细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验报告[4]
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细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告线粒体的活体染色与观察【实验目的】⒈掌握线粒体活体染色原理及方法。
⒉观察和了解动物细胞内线粒体的形态、结构与分布特点。
【实验原理】⒈线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿B染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
⒉活体染色是指用染料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿B、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告篇一实验教师：xxx所在学校：xxx中学目的要求：1练习徒手切片2认识叶片的结构3画叶片的表皮细胞和保卫细胞材料用具：新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。
方法步骤方法与步骤要点注意事项（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片1将新鲜的叶片平放在小木板上。
2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。
3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。
要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。
4用毛笔蘸出较薄的一片，制成临时切片。
叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。
刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。
为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得较薄的一片用来观察。
（二）观察叶片的结构1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。
2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。
仔细观察上、下表皮细胞的`区别（三）观察叶片的下表皮1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。
2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。
注意观察气孔的结构。
（四）画图在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。
画图时，要真实、实事求是。
讨论与交流1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？细胞生物学实验报告篇二一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。
2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。
二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告动物细胞融合【实验目的】⒈了解动物细胞融合的常用方法。
⒉学习化学融合的基本操作过程。
⒊观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融合和电激诱导融合。
⒈病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。
这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可介导病毒和宿主细胞融合，同时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
⒉化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是被广泛使用的化学融合剂。
⒊电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验用品】⒈材料鸡血红细胞。
⒉试剂50%PEG、Hank’s溶液(pH7.4)、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
⒊器材正置显微镜、离心机、离心管、载玻片、盖玻片、滴管、注射器等。
