分子生物学实验报告
分子生物学试验报告
分⼦⽣物学试验报告分⼦⽣物学实验报告实验⼀真核基因组DNA的制备与分析⼀、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的⽼⿏尾巴组织块，⽤⽣理盐⽔洗净，剪碎⾄糜状。
（2）将上述组织碎末加⼊盛有500uL裂解液的2mL离⼼管中，37℃⽔浴1h。
2、⽤蛋⽩酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋⽩酶K，温和的将酶混⼊粘滞的溶液中。
（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃⽔浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，⾄看不到明显的组织块为⽌。
（3）将溶液冷却⾄室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离⼼管⾄两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离⼼10min，使两相分开。
（4）⽤⼤⼝径移液管将上层粘稠的⽔相移到⼀洁净的离⼼管中，⽤酚重复抽提2次。
（5）第三次酚抽提后，将⽔相移⾄另⼀离⼼管中，于室温加100uL的10M⼄酸铵和1000uL 的⼄醇，转动离⼼管使溶液充分混合，DNA⽴即形成沉淀，通常可⽤吸管将沉淀从⼄醇溶液中移除。
如果DNA沉淀为碎⽚，则与室温离⼼收集。
（6）DNA沉淀⽤70%的⼄醇洗涤，离⼼收集。
将离⼼管于室温下放置实验台上，直⾄⼄醇挥发殆尽。
不要使DNA沉淀完全⼲燥，否则极难溶解。
（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24⼩时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。
（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加⾄上述凝胶上样孔内。
（3）取适量标准DNA溶液同样加⾄凝胶上样孔内。
（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极⾄阴极为准。
（5）电泳结束后，将凝胶放⼊含溴化⼄锭（0.5ug/mL）的⽔中室温浸染10min，⽤紫外灯观察凝胶和照相。
⼆、实验结果如上图所⽰，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单⼀条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。
三、结果分析提取的基因组DNA⽚段只有30kb左右，偏⼩。
分子生物学综合实验报告
分子生物学综合试验报告综合实验Ⅰ.Southern杂交（质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、地高辛标记的Southern杂交）一.实验目的1.学习Southern杂交的原理及操作方法。
2.学习碱裂解法提取质粒的原理。
3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。
4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。
二.实验原理利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。
PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。
每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。
DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。
最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。
对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。
一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。
通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告
实验目的：
通过本次实验，我们旨在探究DNA复制、基因表达和蛋白质合成等分子生物学的基本原理，加深对分子水平生物学过程的理解，培养实验操作技能和科学思维能力。
实验材料与方法：
1. 实验材料：大肠杆菌（E. coli）细菌菌斑、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、琼脂糖电泳试剂、PCR扩增仪、电泳仪等。
2. 实验步骤：
a. DNA提取：取一支含E. coli细菌菌斑的移液管，用DNA提取试剂盒提取DNA。
b. PCR扩增：将提取的DNA加入PCR试剂盒中进行PCR扩增反应。
c. 原核表达：将扩增后的DNA片段转入大肠杆菌进行原核表达。
d. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶，通过电泳进行蛋白质分子量的分离。
实验结果与分析：
1. DNA提取：成功提取到E. coli细菌的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳观察到DNA的带型。
2. PCR扩增：成功扩增出目标DNA片段，并经过验证测序结果正确。
3. 原核表达：大肠杆菌成功表达了目标蛋白质，通过SDS-PAGE电泳观察到目标蛋白质的条带。
4. SDS-PAGE电泳：观察到蛋白质的分子量差异，验证了蛋白质的分离效果。
结论与讨论：
通过本次实验，我们成功实现了DNA提取、PCR扩增、原核表达和蛋白质分离等分子生物学实验步骤，从而全面了解了分子生物学过程的基本原理。
实验结果表明，实验操作规范，结果可靠，为今后的科研工作和实验基础奠定了坚实的基础。
同时，也发现了实验中的一些不足之处，提出了改进的建议，为进一步的研究工作提供了参考。
参考文献：
无。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告重组质粒的pcr验证（目的基因的pcr扩增）姓名:xxx学号：xxx专业：xxx界别：xxx同组者：xxxx一．实验目的（1）自学掌控pcr反应的基本原理和实验技术。
（2）了解引物设计的基本要求。
1.pcr基本原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增dna，类似dna的细胞内复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链dna变性为单链dna、单链dna能与引物复性（退火）成为引物-dna单链复合物、以及在dntps存在下dna聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链dna（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个pcr循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的dna片段。
