细胞和分子生物学实验重点知识点汇总

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分子与细胞知识点总结

分子与细胞知识点总结

分子与细胞知识点总结一、分子的结构1.分子的基本概念①分子是由原子通过共价键或离子键连接而成的物质单位。

②分子是一般物质的基本单位,包括有机物质和无机物质。

2.分子的组成①分子由原子组成,原子是构成物质的最基本的微观粒子。

②分子的组成可以是单质原子(O2、N2等)、复合物质(H2O、CO2等)或者大分子化合物(蛋白质、核酸等)。

3.分子的性质①分子的性质由构成它的原子种类和结构决定。

②分子的性质包括物理性质(如颜色、溶解度等)和化学性质(如反应活性、稳定性等)。

二、细胞的结构1.细胞的基本概念①细胞是生物体的基本单位,是生命的基本组成部分。

②细胞是通过细胞分裂产生的,包括原核细胞和真核细胞两种类型。

2.细胞的组成①细胞包括细胞质、细胞膜、细胞核和细胞器等组成部分。

②细胞质包括细胞器和细胞器间质,其中细胞器主要包括内质网、高尔基体、核糖体、线粒体和叶绿体等。

3.细胞的功能①细胞的功能包括新陈代谢、生长、分裂、运动和自我调节等。

②细胞的功能是由细胞的结构和组成决定的,其中各个细胞器都有其特定的功能。

三、细胞膜的结构与功能1.细胞膜的结构①细胞膜是由磷脂双分子层和蛋白质组成的薄膜结构。

②细胞膜的磷脂双分子层包括疏水性头部和亲水性尾部,蛋白质可以是固定在磷脂层上方或者穿过整个膜的跨膜蛋白。

2.细胞膜的功能①细胞膜是细胞的保护壁,保持细胞内外环境的稳定。

②细胞膜是细胞的门控,对物质的进出进行选择性通透。

③细胞膜参与细胞间通讯和信号传递,调控细胞的生理和代谢活动。

四、细胞色素的结构与功能1.叶绿体的结构①叶绿体是植物细胞中的细胞器,具有双膜结构。

②叶绿体内包含叶绿体基质、叶绿体内膜系统和类囊体三个部分。

2.叶绿体的功能①叶绿体是光合作用的场所,其中的叶绿体基质包含叶绿体DNA和叶绿体RNA,可以进行光合作用产生ATP和NADPH。

②叶绿体还可以进行暗反应,将产生的ATP和NADPH用于CO2的固定和还原反应。

博士生生物学细胞分子生物学知识点归纳总结

博士生生物学细胞分子生物学知识点归纳总结

博士生生物学细胞分子生物学知识点归纳总结细胞是构成生物体的最基本单位,生物学的研究对象之一。

细胞分子生物学则是研究细胞内部分子的结构、功能以及相互作用关系的学科。

作为博士生物学领域的学习者,深入理解和掌握细胞分子生物学的知识点是非常重要的。

本文将对博士生生物学细胞分子生物学的知识进行归纳总结,并提供相关的学习指导。

一、细胞的组成与结构1. 细胞膜:细胞膜是细胞的外层包裹物,由双层磷脂分子构成。

它具有选择性通透性,能够调控物质的进入和排出。

2. 细胞质:细胞质是细胞膜内部的胶状物质,包含有各种细胞器和细胞结构。

3. 细胞核:细胞核是细胞内的控制中心,包含有遗传物质DNA和RNA。

细胞核内还包含有核仁和核膜等结构。

4. 亚细胞结构:细胞内还存在着各种具有特定功能的亚细胞结构,例如线粒体、内质网、高尔基体等。

二、细胞分子生物学的基本概念与技术1. DNA:脱氧核糖核酸(DNA)是生物体内存储遗传信息的分子。

它是由四种碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳕嘌呤)组成的双螺旋结构。

2. RNA:核糖核酸(RNA)是DNA的转录产物,承担着蛋白质合成的功能。

RNA包括信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA(rRNA)等。

