微生物检验与控制
微生物检验的质量控制
微生物检验的质量控制微生物检验的质量控制是确保微生物检验结果准确可靠的关键环节。
它包括以下方面：1. 实验室环境控制：实验室应符合微生物检验的有关环境要求，如温度、湿度、照明等。
实验室空气应定期进行空气质量检测，以确保无菌室的无菌状态，避免实验物品受到外界污染。
2. 设备设施的校验和维护：实验室应定期校验和维护微生物检验所使用的设备设施，确保其正常运转和准确度。
培养箱、灭菌器等设备需要周期性地进行校正，酶标仪等精密仪器需要定期进行校准和维护。
3. 样品的采集与保存：微生物样品的采集应严格按照操作规程进行，避免样品受到外界的污染。
采集后的样品应妥善保存，避免细菌的生长和繁殖，同时也要避免样品的变质，影响后续检验结果。
4. 质控菌株的使用：质量控制菌株是用于验证微生物检验方法的菌株。
实验室应定期使用质量控制菌株对检验结果进行验证，确保方法的准确性和重复性。
实验室还需参加国家或行业的外部质量评估，与其他实验室的检验结果进行比对，确保检验结果的可靠性。
5. 操作人员的培训和质量控制：操作人员应接受相关的培训，掌握微生物检验的操作规程和技术要求。
实验室还应建立质量控制制度，对操作人员进行监督和考核，确保操作人员的技术水平和操作规范。
6. 数据的记录和分析：实验室应建立完善的数据记录和管理系统，对检验结果进行记录和分析。
实验室应制定相应的质量控制指标，对检验结果进行评估和监控，及时发现和纠正操作中可能存在的问题。
微生物检验的质量控制对于保证检验结果的准确和可靠至关重要。
只有建立和执行科学规范的质量控制措施，才能提高微生物检验的质量和可靠性，为临床诊断和治疗提供可靠的依据。
微生物检验的质量控制
微生物检验的质量控制微生物检验是指通过对微生物的检测来确定一定环境或食品中的微生物污染水平的检测过程。
微生物检验的质量控制是非常重要的，它直接影响到检测结果的准确性和可靠性。
本文将会探讨微生物检验的质量控制的相关内容。
一、微生物检验的质量控制意义在微生物检验中，质量控制是确保测试结果准确性和可靠性的重要手段。
如果没有严格的质量控制，那么将很难确保检测结果的准确性。
微生物检验的质量控制还可以帮助实验室及时发现和解决检测过程中的问题，确保检测的全过程处于标准化和规范化状态。
二、微生物检验的质量控制内容微生物检验的质量控制主要包括实验室环境的质量控制、试剂的质量控制、设备的质量控制以及人员的质量控制。
1. 实验室环境的质量控制实验室环境的质量控制主要包括实验室的布局、温湿度控制、消毒防护等方面。
合理的实验室布局可以有效地减少实验室内的交叉污染，保证实验室内的检测结果准确。
实验室内温湿度的控制可以保证微生物检验操作的稳定性和一致性。
对实验室进行定期的消毒和维护也是非常重要的，可以有效地减少实验室内的污染源，保证检测结果的准确性。
2. 试剂的质量控制在微生物检验中，试剂的质量对检测结果起着至关重要的作用。
试剂的质量控制主要包括试剂的采购渠道、储存条件、有效期等方面。
实验室在采购试剂时，应选择正规的供应商，确保试剂的质量可靠。
试剂的储存条件也是非常重要的，一般情况下，试剂应在指定的温度和湿度下保存，以确保试剂的活性和稳定性。
实验室还应定期检查试剂的有效期，过期的试剂会影响检测结果的准确性。
3. 设备的质量控制微生物检验设备的质量对检测结果也起着重要的影响。
设备的质量控制主要包括设备的选型、安装、维护和校准等方面。
实验室在选择微生物检验设备时，应考虑设备的准确性、稳定性和灵敏度，确保设备能够满足检测要求。
设备的安装和维护也是非常重要的，定期的保养和维护可以延长设备的使用寿命，保证检测结果的准确性。
设备的校准也是非常重要的，设备的定期校准可以确保设备的准确性和可靠性。
微生物检验的质量控制
微生物检验的质量控制微生物检验是一项重要的实验室技术，用于检测食品、药品、环境以及医疗机构中的微生物污染情况。
为了保证微生物检验结果的准确性和可靠性，必须进行严格的质量控制。
本文将介绍微生物检验的质量控制措施，包括质量控制样品的选择与准备、质量控制的目标、质量控制的方法等内容。
一、质量控制样品的选择与准备在微生物检验中，质量控制样品的选择和准备是进行质量控制的关键步骤。
质量控制样品应具备代表性、稳定性和一致性。
首先，质量控制样品应具备代表性。
选择的质量控制样品应能够反映实际样品的微生物污染情况，并且能够覆盖实验室的检测范围。
例如，在食品微生物检验中，可以选取已知含有特定菌群的食品样品作为质量控制样品。
其次，质量控制样品应具备稳定性。
质量控制样品的微生物含量应稳定，并且能够在一定时间范围内保持一致。
为了确保样品的稳定性，可以进行冷冻保存或添加防腐剂等处理措施。
最后，质量控制样品应具备一致性。
同一个质量控制样品应具有相似的特性和微生物含量，以便在不同批次的检测中进行比较和验证。
可以通过定期对质量控制样品进行检测，确保微生物含量的一致性。
二、质量控制的目标质量控制的目标是确保微生物检验结果的准确性和可靠性，以及降低误差和偏差。
