细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导编者梁亦龙张继承生物信息学院2004年9月前言细胞是一切生物(包括人类)最基本的结构和功能单位。
生命科学中的各个学科领域，甚至非生命科学的许多学科领域中的学者们，越来越多地投入到对细胞生命现象的研究。
细胞是生命的载体，不理解细胞就不理解生命。
在现代生命科学教学中，不设置细胞生物学课，所培养出来的学生就称不上是完全的生命科学家。
在细胞生物学放学中，实验课不可或缺。
实验课的基本任务是，让学生学习细胞生物学基本技术，使他们具有一定的实验操作技能，并培养他们树立独立设计实验的思考观念和进行科研的基本素质。
我们借鉴兄弟院校的经验编写了这本《细胞生物学实验指导》•，供我院开设的各专业选用。
由于我们主客观条件所限，而且编写时间仓促，肯定会有不少缺点和错误，请提出批评意见，帮助我们不断改进教学。
编者梁亦龙2004年9月目录实验是规则与操作要求 (1)实验一细胞形态及大小的观测 (2)实验二相差和暗视野显微镜的原理、使用及标本观察 (5)实验三荧光显微镜原理及应用 (9)实验四电镜参观 (12)实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察 (14)实验六人淋巴细胞染色体标本制作 (15)实验七人淋巴细胞姐妹染色体区分染色 (17)实验八碱性磷酸酶的显示 (19)实验九叶绿体的制备及其对染料的还原 (22)实验十人体细胞核型图的制作 (24)实验十一线粒体的分离及活性测定 (27)实验十二联会复合体的染色与观察 (32)实验十三细胞融合 (33)实验十四死、活细胞鉴别 (39)实验十五细胞固定染色法 (41)实验十六早熟染色体凝集（PCC） (43)实验十七细胞同步化 (46)实验十八动物染色体分带技术 (48)实验十九线粒体的显示 (50)实验二十植物愈伤组织培养以及再分化 (52)实验二十一肿瘤细胞培养实验步骤 (57)实验二十二细胞器的分离 (62)实验二十三石蜡切片的制作 (66)实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
【精品】细胞生物学实验指导讲义
实验一细胞的基本形态结构的观察实验原理与目的（1）通过观察动、植物细胞，了解细胞形态的多样性并掌握光镜下细胞的基本形态结构。
（2）初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法。
实验原理细胞是生命活动的基本结构单位和功能单位。
构成人体或其他高等动物或植物的细胞种类繁多，形态各异。
细胞的形态都与它们的功能相适应。
如具有运输O2和CO2功能的红细胞为双凹盘状；具有感受刺激与传导功能的神经细胞呈星芒形，附有长短不等的树枝状突起；上皮细胞是柱形或扁平形；巨噬细胞则呈不规则形状，并能伸出伪足，以利于为执行吞噬和消灭外源的病原微生物的功能。
虽然细胞在形态上多种多样、大小不同，但却具有共同的基本结构特点，即都是由细胞膜（cellmembrane）、细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)组成。
实验用品1．器具：显微镜、载玻片、盖玻片、推片、吸管、镊子、牙签、擦镜纸、吸水纸、小剪刀。
2．材料：洋葱、人口腔上皮细胞、鸡血液、人血细胞涂片、蟾蜍血细胞涂片。
3．试剂：2%碘液、Giemsa染液。
试剂配制1．2%碘液：称取碘片2g，碘化钾5g，蒸馏水100ml混匀溶解即可。
2．吉姆萨(Giemsa)染液：吉姆萨粉(Giemsastain)l.0g甘油(AR)66ml甲醇(AR)66ml将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再将全部甘油倒入，放56℃温箱中2h后，加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃保存)。
内容与方法一、洋葱鳞茎表皮细胞制片与观察：1.临时制片：取一擦净的载玻片，在玻片中央滴一滴2%的碘液，将洋葱茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用镊子在其表面轻轻撕下一小块膜质表皮，再用剪刀剪成3～4mm2的小块，置于载玻片的染液中铺平，染色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。