【实验步骤】⒈鸡血红细胞的制备和保存用无菌注射器先吸入Alsevers溶液1ml，再从鸡翼下静脉取血0.5~1ml，取出后放入刻度离心管中，再加入2~3mlAlsevers溶液，使总量为4~5ml，混匀并封口，置于4℃冰箱内。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告一、细胞形态观察及其大小测量1.实验结果及分析（1）细胞形态观察图1.1 10X40倍镜下肝细胞图1.2 10X40倍镜下血细胞图1.3 棉花叶横切（栅栏组织细胞）（2）细胞大小测量项目原始数值及数据处理平均值台尺41 35 41 28 20 33 目尺170 145 170 116 83 136.8根据公式计算得：每2.412 2.414 2.412 2.414 2.410 2.412格μm数项目原始数据及数据处理平均值长格数28 28 29 29 31 28 26 23 25 27.44 宽格数 5 4 5 4 6 4 5 5 4 4.67 长μm 67.54 67.54 69.95 69.95 74.77 67.54 62.71 55.48 60.30 66.202.思考题（1）血细胞分为哪几大类？分别描述你看到的不同血细胞的形态，并阐述其功能。
绘图。
血细胞分为红细胞、白细胞和血小板。
红细胞：主要的功能是运送氧。
白细胞：主要扮演了免疫的角色。
当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。
血小板：止血过程中起着重要作用。
血细胞约占血液容积的45%，包括红细胞、白细胞和血小板。
在正常生理情况下，血细胞和血小板有一定的形态结构，并有相对稳定的数量。
红细胞呈双凹圆盘状，中央较薄（1.0μm），周缘较厚（2.0μm），故在血涂片标本中呈中央染色较浅、周缘较深。
在扫描电镜下，可清楚地显示红细胞这种形态特点。
红细胞的这种形态使它具有较大的表面积（约140μm2），从而能最大限度地适应其功能――携O2和CO2。
白细胞为无色有核的球形细胞，体积比红细胞大，能作变形运动，具有防御和免疫功能。
在血涂片中，血小板常呈多角形，聚集成群。
血小板中央部分有着蓝紫色的颗粒，称颗粒区；周边部呈均质浅蓝色，称透明区（hyalomere）。
电镜下，血小板的膜表面有糖衣，细胞内无核，但有小管系、线粒体、微丝和微管等细胞器，以及血小板颗粒和糖原颗粒等。
细胞生物学实验报告_2
细胞生物学实验报告细胞凝集反应【实验目的】⒈了解细胞膜的表面结构。
⒉掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
⒊学习研究细胞凝集反应的方法。
【实验原理】⒈细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构, 脂和蛋白质又能和糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。
目前认为: 细胞间的联系, 细胞的生长和分化, 免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖外被有关。
⒉凝集素（lectin）是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质, 它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被中的糖分子连接, 在细胞间形成“桥”的结果, 加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
【实验用品】⒈材料土豆块茎、家兔。
⒉试剂⑴PBS缓冲液称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 1.48g、KH2PO4 0.43g, 加蒸馏水, 定容至1L, 调pH至7.2。
⑵1％肝素溶液0.1g肝素溶解于10mL0.9％氯化钠溶液中。
⒊器材5mL注射器、酒精棉球、双凹片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管。
【实验程序】⒈以无菌方法抽取兔耳缘静脉血液（5mL注射器先吸取3mL1％肝素溶液）1mL, 用0.9％氯化钠溶液洗5次, 每次3000r/min离心5min, 最后按沉淀的红细胞体积用0.9％氯化钠溶液配成1％红细胞悬液。
⒉称取去皮土豆块茎2g, 切成薄片, 加10mLPBS缓冲溶液, 浸泡2h, 浸出的粗提取液中含有可溶性土豆凝集素。
⒊用滴管吸取土豆凝集素和PBS缓冲液各一滴, 置于双凹片的左右两孔内, 再分别滴入一滴1％红细胞悬液, 振荡10min。
4.待红细胞液发生明显凝集反应后, 将双凹片置于显微镜下观察。
【实验结果】⒈结果细胞凝集反应实验现象⒉图像加土豆凝集素加PBS缓冲液【分析与讨论】⒈结果分析实验过程中可以观察到: 在双凹片上, 加有土豆凝集素的一侧, 震荡过程中, 红细胞液先变浑浊, 随后又变澄清, 同时发生凝集反应, 且凝集后的块状物聚集在液滴中央；而加有PBS缓冲液的一侧, 震荡过程中, 红细胞不发生明显变化, 静置后, 后细胞逐渐集中于液滴中间部位, 而四周表现为澄清。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告实验名称：细胞培养实验实验目的：1. 了解细胞培养的基本原理和过程2. 观察细胞生长和分化的现象3. 掌握细胞培养的实验技术和方法实验原理：细胞培养是一种将生物体细胞从其原始生存环境中分离出来，在体外条件下进行培养的技术。
