然科学基金项目
（：０７３４。ＮＯ３８０８）
１实验材料与方法１１菌种来源．
作者简介：褚可成（９５，，，北人，１８一）男汉河研究生；研究方向：资源与环境微生物。
中图分类号：７７Ｘ８文献标识码：Ａ文章编号：ＧБайду номын сангаас１０７（０２０－００（０－０９２１）２１－６
絮凝剂是一种应用广泛的水处理药剂，可使水筛选得到。９６，ａａｕａ．１７年Ｎｋｍｒｊ等人从霉菌、细菌、放
中不易沉淀的固体悬浮颗粒凝聚沉降．应用的絮线菌、目前酵母菌等菌种中筛选出ｌ９种具有絮凝能力的凝剂有无机高分子絮凝剂、有机高分子絮凝剂和天微生物，中以酱油曲霉（ｐｒｉｕｏａ）Ｊ０２产其Ａｓｅｇｌｓｕｅ７０ｌｓＡ１８ＴｋｇＨ等人研究了然生物高分子絮凝剂。其中，机高分子絮凝剂用量生的絮凝剂效果最好。９５年，ａａｉ无
采用兰州佛慈中药制药厂废水池旁的土壤作为
实验样品。
第２期
褚可成：株高活性产絮微生物的筛选及其培养条件优化展一
１２菌种筛选．
絮凝率）（ — ）ｘ０％＝ＡＢ／ｌ０ＡＡ对照上清液５０ｍ处的光密度值。Ｂ样品：５ｎ：
微生物絮凝剂可以克服无机高分子和合成有机高分好的絮凝和脱色效果，是目前发现的最好的微生物

1株絮凝剂高产菌的筛选及其培养条件优化

1株絮凝剂高产菌的筛选及其培养条件优化摘要:从污水中筛选到1株新型高效微生物絮凝剂产生菌N-7, 根据其形态特征､生理生化特性初步鉴定为杆菌｡该菌培养32 h进入稳定期,36 h时絮凝活性达到最大｡通过单因素试验和正交试验表明,菌株N-7最适培养基为初始pH 7.5､培养温度30 ℃､转速170 r/min,在此条件下,所产絮凝剂对高岭土悬液的絮凝率高达91.3%｡关键词:菌株筛选;微生物絮凝剂;正交试验;优化Screening of a High Flocculants-producing Bacteria Stain and Optimization of Culture ConditionsAbstract: A new high flocculants-producing bacteria strain N-7 was isolated from wastewater. It was preliminary identified as a bacillus based on its morphological and physiological characteristics. The bacteria reached stationary phase after been cultured for 32 h, and had the maximum flocculating activity after 36 h. According to single-factor and orthogonal test, the optimum flocculants-producing conditions were initial pH 7.5, temperature 30 ℃, rotation speed 170 r/min. The flocculation efficiency in Kaolin suspension reached to 91.3% under the optimized conditions. Key words: strain screening; bioflocculant; orthogonal test; optimization絮凝剂是一种可使液体中不易沉降的固体悬浮颗粒凝聚沉降的物质｡