卵细胞胞质内单精子注射对 体外受精能力缺陷的改善

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哺乳动物卵胞质内单精注射的研究进展

哺乳动物卵胞质内单精注射的研究进展

哺乳动物卵胞质内单精注射的研究进展摘要:哺乳动物卵胞质内单精注射技术发展很快,而且已在很多领域发挥其重要的作用。

简单综述了哺乳动物卵胞质内单精注射(ICSI)的研究概况、存在的问题以及今后的应用前景。

关键词:哺乳动物;卵胞质内单精注射;进展显微受精是20世纪80年代发展起来的一种新型的体外受精技术。

即借助显微操作仪,将精子直接或精子细胞注入卵母细胞内(或卵周隙),促使其在体外相互结合的技术,这项新技术是体外受精和显微操作技术相结合而形成的,也可以说是显微操作辅助受精,目前显微受精技术主要有3种途径:①透明带开孔技术(PZD);②卵透明带下注射技术(SUZI);③卵胞质内单精注射技术(ICSI)。

其中①PZD不为人们接受的主要原因是需要足够量的精子。

⑦SUZI法受精令人失望的缺点是多精受精难以控制。

而③ICSI就克服了①PZD和②SUZI的缺点。

ICSI是20世纪80年代后期发展起来的一项新型的体外受精技术,它是借助显微操作仪,将一个精子或生精细胞直接注入卵母细胞胞质内。

使精卵结合完成受精的过程。

ICSI技术可排除透明带和卵质膜对精子人卵的阻碍作用。

故对精子的死活及其完整性无严格要求。

因此一跃成为当前显微受精技术的主流,广泛应用于畜牧生产、野生动物保护、人类的深度不育和受精机理的理论研究中。

1 哺乳动物卵胞质内单精注射受精的效果关于卵胞质内单精注射受精的效果,国内外已有很多成功的报道,但是针对不同的哺乳动物而言,还存在一些问题。

现简单综述如下。

小鼠单精注射的首次尝试在1983年,但当时的试验结果很差,因为小鼠卵母细胞的质膜缺乏弹性。

直接注射精子时非常容易死亡。

Kimura等对显微操作仪进行了改进,采用Piezo-driven操作系统克服了小鼠卵母细胞的细胞膜抗损伤能力差的特点,使小鼠注射卵的存活率由16%提高到80%,囊胚率由33%提高到68%,产仔率达30%。

之后,人们广泛试验睾丸精子,精子头,形态异常精子等各种极端条件处理下精子的受精产仔情况并取得了成功,证明了精子的新鲜度和活动力对ICSI的结果没有显著影响。

卵细胞浆内单精子注射——治疗男性不育的法宝

卵细胞浆内单精子注射——治疗男性不育的法宝

形 态 和 活力 正 常 的精 子 直 接 注 射 到 I S 受 精 结 果 不 受 精 子 浓 度 、 子 C I 精
成 熟 的 卵 细 胞 浆 内 ,只 需 一 个 精 子 活 动 度 和 精 子 形 态 的 影 响 ,是 严 重 即 可 使 卵 细 胞 受 精 ,它 是 治 疗 严 重 男 性 因 素 不 育 患 者 的 最 有 效 的 治 疗
性 因素 引起 的 , 有 2 另 0% ~3 % 是 毫 升 , 动 率 <4 % , 活 力 A 级 0 活 0 或 夫 妇 双 方 因 素 共 同 所 致 。 随 着 试 管 加 B 级 <2 % , 或 畸 形 精 子 > 5
婴儿 技 术 的应 用 范 同不 断 扩 大 , 8 精 5% ; 精 子 密 度 ≥2 01 升 , ③ 0X 1 6毫 子 问 题 造 成 受 精 失 败 的 情 况 日益 增
常 规 试 管 婴 儿 , 样 可 以最 大 限 度 这
§警

≤ 舅


地 为患者 提供 可移植 的胚胎 。
IS 在 治 疗 时 的 促 排 卵 、 子 C I 卵
20鬻 月我国苒 际上第l 冻” 06 l 一 例、 _ . - 例“ 试管婴儿出生, 而且
染色 体检 测报 告 显示 , 名 “ 这 i冻 ” 管 婴 儿 的 身 体 一 切 正 常 , 而 标 试 从
特别 企 划
IS 辅 助受精 。 CI 种植前遗传学诊断 需 行 种
植 前 遗 传 学 诊 断 的 胚 胎 , 精 前 为 受 避 免 透 明带 上 黏 附 精 子 的 影 响 , 有
必要采 用 I I 法 受精 。 CS 方 原 因不 明 的 不 育 对 原 因 不