3. 蛋白质:蛋白质是细胞中最重要的功能分子之一,它不仅构成细胞的结构基础,还参与各种生物化学反应和信号传导过程。

4. PCR:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种重要的分子生物学技术,用于扩增DNA片段并进行基因分析。

5. 基因克隆:基因克隆是将特定的DNA片段插入到载体中,然后在宿主细胞内复制和表达的技术,广泛应用于基因工程研究和生物医学领域。

三、细胞分子生物学的重要进展与应用1. 基因编辑技术:包括CRISPR-Cas9等基因编辑技术的出现,使得基因组的编辑和调控变得更加精准和高效。

2. 基因表达调控机制:研究人员对基因的转录、翻译和后转录调控机制有了更深入的了解,有助于研究各种疾病的发生机理。

细胞分子生物学知识点

细胞分子生物学知识点

细胞分子生物学知识点细胞分子生物学是生物学中重要的一个分支,研究细胞的结构、功能以及其中的分子机制。

本文将以细胞分子生物学的常见知识点为主题,逐一介绍以下内容:DNA的结构和功能,RNA的种类和作用,蛋白质合成和调控,细胞信号传导,细胞凋亡,以及基因调控网络。

一、DNA的结构和功能DNA是细胞内重要的遗传物质,它以双螺旋结构存在于细胞核中。

DNA的结构由两个互补的链组成,这些链由核苷酸单元以碱基对的方式相互连接而成。

碱基对分为腺嘌呤-胸腺嘧啶(A-T)和鸟嘌呤-胞嘧啶(G-C)。

DNA的主要功能是存储和传递遗传信息。

在细胞分裂过程中,DNA会复制自身,并将遗传信息传递给下一代细胞。

这种复制机制使得遗传信息的传递变得可能,并且为细胞的生长和发育提供了基础。

二、RNA的种类和作用RNA是DNA的辅助分子,它通过转录过程将DNA的信息转录成RNA分子。

在细胞内存在多种类型的RNA,包括信使RNA (mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA(rRNA)等。

mRNA是一种带有遗传信息的RNA分子,它通过转录过程将DNA的信息转录成RNA,然后通过转译过程将这些信息转化为蛋白质。

tRNA是一种转运RNA,它通过与氨基酸结合,将氨基酸运送到正在合成蛋白质的位置。

rRNA是一种核糖体RNA,它与蛋白质一起组成核糖体,参与蛋白质的合成过程。

三、蛋白质合成和调控蛋白质是细胞中最丰富的分子,是细胞的工作马。

蛋白质的合成是一个复杂的过程,包括转录和翻译两个步骤。

转录是将DNA上的信息转录成RNA的过程。

在此过程中,DNA 的双链解开,形成 RNA的单链模板,然后RNA的核苷酸与DNA的碱基互补配对,最终形成RNA分子。

翻译是将mRNA上的信息转化为蛋白质的过程。

在细胞质内,mRNA根据遗传密码子的规则,通过三联密码子依次与带有氨基酸的tRNA配对,合成蛋白质链。

蛋白质的合成过程受到多种调控机制的影响,包括转录水平调控、转录后调控以及蛋白质降解等。

分子与细胞 生物知识点总结

分子与细胞 生物知识点总结

高中生物必修1晨读版一、走进细胞1、生命系统的结构层次依次为:细胞→组织→器官→系统→个体→种群→群落→生态系统细胞是生物体结构和功能的基本单位;地球上最基本的生命系统是细胞2、光学显微镜的操作步骤:对光→低倍物镜观察→移动视野中央(偏哪移哪)→高倍物镜观察高倍镜观察:①只能调节细准焦螺旋;②调节大光圈、凹面镜③看到的是倒像★3、原核细胞与真核细胞根本区别为:有无核膜为界限的细胞核①原核细胞:无核膜,无染色体,如大肠杆菌等细菌、蓝藻②真核细胞:有核膜,有染色体,如酵母菌,各种动物注:病毒无细胞结构,无核膜,无染色体,但有DNA或RNA4、蓝藻是原核生物,自养生物,可以进行光合作用,但是没有叶绿体。

