如何清除核酸气溶胶污染
PCR 实验室防污染措施及应急处理方法
PCR 实验室防污染措施及应急处理方法污染，是 PCR 实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手，PCR 实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验习惯的核心。
PCR 实验污染和细胞污染是有差别的，PCR 实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。
因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。
「易查不易察」，污染来的悄无声息，我们该如何应对。
今天给大家简单介绍一下 PCR 实验室的主要污染来源、实验中如何避免和减少污染的可能性及实验发生污染的应急处理方案。
PCR 实验室的污染来源1、样本间交叉污染收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。
2、实验试剂污染主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得PCR 试剂和 PCR 板 / 管处于0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。
3、扩增产物污染大量拷贝的产物泄漏或扩增后的 PCR 反应管意外开盖，这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。
因为 PCR 产物拷贝量大，远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的 PCR 产物污染，就可形成假阳性。
4、克隆质粒污染作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
PCR 实验室的防污染方法按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
1、严格执行各区功能划分试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。
对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
PCR实验室发生污染后处理方法
PCR实验室发⽣污染后处理⽅法PCR实验室发⽣污染后处理⽅法⼀、确定污染类型1、PCR实验室发⽣污染后主要表现为：1）所有同批次标本及阴阳对照全部为阳性；2）阴阳对照正常，所有标本检测均为阳性；3）除了CT值靠前的标本其余标本及阴性对照CT值接近临界值，都有微弱翘尾。
出现以上三种情况，均可判为发⽣污染。
PCR污染类型分为样本污染和产物污染。
所谓样本污染⼀般发⽣在操作2区，由使⽤被污染的耗材和样本交叉污染产⽣；产物污染有PCR扩增产物引起，⼀般发⽣在扩增分析区，即3区，由于PCR反应体系没有完全闭合或者扩增后的体系没有及时安全清理引起。
2、确认污染类型才能有效清除污染。
发⽣污染后，更换所有⼀次性耗材即移液枪及使⽤新拆分试剂。
有两种简易⽅法如下：1）不加内标重复实验，检测结果如果内标没有扩增，可判为样本污染，反之为产物污染。
2）分A和B两组，A组在上机前，⼋联管开盖在2区放置10min左右，B组闭合⼋联管直接上机。
检测结果中若A组发⽣污染B组正常，则为⽓溶胶污染。
⽓溶胶污染有两个来源，其⼀为扩增产物引起，其⼆为浓度较⾼的标本在制备过程中外释累积形成。
⼆、污染处理措施⼀般⽽⾔，发⽣产物形成的⽓溶胶污染是很难在短时间内及时清理掉的，这是由PCR反应的特点决定的，及其微⼩的污染物都可以作为模板扩增，释放出巨⼤荧光信号。
因此，很多试剂⼚商都有相应的防污染试剂产品，可以有效防⽌产物污染，其原理为UNG酶对产物核酸⽚段的有效降解，⽽不影响我们从标本制备来的核酸模板。
但是，彻底消除污染，降低对UNG酶的依赖，还需要⼀套消除污染的体系来应对。
具体如下：1、全⾯规范操作：1）进⾏PCR操作时，⼯作⼈员应该严格遵守SOP操作规程。
2）试剂准备、标本制备区、PCR扩增区及分析区设计要合理，要有⼀定的⽅向性。
⼯作⼈员要谨循由试剂准备→标本制备→PCR扩增区及分析区的⼯作流程。
3）任何⼀间的产物及器材不要拿到其它两个⼯作区。
气溶胶怎么化解的原理
气溶胶怎么化解的原理气溶胶是指在气体中悬浮的固体或液体微粒，是一种常见的空气污染源。
气溶胶的危害主要包括对人体健康的影响和空气质量的恶化。
为了减少气溶胶对环境和人体的危害，需要进行气溶胶的化解处理。
气溶胶的化解原理主要有以下几种。
1. 机械过滤机械过滤是气溶胶处理中最常见的方法之一。
其原理基于固体微粒的大小和密度不同于气体，在通过滤芯或滤网时被拦截下来。
机械过滤器可以使用不同孔径大小的滤网，通过筛选来净化空气中的气溶胶微粒。
这种方法适用于粒径较大的固体微粒和液滴，如粉尘、烟雾等。