2.观察：将标本置于低倍镜下观察，可见许多长柱状排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中较典型的细胞移至视野中央，然后换成高倍镜观察以下结构：1）细胞壁：在每两个细胞相连处，可看到二层壁状结构，是相邻细胞各自的细胞壁，有纤维素构成。
细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察
细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察细胞生物学实验教学备课教案前言：本教案旨在为细胞生物学实验的准备工作提供指导，包括实验的操作步骤和观察要点。
实验内容涵盖细胞培养、染色和观察等方面，旨在帮助学生了解细胞结构和功能，培养他们的实验技能和科学思维。
实验目的：通过本实验，使学生了解细胞的基本结构和功能，培养他们的实验能力和观察分析能力。
实验材料和仪器：1. 细胞培养物：如细菌培养物、动物细胞培养物等。
2. 细胞培养器具：如培养皿、离心管、移液器等。
3. 染色剂：如荧光染料、溴酶、乙酰酚染料等。
4. 显微镜和载玻片。
实验步骤：步骤一：准备工作1. 检查实验材料和仪器是否齐全。
2. 清洗工作台和实验器具，保持清洁。
步骤二：细胞培养1. 取出细胞培养物，根据需要进行适当的稀释。
2. 将细胞培养物分装到培养皿中，每个培养皿的细胞密度控制在适当水平。
3. 采用无菌操作，将培养皿放入恒温培养箱中，设定适当的温度和培养时间。
步骤三：细胞染色1. 取出培养皿中的细胞，使用适当的方法将细胞附着在载玻片上。
2. 准备染色溶液，根据实验需要选择合适的染色剂。
3. 将染色溶液滴在载玻片上，与细胞接触一定时间。
4. 用适当的方法将载玻片洗净，准备观察。
步骤四：观察和记录1. 将载玻片放置在显微镜上，调整镜头和光源，观察细胞的形态和染色效果。
2. 用目镜和物镜逐步调整焦距，获得清晰的细胞图像。
3. 用规定的倍率进行观察，并记录细胞的结构特征和染色的结果。
步骤五：数据分析与讨论1. 根据观察结果，总结细胞结构和功能的特点，并进行分析讨论。
2. 分析不同染色方式对细胞观察结果的影响。
3. 理解实验中可能出现的误差，并提出改进的方法。
步骤六：实验总结1. 总结实验的目的、步骤和观察结果，梳理实验过程中的关键点和问题。
2. 分析实验结果的意义和应用价值，并展望进一步的研究方向。
3. 总结实验中的收获和不足之处，提出改进的建议。
细胞生物学实验指导(12生工)
细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
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实验一动物细胞的传代培养一、实验目的1．熟悉细胞培养过程中的无菌操作技术。
2．了解细胞传代培养的基本方法和主要操作步骤二、实验原理细胞培养(cell culture)是指从机体内取出某种组织或细胞，模拟机体内的生理条件使其在体外生存、生长和繁殖的过程。
细胞的体外培养在细胞生物学和医学研究领域有着极为广泛的用途，这一技术已成为研究细胞生理、细胞增殖、细胞遗传、细胞癌变和细胞工程等课题的一项不可缺少的手段。
细胞培养技术的突出优点在于能为研究者提供大量的生物性状相同的细胞作为研究对象，便于人们在体外利用各种不同的方法从不同的角度研究细胞生命活动的规律。
另外，利用细胞培养技术还可使人们较为方便地研究各种物理、化学和生物因素对细胞结构和功能的影响。
细胞培养可分为原代培养和传代培养2种情况。
所谓原代培养(primary culture)是指直接从机体取出组织或细胞后所进行的首次培养。
而传代培养(subculture)是指当原代培养的细胞增殖到一定密度后，将其从原培养容器中取出，以1：2或其他比例转移到另一个或几个容器中所进行的再培养。
传代培养可简称传代。
在体外培养过程中，要使细胞能正常地生长、繁殖，需经常对其进行传代。
传代的累积次数就是细胞的代数。
在从事细胞培养工作时常常会接触到细胞系(cell line)和细胞株(cell strain)这两个容易混淆的概念。