pcr技术的基本原理类似dna的天然激活过程，其特异性依赖与靶序列两端优势互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--淬火--延展三个基本反应步骤形成：①模板dna的变性：模板dna经加热至90~95℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的淬火(复性)：模板dna经冷却变性成单链后，温度降到55℃左右，引物与模板dna单链的优势互补序列接合融合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的复制链。
经过“变性—淬火—延展”三个过程就可以赢得代莱dna分子，而且这种崭新dna分子又可以沦为下次循环的模板。
因此，变性、淬火和延展循环反复25~30次后，即可从少量的模板dna中扩充出来大量的目的产物。
pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列，因此，引物的优劣直接关系到pcr的特异性与成功与否。
分子生物学实验报告
PCR扩增HBV-S1.实验原理1.1采用PCR扩增出HBV-S基因。
PCR是一种体外由引物介导的特定DNA序列的酶促扩增技术。
其前提是一对人工合成的15-20bp的寡核苷酸引物，其序列与待扩增的DNA两侧的碱基序列互补。
PCR包括下列三个基本步骤：变性、复性、延伸。
经过上述变性、退火、延伸步骤的25-35次循环，导致特异的靶序列的2n指数扩增。
1.2此次扩增的目的基因用于后续的表达，为了保证碱基不发生错配，不采用无矫正功能的Taq酶，而用高保真酶。
1.3为了使目的基因能和载体正确连接，本次实验选择在目的基因末端加尾（A）的方法。
2.实验目的获得HBV-S基因，为后续克隆做准备。
3.实验材料3.1模板3.2 PCR扩增引物3.3二甲基亚砜3.410×PCR 缓冲液（含Tris-HCl 100mmol/L; MgCl2 15mmol/L 、KCl 500mmol/L, pH8.3，0.1%明胶）3.5脱氧核苷三磷酸dNTPs：配成10mM- dATP，dTTP，dGTP，dCTP各10mM，用NaOH溶液调节至pH8.3。
）3.6水：要求不含DNA聚合酶抑制剂，不含离子，一般为去离子二蒸水（ddH2O）, 灭菌以后即可使用。
4.实验仪器4.1PCR仪Thermo Hybaid4.2水平式琼脂糖凝胶电泳槽4.3恒压电泳仪Bio-Rad4.4凝胶成像仪JY04S—3C北京君毅东方4.5垂直流超净工作台上海智域分析仪器制造有限公司4.6微量加样器5.1获得模板5.1.1取100ul血清，加入50ul裂解液，颠倒混匀，100℃金属浴10min；5.1.2 12000rpm的转速下离心5min；取2ul作为模板。
5.2扩增HBV-S基因（PCR）5.2.1PCR体系材料体积5*buffer 2.5mMdNTP Phire模板HBV-S1 HBV-S2 ddH2O总体积4ul 1.6ul 0.4ul 2ul 1 ul 1 ul 10ul 20 ul5.2.2 PCR设置参数1）98℃预变性30s；2）98℃变性5s、60℃复性5s、72℃延伸10s，循环30次；3）72℃终延伸1min.6.琼脂糖凝胶电泳6.1量取100ml5×TBE电泳缓冲液加蒸馏水至1000ml，配置成0.5×TBE电泳缓冲液；6.2称取琼脂糖3g，加入0.5×TBE电泳缓冲液200ml，加热熔化，当凝胶冷却至60℃左右时，加入溴化乙锭溶液5ul，充分混匀；6.3先用透明胶带封固胶托边缘，放好梳子，然后再倒入凝胶（凝胶厚度在5～10mm左右）；6.4在凝胶完全凝固后，小心移去透明胶带，将凝胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，再小心取出梳子；6.5取已制备好的DNA样品10ul，加入染料2ul，充分混匀后用移液器将样取加入点样孔，在另一点样孔中，加入maker10ul；6.6盖上电泳槽，打开电源，电泳40～60分钟；（注意：DNA样品从负极向正极泳动）；6.7将凝胶置于紫外仪下观察；将剩余的10ul保存于4℃扩增的HBV-S基因片段长度为750bp框内所标识的条带为本组实验结果（从左置右，前两管的引物体积为1ul，后两管的引物体积为0.5ul）。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。
实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。
2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。
3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。
4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。
方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。
2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。
实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。
2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。
实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。
这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。
在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。
DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。
在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。
PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。
实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。
PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。
在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。
分子生物学实验总结报告