传统的絮凝剂按照其化学成分可分为无机絮凝剂和有机絮凝剂两类｡其中无机絮凝剂是指利用铁､铝等金属离子沉降液体中不易沉降的固体悬浮颗粒,有机絮凝剂主要是指聚丙烯酰胺等一些具有高絮凝性的有机试剂[1-3]｡传统的絮凝剂由于成本低而被广泛应用,但传统的絮凝剂存在二次污染现象,对人类身体健康和自然环境有潜在危害｡因此,开发高效､无毒､无二次污染的新型絮凝剂具有重要的意义[4]｡微生物絮凝剂是一类由微生物或其分泌物产生的代谢产物,其絮凝范围广､絮凝活性高,作用条件粗放,可以广泛应用于污水和工农业废水处理中｡由于其具有高效､安全､不污染环境的优点,在医药､食品加工､生物产品分离等领域也有巨大的潜在应用价值[5-10]｡由于微生物絮凝剂可以克服传统絮凝剂的缺陷,最终实现无污染排放,因此微生物絮凝剂的研究正成为当今世界絮凝剂方面研究的重要课题｡此前,国内外学者分离筛选出的产微生物絮凝剂的菌株有几十种｡国外对于微生物絮凝剂的应用部分已处于工业化,由于微生物絮凝剂成本较高､絮凝活性低,目前我国尚未广泛应用于工业化生产中,本试验从污水中筛选得到1株具有高效絮凝作用的菌株,通过对其絮凝条件的优化,以期为工业化应用奠定理论基础｡1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株来源试验菌株分离自沈阳仙女河污水处理厂以及沈阳西部污水处理中心收集的污水样品｡1.1.2 培养基牛肉膏蛋白胨培养基､高氏1号培养基､麦芽汁培养基､查氏培养基､PDA培养基｡1.1.3 菌株分离将污水充分振荡后,吸取1 mL悬浊液,加入到装有50 mL培养基的三角瓶中,160 r/min､28 ℃的条件下振荡培养24 h后取出,用去离子水将悬浊液稀释成浓度梯度为10-1~10-5的悬浊液｡分别吸取0.08 mL 悬液涂在筛选培养基平板上｡28 ℃培养2~5 d,用平板划线的方法反复划线,得到单一菌株｡1.1.4 模拟污水的制备以菌株对高岭土悬浊液的絮凝效果作为菌株是否具有絮凝作用的判断依据｡用化学纯高岭土和去离子水制成的4 g/L悬浊液作为模拟污水｡1.2 方法1.2.1 菌株富集培养与初筛在250 mL三角瓶中加入50 mL液体培养基,挑取筛选培养基上的单一菌株接种于液体培养基中,160 r/min､28 ℃振荡培养24 h｡采用高岭土悬浊液测试培养液的絮凝活性｡筛选出絮凝活性较高的菌株｡1.2.2 菌株复筛将初筛获得的有较高絮凝活性的菌株用平板划线法进行纯化分离,28 ℃恒温培养1~2 d,观察菌落生长情况｡待充分生长后选单个菌落接种于装有50 mL培养基的250 mL锥形瓶中扩大培养48 h,培养条件同初筛｡试验重复3次,筛选出絮凝率较为稳定的菌株作为本试验后续研究的出发菌株｡1.2.3 絮凝活性测定以高岭土悬浮液模拟实际废水,取浓度为0.4%的高岭土悬液100 mL 于250 mL三角瓶中,同时加入2 mL经培养24 h的菌液及5 mL CaCl2溶液,以只加5 mL CaCl2溶液､不加菌液的高岭土悬液作为对照,三角瓶充分振荡2 min,静置8 min,用移液枪吸取上清液,测定其在550 nm处的吸光度｡通过公式(1)计算出絮凝率[11-14]｡η=■×100% (1)式中:A为对照上清液550 nm处的吸光度;B为样品上清液550 nm处的吸光度｡1.2.4 絮凝条件的优化研究培养条件的优化:以筛选培养基的培养条件为基础,通过分别改变培养基的初始pH､培养温度､摇床转数和培养时间等条件测定发酵液对高岭土悬液的絮凝率,确定该菌种的最佳培养条件｡