具体目标包括：1. 控制负对照样品的检测结果为阴性。
负对照样品是不含有目标微生物的样品，用于评估实验室的污染情况和检测方法的特异性。
负对照样品的检测结果应为阴性，否则说明实验室存在污染问题。
2. 控制正对照样品的检测结果为阳性。
正对照样品是含有特定微生物的样品，用于评估实验室的检测方法和灵敏度。
正对照样品的检测结果应为阳性，否则说明实验室的检测方法存在问题。
3. 控制微生物检验结果的可重复性和可比性。
同一样品在不同时间或者在不同实验室中进行检测，应该得到相似的结果。
通过控制质量控制样品的微生物含量和质量控制方法的一致性，可以确保检测结果的可重复性和可比性。
三、质量控制的方法在微生物检验中，常用的质量控制方法包括内部质量控制和外部质量控制。
微生物检验流程与质量控制
微生物检验流程与质量控制1.样品采集：选择合适的采样点和时间，采集样品。
保持样品的完整性和无菌状态，以防止外部污染。
2.样品处理：对样品进行处理，以便后续检测。
例如，食品样品可以进行破碎和稀释，以便检测微生物的存在和数量。
3.培养基制备：根据需要选择适当的培养基，准备培养基。
4.增菌：将样品接种到培养基中，以促进微生物的生长。
可使用平板法或液体培养法。
5.培养：将接种后的培养基放入恒温培养箱中进行培养。
根据不同的微生物种类和生长条件，培养时间可能会有所不同。
6.菌落计数：在培养期结束后，对培养基上的菌落进行计数。
可以使用目视计数、平板计数器和自动计数器等不同的方法。
7.鉴定：根据菌落形态、生理生化特性和分子生物学方法等进行鉴定。
常用的鉴定方法包括免疫学方法、PCR和测序等。
8.数据分析：对检测结果进行统计分析和解释，根据需求制作结果报告。
1.环境监测：定期对实验室环境进行空气和表面微生物监测，以确保实验室内无微生物污染。
2.培养基质量控制：对于常用的培养基，需要定期进行质量验证和性能测试，以确保培养基的质量稳定。
3.质控菌株：使用已知的质控菌株进行验证实验，以确保实验方法的准确性和可靠性。
4.内部质控：在每批样品中加入内部质控样品，以评估实验的准确度和一致性。
5.标准操作程序：编写标准操作程序（SOP），确保操作的一致性和准确性。
6.培养箱校准：定期校准恒温培养箱的温度，以确保培养条件的准确性。
7.培养基浓度验证：定期检验培养基的浓度，确保适当的细菌增殖。
8.定期培训：对实验人员进行定期培训，确保他们掌握正确的操作流程和技术。
9.实验记录和文件管理：准确记录每个实验的细节和结果，建立完善的文件管理体系。
通过以上流程和质量控制措施，可以确保微生物检验的结果准确和可靠。
这对于保证食品和饮水的安全性，以及制药产品的质量至关重要。
微生物检验的质量控制
微生物检验的质量控制在实际工作中存在许多复杂因素影响微生物学检验，可能给检验结果带来偏差甚至错误，因此必须对影响检验结果的诸多因素采取控制手段保证检验结果的正确性，不断完善微生物检验的质量控制。
一、质量控制1、检验人员(1)微生物检验不能完全依赖全自动鉴定仪器，检验工作中每一步骤均需要有高度的主观分析和判断能力，与个人的经验.技能和微生物检验基础知识水平密切相关。
(2)除要求微生物检验人员必须具备严肃认真的工作态度，精密细致的观察和操作习惯,注重个人卫生外，还必须训练掌握微生物检验技术。
(3)检验人员应执行上岗前培训制度，上岗前培训合格方能上岗操作，还要主动参加学习、培训、讲座，学习新技术，掌握微生物学检验方法，标准及相关法律法规。
(4)参与编写测试程序及仪器操作程序，学习质量保证体系知识和计量学基本知识。
(5)参加各类水平测试和盲样测试，提高检测水平和分析问题，解决问题的能力。
(6)微生物学检验室负责人应定期对检验人员进行专业知识和操作熟练程度的考核，提高检验人员的素质。
2、培养基（1）为保证干粉培养基质量指标，在实际工作中应注意；加强包装的密封性能；使用时尽量缩短开盖时间；一般干性培养基放在低温干燥的环境中保存，对于易受潮的品种，启用后宜放入干燥器中保存；由于配制水分不同，启用次数或时间增加，干粉培养基的pH值可能会有所变化，应随时略加调整。
（2）培养基的配制应严格按照标准规定的方法进行操作，并做好原始记录。
（3）为保证培养基必须在玻璃容器，搪瓷或铝锅中进行，如用铜，铁器皿，会对微生物生长有毒害作用；（4）配制培养基时应按检验项目规定的配方添加，不得随意增减或更改培养基成分。
（5）要用专用的角匙取药品，避免交叉污染而影响检验结果；培养基配制最好用蒸馏水或去离子水，避免使用自来水，因其中含有氯等抗菌物质；3、检验质量除按国家标准方法对所需检验项目进行检测外，在实际工作中还应注意以下几个方面，否则会影响检验结果的准确性：（1）在定量检验时用重量法还是用体积法，检验结果会有误差，因为此重不等于1的样品，1ml和1g的化验结果绝不会相等。
微生物检验的质量控制—微生物检验室内质量控制(微生物检验课件)
2.设备监测 ➢用于检测的温度依赖性设备定时监测温度，如培养箱、水浴箱、冰箱 ➢CO2培养箱每日记录CO2浓度 ➢超净工作台定期做无菌试验 ➢压力灭菌器要监测灭菌效果