实验总结报告摘要1、通过PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳回收得到外源基因parb,进行BglⅡ和Xba I 双酶切；抽提质粒pIJ86601，进行BamH I和Xba I 双酶切；将两者的酶切产物通过连接转化，培养后抽提质粒进行电泳，测序，检测重组质粒是否构建成功。
测序结果显示未构建成功。
2、用相同的方法构建表达载体PGEX-sco3330，由于时间问题尚未完成。
3、诱导蛋白表达，蛋白纯化，蛋白脱盐，bradford法进行蛋白含量测定以及SDS-PAGE电泳和免疫印迹试验（Western Blotting）。
实验内容：一、构建质粒pIJ86601-parb(一)获取外源基因parb1.PCR扩增PCR体系：200µl体系中，高保真pfuDNA聚合酶10X buffer，40 µl；10mM Mixed dNTP，5 µl；PrimerA，5 µl；PrimerB，5 µl；高保真pfu酶，2 µl；DMSO，20 µl；双蒸水，120 µl；模板1μl。
PCR程序设定Temp[℃] Time next turns Gradient[℃]1: 98.0 10min2: 98.0 30S3: 60.0 30S 30.04: 72.0 30S 2 3 45: 72.0 10min6:16.0 1h2.琼脂糖凝胶电泳切胶回收目的DNA1)通过电泳将目的片段与其他DNA尽可能分开,然后用干净的手术刀割下含需回收DNA的琼脂块,放入1.5ml离心管中。
2)按每300µl/100mg的比例加入Binding Buffer,置于50-60℃水浴中10分钟,使胶彻底融化。
加热融胶时，每2分钟混匀一次。
3)将融化的胶溶液转移到套放在2ml收集管内的UNIQ-10柱中，12,000rpm室温离心2 min。
4)取下UNIQ-10柱,倒废液，将柱放回同一收集管, 加入500µl WashSolution,12,000 rpm室温离心30秒。
分子生物学综合大实验实验报告
分子生物学综合大实验实验报告外源基因SOC1的扩增和重组载体的构建与筛选班级姓名学号实验目的通过PCR技术克隆外援基因SOC1的目的片段。
通过质粒提取，酶切和连接技术，把SOC1基因重组进TA克隆载体并完成筛选。
实验用品材料：植物叶片，TA克隆载体试剂：DNA提取液（1L）TE缓冲液；琼脂糖；核酸染料；；DNAmarker；6×上样缓冲液（0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油）、DNA聚合酶、dNTP、上下游引物器材：研钵，恒温水浴，离心机，离心管，PCR仪、生化培养箱、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统，去离子水、超净工作台，低温台式离心机，分光光度计，水浴锅，高压灭菌锅，酒精灯等。
实验原理通过配制DNA提取液，利用研磨法获得DNA模板，然后采用PCR技术扩增基SOC1基因获得目的片段，然后通过酶切和连接方法把SOC1基因连接到TA载体上。
大肠杆菌感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA与Ca2+形成的复合物粘附于细胞表面，经过42℃短暂的热激处理后，DNA与Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养基中短暂培养，使转入大肠杆菌质粒上的抗生素抗性基因表达，在含相应抗生素的选择培养基上可将转化菌（含质粒）与未转化细菌分开，转化细菌经过不断分裂增殖形成菌落，而未转化的细菌则不能。
并通过氨苄抗性筛选获得重组子实验方法步骤1、植物基因组DNA的小量提取（1）剪取新鲜幼嫩的植物叶片1~2片于1.5 mL离心管中.（2）先加入少量的DNA提取液100 μL，用研磨棒充分研磨尽量避免提取液溅出。
（3）再加入600 μL的DNA提取液，使DNA提取液的总体积为700 μL，上下颠倒混合均匀。
（4）放入高速离心机4 ℃条件下12 000 rpm离心15 min。
（5）取上层水相，移入标有相应序号的新的离心管中，加入600 μL的异丙醇（与加入DNA 提取液的总体积相同），上下颠倒混匀。
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分子生物学实验报告
分子生物学实验报告
引言
分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手
段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制
DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：
- DNA模板
- DNA聚合酶
- 引物
- dNTPs
- 缓冲液
方法：
1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：
通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能
够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：
DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录
RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：
- DNA模板
- RNA聚合酶
- 引物
- NTPs
- 缓冲液
方法：
1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：
凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：
RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转
录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译
蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关
键步骤。
本实验旨在研究蛋白质翻译的机制和调控。
材料：
- mRNA
- 核糖体
- tRNA
- 氨基酸
- GTP
方法：
1. 准备反应体系，包括mRNA、核糖体、tRNA、氨基酸和GTP。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察蛋白质合成产物。
结果：
凝胶电泳分析显示出蛋白质合成产物的出现。
这表明核糖体能够根据mRNA上
的密码子序列，选择性地合成特定的氨基酸链。
讨论：
蛋白质翻译是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
核糖体通过与mRNA的互作用，将mRNA上的信息翻译成氨基酸序列，从而合成特定的蛋白质。
这种选择性翻
译是维持细胞内蛋白质组成和功能的基础。
结论
通过本实验，我们深入了解了DNA复制、RNA转录和蛋白质翻译的基本原理和调控机制。
这些实验结果对我们进一步理解生命的分子机理具有重要意义，也为分子生物学的研究提供了基础。