试验初始pH分别设为6.0､6.5､7.0､7.5､8.0､8.5､9.0,进行了3次平行试验;对培养温度分别设为24､26､28､30､32､34 ℃,进行了3次平行试验;对摇床转速分别为140､150､160､170､180 r/min 进行了3次平行试验｡2 结果与分析2.1 絮凝剂产生菌的筛选结果试验从牛肉膏蛋白胨培养基上分离得到13株菌,编号分别为N-1,N-2,……,N-13;从高氏1号培养基上分离得到7株菌,编号分别为G-1,G-2,……,G-7;从麦芽汁培养基上分离得到4株菌,编号分别为M-1,M-2,M-3,M-4;从查氏培养基上分离得到21株菌,编号分别为C-1,C-2,……,C-21,从PDA培养基上分离得到2株菌,编号分别为P-1,P-2｡上述菌株经初筛后得到18株具有絮凝作用的菌株｡经过复筛后得到6株絮凝率超过50%的菌株,分别为N-6,N-7,N-13,C-4,C-15,C-19｡以上6株菌通过反复接种传代3次后,菌株N-7的絮凝效果最稳定,因此本研究选取N-7作为后续试验菌株｡2.2 N-7菌落形态菌株N-7在牛肉膏蛋白胨培养基上形成橘黄色半透明菌落(图1),表面光滑､黏稠,单菌落直径0.4~0.6 mm｡生理生化试验表明,革兰氏染色阴性,无芽孢,接触酶试验阳性,甲基红试验阴性,V-P试验阴性,发酵产酸不产气,轻微水解淀粉,明胶液化试验阴性｡2.3 单因素试验结果2.3.1 培养时间将1 mL菌种液接于pH 7.0的发酵培养基中,于30 ℃､160 r/min摇床中培养,试验从第30小时起,每2 h取样进行絮凝率测定,共取7个时间点,结果如图2所示｡由图2可知,絮凝率随着培养时间的增加呈先升高再缓慢下降的趋势,在36 h处达到最高点89.0%,随后出现缓慢下降趋势,结合菌体生长曲线可知,菌体在32 h后开始进入稳定期,36 h时菌体数量和活性基本稳定,表明菌体此时产生微生物絮凝剂的效果最佳,随着培养时间的增加,菌体出现老化现象,菌体活性随之下降,菌体的絮凝效果也逐渐降低,因此本试验确定培养时间为36 h｡2.3.2 培养基初始pH 制备N-7菌株种子液,取1 mL种子液分别接种于初始pH为6.0､6.5､7.0､7.5､8.0､8.5､9.0的发酵培养基,30 ℃､160 r/min摇床培养36 h,取发酵培养基的菌悬液2 mL加入到高岭土悬浊液中,充分振荡后静置8 min,在550 nm的条件下测吸光值,进行3次平行试验,结果如图3所示｡由图3可知,培养基初始pH对菌体的絮凝效果有直接的影响,絮凝率呈先逐渐增加后缓慢下降的趋势,在pH为7.5时最大,达到81.2%｡因此菌体絮凝率达到最高的培养基的初始pH为7.5｡2.3.3 培养温度取1 mL N-7菌株的种子液分别接种于6瓶初始pH 7.5的发酵培养基中,温度分别设置为24､26､28､30､32､34 ℃,在转速为160 r/min的摇床培养36 h,取发酵培养基的菌悬液2 mL加入到高岭土悬浊液中,充分振荡后静置8 min,在550 nm的条件下测吸光值,进行3次平行试验,结果如图4所示｡由图4可知,培养温度对菌体的絮凝性也有较大的影响,絮凝率在24~28℃之间逐渐升高,从69.5%升高到87.3%;随后开始下降,因此最佳培养温度定为28 ℃｡