5、细胞学说建立者是施莱登和施旺,细胞学说建立揭示了细胞的统一性和生物体结构的统一性。

二、组成细胞的元素和化合物1.组成细胞的元素①大量无素:C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg②微量无素:Fe、Mn、B、Zn、Mo、Cu(铁锰碰新木桶)③主要元素:C、H、O、N、P、S④最基本元素:C⑤细胞干重中,含量最多元素为C,鲜重中含最最多元素为O2.组成细胞的化合物无机化合物包括水和无机盐,其中水是含量最高的化合物;有机化合物包括糖类、脂质、蛋白质和核酸。

①糖类是主要能源物质,化学元素组成:C、H、O。

糖类的分类:①单糖:葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、脱氧核糖②二糖:麦芽糖、蔗糖、乳糖★③多糖:淀粉和纤维素(植物细胞)、糖原(动物细胞)脂肪(元素组成C、H、O,比糖含H高):储能;保温;缓冲;减压②脂质:磷脂:生物膜重要成分(膜的基本支架,双层排列)胆固醇固醇:性激素:促进人和动物生殖器官的发育及生殖细胞形成维生素D:促进人和动物肠道对Ca和P的吸收③蛋白质:干重中含量最高的化合物,化学元素:C、H、O、N。

④核酸:细胞中含量最稳定,是遗传信息的携带者,元素组成:C、H、O、N、P。

3.实验一:检测生物组织中的糖类、脂肪、蛋白质(1)“还原糖的检测和观察”之注意事项:①还原糖有葡萄糖,果糖,麦芽糖;选择材料:苹果或梨,不能用甘蔗或甜菜。

分子生物学知识点整理

分子生物学知识点整理

分子生物学知识点整理1.基本分子生物学概念:基因、DNA、RNA和蛋白质是分子生物学的基本概念。

基因是一段DNA序列,负责编码产生RNA和蛋白质。

DNA是脱氧核糖核酸,由含有遗传信息的碱基序列组成。

RNA是核糖核酸,负责将DNA的信息转录成具体蛋白质的制作指令。

蛋白质是由氨基酸组成的大分子,负责细胞的结构和功能。

2.DNA的结构:DNA是双螺旋结构,由两条互相缠绕的链组成,这两条链通过碱基之间的氢键相互连接。

DNA的碱基包括腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。

3.DNA复制:DNA复制是细胞分裂的过程中,DNA双链被复制为两条相同的DNA双链。

这是生命的一个基本过程,确保每个新细胞都有完整的遗传信息。

DNA复制是由DNA聚合酶酶进行的,它们能够将新的碱基加到原有的DNA链上。

4.转录:转录是将DNA的信息复制成RNA的过程。

这个过程包括三个步骤:启动、延伸和终止。

在转录开始时,RNA聚合酶酶会识别DNA链上一个特定的启动位点,然后沿着DNA模板链向前延伸合成RNA链。

转录的终止是由特定的序列标志着的,一旦被识别,RNA聚合酶酶就会停止合成RNA。

5.翻译:翻译是将RNA的信息转化成蛋白质的过程。

这个过程涉及到tRNA和核糖体的作用。

tRNA具有与特定氨基酸结合的能力,并根据mRNA 模板上的密码子序列,将氨基酸逐个带入核糖体中合成蛋白质。

6.基因调控:基因调控是细胞内基因表达的调控机制,使细胞能够根据需要调整哪些基因的表达,以适应不同的环境条件。

这包括启动子、转录因子和RNA干扰等机制。

7.基因突变和遗传变异:基因突变是指在DNA链上发生的改变,可能导致蛋白质的结构和功能的改变。

遗传变异包括基因重组、基因扩增和基因缺失等,能够产生新的基因组和生物特征。

8.PCR:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于扩增DNA片段的技术。

它涉及到短的引物,用于界定所需扩增的DNA片段,然后通过多次的加热和冷却循环,DNA被不断复制,产生大量的DNA片段。

细胞与分子生物学实验

细胞与分子生物学实验

实验操作技巧
掌握正确的实验操作方法 ,如无菌操作、细胞培养 、DNA提取等,保证实验 的准确性和可重复性。
废弃物处理
按照相关规定对实验废弃 物进行分类、处理和处置 ,减少对环境的污染。
常用仪器设备及使用方法
细胞培养箱
提供细胞生长所需的温度、湿 度和气体环境,用于细胞培养 和增殖。
PCR仪
用于扩增特定的DNA片段,是 分子生物学实验中常用的设备 之一。
DNA纯化
去除DNA溶液中的杂质 ,如蛋白质、RNA和多 糖等,常用方法包括乙 醇沉淀、硅胶柱层析等 。
DNA鉴定
通过凝胶电泳、紫外分 光光度计等方法检测 DNA的纯度和浓度,以 及通过PCR、限制性内 切酶酶切等方法鉴定 DNA的序列和结构。
RNA提取、纯化和反转录技术
RNA提取
通过变性剂破碎细胞,释放RNA ,常用方法包括异硫氰酸胍法、
活力检测
通过染色法、荧光法等方法检测细胞 活力,了解细胞的生长状态和存活率 。常用方法有台盼蓝染色法、MTT法 等。
特殊类型细胞培养方法探讨
原代细胞培养
直接从组织或器官中分离出的 细胞进行培养,需模拟体内环 境,提供适当的生长因子和营
养物质。
细胞系培养
经过多次传代后形成的具有稳 定遗传特性的细胞群体,需关 注细胞的遗传稳定性和表型变 化。
干细胞培养
具有自我更新和多向分化潜能 的细胞,需提供特定的生长因 子和微环境以维持其干性。
肿瘤细胞培养
研究肿瘤细胞的生物学特性和 药物筛选,需关注细胞的恶性
表型和异质性。
03
分子生物学基本实验操作
DNA提取、纯化和鉴定方法
DNA提取
通过化学或物理方法破 碎细胞,释放DNA,常 用方法包括酚-氯仿抽提 、SDS裂解法等。