3.设备校准验证
➢ 每6个月进行一次检定定或校准： 生物安全柜 CO2浓度检测仪 细胞离心机 压力灭菌器 游标卡尺 培养箱 温度计 移液器 微量滴定管 自动分配器
4. 质量控制： ➢无 菌 试 验 ➢生 长 试 验 ➢与 旧 批 号 平 行 试 验 ➢生 长 抑 制 试 验 （ 适 用 时 ） ➢生 化 反 应 （ 适 用 时 ） 5. 自制培养基每： ➢批 号 产 品 应 检 测 相 应 的 性 能 6. 购买培养基： ➢当 培 养 基 脱 水 、 溶 血 、 破 损 、 冷 冻 、 被 污 染 或 量不足时，仍应进行质量控制。 ➢若 生 产 者 不 能 提 供 所 遵 循 的 质 量 保 证 标 准 ， 实 验室应进行质量控制和相应的性能检测。
任何适用的要求确定保留时间。 样品的安全处置应符合地方法规或有关废物管理的建议。
小结
微生物实验室的检验结果为临床感染性疾病提供快速、准确 的病原学诊断依据，指导临床合理使用抗菌药物，达到治疗、控 制和预防感染性疾病的目的。
因此必须建立全面的质量控制体系，保证检验结果的准确性、 可靠性和可重复性。
在实际工作中存在许多复杂因素影响微生物学检验， 可能给检验结果带来偏差甚至错误。
因此，必须对影响检验结果的诸多因素采取控制手段保 证检验结果的正确性
微生物学质量控制
质量控制是临床微生物学实验室为了保证检验结果， 实事求是地反映客观存在而建立的一套操作程序体系， 是质量管理的一部分，致力于满足质量要求。
二、试剂
1. 试剂标记：名称、浓度、储存条件、配制日期、失效期 、生物危害性。
微生物检验的质量控制
2 仪器、设备
▪ 大型微生物检验室的主要仪器及设备包括：
▪ 无菌室、微生物自动鉴定仪、微生物快速初筛 仪、显微镜、菌落计数器、高压灭菌器、干热灭 菌器、离心机、蒸馏设备、培养箱、厌氧箱、水 浴箱、冰箱、超净工作台、酶标仪、洗板机、 PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。
▪ 制备好的培养基应及时使用，使用 不完的，如无特殊需求，可室温或2-8℃ 冷藏保存。
▪ ▪ 如用塑料袋密封，保存期可延长，
发生变质等被污染迹象或干裂现象的那 么不能再使用。
表1 培养基在2-8℃冷藏条件下保存的有效期
培养基种类 平板培养基 试管（棉塞）培养基 试管（螺旋盖）培养基
保存条件 不装塑料袋 塑料袋密封 不装塑料袋 塑料袋密封 不装塑料袋 塑料袋密封
▪ 〔2〕在严格无菌操作的条件下，按国家规定的样品 采集标准均匀而准确地取样，并及时封口，使样品 具有准确性和代表性。
5 采样
▪ 〔3〕每件样品封口后，贴上标签，做好记录(如 样品名称、采样地点、时间、数量、储藏情况、 采集或送检单位及姓名、采样现场温度、湿度及 卫生状况等)。采集后的样品，一般可保存在28℃的环境中，如果样品是冷冻食品，应保持在 冷冻状态，并及时送检。
▪ 〔4〕采样数量不能少于全部检验需要量的3倍， 以供检验、复检、备查。
6 样品的接收和预处理
▪ 样品送达实验室时，应检查样品标记是 否与样品相符，样品包装状况是否正常。
▪ 假设存在下述情况，应考虑拒收样品：
▪ 〔1〕抽样后样品送达实验室的时间太迟，
▪
使其不能在规定的时间内进展检验；
▪ 〔2〕样品温度太高；
微生物检验与控制
培养基适用性检查
培养基促生长能力检查
分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考察。
培养基抑菌能力检查
分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考察。
检验方法适用性试验：
实质：控制菌检验方法验证。
适用性试验：
规定最短时间培养，试验菌检出能力试验。
供试品检查：
规定最长时间下的控制菌试验。
微生物限度测试的必要性：
原材料及环境中的微生物水平，在很大程度 上影响产品的微生物质量。
环境监测体系
1、清洁和消毒
执行清洁和消毒程序是整个工厂管理的重要组成。要用 环境监测数据来评价这些程序的有效性
影响消毒消毒的因素：消毒剂类型，左右时间，待 消毒表面
消毒剂效率测试 残留去除
环境监测体系
2、取样位置的选择：
哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？ 在生产过程中，什么地点最容易长菌？ 取样点的选择需要统计学设计或根据网格法来确定？ 在
环境微生物监测方案：
1、需氧微生物监测
2、霉菌/酵母菌监测
通常厌氧菌不必常规检测，但如果无菌环境 中发现此类微生物，需增加取样频率。
洁净环境监测主要方面：
微生物监测
无菌药品：
没有任何活体微生物的药品。（理论定义）
符合现行质量标准的药品。 检验项目：无菌检验 限度规格：检验结果阴性 检验方法：现行药典的检验方法 取样方法：现行药典规定的取样方法
常规监测中，有一些点需要周转取样吗？ 哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难凑