2.3.4 培养转速取1 mL N-7菌株的种子液分别接种于5瓶初始pH 7.5的发酵培养基中,置于28 ℃､转速分别设置为140､150､160､170､180 r/min,振荡培养36 h｡取发酵培养基的菌悬液2 mL加入到高岭土悬浊液中,充分振荡后静置8 min,在550 nm的条件下测吸光值,进行3次平行试验,结果如图5所示｡由图5可知,转速的高低直接影响到菌体的生长繁殖以及代谢物的分泌,因此对絮凝率的影响也很关键,随着培养转速的不断增加,絮凝率呈现先升高后降低的趋势,在转速为160 r/min时达到最高点(87.2%),所以最佳培养转速定为160 r/min｡2.4 正交试验结果在单因素试验的基础上,以菌体絮凝性的大小为考察指标,采用L9(43)正交表,进行4因素3水平的正交试验｡正交试验设计与结果见表1｡由表1可知,4个因素对絮凝率影响大小依次为C､D､B､A,即培养温度的影响最大;结合k值可知,优化提取工艺是C3D3B2A2,即培养时间为36 h､初始pH为7.5､培养温度为30 ℃､培养转速为170 r/min｡按C3D3B2A2进行3次平行试验,测得平均絮凝率为91.3%,高于正交试验结果的最大值,因此认为正交试验得出的最优水平是可靠的｡3 结论从污水中筛选得到的新型高效微生物絮凝剂产生菌株N-7,经过正交试验优化得出其培养基在初始pH为7.5､培养温度30 ℃､摇床转速170 r/min､培养36 h时所产絮凝剂对高岭土悬液的絮凝率高达91.3%｡本试验菌株来自污水中,培养基成本低､易筛选,并且通过对絮凝条件的优化,絮凝效果较好,可以对工农业生产中的污水处理及环境保护起到一定的积极作用｡参考文献:[1] 陶然,杨朝晖,曾光明,等.微生物絮凝剂产生菌的筛选､鉴定及其培养条件的优化研究[J].中国生物工程杂志,2005,25(8):76-81.[2] 袁辉洲,李素清.产絮凝剂菌的优化培养与絮凝特性研究[J].桂林电子科技大学学报,2008,28(5):433-437.[3] 朱艳彬,马放,黄君礼,等.生物絮凝剂絮凝特性与絮凝条件优化研究[J].中国给水排水,2006,22(3):4-8.[4] 张娜,尹华,秦华明,等.微生物絮凝剂的稳定性及其对城市污水厂浓缩污泥的絮凝脱水[J].微生物学通报,2008,35(5):685-689.[5] 昝继轻,林炜铁.一株絮凝剂产生菌的筛选鉴定及培养条件[J].微生物学通报,2010,37(4):547-552.[6] 江蕙华,马森,方继敏.微生物絮凝剂产生菌的筛选及其絮凝活性研究[J]. 安徽农业科学,2011,39(15):8990-8993.[7] 史艳丹,刘永军.微生物絮凝剂产生菌的筛选及其絮凝特性[J].中国科技论文在线,2010,5(9):722-725.[8] 王卫平,朱凤香,陈晓旸,等.微生物絮凝剂的研究进展及其应用前景[J].安徽农学通报,2008,15(19):45-48.[9] 刘丽琼,张艳敏. 微生物絮凝剂的研究现状与发展趋势[J].四川环境,2009,28(6):109-114.[10] 薛广雷,王龙,郑洪领.微生物絮凝剂絮凝机理及絮凝效果影响因素[J].水科学与工程技术,2010(1):36-38.[11] 黄凯,李小明,曾光明,等.微生物絮凝剂产生菌的筛选及其培养条件研究[J].环境科学与技术,2005,28(1):12-13.[12] YOU Y, REN N Q,WANG A J,et al. 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以使水中不宜降解的固体悬浮颗粒、菌体细胞及胶体粒子等凝集、沉淀的特殊高分子聚合物。其易于分离，沉降效率高，