生殖医学的现状与进展

生殖医学的现状与进展

1978 年世界第 1 个试管婴儿的诞生标志着不孕症的治疗及生殖医学的研究进入了崭新的时代 。

20 年来 ,不孕症治疗及生殖医学相关技术领域有了 长足的进步 。

现就生殖医学的现状和进展作一述 评 。

1 辅助生殖技术发展迅速20 年来 ,随着体外受精 - 胚胎移植 ( in vitro fer 2 tiliz ati on and em bryo transfer , IVF - E T ) 技术的发展 , 多种 辅 助 生 殖 技 术 ( a ssisted reproductive technique , ART ) 不 断 出 现 , 如 输 卵 管 内 配 子 移 植 ( g am ete in 2 trafallopian transfer , GIFT ) 、输卵管内合子移植 (z ygote intrafall opian transfer ,ZIFT ) 、宫腔内配子移植 ( gam ete intrauterine transfer , GI UT ) 等 ,也有腹腔内直接人工授 精 ( intraabdominal inseminati on ,) 、腹 腔 内 配 子 移 植 (peritoneal ovum sperm transfer , POST ) 成 功 妊 娠 的 报 道 。

进入 90 年代显微操作崭露头角 ,卵细胞胞浆内 单精子注射 ( intracytoplasmic sperm injecti on , ICSI ) 代 替了传统的体外受精方法 ,使技术操作达到细胞水 平 ,对于少精 、弱精或不能由射精取得精子者 ,采用 附睾或睾丸取精 ,行卵细胞内单精子注射实现体外 受精 。

目前 ,世界上已有数千个婴儿用这种技术诞 生 。

冷冻胚胎解冻后作胚胎移植 ,以及供卵 、赠胚工 作的开展使丧失生育能力的妇女实现了生育的愿 望 ,如以往难以想象的绝经后妇女也可通过激素治 疗及供卵 、赠胚生育子女 ,世界上已有上百例 50 岁 以上的妇女经此种治疗生育子女者 ,其中年龄最大 者为 63 岁 。

盘点人工受孕的五大方法

盘点人工受孕的五大方法

盘点人工受孕的五大方法小李听说隔壁王叔王婶结婚多年没有小孩,去医院做试管不久就喜得贵子。

他想起自己也在电视上经常听到“辅助生殖技术”治疗不孕不育的广告。

那么究竟什么是辅助生殖技术呢?所谓辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)是指人类不经过同房,而运用医学技术和方法进行人工操作,帮助精子和卵子相互结合,以达到受孕目的的技术。

换句话说,就是用人工方法辅助人体受孕的自然过程,完成生育的方法。

辅助生殖技术的出现为全球不计其数的不孕不育患者提供了希望,主要包括人工授精、体外受精-胚胎移植(IVF-ET)、胞浆内单精子注射、胚胎移植前遗传学诊断和卵浆置换技术/核移植技术。

什么是人工授精人工授精是将精子通过非性交方式放入女性生殖道使其受孕的一种技术。

按所使用精液来源的不同,可分为丈夫精液或捐献者精液两种。

由于这种办法避免了房事过程,对于因为各种因素而存在房事障碍的夫妇,只要女方具备正常发育卵泡、健全的女性生殖道结构,至少一条通常的输卵管的不孕,男方活动精子数目正常,均可采用人工授精治疗。

双方符合上述生理条件,不孕原因尚不明确的夫妇也可以尝试采用人工授精。

其过程也比较简单,将精液处理后取0.3~0.5毫升,通过插入宫腔的导管,注入宫腔内即可。

由于女性的自然周期因人而异,因此很难找到最佳的授精时机,对于能正常排卵的患者,建议根据自然周期来安排受精时间。

如果此前周期严重紊乱,可以应用促排卵药物,控制排卵时间。

然而,促排卵治疗实际上是摄入雌孕激素、调整激素水平的一种治疗手段,对患者的卵巢、乳房、子宫均具有潜在的影响,并增加多胎妊娠风险,容易造成过度刺激综合征,所以要和医生充分沟通,充分考虑其利弊的前提下应用。