2. 静电沉降静电沉降是指利用静电力来去除气溶胶微粒。
气溶胶微粒通常带有电荷，可以利用静电吸附或静电沉降原理来去除。
静电沉降主要通过电场作用，使带电的气溶胶微粒受到电场力的作用，从而沉降到电极上。
这种方法适用于中等粒径的固体和液体微粒，如细菌、病毒、烟尘等。
3. 热处理热处理是利用高温破坏气溶胶微粒的结构，使其失去稳定性，从而达到去除的目的。
热处理方法主要有热风处理和热释放两种。
热风处理是通过加热气流，使气溶胶微粒受到高温破坏，从而去除气溶胶。
热释放是指利用热释放能量将微粒加热至高温，使其燃烧或融化。
热处理可以去除不同粒径的固体和液体微粒，但对于毒性或有害气溶胶，需要控制热处理温度，以防止产生毒性气体。
4. 化学处理化学处理是利用化学反应来去除气溶胶微粒。
常用的化学处理方法包括湿式和干式处理。
湿式处理主要是通过添加化学试剂或溶液，与气溶胶微粒发生化学反应，从而使其沉降或被固化。
干式处理主要是利用吸附剂将气溶胶微粒吸附在表面上，形成固体颗粒后进行捕集或去除。
化学处理可以去除很小粒径的微粒，但需要选择合适的化学试剂，以及对废弃物的处理和处置。
5. 超声处理超声处理是利用声波来去除气溶胶微粒。
声波振动的能量可以使微粒受到冲击、振动和碰撞，从而使其分解和失去稳定性。
超声处理适用于微粒粒径较小、粘附力较强的情况，比如颗粒细小的烟雾。
BD PCR实验室潜污染与UNG酶
PCR实验室气溶胶污染的清洁措施浅谈一、去除实验室气溶胶污染的常规措施（无UNG酶）准备去核酸酶试剂、有效氯含量1000毫克喷剂、水喷剂。
对重点的实验室区域进行去核酸酶试剂喷洒，如安全柜，扩增仪器台面等，喷洒之后保持5到10分钟；5到10分钟之后，对刚刚喷洒过的表面进行喷水，让水在整个台面上形成一个水膜，然后再用吸水纸擦拭干净，吸水纸用完之后密封扔掉；反复进行；同时，用含氯的试剂和去核酸酶试剂对实验室的空气进行喷洒，增加空气湿度，沉降空气中的气溶胶；然后静置10到20分钟，用含氯的试剂拖把进行拖地，清水擦拭桌面；反复进行；如果扩增仪器内部受到污染，可以将扩增仪搬到通风的地方，打开能打开的所有的盖子，增加空气扩增面积，找一台风扇，对着仪器吹，加速仪器内部气溶胶的扩散具体的处理时间可以根据环境标本的监测结果来来判断；除了风扇对仪器内部进行一个空气的更换，还要用去核酸酶试剂对仪器进行喷洒，然后用清水擦拭干净这个操作也可以反复进行整个清洁过程中，我们可以对实验室的各处彩环境标本进行一个清洁程度的监控，在经过几轮的实验室清洁之后，环境标本的靶标通道Ct值会越来越大，直到消失不管是拖地还是擦是还是通风，都是为了让污染物离开实验室环境；就算是用水，不用去核酸酶试剂，只要做到了移除也是可以去除污染的。
此类清洁措施不仅适用于实验室的气溶胶污染，还适用于患者生活环境和患者标本处理、病房、工区等各个情况下产生的气溶胶，是PCR实验室、医院、社区等单位应该掌握的一个技术方法。
二、UNG酶系统UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链核酸中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的核酸链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃，95℃灭活。
为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染。
常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)和Taq酶热启动。
洁净室微生物气溶胶的消除手段
洁净室微生物气溶胶的消除手段洁净室微生物气溶胶的消除手段众所周知，人是洁净室中产生微粒污染物的主要来源，不可避免且最难控制的因素之一。
据资料，人体大约每6~7cm2的皮肤可带有1~104个细菌，其中约1%为病原性的，人的呼吸、讲话也会散发细菌。
那么，微生物污染应该如何有效地进行控制呢？消毒剂对人体的伤害又如何避免呢？1微生物污染控制的几个概念控制微生物污染的方法很多，各种方法有微小的差别。
具体的控制方法如下：（1）消毒：杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无传播感染的危险。
（2）灭菌：用化学或物理的方法杀灭或清除传播媒介上所有微生物，使其达到无菌水平。
（3）抑菌：抑制传播媒介上微生物的生长繁殖。
（4）抗菌：灭菌作用和抑菌作用的总称。
（5）消毒剂：能杀灭细菌繁殖体、部分真菌和病毒，不能杀灭细菌芽胞的药物。
（6）灭菌剂：可杀灭一切微生物包括细菌芽胞使其达到灭菌要求的制剂。
2过度使用消毒剂引发的问题消毒是净化环境、控制疾病的一项重要的措施。
对洁净厂房特别是相对洁净要求较高的生物洁净室来说，防止细菌的产生、去除及消灭细菌的存在是至关重要的。
常用的消毒方法主要有：煮沸和常压蒸汽消毒、低温消毒、紫外线照射消毒、药剂消毒等。
目前，洁净室使用的药剂消毒方法主要是甲醛消毒。