效的部位？ 什么活动会导致污染的扩散？ 在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染
产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？
环境监测体系
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霉菌和菌总数计数：
培养基：沙氏葡萄糖琼脂 SDA 试验菌株：白色念珠菌、黑曲霉菌 接种量：不大于100 cfu 培养条件：温度：20-25℃（？）
101 可以接受的最大菌数为20； 102 可以接受的最大菌数为200； 103 可以接受的最大菌数为2000；
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非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法
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培养基适用性检查
培养基促生长能力检查
分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考察。
培养基抑菌能力检查
分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考察。
时间：不超过5天
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培养基适用性检查：
范围： - 成品培养基（新引入概念）（？） - 由脱水培养基制成的培养基 - 按处方配制的培养基
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培养基适用性检查合格标准：
1、回收率比值：0.5-2 范围内（以前是多少？）；
2、菌落：形态大小与对照培养基一致；（平板上长 五花八门的菌落怎么办？）
15min（我们应该怎么做？）
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培养基灭菌条件
-在无菌和过度加热之间平衡 -消毒锅灭菌结束后，不建议在其中存储培养基 -不正确的加热、灭菌条件会影响培养基的
颜色 澄清度 pH 凝固能力 促生长能力 选择性
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制备培养基的储存:
-低于0℃，凝胶结构破坏 -避光 避热 -琼脂培养基密封
3、液体培养基：被检液体培养基与对照培养 基比较，生长良好。
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回收率：
USP34-61：
For solid media, growth obtained must not differ by a factor greater than 2 from the calculated value for a standardized inoculum。
药品微生物检验与控制
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培训主题：
1、新修订的“微生物限度检查法”介绍 2、药品微生物实验室质量管理和质量保证 3、药品微生物检验操作技术 4、洁净环境微生物监测
2
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2
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中国药典修订版整体特点：
微生物检验方法与国外药典接近 符合微生物生长特性（利于微生物的检出、
对于固体培养基，获得的生长结果不得超 过由标准接种而来的计算值的两倍范围。
对照组计数
—————— ≤ 测试组计数 ≤ 2 X 对照组计数
2
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计数方法适用性试验：
实质：微生物计数方法验证。
几个数字要求： - 接种菌悬液的体积不大于供试液的1% - 菌悬液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的标准：回收率低于50%（？）
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检验方法适用性试验：
实质：控制菌检验方法验证。
适用性试验：
规定最短时间培养，试验菌检出能力试验。
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供试品检查：
规定最长时间下的控制菌试验。