体外受精-胚胎移植体外受精-胚胎移植过程包括促排卵、取卵、体外受精和培养、胚胎移植4个阶段,也就是说,在女方通过自然或者药物手段排卵后,采取人工办法从体内取出卵细胞,在体外使其与精子结合并培养一段时间,再将发育中的胚胎移植到妇女子宫中,让它继续发育成胎儿的过程。

单精子卵浆内注射应用于前周期常规体外受精失败和低受精的治疗结果

单精子卵浆内注射应用于前周期常规体外受精失败和低受精的治疗结果
的临床结果。方法 :20 年 1 0 1 o月至 2 0 年 5月,3 例 IF完全不受精和 1 例 I F 07 0 V 2 V 低受精不育夫妇 分别在
随后 周 期 采取 3 8个 周期 ( A组 )和 1 个 周期 ( 7 B组 )I S 治疗 , 同期 因 男性 因素 行 第 1 CI 周期 I S 治疗 的 CI
to a l r r l w f r i i a i n r t f e o v n i n l v i n f i u e o o e t l z t o a e a t r c n e t o a I F.M t ds: F o O t. 2 0 t M y. 2 0 e ho r m c 01 o a 0 7, 3 C c e t r v o s t t l f r i i a i n f i u e a t r o v n i n l v r l o a d t r u 8 I SI as s wi h p e i u o a e t l z t o a l r f e c n e t o a I F we e a l c t o g o p A. e 1 C c s i h p e i us l w f r i i a i n r t t r c nv n i n l v e e l o a ed t r u 7 I SI a es w t r v o o e t l z t o a e a e o e t o a I F w r a l c t o g o p B.A d f n 2 1 C y l s f r m l a t r i f r i i y n t e s m r o e e a l c t d t o p C as c nt o o p. 8 I SI c c e o a e f c o n e t l t i h a e pe i d w r l o a e o g u o r l g u r r

卵细胞浆内单精子注射-适应症,实验室工作,影响icsi治疗的因素,icsi治疗的安全性

卵细胞浆内单精子注射-适应症,实验室工作,影响icsi治疗的因素,icsi治疗的安全性

(一)ICSI治疗的适应证
1.少、弱、畸形精子症: (1)严重少精症患者,即一次射出的精液中精子密度≤2×106/ml。
(2)当精子总数超过2×106/ml,但低于20~106/ml,活动率<40%, 或Ⅱ级以上运动精子<25%,或畸形精子率>85%。
(3)精子总数超过20×106/ml,但按严格标准进行精子形态学检查, 形态正常精子低于4%或精子活动率低于5%。 (4)对于临界性少弱精子症很难在常规IVF与ICSI间作出选择,ICSI 要较常规IVF的受精率高,并且可以避免完全体外受精失败,因此有 学者建议对这些患者进行ICSI治疗,但也有人认为有必要持谨慎态度, 不可滥用。
低,妊娠率并无明显改善。
历史
早在 20 世纪60 年代对动物配子的研究发现,将单个精子直接注入卵 胞浆(intracytoplasmicsperminjection ,ICSI),可以发生精子核的解 聚并形成雄性原核,后来,用兔子配子进行ICSI得到正常受精与卵裂, 并且移植胚胎后能发育成新的个体。1988年,LanZendorf 证实将人 类精子直接注入卵子也能受精,到1992年Palermo等取得了人类胞浆 内单精子注射首例妊娠成功。 卵胞浆内单精子注射后的受精率与正常 IVF相当,需要的精子数非常 少,不仅可以使用射出精液中的精子,还可以使用附睾或睾丸取出的 精子,甚至采用睾丸精细胞进行ICSI也有成功的报道。
(二)ICSI操作方法
3.显微操作系统的安装: (1)检查显微操作臂安装情况,并将其调节至合适的初始位置。
(2) 将微量注射器、塑料胶管及金属持针器内充以无菌无毒矿物油, 注意避免管内残留气泡。
(3) 在左侧的持针器前端安装显微固定针,右侧的持针器前端安装 显微注射针,注意不要在固定针及注射针内产生气泡。 (4) 将持针器安装到显微操作臂上,在低倍镜下调整固定针与注射 针两两相对呈一直线。