可降解，产物对环境无毒无害，降解不会产生二次污染，是一
类高效安全的絮凝剂。微生物的絮凝作用最先由法国的
ｌｔｇａｔｉｅｆｔｅｒｆｒｎｅｉｕｄｗｅｅｅａｕｔｄｔｒｕｈｃｌｕａｉｇｔｅｒｆｏｃａｉｇｒｔｓＦｎｌｔｅｏｔｍｕｔｒｏｄｔｎｆｔｅａｉｃｉｔｓｏｉｅｍｅｔｄｌｉｒｖｌａｅｈｏｇａｃｔｎＩｉｌｃｕｔａｅ．ｉａｙ．ｈｐｉｎｖｉｈｑｌｌｌｎｌｍｕｃｌｅｃｎｉｏｓｏｕｉｈ
ｔｎａｕｎｓ１ｉｍｏｔｗａ０％．ｄｒｔｉｏｄｔｎ．ｈｏｃａｉｇｒｔｓｏｒｎｅｉｕｄｆｏｔｅｓｒｉｏＵｎｅｈｓｃｎｉｉｔｅｆｃｕｔａｅｆｆｍｅｔｄｌｉｒｍｈｔａｎＭＣ３ｃｌｅｒ０ｈａｄ７ｒ２９％ｏｌｌｎｅｑｕｔｄｆｎ２ｈｗｅｅ９．ｒｕｏ６
土 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ：自校园绿化带及菜地。霉菌筛选用查取
氏培养基：ａＯ，２Ｐ４１ｇＫ１．，Ｓ４７２ＮＮ３ｇＫＨＯ，Ｃ５ｇＭｇＯ－ＨＯ２０
ｇＬＣＣ液，／ａＩ溶加塞上下颠倒１Ｏ次，然后加入２ｍ发酵液，ｌ加塞上下颠倒１，０次静置１ｉ，移液管取液面下约０５５ｍｎ用．ｅｍ处上清液测Ｏ，Ｄ记为曰，同上，不加发酵液，测定空白样
产奠定了试验基础。关键词茵株筛选；絮凝剂产生菌；培养条件；絮凝率中图分类号Ｓ８文献标识码Ａ１２文章编号０１６（０９３５７—６１２０）１—１１９—０ｌ５３２
ｓｒｅｉｇｏｃｅｎｎｆ柚ＥｍｃｅｔＰｏｕｃｎｃｅｉｌｏｉｒｂｉｌｎｏｃｌｎｔａｔｍｉａｉｎｏＩｓＣｌｔｒｎｄｔｏｉｎｒｄｉｇＢａｔｒｕｎｆＭｃｏａｃｕａｎｄＯｐｉｚｔｏｎｔＩｕｅＣｏｉｉｎＩ
ＫｅｒｓｙｗｏｄＳｒｉｃｅｎｎｔｎｓｒｅｉｇ；ＦＯＣｌｎ —ｐｏｕｉｇｓｒｉａＩＣｕａｔｒｄｃｎｔａｎ；Ｃｕｔｒｏｄｔｏｌｕｅｃｎｉｉｎ；Ｆｏｃｌｔｇｒｔｌｃｕａｉａｅｎ
微生物絮凝剂是一类由微生物在生长过程中产生的，可
株接种于查氏液体培养基中进行发酵，发酵温度３０℃ ，摇床转速１０ｒｍｎ发酵４７，发酵液的絮凝活性，８／ｉ，８— ２ｈ后测选择絮凝活性高且稳定的菌株，研究其培养条件。
１２２絮凝活性评价。在８０ｍ烧杯中配制４ｇＬ高岭土．．０ｌ／
２０世纪８０年代后期，日本在微生物絮凝剂开发方面取得了
引人瞩目的成果，仓根隆一郎等从土壤中筛选到红平红球菌
的ＳＩ菌株，制成ＮＣｌ微生物絮凝剂。此后，多国家－并Ｏ－许科学工作者对微生物絮凝剂及其产生菌进行了大量研究。其中，筛选高效新型絮凝剂产生菌、降低培养成本、
ｐｖｌｅｗａＨａＨｓ６．ｈｌｏｃｌｔｇｒｔｆｆｒｎｅｌｉｆｏｔｔｉｓｃｔｒｄｆｒｔｅｆｃｕａｉａｅｏｅｍｅｔｄｉｄｒｍｈｅｓｒｎｕｕｅｏ５ｈｗａ．ｎｕｑａｔ０ｓ８１Ｏ％．１ｅｏｔｍｕｃｌｕｅｃｎｉｉｎｏｈｔａｎ１１ｐｉｍｕｔｒｏｄｔｏｆｔｅｓｒｉ
ＭＣｓａｌｗ：ｔｅｓｃｏｅｉｚｐｋ’ ｄｕｗａｅｌｃｄｗｉｈｕ０ｅ，ｈｎｔｌｐｖｌｅｏｕｔｒｉｉａｄｔｅｉｏｕａ３ｗａｆｌｓｏｏｈｕｒｓｎＣａｅｓｍｅｉｍｓｒｐａｅｔｃｓｔｅｉｉａＨａＨｆｔｃｕｅｌｑｄｗｓ６ａｈｎｃｌ — ｉｈｅｔｕｎ
欧红香，胜，￣￣，闫永－４朱红力，ｔ依成武
（．１江苏大学环境学院，江苏镇江２２１；．１０３２江苏大学化学化工学院，江苏镇江２２１）１０３