高一必修一生物实验知识点总结

高一必修一生物实验知识点总结

高一必修一生物实验知识点总结一、细胞实验1. 细胞的观察:使用显微镜观察植物细胞和动物细胞的结构,包括细胞膜、细胞质、细胞核等。

2. 细胞的染色体:观察植物细胞和动物细胞的有丝分裂和无丝分裂过程,了解染色体在细胞分裂中的作用。

3. 细胞分裂的控制:通过观察洋葱根尖的有丝分裂过程,了解细胞分裂的控制机制。

二、生物分子实验1. 蛋白质的检测:利用双苯胺法检测食品中的蛋白质含量。

2. 糖的检测:使用贝氏试剂检测食品中的糖含量。

3. 淀粉的检测:利用碘液检测食品中的淀粉含量。

4. 脂肪的检测:利用酚酞试剂检测食品中的脂肪含量。

三、生物基因实验1. 基因的提取:通过提取植物细胞中的DNA,观察DNA的提取过程。

2. 基因的转化:利用农杆菌介导的转化方法将外源基因导入植物细胞中,实现基因转化。

3. 基因的扩增:利用聚合酶链反应(PCR)技术对DNA进行扩增,以获得足够的DNA量进行进一步研究。

四、生物生态实验1. 光合作用的观察:通过观察水生植物在不同光照条件下的氧气释放量,了解光合作用的过程和影响因素。

2. 呼吸作用的观察:通过观察动物在静息和运动状态下的呼吸频率,了解呼吸作用对能量消耗的影响。

3. 影响种子萌发的因素:通过观察不同温度、光照和湿度条件下种子的发芽率和发芽速度,了解各种因素对种子萌发的影响。

五、遗传实验1. 食物中的遗传物质:通过提取食物中的DNA,观察不同食物中的DNA含量和特征。

2. 基因型的推测:通过观察果蝇的眼色和翅膀形态,推测果蝇的基因型,并了解基因的遗传规律。

3. 基因突变的观察:通过观察果蝇突变体的表型变化,研究基因突变对个体特征的影响。

六、生物进化实验1. 演化的证据:通过观察不同物种的化石和现存物种的形态特征,研究演化的证据和演化的过程。

2. 自然选择的模拟:通过模拟环境中的资源竞争和适应性选择,观察种群的变化和进化过程。

以上是高一必修一生物实验的一些知识点总结,通过这些实验可以更好地理解生物学的基本原理和概念,培养实验操作和观察分析的能力,为进一步学习生物提供基础。

分子与细胞知识点总结

分子与细胞知识点总结

分子与细胞知识点总结
分子与细胞知识点总结
细胞是生物体结构和功能的基本单位
主要包括以下内容:
(1)组成细胞的分子:此部分需掌握的内容主要为六大化合物的分布、结构、主要功能、及鉴定方法。

(2)细胞结构:细胞膜、细胞质(各种细胞器的结构及功能)、细胞核此部分需掌握各部分的结构和功能。

(3)细胞代谢(细胞中的各种生物化学反应统称细胞代谢)
①物质的跨膜运输:细胞代谢伴随着物质的输入与输出该部分需掌握三种跨膜运输方式的特点及实例。

②ATP:细胞代谢伴随着能量的'释放或吸收,而细胞生命活动直接利用的能量形式是ATP。