甲醛消毒有两种：（1）就地消毒，只对洁净室的局部空间进行小范围的消毒，可采用甲醛直接在室内蒸发（或加热蒸发），效果较差，且消毒后的排毒不便。
（2）与HVAC系统结合，甲醛从带有夹套的消毒罐内溢出进入空调机组的送风点总管然后送入洁净室内，为加大甲醛的蒸发强度，消毒罐夹套内通有蒸汽。
但是，不分时间地大量使用消毒剂，过度消毒，将对人体和环境造成严重后果。
此外还应该注意甲醛中多含有微量的甲酸，而对镀锌风管等有一定的腐蚀性，建议采用不锈钢管。
洁净室的消毒方式有很多种，任何消毒方式、消毒剂都存在一定的耐药性，使用一段时间后应进行更换。
3最有效、最经济、最安全的除菌手段有些微生物的粒径很小，但它们不能单独存在，一般以群体方式，依附于空气中的固体或液体颗粒上才能在空气中生存。
医院核酸检测实验室(PCR)消毒规范
PCR 实验污染来源PCR 实验室空气流向管理与环境消毒PCR 实验，即临床基因扩增实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。
它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
就新冠病毒核酸检测来说， RT-PCR 是目前使用最广泛和较准确的筛选和确认方法，大规模核酸检测，必然会引起相关机构单位着力建设规范的临床 PCR 实验室。
但是，建立一个 PCR 实验室，其实就是在建设一个平台，考验的不仅仅是一个医疗机构的实验能力，也考验着整个医疗机构的整体能力。
实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是环绕同一个核心问题进行——“避免污染”，任何级别的医院在建设 PCR 实验室时，均需要提前考量各个因素，以保证标本的全环节质量及实验室的生物安全。
PCR 实验室的建设需要设置标准的“四区”：试剂准备区、标本制备区、 PCR 扩增检测区和扩增产物检测区。
每一个独立实验区设置有缓冲区，各区通过气压调节，使整个 PCR 实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染，并降低扩增产物对人员和环境的污染。
PCR 实验室，需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训，并获取 PCR 上岗证。
的震荡、离心都有可能产生气溶胶，有感染的风险。
4、防护要求。
必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进行。
PCR 实验污染来源1、样本间交叉污染：采集样本的容器被污染或者样本密封不严导致外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或者未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或者样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。
2、实验试剂污染：主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或者阳性对照污染。
加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得 PCR 试剂和PCR 板/管处于 02，但这个过程也充满污染风险。
核酸检测实验室污染源、防污染措施及权威处理方案
核酸检测实验室污染源、防污染措施及权威处理方案01▶PCR 实验室的潜在污染来源◀①临床标本中存在的大量待测微生物或待测靶核酸②科研中得到的质粒克隆③以前分析研究的特定微生物或靶核酸④大量存在于实验环境中的特定微生物或靶核酸⑤以前扩增产物的残留污染,这也是 PCR 实验室最容易产生的将造成假阳性的“污染”。
PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR 扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至最小的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。
如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室“污染”,出现大量的假阳性结果。
02▶PCR 实验室的防污染措施◀进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
(一) 划分操作区目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：1. 试剂准备区。
2．标本制备区。
3. PCR扩增区及分析区。
各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。
如：试剂准备→标准制备→PCR扩增区及分析区。