这种技术对于研究细胞生物学、发育生物学、药物筛选等学科具有重要意义。
本实验将通过观察细胞生长和分化的现象，加深对细胞培养技术的理解。
实验材料：1. 人体皮肤细胞2. 培养基（包含血清、抗生素、氨基酸、维生素等）3. 塑料瓶（培养皿）4. 显微镜5. 记录表实验步骤：1. 取适量人体皮肤细胞，用胰蛋白酶消化，使其从组织中分离出来。
2. 将细胞接种到塑料瓶（培养皿）中，加入适当浓度的培养基。
3. 将塑料瓶（培养皿）放入恒温培养箱中，定期观察并记录细胞生长和分化的现象。
4. 在合适的时间点，使用显微镜拍照记录细胞生长和分化的过程。
5. 实验结束后，整理数据和图片，撰写实验报告。
实验结果：经过一段时间的培养，我们观察到皮肤细胞在培养基中开始贴壁，并逐渐生长。
随着时间的推移，部分细胞开始出现分裂，形成相互连接的细胞团。
一些细胞逐渐伸展成梭形或扁平形，呈现出典型的贴壁生长形态。
在某些区域，我们观察到细胞开始分化为两种不同形态的细胞群，一种呈圆形或椭圆形，另一种呈多角形。
这些现象表明细胞已经开始分化。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 细胞确实可以在体外条件下贴壁生长并增殖。
这证明了细胞培养技术的可行性。
2. 细胞分化是一个自然的过程，在本实验中得到了证实。
这说明细胞具有自我更新和多向分化的潜能。
3. 实验过程中需要注意无菌操作和适宜的培养条件，以确保细胞的存活和正常生长。
此外，不同种类的细胞可能需要不同的培养条件，因此在实际操作中需要针对具体细胞类型进行实验。
实验结论：通过本次实验，我们了解了细胞培养的基本原理和过程，观察了细胞生长和分化的现象，并掌握了细胞培养的实验技术和方法。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告实验一、二实验名称石蜡包埋切片技术和苏木精-伊红染色1、为什么生物体的组织要经过如此繁琐的步骤才能观察其组织结构?①首先，生物体是一个非常复杂的组合体。
②其次，这个复杂的组合体是比较脆弱的；作为一个生物研究者，想要观察一个生物体的组织，就必须尽量观察其完整形态，步骤繁琐，并不是在浪费时间，而是为了保证看见的是最真实的，最接近想要看到的结果。
态度严谨了，就不觉得繁琐了。
③石蜡包埋是用于样本固定，方便切片。
切片的目的是方便观察，样本如果厚的话，不利于透光，而且组织重叠，是无法有效观察的。
④染色的目的是也是为了更直观的观察，原始样本不染色的话，在显微镜下是近乎透明的，无法区分细胞或细胞器。
2、查阅文献，有哪些文章采用石蜡包埋切片和H.E染色?请列出这些文献(至少10篇)。
（1）王慧丰,徐亦辰,赵文婧,陈维平.微小组织结构石蜡切片的制备[J].临床与实验病理学杂志,2020,36(08):997-998.（2）赵学影,肖慧,胡子豪,陈云帆,王黎源,隋东莉.HE和免疫组化染色观察人体结肠系膜淋巴管构筑[J].赣南医学院学报,2020,40(01):54-57.（3）万慧颖,徐敏燕,李芳华,胥颖,谢震.荧光原位杂交技术快速鉴定石蜡包埋组织中的曲霉菌感染[J].实用医院临床杂志,2020,17(01):43-46.（4）张晓恒,姚佳,秦冬梅.毛菊苣提取物对小鼠肝纤维化的保护作用[J].世界华人消化杂志,2020,28(03):86-91.（5）连国亮,陈东,商建峰,李彦玮,李倩.胸腔积液凝集物在组织脱落细胞学诊断中的应用[J].医学研究杂志,2019,48(05):152-155+161.（6）张彩丽,张俊霞,刘湘花,孙丽敏,李瑞琴.实验动物多脏器组织石蜡切片统一制做流程及影响条件[J].临床与实验病理学杂志,2019,35(01):108-109.（7）张强,解植伟,尹昊锋,王君,马昊,马福顺.A型肉毒毒素对兔脂肪组织影响的实验研究[J].中国美容整形外科杂志,2019,30(08):467-469.（8）焦哲,王鑫坤,霍军,阴正兴,吴凤笋,吴玉臣,康静静.3例犬淋巴瘤和1例猫淋巴瘤的病理组织学诊断[J].动物医学进展,2019,40(11):137-140.（9）罗晓舟,金小千,温小鹏,罗伦,唐纯志.针刺太冲、太溪对自发性高血压大鼠下丘脑病理形态的影响[J].中华中医药学刊,2019,37(04):781-787+1025.（10）尚宏伟,路欣,郭晓霞.褪色胃组织标本再染色后在教学中的应用[J].继续医学教育,2019,33(03):25-26.3、通过你自己所查阅的文献，谈一下石蜡包埋切片和H.E染色的用途。
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细胞生物学实验班级：生科142姓名：旷江学号：10143131组号： 2小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞华东理工大学应用生物学系摘要本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。