③酶:细胞代谢需要酶的催化该部分包含的考点主要有酶的化学本质、酶的作用特点、影响酶促反应速率的因素。

④两种重要的细胞代谢:光合作用与细胞呼吸
(4)细胞的生命历程:细胞的增殖、分化、衰老、凋亡、癌变。

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细胞和分子生物学实验重点知识点汇总Experiment1细胞有丝分裂间期:有明显的细胞核,染色质分布较均均,由于染色质易与碱性染料结合,故细胞核的染色比细胞质深。

核中可见1~3个染色较浅的呈球状的核仁前期:细胞核膨大,染色质逐渐螺旋化为丝状的染色丝,其后染色丝进一步缩短变粗,形成一定形态和书目的染色体(这时候的每条染色体由两条染色单体组成,但在光镜下一般不易看清),核膜、核仁逐渐消失中期:每条染色体中的成对染色单体逐渐分开(但着丝粒仍未分离)全部染色体(2n=16)移向细胞中央的赤道面上,形成赤道板。

在赤道板到两面有许多纺锤丝连接细胞两极和染色体的着丝点,成为纺锤体,但不易观察到,此时染色体形态最典型后期:着丝粒纵裂为二。

这是,每条染色体的两条染色单体已完全分开,由于纺锤丝的牵引,分别向细胞的两极移动,形成了数目相等的两组染色体(这是所观察到的染色体数目比原来增加1倍,是由于S期内DNA含量倍增的结果)末期:染色体移到两极并解旋为染色质,细胞中部出现细胞板,并逐渐向边缘发展。

当染色质构成核网时,核膜、核仁重新出现。

细胞板达到两边,分裂结束,形成两个子细胞,细胞又进入间期状态。

Experiment2动物染色体的制备原理:染色体只有在分裂期的细胞,特别是中期细胞中表现出典型形态便于观察和计数,所以必须采取特殊的技术方法,从发生有丝分裂的组织和细胞悬液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备。

骨髓细胞数量多、分裂旺盛,不需体外培养和无菌操作,便于取材。

秋水仙素的作用:抑制纺锤体的形成,使细胞停留在分裂中期KCl低渗溶液:使细胞膨胀,促使中期染色体散开固定液:有固定作用,对染色体还有一定的分散作用Giemsa染色液:染色结果:低倍镜下,可见到许多大笑不等被染成紫红色呈圆形的间期细胞核以及分散在它们之间的中期分裂象。

小鼠染色体一般呈“U”形,染色体2n=40Experiment3蟾蜍血细胞的体外融合原理:细胞融合又称体细胞杂交,通过培养和诱导,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。

是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞,随后异核体同步进入有丝分裂,核膜崩溃,来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞,此杂交细胞具有很强的生命力,增殖旺盛。