早期补救卵胞质内单精子显微注射在常规体外受精失败中的应用

早期补救卵胞质内单精子显微注射在常规体外受精失败中的应用
受 精 失败 后 补 救 I C S I大 多在 受精 后 1 8  ̄2 0 h进 行 , 由于 卵
1 . 1 一 般 资 料 2 0 0 9年 1 O月 至 2 0 1 1年 9 月 在 本 中心 接 受 常规 I V F治
母 细 胞 长 时 间暴 露 于 培 养 液 内 ,毒 性 物 质 接 触 时 间 增 加 导 致 卵 母 细 胞 内遗 传 物 质 发 生 异 常 的 概 率 增 加 , 染 色 体 异 常
成熟 的 卵母 细 胞停 留 在 M Ⅱ期 ,当 与 精 子 结 合 后 ,卵
母 细 胞被 激 活 , 完 成 第 二 次 减 数 分 裂 并 排 出 第 二 极 体 ,开 始 新 的细 胞 生 命 周 期 。 因此 ,第 二 极 体 的 排 出是 最 早 的 卵
现将本 中心 6 7例 常规体 外受 精 ( I VF ) 完 全失 败后 行早 期
精 卵共 同孵 育 4 h后 , 用 拨 卵 针 脱 去 卵 周 围 全 部 颗 粒 细 胞
现第二极体 , 4 h有 6 8 的 卵 出 现第 二 极 体 , 而9 O %受 精 卵
的第 二 极 体 则 于约 6 h释 放 。2 0 0 3年 C h e n和 Ka t t e r a等 报 道 了对 常规 I VF授 精 后 6 h未 受 精 的 卵 实 施 I C S I , 获 得 了较 高 的受 精 率 和妊 娠 率 。本 中 心 的 数 据 结 果 也 证 实 了 此
3 讨 论
显 微注射( R - I C S I ) , 但 妊 娠率 低 , 效果 不 理想 , 因 而 有 学 者
认 为行 R - I C S I 意义不大[ 2 ] 。近 年 来 , 更 多 的研 究 提 出 在 受

补救icsi方案

补救icsi方案

补救icsi方案补救ICSI方案随着现代生育技术的发展,不孕症夫妇可以选择辅助生殖技术来实现生育愿望。

其中,胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation Genetic Diagnosis, PGD)和单精子显微注射(Intracytoplasmic Sperm Injection, ICSI)是目前较为常用的两种技术。