关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构AbstractThe cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life.Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur目录第一章综述 (1)1.1实验目的 (1)第二章实验原理 (2)2.1实验流程和应用实验方法 (2)2.2细胞器活体染色与显微观察 (2)2.3细胞骨架的观察 (3)2.4细胞冻存复苏 (3)2.5细胞冻存复苏活力检测 (3)2.6哺乳动物细胞的基因转染 (4)2.7细胞凋亡诱导和分析 (4)第三章实验仪器及试剂 (6)3.1实验仪器 (6)3.2实验试剂 (6)第四章实验步骤............ 错误！未定义书签。
4.1细胞培养和传代 (7)4.1.1洗涤细胞 (7)4.1.2消化 (7)4.1.3接种 (7)4.1.4培养 (7)4.2细胞器活体染色与显微观察 (7)4.3细胞骨架的观察 (7)4.4细胞冻存 (8)4.5细胞复苏 (8)4.6细胞冻存复苏活力检测 (8)4.6.1台盼蓝染色法 (8)4.6.2MTT法 (8)4.6.3XTT法 (8)4.7哺乳动物细胞的基因转染 (8)4.8细胞凋亡诱导和分析 (8)第五章实验结果及分析 (10)5.1动物细胞转染及质粒抽提 (10)5.1.1质粒抽提 (10)5.1.2OD260及OD280测定 (10)5.1.3细胞活体染色 (11)5.2染色法鉴定细胞活力、细胞器及细胞骨架的观察 (12)5.2.1中性红观察细胞系 (12)5.2.2考马斯亮蓝染色细胞骨架观察 (13)5.2.3传代细胞培养 (14)5.3细胞冻存、复苏及MTT法测定细胞活力 (15)5.3.1MTT检测细胞生长状态 (15)5.3.2细胞冻存复苏 (16)第六章思考与讨论 (18)6.1思考题 (18)6.2实验讨论 (20)第七章致谢 (21)第一章综述1.1 实验目的细胞生物学(cell biology)是在显微、亚显微和分子水平三个层次上，研究细胞的结构、功能和各种生命规律的一门科学。
细胞生物学研究主要有十个方面，细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色技术，细胞凋亡的测定，细胞工程基础技术和分子细胞生物学技术。
本实验主要侧重于细胞形态与结构的观察技术，细胞生理，细胞培养与分析，细胞凋亡的测定和细胞工程基础技术五部分，主要达到以下目的:(1)、学习并掌握细胞生物学的基本实验方法和技能，包括细胞培养，细胞计数，细胞染色和细胞冻存复苏等。
(2)、实践细胞生物学理论知识，巩固细胞生物学知识的掌握。
(3)、强化实验设计能力，培养科研思维。
第二章 实验原理2.1 实验流程和应用实验方法詹纳斯绿B&考马斯亮蓝R250染色细胞骨架 MTT(XTT)法测定细胞活力阳离子脂质体介导的基因转染 H 2O 2诱导细胞凋亡相差&荧光显微镜观察结果 Ho33342和PI 双重染色鉴定细胞传代培养细胞显微计数2.2细胞器活体染色与显微观察细胞活体染色是指应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些细胞结构而又很少影响细胞生命活动的染色方法。
本实验应用的是詹纳斯绿B 和中性红进行染色观察。
詹纳斯绿B 能专一的对线粒体进行活体染色。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料詹纳斯绿B 保持氧化状态，即有色状态，呈蓝绿色，而在周围的细胞质中, 染料被还原，呈无色状态。
中性红对高尔基体、高尔基体的染色具有专一性。
只将活细胞中的高尔基体染成红色，细胞核与细胞质完全不着色(这可能与高尔基体中某些蛋白质有关)。
2.3 细胞骨架的观察真核细胞胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架。
根据纤维直径、组成成分或组装结构的不同分为微管、微丝和中间纤维。
微丝是肌动蛋白（F-actin）构成的纤维，在光学显微镜下看不到，在不同种类的细胞中，它们与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构。
考马斯亮蓝染色法可以看在显微镜下观察到微丝结构。
考马斯亮蓝R250可以染各种蛋白，并非特异染微丝。
细胞经适当浓度Triton X-100溶液处理，质膜结构中及细胞内许多蛋白质被溶解，而细胞骨架中的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰R250染色后，胞质背景着色弱，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束。