细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段,也是制备单克隆细胞株的重要技术。

肝素:血液抗凝PEG溶液:促进细胞凝集Hanks溶液:终止PEG作用,平衡缓冲溶液使PEG的浓度降低至诱导融合的要求。

詹纳斯绿:染液Experiment4 AKP Km测定原理:在温度pH和酶浓度一定时,酶促反应初速度与底物浓度的关系满足米-曼氏方程式(公式自己补充)Km是酶的特征常数,反映了酶与特定底物的亲和力大笑。

测定Km值通常用双倒数法,推导上述米-曼氏方程式可得一直线方程:(公式自己补充),在横坐标上的截距即可算出Km 值。

AKP最适pH为10,而酶蛋白最稳定pH为8,测定其Km值时反应体系选择其最适pH。

本实验取pH为10。

Experiment5葡萄糖定量方法─标准管法测定葡萄糖含量原理:在葡萄糖氧化酶的催化作用下β-D葡萄糖样化成过氧化氢和葡萄糖酸,在过氧化酶的存在下,过氧化氢与苯酚、4-氨基安替比林与偶联酚缩合成可被分光光度计测定的红色醌类化合物。

其红色在510nm波长处有最大吸收峰,颜色的深浅在一定范围内与血葡萄糖浓度成正比。

结果:人体正常血糖:3.9~5.8 m mol/ LExperiment6蛋白质定量测定方法─标准曲线法测定蛋白质含量原理:双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物,在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物,此反应即为双缩脲反应。

含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。

蛋白质含有多个肽键,在碱性溶液中能与铜离子络合成紫红色化合物。

其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比,可以用比色法进行鉴定。

Experiment7酶联免疫吸附试验(ELISA)─双抗体夹心法原理:酶联免疫吸附试验是一种固相酶免疫测定的方法,目前广泛应用于各种抗原和抗体的检测。

其基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体表面,并保持其免疫活性,再与酶标记抗体或抗原联结,并保留酶的活性,然后加入酶反应的底物,后者被酶催化变为有色产物,反应颜色的深浅可与相应抗原或抗体的量相关。

在本实验中(1)用一直抗体包被固相载体;(2)加入受检的标本(含待测抗原),使抗原与固相上的抗体结合;(3)加入以辣根过氧化物酶标记的已知抗体,使之与抗原结合。

标记的酶可催化底物(四甲基联苯胺)起显色反应,从而指示特异性抗原抗体反应的存在。

Experiment8血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理:血清蛋白的pI都在7.5一下,在pH8.6的巴比妥缓冲液中以负离子的形式存在,分子大小,形状也各有差异,所以在电场作用下,可在醋酸纤维薄膜上分离成A、α1、α2、β、γ五条区带。

电泳结束后,讲醋酸纤维薄膜置于染色液,使蛋白质固定并染色,再脱色结果:A、α1、α2、β、γExperiment9免疫电泳与对流免疫电泳原理:免疫电泳是将电泳与双向琼脂扩散相结合的一种抗原分析方法。

首先根据抗原中各种蛋白质组分的电荷和分子量大小的不同,在电场作用下有不同的迁移率,从而可将抗原混合物中的各种不同组分愤慨,然后使其与特异性抗体进行双向扩散,发生免疫学沉淀反应。

对流免疫电泳是电泳技术与双向琼脂扩散技术相融合而形成的一种定向加速的凝胶内免疫沉淀反应。

与双向琼脂扩散技术中抗原与抗体分别向四周自由扩散不同,对流免疫电泳在凝胶中加一直流电场,抗原和抗体受到电泳和电渗两种力量的综合作用而向某一方向定向加速移动,因此可以提高灵敏度,明显缩短反应时间。

Experiment10小鼠脾单个核细胞的分离─密度梯度离心法:原理:本次实验根据颗粒沉降原理,将不同密度的小鼠脾脏细胞置于淋巴细胞分离液上进行水平式离心,使单个核细胞在其沉降运动中位于分离液洁面上;达到分离小鼠脾单个核细胞的目的。

已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的密度约为1.088,而红细胞与粒细胞的密度均大于1.088。