一般认为，细胞系指通过原代培养并经传代后所形成的细胞群体，由于细胞系来源于原代培养，而原代培养物中所含的细胞种类较多，故一个细胞系往往由多个生物学性状不同的细胞群体所组成，而细胞株是利用单细胞分离培养法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中选择出的细胞群体，一个细胞株往往具有特殊的生物学性状或标记并可持续存在。
细胞培养是一种程序复杂、条件较多且要求严格的实验性工作。
由于细胞在体外的生长、繁殖会受到温度、营养物质、酸碱度、渗透压及微生物等多种因素的显着影响，故细胞培养工作的各个环节如培养器皿清洗消毒、营养液配制和除菌、pH值调整、温度调节等操作都有严格的要求和规定，特别要注意无菌操作，这是细胞体外培养成败的关键。
细胞生物学实验指导
新鲜菠菜。
三、 试剂：
0.35 mol/L氯化钠，0.01％吖啶橙（acridine orange）。
实验方法：
1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，称30 g于 150 ml 0.35 mol/L氯化钠溶液中，装入组织捣碎机。
2. 利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆3-5 min。
3. 分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验（步骤同上）。
实验结果：
将观察到现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。
不同低渗溶液下的溶血现象
试管编号 是否溶血 时间 结果分析
1. 10 ml 氯化钠 + 1 ml 稀释羊血
2. 10 ml 氯化铵 + 1 ml 稀释羊血
3. 10 ml 醋酸铵 + 1 ml 稀释羊血
实验结果：
描述并记录实验结果。
实验二 叶绿体的分离与荧光观察
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
实验目的：
（一）原理
气孔复合体由一对保卫细胞（有的有副卫细胞）组成，组成气孔的保卫细胞对光、温度、湿度、CO2等环境因子以及一些植物激素非常敏感。保卫细胞接收信号后，经过胞内信号转导，保卫细胞渗透势变化引起保卫细胞吸水或失水，使气孔开放或关闭，而K+是调节保卫细胞渗透势的重要物质，因此气孔的运动伴随着K+的迁移，如在光下，K+大量进入保卫细胞，渗透势下降，细胞吸水，气孔张开，反之，气孔关闭。
细胞学实验指导
前言一、医学细胞生物学实验课的目的和要求医学细胞生物学实验课是医学细胞生物学教学的重要组成部分，它既与医学细胞生物学课堂讲授的理论部分密切联系，同时又有它独特的目的和要求：1. 实验是科学理论的实践与论证，通过实验，使学生从感性认识加深对课堂所获得的理性知识的认识和理解。
2. 通过光学显微镜的使用，临时标本的制作、细胞培养等技术操作，使学生掌握医学细胞生物学的基本实验方法和技能。
3. 通过实验，培养同学观察、比较、分析、综合等科学思维方法、独立工作能力和实事求是的科学态度。
4. 通过实验，使学生获得书写细胞生物实验报告、绘图、制表等方面的基本知识和技能训练。
二、医学细胞生物学实验报告的写作实验报告是科学研究的记录，同学们必须学会客观地、真实地记载实验过程和结果。
实验报告的形式一般可分以下三种：1. 文字报告：要求学员将观察所得和实验结果客观地用文字给以准确、详细的描述和记录。
文字力求简洁明了，条理清楚。
2. 绘图: 绘图是医学细胞生物学实验中常用的报告形式之一, 它既是根据所观察标本的真实记录和研究资料, 又可通过描绘学习更精细观察描述。
医学生物学实验绘图不同于一般艺术性绘图。
医学细胞生物学绘图的基本要求: ①绘图前应对标本加以仔细观察研究，并在正确的理解后方可动手绘制。
图中各种结构的大小应与实物成比例，力求准确，明暗之处以点疏密表示，切勿以铅笔涂施阴影；②绘图要求洁净明了，整齐有序，图的位置大小，要求分配适宜，线条力求匀整；③图绘好后，各部结构要用铅笔详细标注名称，标注的方法是：由所标注的部位引出直线，并将其名称注于线的末端，所引的线条应与报告纸上下沿平行，书写字应当横排，字迹要求端正。
3. 制表：将观察所得或实验结果，设计一表格，将有关结果逐项填入，表示其相应关系。
三、实验室规则1. 做好课前预习：实验课前，要认真阅读实验指导及与教材的有关内容，明确实验目的、要求和注意事项，了解实验内容、方法和步骤。