摘要［目的］筛选出高效微生物絮凝剂产生菌并优化其培养条件。［方法］利用平板培养基和液体培养基筛选出絮凝活性高且稳定的菌株，通过计算絮凝率评价其发酵液的絮凝活性，最后通过单因素试验确定所选出菌株的最佳培养条件。［结果］分离出１３株具有絮凝活性的菌株，茵株Ｍ３的发酵液对高岭土悬浊液的絮凝率可达舳．％。培养７８后菌株发酵液的絮凝率分别为８．％和Ｃ８２ｈ和４ｈ０８８．％。以玉米粉和葡萄糖为碳源培养６后菌株发酵液的絮凝率分别为９．％和８．％，１２０ｈ２２７８而葡萄糖的絮凝效果更稳定。ｐＨ值６时，培养６０ｈ后菌株发酵液的絮凝率为８．％。菌株Ｍ３１ＯＣ的最佳培养条件为：用葡萄糖替代查氏培养基中的蔗糖，养液初始ｐ培Ｈ值６接，种量为１％。０在该条件下培养５７后菌株Ｍ３酵液的絮凝率分别为９．％和９．％。［０ｈ和２ｈＣ发２９２０结论］该研究为微生物絮凝剂的生
ｃｒｏｒａｄｇｕｏｅａａｂｎｓｕｃｒｅｅ９．％ａｄ８．％ｒｓ．ｎｅｆｃｕａｎｆｃｆＵＯｅｗｓｍｏｅｓｂｅｏｎｆｕｎｃｓｓｃｒｏｏｅｆｈｗｒ２２ｌｌｒｏ５０ｎ７８ｅｐａｄｔｌｃｌｔｇｅｅｔＣＳａｒｔｌ．ｅｅｈｏｉｏｇｌａｎｔｈ
安徽农业科学，ｏｒａｏＡｈｉｇｉｃ．０９，７３）１１９—１１０１１８Ｊｕｎｌｆｎｕｒ．Ｓｉ２０３（１：５３Ａ５４，５６
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张杨林
责任校对
卢瑶
１株高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化
ＯＵｌＩ —ｔｎｔａ（ｃｏｌｆｈｎｉｎｅｔＪｎｓｉｅｓｔ，ｈｎｉｇＪｎｓ１０３Ｉｏｌｘ￣ｇｅｌＳｈｏｏｅＥｖｏｍｎ，ｉｇｕＵｎｖｒｉＺｅｊｎ，ｉｇｕ２２１）ｇｔｒａｙａａＡｂｔａｔｆｂｅｔｅｈｔｄｉｄｔｓｒｅｕｅｅｃｅｔｒｄｃｎａｔｒｆｍｃｏｉｌｏｃｌｔａｄｏｔｉｅｔｅｒｕｔｒｏｄ— ｓｒｃｉｃｉＴｅｓｙａｍｅｃｅｎｏｔｈｆｉｏｕｉｇｂｃｅｉｏｉｒｂａｆｃｕａｎｐｉｚｌｉｃｌｅｃｎｉＯｖ１ｕｏｔｉｆｎｐａｌｎｍｌｕｔｎｆｔｏ１１ｓａｎｉｉｎｔｂｅｆｃｕａｉｇａｔｉｅｅｓｒｅｅｕｙｕｉｇｐａｅｉｍｎｑｉｅｉｍａｄｔｅｆｅ — ｉ．ｈｄ１１ｔｉｓｗｔｈｇａｄｓｌｌｃｌｔｃｉｔｗｒｃｅｎｄｏｔｓｎｌｔｍｄｕａｄｌｕｄｍｄｕｈｏｕｏＭｅｅｒｈｈａｏｎｖｙｂｅｉｎｌｃ
１，瓶用恒重后的定量滤纸过滤发酵液，然后用蒸馏水洗涤菌
提高絮凝活性以及降低絮凝剂用量是研究重点之一。笔］
者从土壤中选出一株高效微生物絮凝剂产生菌ＭＣ，３对其培养条件进行优化，以期提高其絮凝效率。
１材料与方法
１１材料．
ＬｕｓＰｓｒ１７ｏｉａｔ在８６年研究酵母菌Ｌｖｒａｓｅｓｅｅｕｅｃｓｕｅ时发现。ｅ
悬浊液（在恒温磁力搅拌机上快速搅拌２ｈ高岭土为分析，纯）取４ｌ，６ｒ置于５ｌ塞比色管中，入２ｍ浓度１ｎＯｍ具加１０
ｌｃｌｔａｅｏｅｍｅｅｉｄｆｏｔｅｓｒｉ３ｏａｌｓｓｅｓｏｏｅｕｏ８．％１１ｃｕａｉｇｒｔｓｏｅｍｅｔｄｌｑｄｆｃｕａｉｇｒｔｆｆｒｎｔｄｌｕｉｒｍｈｔａｎＭＣｎｋｏｉｕｐｎｉｎｃｕｄｂｐｔ０８．１ｅｆｏｃｌｔｎａｅｆｆｒｎｅｉｕｉｏｎｑｎｌｌｆｏｔｅｓｒｉｓｃｌｕｅｏ２ｈａｄ８ｒＯ８ａｄ８１２ｒｓ．ｈｏｃｌｔｇｒｔｓｏｒｎｅｉｉｒｍｈｔａｎｕｔｒｄｗｉｈｒｍｈｔａｎｕｔｒｄｆｒ７４ｈｗｅｅ８．％ｎ．％ｅｐＴｅｆｃｕａｉａｅｆｆｍｅｔｄｌｄｆｏｔｅｓｒｉｓｃｕｅｔｎｌｎｅｕｑｌ
的Ｏ，为，下式计算絮凝率：Ｄ记按Ｊ叼＝［Ａ一曰）Ａ］０％（／ ×１０（）１１２３菌株生长曲线及培养时间的确定。该试验菌株生长．．曲线通过测定菌体干重获得，体如下：９个装等量查具取氏培养液的锥形瓶，同时发酵培养。２４ｈ后，隔１出每２ｈ取