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微生物控制菌检验结果解释：
-阳性。产品报废。 -阴性，（1）未检出；
（2）非控制菌。怎么办？
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微生物实验室检验技术
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非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法
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主要特点
需氧菌概念？ 回收率测试方法与合格限度
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培养基适用性检查：
培养基： 胰酪大豆胨琼脂/胰酪大豆胨肉汤？ TSA / TSB
沙氏葡萄糖琼脂/沙氏葡萄糖肉汤 SDA
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
9
需氧菌总数计数：
培养基：胰酪大豆胨琼脂 TSA 试验菌株：金黄色普通球菌、铜绿假单胞菌、枯
更易生长） 标准与国际药典USP/EP/JP相近
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微生物学是开发、生产及成品测试的一部分
无菌控制也适用于非无菌产品（无菌观念： 不要人为引入微生物）
控制贯穿于一个药物或生物制剂从研发到市场 到成品控制的整个过程 整个过程中的各种微生物控制的整合将提高 最终产品微生物质量的保证
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无菌技术：
防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染 的操作方法和管理方法。
-无菌环境 -灭菌 -消毒 -卫生要求 -无菌操作技术
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培养基
微生物实验室工作质量的核心是培养基，应根据既定的 目的选用正确的培养基。生产商应提供相关的COA和说 明书:
-配制 -储存 -菌种选用
水:
（涂布法：涂布时候0.1ml里应含有100cfu菌悬液， 所以可用上一级的稀释液）
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微生物测试方法
平皿法
1、倾注法； 2、涂布法（新增）
薄膜过滤法
MPN法（一般用在食品行业）
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涂布法：
新引入的方法 关键点：涂布供试液不少于0.1mL.
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微生物限度标准解释：
融化 -重复融化应被限制（不超过一次），
防止过度加热或潜在污染 -融化时，使用
水浴或流通蒸汽 微波炉，热板要防止过度加热 -融化的培养基储存 在40~45℃水浴不应超过8小时 浇制平皿前擦干
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培养基应标示:
-制备批号 -制备日期，有效期 -培养基名称
有效期确定
-根据成分，配方，容器，储存条件等确定 -生长能力试验数据支持
-纯化水，去离子水，蒸馏水 -记录用量
成分的测量:
-校准过的天平，天平的量程应准确 -清洁的容器和工具 -记录称量
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培养基
不要过度加热
-加热帮助溶解，通常培养基变深说明过度加热 -添加剂加入后需充分混合
清洁的玻璃器皿
-防止外来污染和抑菌剂 -玻璃器皿清洁
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培养基
灭菌条件
-供应商提供参数，或自己验证 -高压蒸汽灭菌，过滤除菌 -验证应考虑无菌和培养基生长能力 - 湿 热 灭 菌 要 考 虑 装 载 分 布 ， 通 常 121℃
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作为重要组成的微生物控制：
原料和组分的微生物控制（源头）
环境的微生物控制（动态时取样点如何确定？）
生产过程的微生物控制（比A级区更好的区域是什么？） 成品的微生物控制 人员的微生物控制
所有微生物控制的整合
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微生物实验室重要的控制点：
-无菌技术（人员是关键） -培养基控制 -菌种控制 -设备控制 -实验室布局和运作 -数据文件控制 -员工培训