因此,用密度为1.088±0.001的淋巴细胞分离液通过密度梯度离心方法,可从小鼠脾脏细胞分离得到单个核细胞。

而分离人单个核细胞的淋巴细胞分离液密度为1.077±0.001.Experiment11凝胶柱层析分离鉴定蛋白质原理:利用交联葡聚糖凝胶G-50的凝胶过滤作用,将脲酶和胰岛素分开,以Folin-Denis反应检查流出液中的蛋白质。

此反应主要靠蛋白质中的酪氨酸和色氨酸与含磷鉬钨酸的酚试剂生成蓝色鉬蓝,蓝色深浅与蛋白质含量成正比关系。

以纳氏试剂检查脲酶活性,此反应是先将脲酶流出液分解尿素产生胺,而氨可与纳氏试剂作用生成黄色的碘代双汞胺。

脲酶试剂:分子筛层析结果:先分离出脲酶,再分离出胰岛素,出现两个峰值Experiment12DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析原理:聚酰胺薄膜层析是一类较特殊的吸附分配层析。

混合物随流动相通过聚酰胺薄膜时,由于被分离的物质与聚酰胺薄膜上的酰胺基团形成氢键,各种物质形成氢键能力强弱不同,决定了吸附力的差异,吸附力强展层速度较慢,吸附力弱展层速度较快,同时展层溶剂与被分离物质在聚酰胺粒子表面竞争形成氢键,选择适当的展层溶剂,使被分离物质在溶剂与聚酰胺薄膜表面之间分配系数产生最大差异。

一般讲,易溶于展层剂的所受到的动力作用大,展层速度块,反之速度就慢。

通过各物质的吸附力和分配系数不同,使得被分离的物质在聚酰胺薄膜层析中得到分离。

结果:聚酰胺薄膜上出现9~10个点。

Experiment13鼠肝DNA的提取和纯化原理:DNA是染色体的主要组成成分,是遗传的物质基础。

DNA在生物组织中往往以核蛋白的形式主要存在于细胞核中,分子量甚大,人的染色体DNA(单倍体23条染色体)平均分子量约为6×10(10)道尔顿,约相当于1.3×10(5)kb。

提取DNA最基本的要求是保持DNA大分子的完整性及纯度,避免机械张力(剪切)引起DNA分子的降解,注意对杂质及蛋白质的去除,防止细胞内存在的DNA酶对DNA的酶解。

苯酚-氯仿混合液:使蛋白质变性,混合液分层冰无水乙醇及70%乙醇:乙醇吸收DNA分子周围的水分,DNA失水形成白色絮状沉淀RNase:降解RNA蛋白酶K:裂解细胞,消化蛋白质,使核蛋白解聚并使细胞内存在的DNA酶失活。

结果:A260/A280接近1.80说明样品纯度越高。

Experiment14PCR技术检测β-actin基因原理:PCR的原理类似于天然DNA的复制,主要利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特性,模仿体内的复制过程,在附加的一对引物(人工合成的寡核苷酸片段,它与待扩增片段两条链的两段DNA序列分别互补)之间引发聚合酶反应。

DNA样品:提供DNA合成的模板引物:提供3’-OH末端,特异性扩增,界定扩增范围4种dNTP:双链合成的原料TaqDNA聚合酶:5’→3’聚合,3’→5’内切其他试剂:Mg2+:Taq酶活性中心需要Tris-HCl:提供最适pH:6.8~7.8KCl:促进引物退火(使引物加到DNA链上)明胶:稳定酶的作用Experiment15琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理:在pH8.0-8.3的缓冲液中,核酸分子带负电荷,向正极移动。

由于不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同(忽略碱基上的部分电荷,每个核苷酸残基都带二个负电荷),因此在自由泳动时,各种核酸分子的迁移率相似,无法分开。

然而,在浓度适当的琼脂糖凝胶中,由于分子筛效应,使大小和构象不同的核酸迁移率出现差异,从而把它们分开。

溴乙锭:染色剂(吖啶橙)结果:在紫外灯下可以看见220bp的荧光带出现在溴酚蓝的后面。

DNA片段的荧光强弱由DNA含量决定,而DNA的迁移率反映了DNA片段的大小。

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