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细胞生物学实验指导实验目录:实验一：特殊显微镜的原理及其使用实验二：电子显微镜的原理及使用实验三：细胞膜的渗透性实验四：细胞的凝集反应实验五：诱导细胞融合—聚乙二醇法实验六：线粒体和液泡系的超活染色与观察实验七：叶绿体的荧光原位观察实验八：细胞骨架的观察实验九：细胞中DNA、RNA的显示实验一特殊显微镜的原理及其使用I.暗视野显微镜的原理和使用一、实验目的1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理；2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。
二、原理和结构特点在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。
暗视野显微镜就是利用此原理设计的。
它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视野聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。
在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。
但被检物体为非均质时，并大于1/2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。
一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004μm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2μm)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
三、仪器、材料与试剂（一）仪器具有暗视野聚光器的显微镜（二）材料牙垢微生物，洋葱内表皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头镊子，滤纸条，指甲油，擦镜纸等。
（三）试剂生理盐水四、实验步骤1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上一片无划痕、清洁的盖玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，用指甲油封片（或不封片）。
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实验一显微镜的结构及使用[实验目的]（一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。
（二）掌握显微镜的使用方法。
（三）了解显微镜的维护方法。
[实验原理]虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。
[实验器材]擦镜纸字母装片羊毛交叉擦片普通光学显微镜二甲苯香柏油三内容与方法：普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。
（图2）（一）微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。
1.机械部分：（1）镜座：位于底部的金属座。
一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。
（2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。
（3）镜臂：镜柱上方弯曲部分，是取用显微镜时握拿的部位。
（4）镜筒：在镜臂的上方倾斜的金属园筒，上端装有目镜、下端转折处装有棱镜，使光线转折450。
其上有一固定螺钉将镜筒连接于镜臂上方。
（5）调节器：在镜柱两侧有大小两个螺旋，大螺旋为粗调节器，转动时能使载物台快速升降。
调节范围较大，适于低倍镜调焦用。
小螺旋为细调节器，转动是载物台仅缓慢升降，调节范围较小，适于调节物象的清晰度。
此外，在右侧粗调节器内侧有一窄环，称粗调松紧调节轮，用以调节粗调节器的松紧度。
向外转时偏紧，向内转时偏松。
左侧粗调节器内侧有一粗调限位调节环凸柄，向上推紧时，镜台上的最高点被固定（这两个环一般不需调节）。