然而,由于种种原因,ICSI技术在一些情况下可能出现失败的情况。

本文将探讨如何补救ICSI方案,以期帮助那些遭遇失败的不孕症夫妇。

要补救ICSI方案,需要对失败的原因进行分析。

ICSI技术失败的原因可能有很多,包括胚胎质量不佳、子宫内膜问题、父母遗传因素等。

因此,在补救ICSI方案时,需要根据具体情况有针对性地进行治疗。

一种常见的补救ICSI方案是改善胚胎质量。

在ICSI过程中,胚胎的质量对于成功率至关重要。

如果ICSI失败的原因是胚胎质量不佳,可以尝试使用辅助技术来提高胚胎质量,例如胚胎孵化、胚胎筛选、胚胎培养基优化等。

这些技术可以提高胚胎的存活率和着床率,从而增加成功的机会。

另一种补救ICSI方案是处理子宫内膜问题。

子宫内膜问题可能导致胚胎着床困难,进而影响妊娠成功率。

如果ICSI失败的原因是子宫内膜问题,可以尝试进行子宫内膜膜补充治疗。

这种治疗方法可以通过给予激素或药物来改善子宫内膜的厚度和质量,增加胚胎着床的可能性。

除此之外,在补救ICSI方案时,还需要注意父母遗传因素的影响。

如果ICSI失败的原因是父母遗传因素导致的胚胎异常,可以考虑进行PGD技术。

PGD可以在胚胎植入前进行基因诊断,筛选出健康的胚胎进行移植,从而提高妊娠成功率。

补救ICSI方案还可以从饮食和生活习惯入手。

良好的饮食和生活习惯可以改善身体健康状况,增加受孕的机会。

建议不孕症夫妇要保持健康的体重、均衡的饮食、适度的运动和充足的休息,避免过度劳累和精神压力,保持良好的心态。

总结起来,补救ICSI方案需要根据具体情况进行针对性的治疗。

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第11卷 第12期中华男科学杂志Vol.11 No.12 2005年12月Nati onal Journal of Andr ol ogy Dec.2005・论著・卵细胞胞质内单精子注射对体外受精能力缺陷的改善蔡令波,冯 婷,陈 娟,钱 云,刘嘉茵,张 燕(南京医科大学第一附属医院生殖医学中心,江苏南京210029)摘要: 目的:评价前一周期行体外受精(I V F)失败和受精率低后,改行卵细胞胞质内单精子注射(I CSI)的受精效果。

 方法:行I CSI治疗的113例患者136周期分为两组:因严重少弱精子症而行I CSI的106个周期(组1);因前次常规I V F受精失败或受精率低于20%而改行I CSI的30个周期(组2)。

比较两组间卵母细胞的正常受精率、优质胚胎率和妊娠率的差异,并对第2组受精率的分布进行分析,以了解改行I CSI后受精效果的改善情况。

 结果:改行I CSI后,两组的正常受精率和优质胚胎率差异均无显著性(70.49%vs72.02%;38.28%vs38.81%)(P>0.05)。

两组的临床妊娠率分别为40.57%和40.00%,差异也无显著性(P>0.05)。

改行I CSI后,大部分周期(70.00%,21/30)的受精率都在50%以上,平均受精率为79.79%,受精效果得到明显改善。

 结论:I V F受精失败和受精率低可以通过行I CSI而获得较好结局。

关键词:不育;体外受精;受精率低;受精失败;卵细胞胞质内单精子注射中图分类号:R711.6 文献标识码:A 文章编号:100923951(2005)1220895203I ntracytoplas m ic Sperm I njection Can I m prove the Fertilization L i m itation Followi n g in vitroFertilization duri n g Previous CyclesCA IL ing2bo,FENG Ting,CHEN Juan,Q I A N Yun,L I U J ia2yin,ZHANG YanRepr oductiveM edicine Center,the Fir st Affiliated Hospital of N anjing M edical Univer sity,N anjing,J iangsu210029,China Correspondence to:Q I AN Yun,E2m a il:qianyun@nj m Abstract: O bjective:T o evaluate whether or not intracyt op las m ic s per m injecti on(I CSI)can i m p r ove p revi ous fertilizati on li m itati on on conventi onal in vitro fertilizati on(I V F). M ethods:One hundred and thirty2six comp leted cycles in113patients with I CSI treat2 ment were gr ouped.Gr oup1was106cycles perfor m I CSI because of male fact or,and gr oup2was other30cycles with the hist ory of fertilizati on failure and fertilizati on rate<20%on conventi onal I V F,als o asse mbling the cycles in gr oup2according t o the fertilizati on rate. R esu lts:There was no significant difference bet w een t w o gr oup s in the rates of nor mal fertilizati on(70.49%vs72.02%),good quality e mbryos(38.28%vs38.81%),and clinical p regnancy(40.57%vs40.00%)(P>0.05).The fertilizati on rate of a maj ori2 ty of cycles(70.00%,21/30)in gr oup2was higher than50%,and the mean of fertilizati on rates was79.79%. C onclusion:I CSI can i m p r ove the fertilizati on li m itati on f oll owing I V F during p revi ous cycles,and the fertilizati on rates was si m ilar t o those treated I CSI because of male fact or. N a tl J A ndrol,2005,11(12):8952896,899Key words:in vitro fertilizati on;l ow fertilizati on rate;fertilizati on failure;intracyt op las m ic s per m injecti on 在实施常规体外受精(I V F)治疗的周期中,5%~10%的患者会出现受精率低于20%或完全不受精的情况。

对于这些患者,临床上一般会在下一个周期采用卵细胞胞质内单精子注射(I CSI)技术进行・598・收稿日期:2005204202;修回日期:2005208225基金项目:江苏省科技厅社会发展基金(BS2003045),江苏省卫生厅生殖医学135重点学科基金作者简介:蔡令波(19762),男,山东梁山县人,实习研究员,硕士,从事生殖医学研究。