切记：任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
(二) 分装试剂PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。
所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA：1．PCR用水应为高压的双蒸水；2．引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制；3．引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。
(三) 实验室的严格分区及工作程序的严格遵守试剂准备区、样本准备区、扩增区、检测区等必须备有其各自必需的仪器设备、工作服、手套、加样器和通风系统。
PCR检测常见问题与解决途径
PCR检测常见问题与解决途径利用PCR方法检测转基因成分时，经常出现假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带。
尤其是假阳性和假阴性可使检测结果得出错误结论，有时可造成严重后果。
为了提高转基因检测的准确性和可靠性，PCR检测应尽量减少假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带现象的发生。
一个好的PCR方法不但要求特异性好、灵敏度高、还要求具有高的可重复性、重现性、鲁棒性，尽量减少假阳性、假阴性和非特异性扩增。
本文对PCR检测中出现的假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带的原因及其解决方法予以综述。
一、假阳性：（一）假阳性现象假阳性是指检测阴性材料得到阳性结果。
如果一次实验中的几个阴性对照中出现一个或几个阳性结果，提示本次实验中其它标本的检测结果可能有假阳性。
实验中设立的阴性对照可提示有无假阳性结果出现。
（二）造成假阳性的原因1. 样品间交叉污染：样本污染主要有收集样本的容器被污染，或样本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有样本而造成相互间交叉污染；样本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；2. PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3. PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。
因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。
4. 气溶胶污染：在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。
据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。
5. 实验室中克隆质粒的污染：由于克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可能性也很大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
核酸气溶胶污染清除新方法
每天要做分子实验的您，是否正在被假阳性困扰？是否对pcr污染束手无策？您还在用酒精、异丙醇擦拭吗？还在用紫外线照射消毒吗？
有效数据证明，传统方法不能有效处理实验室气溶胶污染。
这些悬浮在空气中的粒子，对实验数据的真实性、准确性构成巨大威胁，同时也导致科研经费的无谓损失。
那么，有没有一种产品，可以消除分子实验室气溶胶污染呢？
答案是有的。
朗司医疗研发的PCR_Cleaner是一种专门去除表面核酸污染物的喷雾剂，可有效降解核酸分子，使用方便且效果明显，适用于PCR 实验室、PCR 设备及耗材等。
这种神奇的溶液，具有与表面活性剂十分相似的理化性质，如化学稳定性和耐热性。
同时，因为
PCR_Cleaner由表面活性剂和非碱性的非致癌物组成，对人体无毒无害，也不影响实验正常进行，您可以放心地在每个实验前后多次使用。
看到这里，您或许在担心，这款清除剂，是不是操作很复杂呢？像传统清除手段比如酶解、紫外照射、修饰、高压变性等等，耗时耗力，做实验我都够累了，根本没精力去操作啊。
不用担心。
朗司医疗的PCR_Cleaner由AB两瓶试剂组成，您只需要2步操作，就可以消除95%以上的DNA气溶胶污染+99%以上的RNA气溶胶污染。
第一步：用A瓶在目标表面喷涂3次，等待1分钟，用干净纸巾擦拭；第二步：用B瓶在目标表面喷涂3次，立即擦拭。
简单两步，就完成了核酸气溶胶污染的防治工作。
考虑到核酸污染物具有累积性和持续性，且难以去除，朗司医疗推荐您每月至少用PCR_Cleaner对整个实验室进行彻底清洁，将PCR_Cleaner喷涂于实验台面、门把手、仪器、设备等，可有效降低气溶胶污染的累计性。