细胞生物学实验指导

实验一显微镜的结构及使用

[实验目的]

（一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。

（二）掌握显微镜的使用方法。

（三）了解显微镜的维护方法。

[实验原理]

虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。

[实验器材]擦镜纸字母装片羊毛交叉擦片普通光学显微镜二甲苯香柏油

三内容与方法：

普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。（图2）

（一）微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。1.机械部分：

（1）镜座：位于底部的金属座。一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。

（2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。

（3）镜臂：镜柱上方弯曲部分，是取用显微镜时握拿的部位。

（4）镜筒：在镜臂的上方倾斜的金属园筒，上端装有目镜、下端转折处装有棱镜，使光线转折450。其上有一固定螺钉将镜筒连接于镜臂上方。

（5）调节器：在镜柱两侧有大小两个螺旋，大螺旋为粗调节器，转动时能使载物台快速升降。调节范围较大，适于低倍镜调焦用。小螺旋为细调节器，转动是载物台仅缓慢升降，调节范围较小，适于调节物象的清晰度。此外，在右侧粗调节器内侧有一窄环，称粗调松紧调节轮，用以调节粗调节器的松紧度。向外转时偏紧，向内转时偏松。左侧粗调节器内侧有一粗调限位调节环凸柄，向上推紧时，镜台上的最高点被固定（这两个环一般不需调节）。（6）旋转盘：又称物镜转换器，安装在镜筒下端，为一可旋转的圆盘，上有4个圆孔，

图2 显微镜的结构

1.目镜

2.镜筒

3.物镜转换器

4.物镜

5.通光孔

6.聚光器

7.光圈

8.反光镜9.粗调节器10.细调节器11.镜臂12.推进器13.载物台

14.倾斜关节15.镜柱16.镜座17.照明装置18.粗调限位环凸柄

19滤光片座

用以安装放大倍数的物镜，转动旋转盘使不同的物镜达到工作位置（即与光路合轴）。（7）镜台（载物台）：为方形平台，位于物镜下方，用以放置观察标本。镜台中央有一通光孔。

（8）推进器：位于镜台后方，上安有弹簧夹，用来固定玻片标本。在镜台左下方有两个同轴螺旋，转动时可使玻片标本前后或左右移动。推动器上有纵横两个游标尺，用以测定标本在视野中的方位（图1-2）。游标尺一般由主标尺（A）和副标尺（B）组成。副标尺的分度为主标尺的9/10。使用时，先看副标尺的0点位置，再看主副标尺的重合一致点，即可读出数值。如图所示数值为26.6mm。

图3 游标尺的用法

2．光学部分：

（1）目镜：装于镜筒上端，其上端刻有10×或15×等符号，表示不同目镜的放大倍数。可根据不同的需要选择不同的目镜。目镜中有视场光光阑，光阑上装有指针，可转动目镜，将指针指向标本的具体部位。目镜中也可安装目镜测微尺。

图4 物镜的工作距离和同高调焦

（2）物镜：依放大倍数不同，分低倍镜，高倍镜和油镜三种。每个物镜上刻有相应的标记（图4）。如10倍物镜上标有10/0.25和160/0.17:10为物镜的放大倍数，0.25为镜口率，它决定物镜的分辨率；160表示镜筒长度为160mm，0.17表示标准盖玻片厚度应为0.17mm。从外形上怎样区分几种物镜？低倍镜：镜身短小，镜面直径最大，镜身上刻有8或10。高

倍镜：镜身长而较较粗，镜面直径较小，刻有40或45。油镜：镜身最长，镜面直径最小，其上刻有90或100。各种物镜上标有不同的色圈，如红，黄或白色。高倍镜下方有黄色圈，油镜下方有白色圈，作为识别标志。不同的物镜有不同的工作距离。所谓工作距离是指显微镜处于工作状态（对焦后，物象清晰）时，物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。物镜的放大倍数与工作距离成反比。当低倍镜调节到工作距离时，可直接转高倍镜或油镜，然后由细调节器稍加调节，即可见到清晰物象，这就称为同高调焦。显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。如目镜为10×，物镜为40×，其放大放大倍数为10×40=400倍。（3）聚光器：位于镜台通光孔下方，由一组透镜组成，能将反光镜反射而来的光线集中到标本上，以增加亮度，其左下方有一小螺旋，转动时可升降聚光器，上升时，光线增强，下降时，则光线减弱。

（4）反光镜：位于聚光器下方，分平、凹两面，能向各方向转动，将光源发射的光线反射到聚光器中。凹面有聚光作用，适用于较弱光和散射光。光线较强时采用平面镜。

（5）光阑：装有聚光镜下方，由许多金属片组成，外侧有一小柄，拨动时可使光阑扩大或缩小，以调节亮度。光阑大则光线强，适于观察深色标本；色浅或未染色的标本，则应缩小光阑，使光线减弱，才能观察。光阑下方有滤光片座（或）环放置各式滤光片。

（二）显微镜的使用方法

1.低倍镜的使用：

（1）准备：打开镜箱，右手握镜臂，取出显微镜，左手托座，轻轻放于实验台座位偏左侧，以镜座后端距桌边约5cm为宜。

（2）对光：转动粗调节器，使镜台略有下降，转动旋转盘使低倍镜对准通光孔，此时可听到轻微的扣碰声，使目镜和物镜的光轴一致。开大光阑，上升聚光器，双眼睁开，用左眼向目镜内观察，转动反光镜，直到视野内光线明亮均匀。

（3）置片：将标本有盖玻片的一面向上置于镜台上，夹住，然后转动推进器螺旋，把标本移到通光孔中央。

（4）调焦：转动粗调节器，从侧面注视，使低倍镜距标本约为5mm处（切勿边在目镜中观察，边转动粗调节器，以防镜头碰撞玻片造成损坏）。然后双眼睁开，用左眼观察，慢慢转动粗调节器，使镜台下降，当视野中出现物象时停止。上下转动细调节器，使物象调到最清晰为止。如果物像不在视野中心，可扭动推进器螺旋，前后、左右移动将标本移到视野中央。在调焦时，若镜头与标本玻片的距离已超过1cm时，还未见物像，则应按上述步骤从头重新操作调焦。这些步骤必须反复练习，熟练掌握。

2．高倍镜的使用：

（1）一定要在低倍镜下找到要观察的清晰物像后，再把需要放大的部位移到视野正中，然后转换高倍镜观察。

（2）转换高倍镜时，先从侧面注视，镜头不与玻片碰撞时，才能转换高倍镜。然后用左眼观察，慢慢上下转动细调节器（切勿使用粗调节器），即可见到清晰物像。注意：若发生高倍镜头玻片碰撞，不能用力强转，若转换后找不到物像时，应仔细查找，可能有下列原因：一、若玻片标本放反了，应将有盖玻片的一面朝上放置。或物镜未旋紧，使工作距离偏差太大，应将镜头旋紧。二、观察的标本不在视野内，标本太小或太少。这时应转换低倍镜，仔细地找到标本并置于视野正中心，再转换高倍镜观察。三、色浅或未染色标本，光线太强，也不易看到。应将聚光器降低，或缩小光阑，减少进光。更换标本时，应先转开高倍镜，然后再取出或放置标本。

3．油镜的使用：在观察标本的细细微结构时使用。

（1）在低倍镜或高倍镜下，把欲观察的部分移到视野的正中央。