通讯作者:钱 云,E2mail:qianyun@nj m 治疗,以期克服这种原因不明的受精障碍,并且已经有受精得到改善和临床获得妊娠的多例报告[1~4]。

然而也有研究者认为常规I V F受精失败或受精率低的患者,即使下一周期改行I CSI,其受精结局也很差,I V F受精失败患者的卵子中可能存在I CSI不能克服的先天缺陷[5,6]。

本研究回顾性评价前一周期行常规I V F受精率低或受精失败后,改行I CSI的受精效果,为下一周期改行I CSI是否可行提供依据。

1 资料与方法1.1 病例来源 2002年1月~2004年12月,在本中心行I CSI治疗的113例患者共136个周期。

将周期分为两组:严重少弱精子症而行I CSI的106个周期(组1);前次常规I V F受精失败或受精率低于20%而改行I CSI的30个周期(组2)。

同时,为了更好地了解I CSI对前一周期I V F受精率低或者失败的改善效果,我们根据受精率的分布将组2分为两组:A组为受精率略有提高(20%~50%)的9个周期;B组为受精率改善明显(>50%)的21个周期。

1.2 方法 采用常规促排卵方案进行卵巢刺激,B 超监测卵泡生长发育。

待卵泡生长发育充分后,B 超介导下经阴道穿刺取卵。

取卵后4~5h行I CSI, I CSI后16~18h观察受精情况,随后每隔24h观察受精卵的发育。

将卵裂速度正常、卵裂球大小均一或大致均一、卵裂球数目均等或大致均等、碎片≤5%的胚胎判为优质胚胎。

在I CSI后第3d行胚胎移植。

患者取卵日开始肌注黄体酮以支持黄体功能,胚胎移植后第15~18d,检查血清人绒毛膜促性腺激素(hCG)含量,第35d B超检查确认胎心。

1.3 统计学分析 采用t检验和χ2检验进行差异比较,所有数据运用SPSS10.0统计软件处理,P< 0.05为差异有显著性。

2 结果与因严重少弱精子症而行I CSI的结果比较,前一周期I V F受精失败或受精率低而行I CSI的结果见表1。

结果显示,I CSI后,组1的正常受精率、优质胚胎率和临床妊娠率与组2差异均不显著。

受精失败和受精率低改行I CSI后的受精结果分布见表2。

因前次I V F受精失败或受精率低改行I CSI后,有30.00%(9/30)周期的受精率在20%~50%,平均受精率仅为40.54%,仅1例获得临床妊娠。

其他的70.00%(21/30)周期的受精率都在50%以上,平均受精率为79.79%,临床妊娠率为52.38%。

表1 前次I V F受精失败和受精率低行I CSI与因严重少弱精子症而行I CSI的结果比较paris on of the results f oll owing I CSI bet w een gr oup 2with the fertilizati on li m itati on foll owing p revi ous in vitro fertili2 zati on and gr oup1due t o oligoasthenos per m iaGr oup12 No.of cycles10630Fe male age(y)31.90±3.8232.80±3.79No.of oocytes retrieved(mean)1346(12.70)263(8.80)No.of MⅡoocytes(%)1081(80.31)193(73.38)No.of oocytes fertilized(%)762(70.49)139(72.02)No.of oocytes cleaved(%)674(88.45)134(96.40)No.of good quality e mbryo(%)258(38.28)52(38.81)No.of e mbryo transfers(mean)279(2.60)81(2.70)Clinical p regnancy rate(%) 43(40.57)12(40.00)表2 受精失败和受精率低改行I CSI后受精结果的分布Table2.D istributi on of fertilizati on rates foll owing I CSI cycles in p revi ous fertilizati on failure or l ow fertilizati on rates on I V F cyclesGr oup A B Cycles(%)9(30.00)21(70.00)Fe male age(y)33.22±3.2435.47±3.98No.of oocytes retrieved(mean)52(5.78)211(10.0)No.of MⅡoocytes(%)37(71.15)156(73.93)No.of fertilized oocytes(%)15(40.54)124(79.79)No.of cleaved oocytes(%)15(100.00)119(95.97)No.of good quality e mbryo(%)6(40.00)46(38.66)No.of e mbryo transfers(mean)14(1.56)67(3.2)Clinical p regnancy Rate(%)1(11.11)11(52.38)3 讨论受精是一个多步骤和多因素影响的复杂过程。

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