（6）旋转盘：又称物镜转换器，安装在镜筒下端，为一可旋转的圆盘，上有4个圆孔，图2 显微镜的结构1.目镜2.镜筒3.物镜转换器4.物镜5.通光孔6.聚光器7.光圈8.反光镜9.粗调节器10.细调节器11.镜臂12.推进器13.载物台14.倾斜关节15.镜柱16.镜座17.照明装置18.粗调限位环凸柄19滤光片座用以安装放大倍数的物镜，转动旋转盘使不同的物镜达到工作位置（即与光路合轴）。
（7）镜台（载物台）：为方形平台，位于物镜下方，用以放置观察标本。
镜台中央有一通光孔。
（8）推进器：位于镜台后方，上安有弹簧夹，用来固定玻片标本。
在镜台左下方有两个同轴螺旋，转动时可使玻片标本前后或左右移动。
推动器上有纵横两个游标尺，用以测定标本在视野中的方位（图1-2）。
游标尺一般由主标尺（A）和副标尺（B）组成。
副标尺的分度为主标尺的9/10。
使用时，先看副标尺的0点位置，再看主副标尺的重合一致点，即可读出数值。
如图所示数值为26.6mm。
图3 游标尺的用法2．光学部分：（1）目镜：装于镜筒上端，其上端刻有10×或15×等符号，表示不同目镜的放大倍数。
可根据不同的需要选择不同的目镜。
目镜中有视场光光阑，光阑上装有指针，可转动目镜，将指针指向标本的具体部位。
目镜中也可安装目镜测微尺。
图4 物镜的工作距离和同高调焦（2）物镜：依放大倍数不同，分低倍镜，高倍镜和油镜三种。
每个物镜上刻有相应的标记（图4）。
如10倍物镜上标有10/0.25和160/0.17:10为物镜的放大倍数，0.25为镜口率，它决定物镜的分辨率；160表示镜筒长度为160mm，0.17表示标准盖玻片厚度应为0.17mm。
从外形上怎样区分几种物镜？低倍镜：镜身短小，镜面直径最大，镜身上刻有8或10。
高倍镜：镜身长而较较粗，镜面直径较小，刻有40或45。
油镜：镜身最长，镜面直径最小，其上刻有90或100。
各种物镜上标有不同的色圈，如红，黄或白色。
高倍镜下方有黄色圈，油镜下方有白色圈，作为识别标志。
不同的物镜有不同的工作距离。
所谓工作距离是指显微镜处于工作状态（对焦后，物象清晰）时，物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。
物镜的放大倍数与工作距离成反比。
当低倍镜调节到工作距离时，可直接转高倍镜或油镜，然后由细调节器稍加调节，即可见到清晰物象，这就称为同高调焦。
显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。
如目镜为10×，物镜为40×，其放大放大倍数为10×40=400倍。
（3）聚光器：位于镜台通光孔下方，由一组透镜组成，能将反光镜反射而来的光线集中到标本上，以增加亮度，其左下方有一小螺旋，转动时可升降聚光器，上升时，光线增强，下降时，则光线减弱。
（4）反光镜：位于聚光器下方，分平、凹两面，能向各方向转动，将光源发射的光线反射到聚光器中。
凹面有聚光作用，适用于较弱光和散射光。
光线较强时采用平面镜。
（5）光阑：装有聚光镜下方，由许多金属片组成，外侧有一小柄，拨动时可使光阑扩大或缩小，以调节亮度。
光阑大则光线强，适于观察深色标本；色浅或未染色的标本，则应缩小光阑，使光线减弱，才能观察。
光阑下方有滤光片座（或）环放置各式滤光片。
（二）显微镜的使用方法1.低倍镜的使用：（1）准备：打开镜箱，右手握镜臂，取出显微镜，左手托座，轻轻放于实验台座位偏左侧，以镜座后端距桌边约5cm为宜。
（2）对光：转动粗调节器，使镜台略有下降，转动旋转盘使低倍镜对准通光孔，此时可听到轻微的扣碰声，使目镜和物镜的光轴一致。
开大光阑，上升聚光器，双眼睁开，用左眼向目镜内观察，转动反光镜，直到视野内光线明亮均匀。
（3）置片：将标本有盖玻片的一面向上置于镜台上，夹住，然后转动推进器螺旋，把标本移到通光孔中央。
（4）调焦：转动粗调节器，从侧面注视，使低倍镜距标本约为5mm处（切勿边在目镜中观察，边转动粗调节器，以防镜头碰撞玻片造成损坏）。
然后双眼睁开，用左眼观察，慢慢转动粗调节器，使镜台下降，当视野中出现物象时停止。
上下转动细调节器，使物象调到最清晰为止。
如果物像不在视野中心，可扭动推进器螺旋，前后、左右移动将标本移到视野中央。
在调焦时，若镜头与标本玻片的距离已超过1cm时，还未见物像，则应按上述步骤从头重新操作调焦。
这些步骤必须反复练习，熟练掌握。
2．高倍镜的使用：（1）一定要在低倍镜下找到要观察的清晰物像后，再把需要放大的部位移到视野正中，然后转换高倍镜观察。