2.4 细胞冻存复苏细胞长期培养过程中可能因为微生物污染或基因型改变等导致具有优良特性细胞系丢失，细胞可经快速冷冻并几乎无限期保存在非常低的温度下，如液氮中，可以防止此类问题。
不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内外环境中的水会形成冰晶，导致细胞内发生一系列变化，导致细胞死亡。
在培养液中加入保护剂如甘油和二甲基亚砜（DMSO），可使冰点下降，在缓慢的冻结条件下，使细胞内水分在冻结前析出胞外，使细胞免受损伤；溶解细胞时，解冻要快，使之迅速通过细胞最易受损的-5℃—0℃后，细胞仍能生长，活力不受损伤。
2.5 细胞冻存复苏活力检测细胞活力检测分为细胞死活和细胞生命力两部分，这两点是相互贯通的，死细胞没有生命活力，有生命活力的细胞都是活细胞。
一般死活细胞检测有以下四种方法：（1）、染色排除法（最常用）：台盼蓝法（死细胞染成蓝色，活细胞不着色），苯胺黑法（死细胞染成黑色，活细胞不着色）。
（2）、荧光排除法：生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光；生活力的细胞发出荧光也较弱；死亡细胞无荧光。
（3）、细胞内酶与特定试剂的显色反应：MTT比对实验：琥珀酸脱氢酶可使MTT 分解产生蓝色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围，其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。
（4）、克隆形成试验。
细胞生命力可以用细胞生长曲线测定来表征。
细胞生长曲线是了解培养细胞的增殖详细过程及细胞生长基本规律的重要手段。
一般有直接计数法，AKP法，ATP法，3H脱氧胸苷掺入法，MTT法，XTT法等，和细胞死活检测方式有相同之处。
2.6 哺乳动物细胞的基因转染基因转染是将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内，并使核酸在细胞内表达的过程，广泛用于基因的结构和功能分析、建造疾病的动物模型和药物筛选模型、基因表达与调控、基因治疗与转基因动物、生产药用蛋白和保健蛋白等研究。
基因转染分为转染和感染两大类。
转染是通过生化或者物理方法将目的基因导入真核细胞中。
感染是通过病毒介导，用基因组中携带有克隆目的片断的病毒来感染靶细胞。
转染按照方式的不同又可有直接注射法，脂质体转染法，受体介导的基因转移，显微注射法，电穿孔法，碳酸钙共沉淀法等。
本实验采取阳离子脂质体介导的转染。
阳离子包被的脂质体可以带负电的DNA吸附，形成复合物（DNA在内部），而脂质体可以透过细胞膜，从而将DNA带入胞内，DNA进入细胞核，和基因组整合，继而表达特定标记蛋白。
2.7 细胞凋亡诱导和分析细胞凋亡，即程序性细胞死亡，是由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程。
过程包括诱导性因素和抑制性因素，诱导性因素是凋亡程序的执行者，包括激素和生长因子失衡、免疫性因素、微生物学因素等，抑制性因素包括细胞因子（IL-2，神经生长因子）和某些激素等。
凋亡细胞的检测可以通过形态学、膜通透性、膜成分外露和DNA变化等方式进行。
比较显著的是形态学变化（形成凋亡小体等）和细胞生理生化改变。
生化特征包括胞浆内Ca2+浓度升高，细胞内活性氧增多，质膜通透性变大，DNA 内切酶活性被激活升高，Ⅱ型谷氨酰胺转移酶和需钙蛋白酶（Calpain）活性升高等现象。
本次实验基于质膜通透性变大的生化特征。
凋亡细胞的质膜通透性增大，相对分子量大的或小的与DNA结合的荧光染料都可以进入细胞内，进而同DNA 结合使其染色。
而正常细胞的质膜通透性较小，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如溴化乙啶）不能进入细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如吖啶橙）仍能被细胞摄取。
因此可以利用吖啶橙和溴化乙啶双染色法区别正常细胞和凋亡细胞。
细胞内DNA出现吖啶橙标记（绿色荧光）而不出现溴化乙啶标记（红色荧光）的为正常细胞，而在细胞内既出现吖啶橙标记也出现溴化乙啶标记的为凋亡细胞。
第三章实验仪器及试剂3.1 实验器材CO2培养箱，倒置显微镜，超净台，移液器，血球计数板，离心机，血球计数板，37℃水浴，-80℃冰箱，液氮和液氮容器，六孔板，96孔培养板，移液枪，枪头，酶联免疫检测仪，电子天平，比色皿，分光光度计3.2 实验试剂无钙、镁磷酸盐缓冲液(PBS)细胞消化液：0.25%胰蛋白酶-0.2%EDTA培养基（DMEM液或RPMI 1640）小牛血清或胎牛血清1%詹纳斯绿b染液：称取1g詹纳斯绿b溶于100ml蒸馏水中，稍加热(30～45℃)使之快速溶解，用滤纸过滤，即为1%原液,装入棕色瓶备用。
为了保持其充分的氧化能力，最好是临用前现配。
1:15 000中性红水溶液：中性红5mg溶于75ml蒸馏水中1%中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50ml蒸馏水中。