（2）转换高倍镜时，先从侧面注视，镜头不与玻片碰撞时，才能转换高倍镜。
然后用左眼观察，慢慢上下转动细调节器（切勿使用粗调节器），即可见到清晰物像。
注意：若发生高倍镜头玻片碰撞，不能用力强转，若转换后找不到物像时，应仔细查找，可能有下列原因：一、若玻片标本放反了，应将有盖玻片的一面朝上放置。
或物镜未旋紧，使工作距离偏差太大，应将镜头旋紧。
二、观察的标本不在视野内，标本太小或太少。
这时应转换低倍镜，仔细地找到标本并置于视野正中心，再转换高倍镜观察。
三、色浅或未染色标本，光线太强，也不易看到。
应将聚光器降低，或缩小光阑，减少进光。
更换标本时，应先转开高倍镜，然后再取出或放置标本。
3．油镜的使用：在观察标本的细细微结构时使用。
（1）在低倍镜或高倍镜下，把欲观察的部分移到视野的正中央。
（2）将聚光器升到最高位置，并将光阑开到最大（因油镜所需光线较强）。
（3）移开物镜，在待观察部位滴一滴香柏油。
眼睛从侧面注视着，使油镜转到工作状态，此时油镜的下端镜面一般正好浸在油滴中。
也可先稍稍上升镜筒（或下降载物台），使油镜对准通光孔，再使油镜下端浸入油滴中。
（4）用左眼观察目镜，慢慢转动细调节器，直到物像清晰。
（5）油镜使用完毕，应转开镜头，用擦镜纸把镜头上的香柏油擦干净，再用一张擦镜纸沾少许二甲苯轻擦，最后用干净的擦镜纸再擦一遍。
（三）标本观察以英文字母（或数字）装片、红绿羊毛交叉装片或其它标本为材料，严格按照上述操作程序和注意事项反复练习低倍镜、高倍镜和油镜的使用方法。
1.字母装片：取字母片，先用眼睛直接观察一下字母的方位和大小，然后放到低倍镜下观察。
注意视野中字母的方位发生了什么变化？标本移动的方向与视野中物像移动的方向有何不同？2.红绿羊毛交叉装片：先在低倍镜下仔细观察找到两根羊毛的交叉点，将交叉点移到视野中央后换高倍镜观察，利用细调螺旋分别对两根羊毛进行调焦，分辨出两根羊毛的上下位置。
（四）使用显微镜应注意的事项1.取用显微镜时，应一手紧握镜臂，一手托住镜座，不要用单手提拿，以避免目镜或其它零部件滑落。
2.使用镜筒直立式显微镜时，镜筒倾斜的角度不能超过450，以免重心后移使显微镜倾倒。
在观察带有液体的临时装片时，不要使用倾斜关节，以避免由于载物台的倾斜而使液体流到显微镜上。
3.不可随意拆卸显微镜上的零部件，以免发生丢失、损坏或使灰尘落入镜内。
4.显微镜的光学部件不可用纱布、手帕、普通纸张或手指揩擦，以免磨损镜面，需要时只能用擦镜纸轻轻擦拭。
机械部分可用纱布擦拭。
5.在任何时候，特别是使用高倍镜或油镜时，都不要一边在目镜中观察，一边下降镜筒（或上升载物台），以避免镜头与玻片相撞，损坏镜头或玻片标本。
6.显微镜使用完后应及时复原。
先升高镜筒（或下降载物台），取下玻片标本，使物镜转离通光孔；如镜筒、载物台是倾斜的，应恢复直立或水平状态。
然后下降镜筒（或上升载物台），使物镜与载物台相接近；垂直反光镜，下降聚光器，关小光圈。
最后放回镜箱中锁好。
7.在利用显微镜观察标本时，要养成两眼同睁，双手并用（左手操纵调焦螺旋，右手操纵标本移动器）的习惯，必要时应一边观察一边计数或绘图记录。
[作业与思考]1.怎样区分三种物镜？为什么使用高倍镜或油镜必须按照从低倍镜到高倍镜再到油镜的顺序进行？2. 如果在高倍镜下找不到物像，应从哪些方面找原因，如何解决？3. 要经过哪些步骤才能在镜下找到清晰物像？附录其他显微镜简介在生物学和医学研究中，还常用以下几种显微镜。
1.双筒解剖显微镜：解剖较小标本或观察玻片标本外形全貌时，需使用解剖显微镜，以观察自然状态的较小的实体（正像），解剖细小生物。
2.暗视野显微镜：它利用中央遮光板或暗视野聚光器，使光源的中央光束不能从聚光器的中心部分射入物镜，从而形成暗视野，而聚光器边缘的光线倾斜地照射在标本上，经标本的反射或散射，投入物镜内，因而在暗视野中看到的是被检测物体的衍射图像，并非物体本身。
所以暗视野显微镜被用来观察普通显微镜不易观察到的微小生物体的存在和运动，但它不能分辨其细微结构。
3.荧光显微镜：最主要的特点是以紫外光为光源。
利用紫外光照射，激发标本内的荧光物质或被荧光染料染色的标本发出不同颜色的荧光，再通过物镜和目镜的放大进行观察，其敏感性高，可用来研究标本内某些物质的化学特性和存在位置。
4.相差显微镜：其聚光器下装有一环状光阑，物镜中安有相位板，两者互相配合，能使光波的相位差变成振幅差，这样可增大物体明暗的反差，用于观察未染色活细胞听微细结构。